Name: Een geoptimaliseerde protocol voor het kweken van Fopius arisanus, Een Parasitaire van Tephritid Fruit Flies (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min
Description: Leer een geoptimaliseerd protocol voor het kweken van Fopius arisanus, een parasitoïde wesp tegen Tephritid fruitvliegen. Deze methode ondersteunt biologische bestrijding in landbouw.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wij danken Keith Shigeteni voor hulp bij het insectary en Natasha Sostrom voor hulp bij computer graphics. Dit werk werd gefinancierd door USDA-ARS. Meningen, bevindingen, conclusies of aanbevelingen in deze publicatie zijn die van de auteurs en komen niet noodzakelijk overeen met de standpunten van de USDA. USDA is een gelijke kansen provider en werkgever.

1. Bereid gastheer fruitvlieg eieren voor parasitering <ol><li> Bereiden op een substraat voor fruitvlieg eieren worden geparasiteerd door het bereiden van agar (alternatief Gelcarin GP812, FMC Biopolymer, Ewing NJ; een meer kosteneffectieve optie) gevulde gerechten, 10 cm in lengte per kant en 1,5 cm diepte. Bereid agar bij een concentratie van 9 g per liter water. </li><li> Vul gerechten tot de rand met vloeibare agar (ongeveer 70 ml), en laat ze afkoelen en stollen (minstens 45 minuten). </li><li> Zodra de agar blokken zijn solide, breng dan een enkele laag van weefsel papier (een enkele laag van de partij Georgia Pacific 'Voorkeur' weefsel), die de bovenkant van elk blok. Het weefsel moet gemakkelijk te houden aan de agar als gevolg van het oppervlak vocht. </li><li> Breng een 0,5 ml volume fruitvlieg eieren gesuspendeerd in water om het weefsel overdekte oppervlakte van de agar blokken. In onze insectary, dit is gelijk aan ongeveer 6000 eieren van Bactrocera dorsalis (12.000 eieren per ml). </li><li> Gebruik een schone 2,5 cm brede kwast gedoopt in water gelijkmatig verspreiden van de fruitvlieg eieren over het weefsel oppervlak. </li><li> Plaats de fruitvlieg eieren onder het onderste scherm van de sluipwesp kooien te ovipositie mogelijk te maken. Tik op de onderkant van het onderste scherm om de dode parasieten die kunnen belemmeren de eieren te verwijderen. Het is het beste als het onderste scherm niet raakt de eieren. </li><li> Laat de parasieten om 's nachts en in de volgende dagen eieren leggen, ongeveer 21 uur. Dit is voldoende tijd voor een hoog percentage van de eieren te geparasiteerd. Langere belichtingstijd risico's superparasitization. </li></ol> 2. Broedeieren en verpopping van parasitering gastheer fruitvliegen <ol><li> Bereid opvoeding container door het plaatsen van 3 tot 3,5 voorbereid agar blokken van parasitering eieren per 1,25 liter fruitvlieg dieet 19 met eieren naar boven. </li><li> Plaats het dieet bak met eieren op een riser over een 1,5 cm diepe laag van fijn vermiculiet of gewassen zand in een grotere verpopping container. Bedek de verpopping container met een deksel en tape de randen van de met plakband. Vermiculiet kan worden hergebruikt na zeven (zie hieronder). </li><li> Ervoor te zorgen dat er voldoende ruimte tussen de bovenkant van het dieet container en de verpopping deksel voor de fruitvlieg larven kruipen uit en 'pop' 20 in de vemiculite hieronder. </li><li> Verhuizen verpopping containers naar een kamer bij 27 ° C en 80% relatieve vochtigheid (RH) voor een week. Bedek containers met een donkere doek voor de eerste vier dagen verwijder vervolgens de doek voor de resterende dagen. </li><li> Verwijder de larvale voeding na een week, zodra larven dook en ging de vermiculiet voor de verpopping. Als er larven in het vermiculiet, hen in staat stellen om zich te verpoppen 's nachts. </li><li> Zeef de poppen uit de vermiculiet. Begin met een grove zeef (ongeveer 3 mm), gebruik dan een hand zeef om alle resterende klonten van vermiculiet te verwijderen. </li></ol> 3. Sortering en selectie <ol><li> Pupa met F. arisanus kan gedeeltelijk worden gescheiden van unparasitized fruitvliegjes op grootte. Verzamel pop tussen de 1,65 en 2,26 mm in diameter, omdat deze zullen worden verrijkt voor geparasiteerd vliegen. 12 Puparia die kleiner zijn bevatten meestal ondermaats parasitoïden grotere pop meestal bevatten vliegen. Merk ook op dat voor de geparasiteerde poppen het percentage van de vrouwen positief correleert met maat 12. </li><li> Een verscheidenheid van methoden kunnen worden gebruikt om poppen sorteren op grootte. We beschrijven een mechanische methode met behulp van een aangepast formaat sorter 21. </li><li> Plaats poppen in de trechter aan de bovenkant van een trilling feeder die langzaam voedt de grootte van sorter. </li><li> Voer de poppen in de omvang sorter, die bestaat uit een paar van iets uiteenlopende rollen bars in een hoek van 30 °. De poppen daling van individueel naar grootte in een array van slots die lege in tien aparte containers door middel van een trechter. </li><li> Verzamel poppen van de bekers in de orde van grootte van 1,65 tot 2,26 mm en leg ze in een kooi opkomst voor 7 dagen tot de meeste vliegen zijn voortgekomen uit de