Name: GABA-geactiveerde Single-kanaal en Tonic Stromingen in hersenen van de rat Slices (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-17T14:03:00.000+00:00
Duration: 9 min 59 s
Description: Leer de patch-clamptechniek om GABA-geactiveerde enkelkanaalstromen in rattehersenslices te meten. Deze methode onderscheidt synaptische en extrasynaptische GABAA-kanalen om neurale excitabiliteit te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gefinancierd door de Zweedse Research Council, Uppsala Universiteit en het Fredrik en Ingrid Thurings Foundation. ZJ hield een postdoctoraal fellowship van EXODIAB en Svenska för Sällskapet Medicinsk Forskning. Wij danken Frank Lee voor techniek hulp.

<ol><li>Pavlov, I., Savtchenko, L. P., Kullmann, D. M., Semyanov, A., Walker, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outwardly+rectifying+tonically+active+GABAA+receptors+in+pyramidal+cells+modulate+neuronal+offset%2C+not+gain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Outwardly rectifying tonically active GABAA receptors in pyramidal cells modulate neuronal offset, not gain.</a> J Neurosci. 29, 15341-15350 (2009).</li>
<li>Chao, H. T., Chen, H., Samaco, R. C., Xue, M., Chahrour, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysfunction+in+GABA+signalling+mediates+autism-like+stereotypies+and+Rett+syndrome+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Dysfunction in GABA signalling mediates autism-like stereotypies and Rett syndrome phenotypes.</a> Nature. 468, 263-269 (2010).</li>
<li>Clarkson, A. N., Huang, B. S., Macisaac, S. E., Mody, I., Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+excessive+GABA-mediated+tonic+inhibition+promotes+functional+recovery+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Reducing excessive GABA-mediated tonic inhibition promotes functional recovery after stroke.</a> Nature. 468, 305-309 (2010).</li>
<li>Jin, Z., Jin, Y., Mendu, K. M., Degerman, E., Groop, L., Birnir, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+reduces+neuronal+excitability+by+turning+on+GABA%28A%29+channels+that+generate+tonic+current%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Insulin reduces neuronal excitability by turning on GABA(A) channels that generate tonic current.</a> Plos One. 6, e16188-e16188 (2011).</li>
<li>Nusser, Z., Mody, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+modulation+of+tonic+and+phasic+inhibitions+in+dentate+gyrus+granule+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Selective modulation of tonic and phasic inhibitions in dentate gyrus granule cells.</a> J Neurophysiol. 87, 2624-2628 (2002).</li>
<li>Semyanov, A., Walker, M. C., Kullmann, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABA+uptake+regulates+cortical+excitability+via+cell+type-specific+tonic+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GABA uptake regulates cortical excitability via cell type-specific tonic inhibition.</a> Nat Neurosci. 6, 484-490 (2003).</li>
<li>Birnir, B., Korpi, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+sub-cellular+location+and+intracellular+neuronal+proteins+on+properties+of+GABA%28A%29+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Des%22%5BJournal%5D)">The impact of sub-cellular location and intracellular neuronal proteins on properties of GABA(A) receptors.</a> Curr Pharm Des. 13, 3169-3177 (2007).</li>
<li>Olsen, R. W., Sieghart, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+Union+of+Pharmacology.+LXX.+Subtypes+of+gamma-aminobutyric+acid%28A%29+receptors%3A+classification+on+the+basis+of+subunit+composition%2C+pharmacology%2C+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Update.+Pharmacol+Rev%22%5BJournal%5D)">International Union of Pharmacology. LXX. Subtypes of gamma-aminobutyric acid(A) receptors: classification on the basis of subunit composition, pharmacology, and function.</a> Update. Pharmacol Rev. 60, 243-260 (2008).</li>
<li>Hamill, O. P., Marty, A., Neher, E., Sakmann, B., Sigworth, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+patch-clamp+techniques+for+high-resolution+current+recording+from+cells+and+cell-free+membrane+patches%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">Improved patch-clamp techniques for high-resolution current recording from cells and cell-free membrane patches.</a> Pflugers Arch. 391, 85-100 (1981).</li>
<li>Sakmann, B., Neher, E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSakmann%2C+B+%22The+Single-Channel+Recording%22">The Single-Channel Recording</a>. , 2 ed., Plenum Press. New York. (1995).</li>
<li>Zilberter, Y., Zilberter, T., Bregestovski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+activity+in+vitro+and+the+in+vivo+reality%3A+the+role+of+energy+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Neuronal activity in vitro and the in vivo reality: the role of energy homeostasis.</a> Trends Pharmacol Sci. 31, 394-401 (2010).</li>
<li>Spruston, N., McBain, C. Structural and functional properties of hippocampal neurons. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSpruston%2C+N+%22The+Hippocampus+Book%22">The Hippocampus Book</a>. Andersen, P., Morris, R., Amaral, D., Bliss, T., O'keefe, O. , Oxford University Press. Oxford. (2007).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22The+Hippocampus+Book%22">The Hippocampus Book</a>. Andersen, P., Morris, R., Amaral, D., Bliss, T., O'keefe, O. , Oxford University Press. Oxford. (2007).</li>
<li>Eghbali, M., Curmi, J. P., Birnir, B., Gage, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+GABA%28A%29+channel+conductance+increased+by+diazepam%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Hippocampal GABA(A) channel conductance increased by diazepam.</a> Nature. 388, 71-75 (1997).</li>
<li>Lindquist, C. E., Birnir, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graded+response+to+GABA+by+native+extrasynaptic+GABA+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Graded response to GABA by native extrasynaptic GABA receptors.</a> J Neurochem. 97, 1349-1356 (2006).</li>
<li>Birnir, B., Eghbali, M., Cox, G. B., Gage, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABA+concentration+sets+the+conductance+of+delayed+GABAA+channels+in+outside-out+patches+from+rat+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Membr+Biol%22%5BJournal%5D)">GABA concentration sets the conductance of delayed GABAA channels in outside-out patches from rat hippocampal neurons.</a> J Membr Biol. 181, 171-183 (2001).</li>
<li>Birnir, B., Eghbali, M., Everitt, A. B., Gage, P. W. B. icuculline <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pentobarbital+and+diazepam+modulate+spontaneous+GABA%28A%29+channels+in+rat+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">pentobarbital and diazepam modulate spontaneous GABA(A) channels in rat hippocampal neurons.</a> Br J Pharmacol. 131, 695-704 (2000).</li>
<li>Birnir, B., Everitt, A. B., Gage, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+GABAA+channels+in+rat+dentate+gyrus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Membr+Biol%22%5BJournal%5D)">Characteristics of GABAA channels in rat dentate gyrus.</a> J Membr Biol. 142, 93-102 (1994).</li>
</ol>

