Name: Windowing Kip Eieren voor Ontwikkelingsbiologie Studies (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 1 s
Description: Leer een geoptimaliseerde methode voor het prepareren van kippeneieren voor neurobiologische experimenten. Deze techniek verbetert de overlevingstijd van embryo's en faciliteert cel fate mapping in ontwikkelingsbiologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

1. Verwijder de eieren van incubator <ol><li> Te handhaven op 37 ° C met een relatieve luchtvochtigheid die boven de 60%. </li><li> Verwijder de eieren, sla de eieren 90 °, zodat de grote basis horizontaal ligt. </li></ol> 2. Wattenstaafje eieren om te steriliseren <ol><li> Verzadigen een stapel van niet-steriel gaasje met 70% ethanol. </li><li> Gebruik twee tot drie stukken op te uitstrijkje tot 5 eieren. Gooi als het gaas vuil is. </li></ol> 3. Voorbereiden eiwit verwijderen website <ol><li> Knippen en plaats een 1 &quot;x 1&quot; stukje plastic tape 3M net links van de basis om het gebied waar de albumine zullen worden getrokken uit te beschermen. </li></ol> 4. Verwijdering van albumine <ol><li> Gebruik de punt van een schaar om een ​​klein gat in het midden van de tape. </li><li> Met behulp van een 10 cc spuit met een 18-gauge, 1-inch naald langzaam boren de naald door het gat van de schaar. </li><li> Rij de naald neer op een hoek van 45 ° C naar de onderkant van het ei. </li><li> Kantel de naald richting het centrum en het opstellen van 3-4 mL van eiwit. </li></ol> 5. Window <ol><li> Snijd een 3 &quot;x 3&quot; stukje plastic tape en rek het te passen op de top van het ei. Uitbreiding van de hoeken van het plein rond de afgeronde uiteinden van de horizontale oppervlakte van de eieren, zorg dat u trekken te hard. Trek de tape, zodat deze strak tegen het oppervlak van de eieren zonder plooien. </li><li> Met behulp van een paar scherpe rechte 4 &quot;dissectie schaar, draai een gat in de onderkant midden van het gebied waar de tape is geplaatst. Langzaam het onderste blad van de schaar gids in het ei en zorg ervoor om de tips te houden tegen de binnenkant van de schelp. Direct het blad naar de basis en langzaam beginnen de shell te snijden. Voorwaarts in een tegen de klok mode, stoppen net voor het bereiken van de top centrum. Verwijder de schaar en herhaal gaan in de tegenovergestelde richting totdat er slechts een klein stukje van de ei verbonden blijft. Controleer of het ei wordt bevrucht. Sluit het venster. </li></ol> 6. Sluiten, heropenen en het afdichten van de ei. <ol><li> Snijd ongeveer een 2-3 &quot;lang en 1 / 2&quot; breed plastic tape en sloot het raam, zodat het past weer in het gat dat werd gesneden. Neem een ​​ander 1 x een &quot;stuk tape en zegel het gat waar het ei werd afgevoerd. Gebruik een pincet om het ei op een manipulatie te doen heropenen. Wanneer u klaar bent om de eieren terug te keren naar de incubator, snijd een stuk van de tape die groot genoeg is om het venster te verzegelen en de hele horizontale oppervlak van het ei te dekken. </li></ol>

<ol><li>Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 224, 138-151 (2000).</li>
<li>Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 269, 26-35 (2004).</li>
<li>Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. Dev Biol. 295, 76-89 (2006).</li>
<li>Huffman, K. J., Cramer, K. S. Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).</li>
<li>Krull, C. E. Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).</li>
<li>Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).</li>
</ol>

Deze methode zorgt voor lange tijd te overleven volgende experimentele manipulaties. Bijvoorbeeld, dye-labeling studies mogen voortbestaan ​​aan E10 of later in een lot mapping studie (1). Daarnaast is het gebruikt voor in ovo elektroporatie studies dat verandering van de genexpressie niveaus en benodigde ontwikkeling door te gaan naar latere ontwikkelingsstadia (2-6) te verstrekken. Dit window techniek kan gebruikt worden in combinatie met een procedure die overleving na manipulaties aan het embryo vereist.