unparasitized poppen. </li><li> Vervolgens gebruikt u een ventilator te legen puparia scheiden van degenen die nog met insecten. </li></ol> 4. F. arisanus opkomst en onderhoud <ol><li> Om de kolonie van F. te behouden arisanus gebruik maken van een sluipwesp kooi met een verwijderbaar glazen front, ongeveer 25 cm in lengte per zijde. De kooi is 1 mm 2 screening op de top en twee van de zijden. De achterkant van de kooi is bedekt met een rubber plaat met een 9 cm gat voor toegang. De bodem van de kooi heeft een uitgesneden aan de binnenkant bedekt met een 1-2mm 2 scherm groot genoeg om de plaatsing van twee agar blokken mogelijk is met fruitvlieg eieren voor parasitoid ovipositie. </li><li> De holding kooien moet ook een getinte gedeelte langs de onderkant kwart van de glazen pui aan het licht die parasitaire verdringing kan maken langs de voorkant van de kooi, wat resulteert in een verhoogde mortaliteit te minimaliseren. </li><li> Plaats ongeveer 11 g van deze selectieTed poppen in plastic containers van ongeveer 9 cm in diameter. Dit moet produceren ongeveer 600-700 parasieten per kooi. Maat selectie zou moeten resulteren in ongeveer 60% vrouwen. </li><li> Bevestig gescreend deksels van de containers. De deksels moeten worden gedekt met een 2 mm 2 screening, waardoor volwassen F. arsianus om de containers te verlaten na opkomst, maar bevat alle resterende fruitvliegen. </li><li> Handhaving van de parasieten bij 24 ° C en ongeveer 45% RH met een 12:12 fotoperiode en goede ventilatie. Als hoge sterfte wordt waargenomen, kan het verplaatsen van de kooien buiten voor een paar uur per dag of meer ventilatie te verminderen. Parasieten moet klaar om eieren leggen in een extra week en moet productief voor twee weken. </li><li> Streak onverdund gesponnen honing langs de bovenkant van de kooien ten minste drie keer per week of wanneer de beschikbare honing droog is. Breng de gesponnen honing in de smalle strepen met behulp van een vingertop. Merk op dat als de strepen zijn te zwaar de honing komt in de kooi, indien te licht de honing zal snel uitdrogen en vereisen regelmatig opnieuw aanbrengen. </li><li> Plaats agar blokken (10 cm x 10 cm x 4 cm) op de toppen van de kooien om vocht te verstrekken aan de parasieten. Deze moeten worden gewijzigd twee keer per week. </li></ol> 5. Representatieve resultaten: Wij rapporteren hier de resultaten van procedures voor kwaliteitscontrole uitgevoerd op de USDA-ARS F. arisanus opvoeding operatie in Hilo, Hawaii tussen 05 januari en juni 22, 2010. Opvoeding op de Hilo locatie op de schaal zoals beschreven in dit artikel en video-protocol werd in augustus 2009, en de initiële problemen en aanpassingen aan de nieuwe locatie was grotendeels opgelost januari. Daarom zijn deze gegevens representatief zijn voor de resultaten andere onderzoekers zouden kunnen verkrijgen van de aanvang van hun kolonie als ze volgen het protocol zoals beschreven en hebben ervaring met opvoeden insecten in het algemeen. In deze periode waren we het handhaven van een kleine kolonie van F. arisanus: 4 parasitaire holding kooien geproduceerd per week, wat overeenkomt met ongeveer 3.600 F. arisanus. Een eerste controle van de verrijkte parasitering tarieven werd uitgevoerd door het nemen van een 2 g monster van poppen in de orde van grootte van 1,65 tot 2,26 mm (verrijkt) voor een extra week van de ontwikkeling in een kooi (dat wil zeggen onmiddellijk na de larvale dieet werd verwijderd en de poppen gezeefd en grootte gesorteerd. We verwijzen naar deze als 'early poppen'). Tijdens de eerste drie maanden van 2010 de gemiddelde verhouding parasieten in de verrijkte monster was 0,46 (SD = 0,18). Tijdens het volgende kwartaal betekent dit was 0,58 (SD = 0,08), als gevolg van de stabilisatie van de kolonie en opvoeding procedures op de nieuwe locatie. Merk op dat de verrijkte poppen, die niet werden met succes geparasiteerd die niet produceren Emergents en degenen die geproduceerd vliegt bevatten. Na een extra week in de kooi verwijderen van lege puparia nog eens twee gram monster werd genomen ('late poppen'). Fruitvliegen vertegenwoordigden minder dan 1% van dit tweede monster. Het lage percentage van fruitvliegen is deels te wijten aan de eerdere opkomst van vliegen in vergelijking met parasieten, dus de meeste vliegen bleef in de holding container. Tot slot, Figuur 1 geeft de opbrengst in popstadium massa van januari tot juni 2010. De opbrengsten zijn gemeten van poppen verrijkt in de orde van grootte van belang, 1.65-2.26 mm. De grote massa van de 'vroege poppen' aan het begin van het jaar geeft een groot deel van de fruitvliegjes en unemerged poppen in die tijd, terwijl aanpassingen werden gedaan om de nieuwe faciliteit. <img src="/files/ftp_upload/2901/2901fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Opbrengst van verrijkte (popstadium een diameter van 1.65-2.26mm) vroeg (direct na size selectie) en 'late' (na het houden van een week en het verwijderen van lege darmen) poppen aan het ARS-USDA F. ariasnus kolonie in Hilo, Hawaii , januari-juni 2010