De whole-cell staat voor de huidige ensemble van de stromen gegenereerd door actieve kanalen in de cel. De specifieke farmacologie en chloride permeabiliteit van de GABAA kanalen maakt het mogelijk om stromen in verband met deze kanalen te identificeren. De voorbijgaande aard van de activering van synaptische kanalen en de tonic activering van de extrasynaptic kanalen maakt een eenvoudige differentiatie tussen deze twee populaties van de GABAA-kanalen, uitgedrukt in een neuron. Kan echter alleen met een single-channel-opnames een onderzoek naar de kinetische eigenschappen van het kanaal moleculen die de tonica stromen te genereren. In tegenstelling tot synaptische kanalen die geactiveerd binnen 100 microseconde, zijn de tonica GABAA kanalen geactiveerd met een vertraging in het bereik van minuut vanaf het moment dat GABA wordt toegepast 4,7,15,16,17,18. Deze vertraagde activering van de kanalen resulteert in een kanaal dat veel eigenschappen kunnen niet worden bestudeerd met behulp van whole-cell opnames. Op de single-channel niveau van de verschillende sub-populaties van GABAA kanalen kunnen worden geïdentificeerd op basis van verschillende functionele en farmacologische eigenschappen. Dus, door het nemen van een voordeel van wat de verschillende patch-clamp configuraties te bieden hebben, is het mogelijk om in detail te bestuderen de moleculaire functie en farmacologie van de GABA-geactiveerde kanalen die de tonic en synaptische stromen in neuronen te genereren.