<table><tbody><tr><td>Roterende incubator</td><td> </td><td>Profi</td><td></td><td>Handhaven op 37&amp;deg; C met een relatieve vochtigheid ingesteld op boven 60%</td></tr><tr><td>70 % EtOH</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>gaas</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>3M plastic tape</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>10cc spuit</td><td> </td><td></td><td></td><td>1/ei</td></tr><tr><td>18G naalden</td><td> </td><td></td><td></td><td>1&amp;#189; inch naald, 1/spuit</td></tr><tr><td>Dissectieschaar</td><td> </td><td></td><td></td><td>4&quot; scherpe rechte bladen</td></tr><tr><td>Bevruchte eieren</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr></tbody></table>

windowing kip eieren voor ontwikkelingsbiologie studies

Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies

De studie van de ontwikkeling is sterk ondersteund door het gebruik van het kippenembryo als een experimenteel model. Het gemak van bereikbaarheid van het embryo heeft het mogelijk gemaakt voor experimenten naar cel lot met behulp van verschillende methoden, waaronder chick kwartel hersenschimmen en focale kleurstof etikettering kaart. Daarnaast, is het mogelijk voor moleculaire verstoringen van verschillende types, waaronder de plaatsing van eiwit-gecoate kralen en introductie van plasmide DNA met behulp van in-ovo elektroporatie. Deze experimenten hebben opgeleverd belangrijke gegevens over de ontwikkeling van het centrale en perifere zenuwstelsel. Voor veel van deze studies, is het noodzakelijk om de eischaal te openen en te hersluiten zonder verstoren van de embryo&#39;s groei. Het embryo kan worden onderzocht in opeenvolgende ontwikkelingsfasen door de heropening van de eierschaal. Terwijl er verschillende uitstekende methoden voor het openen van kippeneieren, in dit artikel tonen we aan een methode die is geoptimaliseerd voor lange tijd te overleven. In deze methode, het ei rust op zijn kant en een klein venster wordt gesneden in de schaal. Na de experimentele procedure, wordt de shell gebruikt om het ei voor de duur van zijn ontwikkeling te dekken. Doorzichtige plastic tape bedekken de eierschaal beschermt de embryo en het behoud van hydratatie gedurende de rest van de incubatietijd. Deze methode is gebruikt vanaf twee dagen van incubatie en heeft toegestaan ​​overleving door volwassen embryonale leeftijden.

Het gemak van bereikbaarheid van het embryo heeft het mogelijk gemaakt voor experimenten naar cel lot met behulp van verschillende methoden, waaronder chick kwartel hersenschimmen en focale kleurstof etikettering kaart. In dit artikel tonen we een ei voorbereiding methode die is geoptimaliseerd voor een lange overlevingsduur.

Windowing Kip Eieren voor Ontwikkelingsbiologie Studies

De studie van de ontwikkeling is sterk bevorderd door het gebruik van het kiजenembryo als experimenteel model. De gemakkelijke toegankelijkheid van het embryo heeft ...

Welkom in het Kramer Lab. Ik ben Matt Korn, van de afdeling Neurobiologie en Gedrag aan de University of California Irvine. Vandaag laat ik u zien hoe u kippeneieren voorbereidt voor diverse manipulaties, waaronder het plaatsen van kraaltjes, het injecteren van kleurstoffen of in ovo exploratie.Laten we zonder verdere vertraging beginnen. We gaan nu het ei reinigen, omdat er veel zaken in de incubator terecht kunnen komen.We gaan dit afsluiten met tape. We willen voorkomen dat er kleine stukjes rondwaaien bij het venster waar het ei komt, om de kans te verkleinen dat het embryo sterft voordat we het willen verwijderen. Zoals u in de incubator kon zien, liggen de eieren met de brede zijde naar boven.Wat we nu gaan doen, is het ei pakken en simpelweg op zijn zijkant draaien. Dit heeft twee doelen. Ten eerste bevindt ons venster zich dan precies hier, en ten tweede moet het embryo naar boven drijven zodat we eventuele manipulaties kunnen uitvoeren.Ik ga er nu een paar uit het rek dat in de incubator stond in een kartonnen eierhouder plaatsen. Dit is overigens het onderdeel dat in de doos zit wanneer de eieren worden geleverd. Voor vandaag gaan we dit dus gewoon gebruiken om de eieren

windowing-chicken-eggs-for-developmental-studies

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Een benadering voor het analyseren van migratie en de uiteindelijke lot van aviaire neurale lijst cellen in kwartel-chick chimere embryo's wordt beschreven. Deze methode is een eenvoudige en directe techniek voor het opsporen van neurale lijst cellen tijdens migratie en differentiatie die anders moeilijk te onderscheiden binnen een ongemanipuleerde kippenembryo.