<ol><li>Wang, X. G., Bokonon-Ganta, A. H., Ramadan, M. M., Messing, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egg-larval+opiine+parasitoids+%28Hym.%2C+Braconidae%29+of+tephritid+fruit+fly+pests+do+not+attack+the+flowerhead-feeder+Trupanea+dubautiae+%28Dipt.%2C+Tephritidae%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Entomology%22%5BJournal%5D)">Egg-larval opiine parasitoids (Hym., Braconidae) of tephritid fruit fly pests do not attack the flowerhead-feeder Trupanea dubautiae (Dipt., Tephritidae.</a> Journal of Applied Entomology. 128, 716-722 (2004).</li>
<li>Vargas, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+for+areawide+integrated+management+of+Mediterranean+fruit+fly+%28Diptera+%3A+Tephritidae%29+with+a+braconid+parasitoid+and+a+novel+bait+spray%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Economic+Entomology%22%5BJournal%5D)">Potential for areawide integrated management of Mediterranean fruit fly (Diptera : Tephritidae) with a braconid parasitoid and a novel bait spray.</a> Journal of Economic Entomology. 94, 817-825 (2001).</li>
<li>Vargas, R. I., Leblanc, L., Putoa, R., Eitam, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+introduction+of+Bactrocera+dorsalis+%28Diptera+%3A+Tephritidae%29+and+classical+biological+control+releases+of+Fopius+arisanus+%28Hymenoptera+%3A+Braconidae%29+on+economically+important+fruit+flies+in+French+Polynesia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Economic+Entomology%22%5BJournal%5D)">Impact of introduction of Bactrocera dorsalis (Diptera : Tephritidae) and classical biological control releases of Fopius arisanus (Hymenoptera : Braconidae) on economically important fruit flies in French Polynesia.</a> Journal of Economic Entomology. 100, 670-679 (2007).</li>
<li>Harris, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+melon+fly+%28Diptera%3A+Tephritidae%29+populations+with+releases+of+Fopius+arisanus+and+Psyttalia+fletcheri+%28Hymenoptera+Braconidae%29+in+North+Shore+Oahu%2C+HI%2C+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Biocontrol%22%5BJournal%5D)">Suppression of melon fly (Diptera: Tephritidae) populations with releases of Fopius arisanus and Psyttalia fletcheri (Hymenoptera Braconidae) in North Shore Oahu, HI, USA.</a> Biocontrol. 55, 593-599 (2010).</li>
<li>Haramoto, F. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22The+Biology+of+Opius+oophilus+Fullaway+%28Hymenoptera%3A+Braconidae%29+%5B%5D%22">The Biology of Opius oophilus Fullaway (Hymenoptera: Braconidae) [dissertation]</a>. , University of Hawaii. Honolulu, HI. (1988).</li>
<li>Chong, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+methods+for+fruit+fly+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Hawaiian+Entomological+Society%22%5BJournal%5D)">Production methods for fruit fly parasites.</a> Proceedings of the Hawaiian Entomological Society. 18, 61-63 (1962).</li>
<li>Snowball, G. J., Wilson, F., Lukins, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+and+consignment+techiques+used+for+parasites+introduced+against+Queensland+fruit+fly+%28Strumeta+tryoni+%28Frogg%29.%29%5BTitle%5D)+AND+%22Australian+Journal+of+Agricultural+Research%22%5BJournal%5D)">Culture and consignment techiques used for parasites introduced against Queensland fruit fly (Strumeta tryoni (Frogg).).</a> Australian Journal of Agricultural Research. 13, 233-248 (1962).</li>
<li>Ramadan, M. M., Wong, T. T. Y., Beardsley, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproductive+Behavior+of+Biosteres+arisanus+%28Sonan%29+%28Hymenoptera%3ABraconidae%29%2C+an+Egg-Larval+Parasitoid+of+the+Oriental+Fruit+Fly%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Control%22%5BJournal%5D)">Reproductive Behavior of Biosteres arisanus (Sonan) (Hymenoptera:Braconidae), an Egg-Larval Parasitoid of the Oriental Fruit Fly.</a> Biological Control. 2, 28-34 (1992).</li>
<li>Ramadan, M. M., Wong, T. T. Y., McInnis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproductive+biology+of+Biosteres+arisanus+%28Sonan%29%2C+an+egg-larval+parasitoid+of+the+oriental+fruit+fly%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Control%22%5BJournal%5D)">Reproductive biology of Biosteres arisanus (Sonan), an egg-larval parasitoid of the oriental fruit fly.</a> Biological Control. 4, 93-100 (1994).</li>
<li>Harris, E. J., Okamoto, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Method+for+rearing+Biosteres+arisanus+%28Hymenoptera%2C+Braconidae%29+in+the+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Economic+Entomology%22%5BJournal%5D)">A Method for rearing Biosteres arisanus (Hymenoptera, Braconidae) in the laboratory.</a> Journal of Economic Entomology. 84, 417-422 (1991).</li>
<li>Bautista, R. C., Harris, E. J., Lawrence, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+and+rearing+of+the+fruit+fly+parasitoid+Biosteres+arisanus%3A+clues+to+insectary+propagation%5BTitle%5D)+AND+%22Entomologia+Experimentalis+Et+Applicata%22%5BJournal%5D)">Biology and rearing of the fruit fly parasitoid Biosteres arisanus: clues to insectary propagation.</a> Entomologia Experimentalis Et Applicata. 89, 79-85 (1998).</li>
<li>Bautista, R. C., Mochizuki, N., Spencer, J. P., Harris, E. J., Ichimura, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass-rearing+of+the+tephritid+fruit+fly+parasitoid+Fopius+arisanus+%28Hymenoptera+%3A+Braconidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Control%22%5BJournal%5D)">Mass-rearing of the tephritid fruit fly parasitoid Fopius arisanus (Hymenoptera : Braconidae).</a> Biological Control. 15, 137-144 (1999).</li>