Verschillende patch-clamp hardware en software systemen zijn beschikbaar en ze werken allemaal volgens dezelfde basisprincipes. In ons laboratorium hebben we gebruik maken van de Axoclamp versterkers en de PClamp software (Molecular Devices, USA) te registreren en te analyseren onze experimenten. Een andere populaire merk is HEKA versterkers en software (HEKA Elektronik, Duitsland) Microforge: Narishige MF-830 (Japan), Vibrotome: bijv. Leica VT1200S (Duitsland) of Campden Instrumenten vibrotome (Verenigd Koninkrijk), Microscoop: Nikon Eclipse E600FN, Water bad, Micromanipulators: op maat gemaakt en Narishige micromanipulators (Japan), Puller: DMZ- universeel (Duitsland) of Narishige PC-10 (Japan). Elektrode glas: GC150F-15 (Harvard Apparatus, Verenigd Koninkrijk).

gaba-geactiveerde single-kanaal en tonic stromingen in hersenen van de rat slices

GABA-activated Single-channel and Tonic Currents in Rat Brain Slices

De GABA A-kanalen zijn aanwezig in alle neuronen en bevinden zich zowel op synapsen en buiten de synapsen, waar zij genereren fasische en tonische stromingen, respectievelijk 4,5,6,7 De GABA Een kanaal is een pentamere GABA-gated chloride kanaal. Het kanaal subeenheden zijn gegroepeerd in 8 families (α1-6, β1-3, γ1-3, δ, ε, θ, π en ρ). Twee alfa&#39;s, beta&#39;s en een twee 3 e subeenheid vormen de functionele kanaal 8. Door het combineren van studies van sub-type-specifieke GABA-geactiveerde single-channel moleculen met studies, inclusief alle populaties van de GABA A-kanalen in het neuron wordt het mogelijk om inzicht in de fundamentele mechanisme van neuronale inhibitie en hoe het wordt gemoduleerd door farmacologische middelen. We gebruiken de patch-clamp techniek 9,10 aan de functionele eigenschappen van de GABA A-kanalen studie in levend neuronen in de hippocampus hersenen plakken en opnemen van de single-channel en whole-cell stromen. We verder onderzoeken hoe de kanalen worden beïnvloed door verschillende GABA concentraties, andere drugs en het intra-en extracellulaire factoren. Voor gedetailleerde theoretische en praktische beschrijving van de patch-clamp-methode vindt u in de Single-Channel Recordings bewerkt door B en E Sakman Neher 10.

We maken gebruik van de patch-clamp techniek om GABA-geactiveerde single-channel stromingen (GABAA-kanalen, GABAA-receptoren) en de synaptische en tonische stromen ze genereren in neuronen te meten. Activering van de kanalen af ​​neuronale prikkelbaarheid bij gezondheid en ziekte<sup&gt; 1,2,3,4</sup&gt;.

GABA-geactiveerde Single-kanaal en Tonic Stromingen in hersenen van de rat Slices

De GABAA-kanalen zijn aanwezig in alle neuronen en bevinden zich zowel bij synapsen als buiten de synapsen, waar ze fasische en tonische stromen genereren, ...

