Windowing Kip Eieren voor Ontwikkelingsbiologie Studies

Welkom bij het Kramer Lab. Ik ben Matt Korn, afdeling Neurobiologie en Gedrag aan de Universiteit van Californië Irvine. Vandaag laat ik zien hoe je kippeneieren kunt voorbereiden voor verschillende manipulaties, inclusief het plaatsen van kralen, het injecteren van kleurstoffen of in ovo exploratie.

Dus zonder verder oponthoud, laten we beginnen. Oké, dus we gaan het ei schoonmaken. De reden hiervoor is dat er veel dingen op kunnen komen in de incubator.

We gaan dit afdichten met plakband. We willen geen kleine stukjes rond de plek waar het raam gaat komen, omdat het de kans verhoogt dat het embryo sterft voordat we het eruit willen halen. Dus als je vanuit de incubator ziet, liggen de eieren met de grote kant omhoog.

Dus wat we gaan doen is het ei kantelen. Dat doet twee dingen. Ten eerste komt ons raam hier te zitten en ten tweede moet het embryo naar boven drijven zodat we elk type manipulatie kunnen uitvoeren.

Dus ik ga een paar eieren hieruit halen van de rek die in de incubator stond en ze in een kartonnen eierhouder plaatsen. Dit is eigenlijk het stuk dat in de doos zit wanneer de eieren worden geleverd. Dus voor vandaag gaan we het gewoon gebruiken om de eieren te houden.

De opstelling is nu aan jou. Ik doe het graag op deze manier omdat ik toegang heb tot alle eieren op elk moment en geen van de eieren raakt elkaar. Als ik er een zou vinden die los zit en een barst heeft en die zou vallen, hebben ze allemaal een beetje ruimte van elkaar.

Dus ik ga mijn gaas hier pakken en er een mooie stapel van maken zoals deze en het in twee delen splitsen. Ik ga hier 70% alcohol nemen en het gewoon vullen tot ik het onderste een beetje vochtig voel. En dat is omdat ik deze hele stapel ga gebruiken om alle eieren mee te vegen.

Dus dan neem ik er een paar van de bovenkant, ga het echt op de bovenkant doen maar in feite bijna over het hele ei. En nadat dit is gebeurd, droogt de alcohol vrij snel en dan kunnen we er plakband op doen. Het plakband zal goed plakken en tegen de tijd dat ik een set heb afgewerkt, is de eerste meestal droog en kunnen we doorgaan naar de volgende stap in onze eivoorbereiding.

Dus nogmaals, plaats dat terug in de prullenbak en we zijn klaar om naar de volgende stap te gaan. Oké, nu dat al onze eieren met de alcohol zijn geveegd, kunnen we een afvoergat maken op de grote kant van het ei, de basis van het ei. En dit zal ons toelaten om in te gaan en wat albumine te extraheren, want als we de albumine niet extraheren, zit het embryo niet goed.

We kunnen geen manipulaties uitvoeren. Dus dit omvat dat ik een mes neem en dit plastic plakband. Het is een beetje elastisch, wat geweldig is.

Niet alleen laat het ons toe om over een gat te strekken als het iets groter is dan we zouden willen, maar wanneer we het hele ei bedekken, zullen we dit moeten strekken. Dus het gebied waar het raam gaat komen is volledig bedekt. Dus ik ga er gewoon een stukje afsnijden zoals dit en dan een strookje van ongeveer een millimeter maken.

En dan kan ik hieruit een stukje plakband van ongeveer een millimeter vierkant maken. En dan ga ik het gewoon bovenaan naar links van de datum plaatsen. Zet het daar recht en je kunt het zien.

Het plakt heel mooi. Dan kan ik terugkomen naar de strook die ik al heb gemaakt, nog een millimeter plakband afsnijden. En plaats het weer naar links van het nummer daar, wat eigenlijk de bovenkant van het ei is.

Nu dat we het op zijn kant hebben gedraaid, is het aan de rechterkant. En nog een stukje hier. Nu draag ik geen handschoenen omdat het plakband zich aan de handschoenen zal hechten als ik handschoenen draag en ik heb mijn handen gewassen.

Ik maak me niet echt zorgen over iets anders dat de actieve stof op dit moment zal verontreinigen. Dus ik ga een schaar met een scherpe punt pakken. Ik ga in het midden van waar ik het plakband heb geplaatst en draai het in een tegen de klok in draaiende beweging tot ik het een beetje laat breken.

En je zult zien dat er een klein gaatje is. Nu hoeft het gat niet erg groot te zijn omdat zodra we de spuit erin krijgen, zal het het gat groot genoeg maken. Maar dit is zodat we niet recht ingaan met een naald en proberen het ei te breken met dat omdat dat vaak zal leiden tot het hele zijvlak van het ei dat uit elkaar valt.

Dan kunnen we het ei niet meer gebruiken. Oké, dus nu ga ik het ei laten weglopen. We hebben dat mooie kleine gaatje aan de zijkant en ik ga deze 10 milliliter spuit en een redelijk grote naald gebruiken om de albumine te extraheren.

Nu wil ik ongeveer drie of vier milliliter, zeker meer dan drie, niet veel meer dan vier en een half of vijf. Dit zal ons embryo dat nu op de bovenkant zit een beetje weg laten vallen van de schaal. En dan kunnen we onze manipulaties uitvoeren.

Dus door op een hoek van 45 graden te gaan, ben ik onder de dooier. En dan wil ik het een beetje naar rechts draaien om eronder te glijden en je kunt de naaldpunt voelen die de bodem van het ei raakt. En ik ga ongeveer drie of vier milliliter eruit halen en het komt er vrij mooi uit.

Ik ga deze albumine in mijn tailleemmer hier gooien en nu kan ik doorgaan met de andere eieren. Oké, dus ik ga door. En je zult hier zien dat het gat dat ik heb gemaakt voor het weglopen een beetje groter is dan ik zou willen, maar dat blijkt oké te zijn.

Wat ik me wil aantrekken is dat ik, terwijl ik de naald steek, het niet meer breek. Dus ik ga dat gewoon doen. Oké, dus ik kan al zien dat het ei een beetje een barst in heeft.

Kleine barsten zijn oké, maar je moet je zorgen maken als het zich uitstrekt naar een ander vlak van