<li>Bautista, R. C., Harris, E. J., Vargas, R. I., Jang, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parasitization+of+melon+fly+%28Diptera+%3A+Tephritidae%29+by+Fopius+arisanus+and+Psyttalia+fletcheri+%28Hymenoptera+%3A+Braconidae%29+and+the+effect+of+fruit+substrates+on+host+preference+by+parasitoids%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Control%22%5BJournal%5D)">Parasitization of melon fly (Diptera : Tephritidae) by Fopius arisanus and Psyttalia fletcheri (Hymenoptera : Braconidae) and the effect of fruit substrates on host preference by parasitoids.</a> Biological Control. 30, 156-164 (2004).</li>
<li>Rousse, P., Gourdon, F., Quilici, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+specificity+of+the+egg+pupal+parasitoid+Fopius+arisanus+%28Hymenoptera+%3A+Braconidae%29+in+La+Reunion%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Control%22%5BJournal%5D)">Host specificity of the egg pupal parasitoid Fopius arisanus (Hymenoptera : Braconidae) in La Reunion.</a> Biological Control. 37, 284-290 (2006).</li>
<li>Quimio, G. M., Walter, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+preference+and+host+suitability+in+an+egg-pupal+fruit+fly+parasitoid%2C+Fopius+arisanus+%28Sonan%29+%28Hym.%2C+Braconidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Zeitschrift+fur+Angewandtes+Entomologie%22%5BJournal%5D)">Host preference and host suitability in an egg-pupal fruit fly parasitoid, Fopius arisanus (Sonan) (Hym., Braconidae).</a> Zeitschrift fur Angewandtes Entomologie. 125, 135-140 (2001).</li>
<li>Calvitti, M., Antonelli, M., Moretti, R., Bautista, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oviposition+response+and+development+of+the+egg-pupal+parasitoid+Fopius+arisanus+on+Bactrocera+oleae%2C+a+tephritid+fruit+fly+pest+of+olive+in+the+Mediterranean+basin%5BTitle%5D)+AND+%22Entomologia+Experimentalis+Et+Applicata%22%5BJournal%5D)">Oviposition response and development of the egg-pupal parasitoid Fopius arisanus on Bactrocera oleae, a tephritid fruit fly pest of olive in the Mediterranean basin.</a> Entomologia Experimentalis Et Applicata. 102, 65-73 (2002).</li>
<li>Montoya, P., Suarez, A., Lopez, F., Cancino, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fopius+arisanus+oviposition+in+four+Anastrepha+fruit+fly+species+of+economic+importance+in+Mexico%5BTitle%5D)+AND+%22Biocontrol%22%5BJournal%5D)">Fopius arisanus oviposition in four Anastrepha fruit fly species of economic importance in Mexico.</a> Biocontrol. 54, 437-444 (2009).</li>
<li>Vargas, R. I., Shelly, T. E., Leblanc, L., Piñero, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+Advances+in+Methyl+Eugenol+and+Cue-Lure+Technologies+for+Fruit+Fly+Detection%2C+Monitoring%2C+and+Control+in+Hawaii%5BTitle%5D)+AND+%22Pheromones%22%5BJournal%5D)">Recent Advances in Methyl Eugenol and Cue-Lure Technologies for Fruit Fly Detection, Monitoring, and Control in Hawaii.</a> Pheromones. 83, 575-595 (2010).</li>
<li>Tanaka, N., Steiner, L. F., Ohinata, K., Okamoto, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-cost+larval+rearing+medium+for+mass+production+of+oriental+and+Mediterranean+fruit+flies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Economic+Entomology%22%5BJournal%5D)">Low-cost larval rearing medium for mass production of oriental and Mediterranean fruit flies.</a> Journal of Economic Entomology. 62, 967-968 (1969).</li>
<li>Vargas, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+production+of+tephritid+fruit+flies%5BTitle%5D)+AND+%22World+crop+pests.+Fruit+flies%3A+Their+biology%2C+natural+enemies+and+control%22%5BJournal%5D)">Mass production of tephritid fruit flies.</a> World crop pests. Fruit flies: Their biology, natural enemies and control. 3, 141-151 (1989).</li>
<li>Spencer, J. P., Mochizuki, N., McInnis, D. O., Liquido, N. J. Mechanical separation of parasitoid sexes based upon size of fruit fly host pupae. Abstracts of the 2nd meeting of the Working Group on Fruit Flies of the Western Hemisphere Vina Del Mar, Chile, , (1996).</li>
<li>Dukas, R., Duan, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+fitness+consequences+of+associative+learning+in+a+parasitoid+wasp%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Ecology%22%5BJournal%5D)">Potential fitness consequences of associative learning in a parasitoid wasp.</a> Behavioral Ecology. 11, 536-543 (2000).</li>
<li>Drew, R., Tsuruta, K., White, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+species+of+pest+fruit+fly+%28Diptera%3A+Tephritidae%3A+Dacinae%29+from+Sri+Lanka+and+Africa%5BTitle%5D)+AND+%22African+Entomology%22%5BJournal%5D)">A new species of pest fruit fly (Diptera: Tephritidae: Dacinae) from Sri Lanka and Africa.</a> African Entomology. 13, 149-154 (2005).</li>
<li>Argov, Y., Gazit, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+control+of+the+Mediterranean+fruit+fly+in+Israel%3A+Introduction+and+establishment+of+natural+enemies%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Control%22%5BJournal%5D)">Biological control of the Mediterranean fruit fly in Israel: Introduction and establishment of natural enemies.</a> Biological Control. 46, 502-507 (2008).</li>
<li>Bokonon-Ganta, A. H., Ramadan, M. M., Messing, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproductive+biology+of+Fopius+ceratitivorus+%28Hymenoptera+%3A+Braconidae%29%2C+an+egg-larval+parasitold+of+the+Mediterranean+fruit+fly%2C+Ceratitis+capitata+%28Diptera+%3A+Tephritidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Control%22%5BJournal%5D)">Reproductive biology of Fopius ceratitivorus (Hymenoptera : Braconidae), an egg-larval parasitold of the Mediterranean fruit fly, Ceratitis capitata (Diptera : Tephritidae).</a> Biological Control. 41, 361-367 (2007).</li>
</ol>