Het algemene doel van het volgende experiment is het registreren van GABA-geactiveerde stromen gegenereerd door individuele moleculen, de enkelkanaalstroom, en door specifieke populaties kanalen die zich in of buiten synapsen bevinden. Dit wordt bereikt door eerst hippocampus-brensnijden van ratten voor te bereiden en pipetten te maken voor gebruik bij patchclamping. Als tweede stap wordt een pipet bevestigd aan het neuronale membraan.Na de vorming van een giga-seal is de cell-attached patchclamp-configuratie verkregen. Pas vervolgens zuigkracht toe op de pipet. Zodra deze door het celmembraan breekt, is de whole-cell patchclamp-configuratie tot stand gekomen.Er worden resultaten behaald waarmee onderscheid kan worden gemaakt tussen synaptische en extrasynaptische gabaa-kanalen. Het belangrijkste voordeel van de patchclamp-techniek ten opzichte van bestaande methoden zoals EMIT is dat men de functionele eigenschappen van de kanalen kan bestuderen. De patchclamp-methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen in het veld van de neurowetenschappen, zoals wat de exciteerbaarheid van neuronen bepaalt en hoe deze wordt gemoduleerd en nauwkeurig wordt afgesteld.De implicaties van deze technologie strekken zich uit tot de therapie en diagnose van vele ziekten, aangezien elke levende cel afhankelijk is van correct functionerende ionkanalen voor overleving en gespecialiseerde cellulaire functies. De procedure wordt gedemonstreerd door giant, postdoc-onderzoeker in het lab, en young yin, een promovendus in het lab. Om met deze procedure te beginnen, wordt een postnatale Wistar-rat van 16 tot 22 dagen oud gedood door decapitatie, waarna de hersenen snel met een spatel worden verwijderd. Snijd de hersenen langs de middellijn door met een chirurgisch scalpel.Plaats vervolgens elke hemisfeer op een watman filterpapier met het snijvlak naar het papier gericht. Breng een druppel secondelijm aan op de specimen schijf en plaats de hemisfeer daarop met het snijvlak naar beneden gericht. Plaats de specimen schijf vervolgens in de snijkamer van de vibratoom die is gevuld met ijskoud water.Een CSF. Stel de snededikte in op 400 micrometers en begin met het snijden van het brein. Snijd ongeveer twee millimeter hersenweefsel weg tot de hippocampus is bereikt.Plaats vervolgens de hippocampale coupes in een glazen petrischaal gevuld met CSF. De schaal wordt op een zwarte achtergrond geplaatst om de hippocampus gemakkelijk te kunnen visualiseren. De volgende stap is het isoleren van de hippocampus van het omringende weefsel met een scherp chirurgisch mesje.Zorg ervoor dat het weefsel daarna niet wordt geduwd of getrokken. Incubeer de plakjes en de A CSF-oplossing gedurende één uur bij 37 °C en bewaar ze vervolgens bij kamertemperatuur tot de experimenten zijn voltooid. Borosilicaatglazen capillairen worden gebruikt voor de patchpipetten.Trek de patchpipetten met een automatische of handmatige pipettentrekker, resulterend in een weerstand van twee tot vier mega ohm voor whole-cell registraties, of acht tot 20 mega ohm voor single-channel registraties. Polijst de pipet met hetzelfde borosilicaatglas voor single-channel registraties. Gebruik een micro-forge om het borosilicaatglas op de platina draad te smelten om de tip gladder te maken.Het polijsten van de pipetten op deze wijze resulteert in pipetten die stabielere en hoogwaardigere afsluitingen vormen in vergelijking met pipetten die zijn gepolijst door de hitte van een ongecoate draad of door een polijststap in de automatische puller. De patchclamp-apparatuur bestaat uit een microscoop op een trillingsvrije tafel en omsloten door een kooi van Faraday, een versterker, een digitalizer en een computer. Samen wordt deze apparatuur vaak aangeduid als een patchclamp-opstelling.Plaats nu een pipet in de pipethouder en draai de dop aan om de pipet te bevestigen. P clamp wordt gebruikt als patch-clampsoftware. Stel de OC clamp-versterker 200 B in op V clamp, met een versterking van twee, een filter van twee kilohertz en een rustpotentiaal van nul millivolts. Blaas, om positieve druk in de pipet te creëren, lucht in het mondstuk dat is bevestigd aan de slang die verbonden is met de pipethouder.Sluit vervolgens het ventiel tussen het mondstuk en de buis. Controleer of er geen lucht lekt. Breng daarna de pipet naar beneden in de badoplossing.Op het computerscherm waarop de pipetweerstand wordt gemeten, ziet u een puls die is gegenereerd door een pulstrein van vijf millivolt en een getal dat de weerstand van de pipet aangeeft. Kleinere getallen staan voor grotere openingen van de pipetpunt en grotere pipetten. Stel de pipetoffset op de versterker in op nul.Gebruik een 10 x vergroting op de microscoop om de regio te identificeren, of een 60 x vergroting. Om een parametaal neuron te identificeren dat u gaat patchen in de hippocampale coupes, verschijnen de korrelcellen van de gyrus dentatus, de regio van de CA1 parametaal cellichaam en de regio van de CA3 parametaal cellichaam elk als een heldere band. Stel de pipet scherp zodat u zowel de regio of cel als de pipet kunt zien.Plaats de pipet, terwijl u door de oculairs van de microscoop kijkt, boven het midden van het gebied met de grove instelling van de manipulator en laat de pipet zakken tot deze net boven het weefsel staat, maar het nog niet raakt. Laat de pipet op dit punt heel voorzichtig zakken naar het centrum van de cel of het gebied met de fijne instellingen van de manipulator. Houd tegelijkertijd het computerscherm in de gaten om de weerstand van de pipet te volgen.Blijf de pipet laten zakken totdat de weerstand van de pipet toeneemt. Laat de positieve druk uit de pipet ontsnappen door het ventiel te openen. Dit creëert een zachte zuigkracht en vormt automatisch de giga seal.Als de giga-seal niet is gevormd, breng dan zuigkracht aan op het mondstuk waar u eerder positieve druk heeft uitgeoefend. U heeft nu de zogenaamde cell-attached patch-clamp configuratie verkregen. Pas de snelle en langzame capaciteitscompensatie aan om de transiënt van de pipet en de pipethouder op te heffen.Op het computerscherm ziet u een vlakke stroomlijn. Hoe hoger de GigE-waarde is, hoe beter de signaal-ruisverhouding is in de single-channel opnames om single-channel stromen vast te leggen met een cell-attached patchclamp-configuratie. Stel de gain in op 500 en de bemonsteringssnelheid van de gegevens op niet trager dan 100 microseconden.Registreer vervolgens de stromen. Houd het volume van de badoplossing laag, zodat deze de slice net bedekt, om de ruis in de opnames te minimaliseren voor het uitvoeren van whole-cell registratie. Wijzig het pipetpotentiaal naar -60 millivolt of een waarde die dicht bij het rustmembraanpotentiaal ligt.Pas bij de configuratie met vastgehechte cel zuigkracht toe op de pipet via de slang die is verbonden met de pipethouder. Let tegelijkertijd op de veranderingen in de weerstand en de capaciteitstransiënt op het computerscherm. Dit gaat door totdat u door het celmembraan bent gebroken.Wanneer dit gebeurt, bevindt u zich in de zogenaamde whole-cell configuratie of whole-cell modus. Laat de pipetoplossing vijf tot 10 minuten equilibreren met het celinterieur. Houd ondertussen de waarde van de serieweerstand in de gaten.De stroom wordt gedragen door de populaties open kanalen in het celmembraan. Om GABA-geactiveerde enkelkanalen aan te tonen, wordt GABA aan de pipetoplossing toegevoegd, aangezien het het celmembraan niet kan passeren. Hier worden de enkelkanaalstromen getoond die zijn geactiveerd door een GABA-concentratie van 20 nanomolar in een cell-attached patch op een granule neuron van de gyrus dentatus.De patch werd gedepolariseerd met 40 millivolt. De maximale conductantie van het kanaal was 44 Picos semens en de activatielatentie was 2,63 minuten. Hier is een voorbeeld van hoe gaba, geactiveerde synaptische en extrasynaptische stromen kunnen worden onderscheiden aan de hand van het fasische en tonische karakter van de stromen.De stroom door populaties kanalen werd gemeten in hippocampale neuronen van ratten met de whole-cell voltage-clamp methode om tonische en fasische stromen te identificeren. 100 micromolar van de gabaa-antagonist SR 9 55 31 werd toegepast op een neuron van de gyrus dentatus, zoals aangegeven in BA, en op een insuline-behandeld ca. One parametal neuron, zoals aangegeven in BB. SR 9 55 31 blokkeerde de extrasynaptische kanalen en veroorzaakte een verschuiving in de basislijnstroom, waardoor de tonische stroom zichtbaar werd.Zodra de techniek onder de knie is, kan het verkrijgen van een cell-attached patch en het vervolgens doorbreken van het membraan om een whole-cell patch te vestigen binnen twee minuten worden voltooid. Na het volgen van deze procedure kan men patches aanbrengen op andere weefsels, zoals intacte pancreaseilanden, of op geïsoleerde cellen, zoals lymfocyten of cellen in cultuur.