We hebben geen belangenconflicten te melden.

In dit protocol en de bijbehorende video-artikel hebben we beschreven en aangetoond een geoptimaliseerd protocol voor het kweken van F. ariasnus, een parasitoïde van Tephritid fruitvliegen, in een laboratorium setting. Dit protocol werd verfijnd door de jaren heen naar de hoeveelheid arbeid en gespecialiseerde apparatuur die nodig is om een ​​kolonie te behouden te minimaliseren. Wij constateren dat een gevestigde, productieve en stabiele kolonie van gastheer fruitvliegen is vereist voor elke poging tot opvoeding sluipwespen. In onze insectary gebruiken we Bactrocera dorsalis als gastheer fruitvlieg, maar ook andere soorten is aangetoond dat ze bevoegd zijn gastheren en 14-17. Verschillende aspecten van F. arisanus kolonie onderhoud moeten nog worden onderzocht. Deze omvatten de snelheid van het laboratorium aanpassing in deze soort 10, mechanismen van het leren 22 en de genetische veranderingen die zich kunnen voordoen met aanpassing en mechanismen die een rol kunnen spelen in gastheer fruitvlieg plasticiteit. De afgelopen tien jaar zijn er meerdere voorbeelden van de verspreiding van Dacine vliegt de hele wereld, vooral die in het geslacht Bactrocera: B. dorsalis in Frans Polynesië, B. carambolae in delen van Zuid-Amerika, B. invadens in Afrika en B. zonata in Afrika en Noord-Middellandse Zee. 3,23,18 Het testen van de effectiviteit van biologische bestrijdingsmiddelen zoals F. arisanus tegen andere Bactrocera soorten moeten een hoge prioriteit, en het is onze hoop dat de toepassing van de methoden beschreven in dit protocol en de bijbehorende video-artikel, zal versnellen onderzoek naar de F. arisanus in een breder scala van locaties 24. Tenslotte kan nader onderzoek met deze methode als uitgangspunt ook belangrijke informatie voor de kolonisatie van nieuwe ei sluipwespen 25,1

een geoptimaliseerde protocol voor het kweken van fopius arisanus, een parasitaire van tephritid fruit flies

An Optimized Protocol for Rearing Fopius arisanus, a Parasitoid of Tephritid Fruit Flies

Fopius arisanus (Sonan) is een belangrijke parasieten van Tephritid fruitvliegen ten minste twee redenen. Ten eerste is het een van de slechts drie opiine parasitoïden bekend zijn bij de gastheer te infecteren tijdens de ei-fase 1. Ten tweede, het heeft een breed scala van mogelijke fruitvlieg hosts. Misschien te wijten aan haar levensgeschiedenis, F. arisanus is een succes gebruikt voor biologische bestrijding van fruitvliegen in meerdere tropische gebieden 2-4. Een belemmering voor het ruime gebruik van F. arisanus voor de fruitvlieg controle is dat het moeilijk is om een stabiele kolonie laboratorium 5-9 vast te stellen. Ondanks deze moeilijkheid, in de jaren 1990 USDA onderzoekers ontwikkelden een betrouwbare methode om het laboratorium populaties van F. te behouden arisanus 10-12. Er is grote interesse in F. arisanus biologie 13,14, in het bijzonder met betrekking tot zijn vermogen om een breed scala van Tephritid gastheren 14-17 koloniseren; belang is vooral gedreven door de alarmerende verspreiding van Bactrocera fruitvlieg plagen om nieuwe continenten in de laatste tien jaar 18. Verder onderzoek naar F. arisanus en extra inzet van deze soort als een biologisch bestrijdingsmiddel zal profiteren van optimalisaties en verbeteringen van het houden van methoden. In dit protocol en de bijbehorende video-artikel beschrijven we een optimale methode voor het kweken van F. arisanus op basis van een eerder beschreven aanpak 12. De methode die we beschrijven hier maakt het fokken van F. arisanus in een kleine schaal zonder het gebruik van fruit, gebruik van materialen die beschikbaar zijn in tropische gebieden over de hele wereld en met relatief weinig manuele arbeid.

Fopius arisanus is een ei-larve-parasiet van Tephritid fruitvliegen die met succes wordt toegepast in de biologische bestrijding van deze belangrijke tropische ongedierte. We beschrijven hier een geoptimaliseerd protocol voor het kweken van F. arisanus op kleine schaal met behulp van gemakkelijk beschikbare materialen.

Een geoptimaliseerde protocol voor het kweken van Fopius arisanus, Een Parasitaire van Tephritid Fruit Flies

*Fopius arisanus* (Sonan) is om ten minste twee redenen een belangrijke parasitoïde van Tephritidae-fruitvliegen. Ten eerste is het een van de slechts drie opiine ...

FOIA Aus is een belangrijk biologisch bestrijdingsmiddel in Hawaï omdat het de fruitvliegen aanvalt, die ernstige economische plagen vormen in de tropen en in het bijzonder hier in Hawaï. Het voordeel van FOIA Aus is dat het de eifase van het plaaginsect aanvalt, waardoor het insect in een vroeg stadium wordt bestreden. In de volgende fragmenten ziet u close-ups van hoe we FOIA Aus kweekten in een laboratoriumomgeving.Aan het einde van dit programma volgt een bespreking over hoe dit specifieke parasitoïde is ingezet in een succesvol uitzettingsprogramma in Frans-Polynesië. We beginnen ons protocol met volwassen parasieten die klaar zijn om eitjes van een waardvlieg te parasiteren. De eerste stap is het voorbereiden van de vliegeneitjes om deze aan de parasiet aan te bieden.Vervolgens krijgen de fruitvliegenlarven de kans om uit te komen, zich te ontwikkelen en te verpoppen. Zodra de fruitvliegen het popstadium bereiken, worden ze op grootte gesorteerd om de concentratie parasieten te verhogen. Ten slotte komen de parasieten tevoorschijn en worden ze in stand gehouden tot ze volgroeid zijn.Vervolgens komen ze samen en zijn ze weer klaar om eitjes te leggen in een nieuwe batch fruit. Dit voltooit de cyclus.Bereid een substraat voor de fruitvliegeieren door agarblokken te maken van ongeveer 10 centimeter per zijde. De agar wordt bereid in een concentratie van negen gram agarpoeder per liter water.Vul de schaaltjes op een vlak oppervlak tot aan de rand met vloeibare auger en laat dit gedurende ten minste 45 minuten stollen. Zodra de augerblokken gestold zijn, brengt u een enkele laag vloeipapier aan over de bovenkant van elk augerblok. Door het oppervlaktevocht zou het vloeipapier gemakkelijk aan de auger moeten hechten.Een tweede keer rollen. Breng de fruitvliegen-eieren aan op het met weefsel bedekte oppervlak van de boorblokken. Een volume van 0,5 milliliter fruitvliegen-eieren in suspensie levert ongeveer 6 000 eieren per blok op.Een 2,5 centimeter brede kwast gedoopt in water wordt gebruikt om de fruitvliegen-eieren gelijkmatig over het weefseloppervlak te verspreiden. De fruitvliegen-eieren worden nu onder het onderste scherm van de parasietkooien geplaatst zodat de parasieten deze kunnen overnemen; door tegen de onderkant van het scherm te tikken, worden dode parasieten verwijderd die de fruitvliegen-eieren zouden kunnen blokkeren. De fruitvliegen-eieren stellen de parasieten in staat om gedurende de nacht over te poseren.Ongeveer 21 uur is voldoende om een hoog percentage van de fruitvliegeieren te laten parasiteren. Een langere blootstelling brengt het risico op superparasitering met zich mee. De belangrijkste componenten die nodig zijn voor het opkweken van de eieren na blootstelling aan parasieten zijn fruitvliegenlarvenvoeding, containers voor larvenvoeding en poppingscontainers.Plaats drie tot drie en een halve voorbereide auger-blokken met geparasiteerde eieren op één en een kwart liter fruitvliegenlarvenvoedsel. Plaats de beker met voedsel en eieren op een verhoging en plaats een verpoppingsbeker over een anderhalve centimeter dikke laag fijnmazige vermiculiet of gewassen zand.Plak de randen van de verpopingscontainer af met schilderstape. Zorg ervoor dat er voldoende ruimte is tussen de bovenkant van de voedingscontainer en het deksel van de verpopingscontainer, zodat de larven eruit kunnen kruipen en in de onderliggende vermiculiet kunnen vallen. Verplaats de verpopingscontainers gedurende één week naar een ruimte bij 27 °C en 80% relatieve vochtigheid.Bedek de containers gedurende de eerste vier dagen na één week met een zware doek. Open de verpoppingscontainers en verwijder het larvenvoeding. Wij gebruiken Bre Dorsals als de gastvruchtvlieg voor de kweek van foia Airis.Andere soorten in de genera Asfa en Sitis zijn ook potentiële gastheren. Als er onverpopte larven in de vermiculiet zitten, laat deze dan gedurende de nacht verpoppen. Zeef de poppen uit de vermiculiet door te beginnen met een grove zeef en een grote container.Gebruik vervolgens een handsieve om eventuele resterende klonten vermiculiet die containing opia bevatten te verwijderen. Ais kunnen gedeeltelijk worden gescheiden