gaba-activated-single-channel-and-tonic-currents-in-rat-brain-slices

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Dit rapport toont een techniek voor mechanische isolatie van individuele levensvatbare neuronen te behouden bevestigd presynaptische boutons. Vibrodissociated neuronen hebben de voordelen van een snelle productie, een uitstekende farmacologische controle en een betere ruimte-clamp zonder invloed van naburige cellen. Deze methode kan gebruikt worden voor beeldvorming van synaptische elementen en patch-clamp opname.

Vibrodissociation van de neuronen van knaagdieren Brain Slices synaptische transmissie en Image presynaptische Terminals Study

This video demonstrates the recording of whole-cell currents induced by gamma-aminobutyric acid, or GABA, in a mouse prefrontal cortical brain slice. Controlled delivery of GABA opens chloride channels in a postsynaptic neuron, generating inhibitory postsynaptic currents, or IPSCs. These IPSCs increase with higher GABA concentrations, reflecting GABA's inhibitory activity on synaptic transmission.

Recording Whole-Cell Currents with GABA Puffing in a Mouse Brain Slice

This video demonstrates a procedure for analyzing synaptic connectivity between medial prefrontal cortex (mPFC) and amygdala neurons using acute amygdala brain slices from mice. The mPFC neurons in these mice express channelrhodopsin fused to a fluorescent protein. The channelrhodopsins facilitate ion influx and action potential generation in the mPFC neurons upon light activation. Consequently, mPFC neurons release neurotransmitters that bind to postsynaptic amygdala neurons, triggering...

Visualization and Mapping of Neuronal Pathways in an Amygdala Brain Slice

This video demonstrates the procedure for studying synaptic efficiency in the lateral entorhinal cortex (LEC) by optogenetically stimulating medial prefrontal cortex (mPFC) axons and recording the responses of pyramidal neurons in the LEC. This method combines patch-clamp recordings with synaptic activation by light stimulation to study synaptic plasticity.

Optogenetic Stimulation and Electrophysiological Recording of Synaptic Events in Rat Brain Slices

Corticale netwerken worden gecontroleerd door een kleine, maar gevarieerde set van remmende interneuronen. Functioneel onderzoek van interneuronen vereist daarom gerichte opname en strenge identificatie. Hier beschreven is een gecombineerde aanpak met whole-cell opnames van enkele of synaptically gekoppelde paren van neuronen met intracellulaire etikettering, post-hoc-morfologische en immunocytochemische analyse.

Whole-cell patch-clamp opnamen van Morphologically- en neurochemisch-geïdentificeerde hippocampus Interneurons

Trillingen zijn fundamentele netwerk-eigenschappen en worden gemoduleerd door ziekte en drugs. Studeren brain-slice oscillaties laat karakterisering van geïsoleerde netwerken onder gecontroleerde omstandigheden. Protocollen zijn voorzien voor de voorbereiding van acute hersenen plakjes voor het oproepen van CA1 γ oscillaties.

Generatie van Local CA1 γ Oscillations door Tetanische Stimulation

We beschrijven de bladerdeeg-techniek, waarbij farmacologische reagentia tijdens geheel-cel patch-clamp opname kunnen worden beheerd, en benadrukken verschillende aspecten van de functies die cruciaal voor het succes ervan zijn.

Geheel-cel stromingen geïnduceerd door Puff toepassing van GABA in de hersenen segmenten

Hier presenteren we protocollen om te ontdekken van verbindingen actief bij GABAA -receptoren, van de binding aan de Fysiologie en farmacologie.

Methoden voor de ontdekking van nieuwe verbindingen moduleren van een Receptor Gamma - aminoboterzuur Typ een transmissie

Acute inbeslagneming modellen zijn belangrijk voor de studie van de mechanismen die ten grondslag liggen aan de epileptiform gebeurtenissen. Bovendien biedt de mogelijkheid om het genereren van epileptiform evenementen op afroep een zeer efficiënte methode om te bestuderen van de exacte volgorde van de gebeurtenissen ten grondslag liggen aan hun inleiding. Hier beschrijven we de acute 4-aminopyridine corticale inbeslagneming modellen gevestigd in muis en menselijk weefsel.

Generatie en On-Demand inleiding van Acute Ictale activiteit in knaagdier en menselijk weefsel

Ex vivo hersenplakken kunnen worden gebruikt om de effecten van vluchtige anesthetica op opgeroepen reacties op afferente inputs te bestuderen. Optogenetica wordt gebruikt om zelfstandig thalamocorticale en corticocorticale afferente stoffen te activeren voor niet-primaire neocortex, en synaptische en netwerkresponsen worden gemoduleerd met isofluraan.

Optogenetische activering van afferente paden in hersenplakken en modulatie van reacties door vluchtige anesthetica

Dit artikel is bedoeld om een systematisch protocol te beschrijven om horizontale hippocampale hersenplakken bij muizen te verkrijgen. Het doel van deze methodologie is om de integriteit van hippocampale vezelroutes te behouden, zoals het perforantpad en het bemoste vezelkanaal om deukende gyrusgerelateerde neurologische processen te beoordelen.

Horizontale Hippocampal Plakjes van de Hersenen van de Muis

Leer de patch-clamptechniek om GABA-geactiveerde enkelkanaalstromen in rattehersenslices te meten. Deze methode onderscheidt synaptische en extrasynaptische GABAA-kanalen om neurale excitabiliteit te bestuderen.

GABA-geactiveerde Single-kanaal en Tonic Stromingen in hersenen van de rat Slices

Meer video's verkennen