van niet-geparasiteerde fruitvliegen. Op basis van eerder onderzoek verzamelen we daarom alleen de aria met een diameter tussen 1,65 en 2,26 millimeter; exemplaren die kleiner zijn, bevatten voornamelijk ondermaatse parasitoïden.Grotere areia bevatten voornamelijk vliegen. Er kunnen verschillende methoden worden gebruikt om de poppen op grootte te sorteren. Wij beschrijven een mechanische methode waarbij een op maat gemaakte groottesorteerder wordt gebruikt voor de verzamelde geparasiteerde areia.Het percentage vrouwtjes neemt toe met de grootte. Plaats de puy in de trechter aan de bovenzijde van de mechanische groottesorteerder. Een trilvoeder verplaatst ze naar de bovenkant van een paar licht uiteenlopende rollende staven onder een hoek van 30 graden. De aria vallen individueel in een reeks sleuven die via trechters in 10 afzonderlijke containers lopen.Plaats de poppen met een diameter tussen 1,65 millimeters en 2,26 millimeters gedurende nog zeven dagen in een uitkomstkooi, totdat de meeste vliegen uit de geparasiteerde poppen zijn uitgekomen. Gebruik vervolgens een ventilator om de lege vliegenhuiden te scheiden van die waarin nog levende parasitoïden zitten. Om de kolonie van Opia Aus in stand te houden, wordt een kooi voor parasieten gebruikt met een afneembaar glazen voorpaneel en een zijdelengte van ongeveer 25 centimeters.De kooi is aan de bovenzijde en aan twee van de zijkanten voorzien van een gaas met een maaswijdte van één vierkante millimeter. De achterzijde van de kooi is bedekt met een rubberen vel met een gat van negen centimeter voor toegang. De onderzijde van de kooi heeft een uitsparing die aan de binnenzijde is afgedekt met een gaas van één tot twee vierkante millimeter.Groot genoeg om de plaatsing van twee boorblokken met fruit en vliegeneieren voor de positie van de parasiet mogelijk te maken. De kooien moeten ook een getint gedeelte hebben langs het onderste kwart van de glazen voorkant om parasietendichtheid langs de voorkant van de kooi te minimaliseren. Plaats ongeveer 11 gram van het geselecteerde medium in plastic bakjes met een diameter van ongeveer negen centimeter.Dit zou ongeveer 600 tot 700 parasieten per kooi moeten opleveren. Grootteselectie zou moeten resulteren in ongeveer 60% vrouwtjes. Bevestig zeefdeksels op de containers. De deksels moeten zijn bedekt met een gaas van twee vierkante millimeter, waardoor de volwassen vliegen de containers bij het uitkomen kunnen verlaten, maar eventuele overgebleven fruitvliegen worden tegengehouden.Houd de parasieten bij 24 °C en een relatieve vochtigheid van ongeveer 45% met een fotoperiode van 12:12 en een goede ventilatie; breng ten minste drie keer per week stroken gesponnen honing aan langs de bovenkant van de kooien. Of, telkens wanneer de aanwezige honing is uitgedroogd, breng de gesponnen honing in smalle strepen aan met een vingertop. Let op dat de honing in de kooi zal druppelen als de strepen te dik zijn. Als de strepen te dun zijn, droogt de honing snel uit en is frequente aanbrenging nodig. Plaats auger-blokken van 10 cm bij 10 cm en 4 cm diep op de bovenkant van de kooien om de parasieten van vocht te voorzien.Deze blokken moeten twee keer per week worden gewisseld. In 2001 ontvingen we een kleine startbeurs om te onderzoeken of we biologische bestrijdingsmiddelen konden introduceren in Frans-Polynesië om de situatie te helpen verlichten, omdat de oosterse fruitvlieg op dat moment een ongelooflijke plaag veroorzaakte van alle tropische vruchten. Vanuit het laboratorium hier in Hawaii hebben we 10 zendingen verstuurd.Elk van deze zendingen bestond gewoonlijk uit ongeveer honderdduizend Fopius arisanus; eigenlijk waren het er een stuk meer, maar we verzonden de puparia van de oriëntaalse fruitvlieg met de parasitoïde erin, en daarna lieten we ze uitkomen. We richtten een klein laboratorium in op Tahiti waar we deze zendingen ontvingen en vervolgens de Fopius arisanus lieten uitkomen. Over een periode van ongeveer een jaar hebben we bijna een miljoen Fopius arisanus uitgezet.Over het algemeen is dit de meest succesvolle aanpak buiten Hawaï. Toen FOIA Aus aanvankelijk in Hawaï werd geïntroduceerd, was het het beste voorbeeld van biologische bestrijding van fruitvliegen in de gehele Pacific. In de afgelopen 10 jaar is er wereldwijd een enorme verspreiding geweest van het Bactrocera dorsalis-complex.Zo is Bactrocera Carbo verspreid naar Zuid-Amerika, Suriname, en bevindt het zich nu in Noord-Brazilië. Daarnaast is er een andere soort genaamd Bacter Inance, die zich over heel Afrika heeft verspreid en daar voor grote schade zorgt. Ook is er sprake geweest van de verspreiding van bacter papaya.Dit succes opent nu mogelijkheden om deze FOIA Aus uit te brengen in Zuid-Amerika, Afrika en in andere delen van Azië.

an-optimized-protocol-for-rearing-fopius-arisanus-parasitoid

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Een methode voor het kweken van Drosophila melanogaster onder axenic en gnotobiotische voorwaarden wordt gepresenteerd. Fly embryo's worden dechorionated in natriumhypochloriet, aseptisch in steriele voeding en grootgebracht in gesloten containers. Inenten van voeding en embryo's met bacteriën leidt tot gnotobiotische verenigingen, en bacteriële aanwezigheid wordt bevestigd door plating whole-body Drosophila homogenaten.

Het grootbrengen de fruitvlieg<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Onder Axenische en gnotobiotische voorwaarden

Hier presenteren we een protocol op basis van het meelworm (Tenebrio molitor)-aassysteem dat werd gebruikt voor het isoleren en selecteren van entomopathogene schimmels (EPF) uit bodemmonsters. Een effectieve conidia-getalformule (ECN) wordt gebruikt om een hoge stresstolerante EPF te selecteren op basis van fysiologische kenmerken voor microbiële bestrijding van plagen in het veld.

Isolatie en selectie van entomopathogene schimmels uit bodemmonsters en evaluatie van schimmelvirulentie tegen insectenplagen

Ganaspis brasiliensis - een larvale parasitoïde van Drosophila suzukii (een wereldwijde invasieve fruitgewasplaag) - is goedgekeurd of wordt overwogen voor introductie in Europa en de Verenigde Staten voor biologische bestrijding van deze plaag. Dit artikel geeft protocollen voor zowel kleinschalige als grootschalige opfok van deze parasitoïde.

Methoden voor het fokken van de parasitoïde Ganaspis brasiliensis, een veelbelovend biologisch bestrijdingsmiddel voor de invasieve Drosophila suzukii

Het verhogen van de detectie van onrijpe tephritid fruitvliegen in het veld kan leiden tot tijdige inspanningen om populaties van deze destructieve plagen te elimineren. Het detecteren van late instarlarven is sneller en nauwkeuriger wanneer gastheerfruit in een zak wordt gemoest en de pulp door een reeks zeven wordt geleid dan met de hand snijden en visuele inspectie.

Fruitpulp zeven om onrijpe tefritide fruitvliegen in het veld te detecteren

Hier presenteren we een protocol voor het verkrijgen van entomopathogene schimmels van een boshoutboorder en een vervangende manier om hun entomopathogene activiteiten te evalueren met behulp van een Coleoptera-modelinsect. Deze methode is efficiënt en handig voor het verkennen van entomopathogene schimmelbronnen van houtborende insectenplagen in natuurlijke bossen.

Isolatie, gedragsidentificatie en pathogeniteitsbeoordeling van entomopathogene schimmels van een boshoutboorder

Dit artikel schetst het laboratoriumonderhoud (inclusief paring en voeding) van de onderste dipteranvlieg Bradysia (Sciara) coprophila.

Laboratoriumonderhoud van de onderste dipteravlieg Bradysia (Sciara) coprophila: een nieuw/oud opkomend modelorganisme

Het doel van dit protocol is het faciliteren van functionele analyse van parasitoïde-gastheerinteracties in Asobara japonica en Drosophila melanogaster. Door geoptimaliseerde kweekmethoden, een infectietest met één eicel en RNAi-gemedieerde gen-knockdown.

Protocollen voor efficiënte opvoeding en functionele analyse van de endoparasitoïde wesp Asobara japonica en haar gastheer Drosophila melanogaster

Studeren Agressie in Drosophila (fruitvliegjes)

Deze video illustreert de algemene technieken die worden gebruikt aan de achterzijde Anopheles gambiae in het laboratorium. De methoden voor het onderhoud van het laboratorium muggen worden gedemonstreerd in alle stadia van het leven van het organisme cyclus van larven tot poppen om bloed te geven volwassenen.

Protocol voor Mosquito Opfok (A. gambiae)

Een snelle methode voor vluchtige verbinding analyse fruit beschreven. De vluchtige stoffen in de kopruimte van een homogenaat van het monster snel gescheiden en gedetecteerd met ultrasnelle gaschromatografie (GC) gekoppeld met een akoestische oppervlaktegolf (IST) sensor. Een procedure voor data verwerking en analyse wordt ook besproken.

Fruit Vluchtige analyse met behulp van een elektronische neus

Leer een geoptimaliseerd protocol voor het kweken van Fopius arisanus, een parasitoïde wesp tegen Tephritid fruitvliegen. Deze methode ondersteunt biologische bestrijding in landbouw.

Een geoptimaliseerde protocol voor het kweken van Fopius arisanus, Een Parasitaire van Tephritid Fruit Flies

Meer video's verkennen