Analyse van de neurale lijst migratie en differentiatie door Cross-soorten transplantatie

In this video, we describe a technique to open the eggshell of a fertilized chicken egg to expose its chorioallantoic membrane or CAM carrying a network of branching blood vessels. The exposed CAM can be used for in ovo tumor modeling.

Egg Windowing: A Method of Opening Fertilized Chicken Egg Shell to Expose Chorioallantoic Membrane Vasculature

Het bekijken en toegang krijgen tot het kippenembryo tijdens de ontwikkeling kan een uitdaging zijn. We hebben een ex ovo methode ontwikkeld die eenvoudig, kosteneffectief is en gemakkelijk kan worden gebruikt in een klaslokaal of onderzoeksomgeving. Deze methode biedt toegang tot het embryo tot in de late stadia van de embryonale ontwikkeling (HH 40).

Geoptimaliseerd Ex-ovo Het kweken van kippenembryo's tot geavanceerde stadia van ontwikkeling

Dit protocol beschrijft drie methoden voor het verkrijgen en gebruiken van 5 tot 8 dagen oude kippenembryo's en hun chorioallantoic membrane (CAM) als een in vivo model om contrastverbeterde ultrasone beeldvorming en microbubbel-gemedieerde medicijnafgifte te bestuderen.

De voorbereiding van Chicken Ex Ovo Embryo's en Chorioallantoic Membrane Vessels als In Vivo Model voor Contrast-Enhanced Ultrasound Imaging en Microbubble-Gemedieerde Drug Delivery Studies

Dit is een effectieve methode om te screenen op suppressors of drivers van kankermetastase. Cellen, getransduceerd met een expressiebibliotheek, worden geïnjecteerd in het kippen chorioallantoïsche membraan vasculatuur om gemetastaseerde kolonies te vormen. Kolonies met verminderde of verhoogde invasiviteit worden verwijderd, uitgebreid, opnieuw geïnjecteerd om hun fenotype te bevestigen en ten slotte geanalyseerd met behulp van sequencing met hoge doorvoer.

Ontdekking van gemetastaseerde regulatoren met behulp van een snel en kwantitatief intravital chick chorioallantoic membraanmodel

Kippenembryo's, als klassiek ontwikkelingsmodel, worden in ons lab gebruikt om ontwikkelingscarditoxiciteiten te beoordelen na blootstelling aan verschillende milieuverontreinigingen. Blootstellingsmethoden en vastgestelde morfologische/functionele beoordelingsmethoden worden in dit manuscript beschreven.

Kipembryo gebruiken als een krachtig hulpmiddel bij de beoordeling van ontwikkelingscarditoxiciteiten

Een robuuste methodologie is ontwikkeld voor het uitvoeren van ovo-voedingsonderzoeksproeven met behulp van niet-geïncubeerde commerciële vleeskuikeneieren om het vermogen van natuurlijke en synthetische verbindingen, in dit geval nicotinamide riboside, te testen om spierontwikkeling en -groei te beïnvloeden.

In Ovo Voeding van commerciële vleeskuikeneieren: een nauwkeurige en reproduceerbare methode om spierontwikkeling en -groei te beïnvloeden

De geweekte kraaltest omvat gerichte toediening van testreagens op elk ontwikkelingstijdpunt om de regulatie van celdifferentiatie en morfogenese te bestuderen. Een gedetailleerd protocol, toepasbaar op elk proefdiermodel, voor het bereiden van drie verschillende soorten geweekte kralen en het implanteren hiervan in de interdigit van een kippenembryo wordt gepresenteerd.

Analyse van celdifferentiatie, morfogenese en patronen tijdens kippenembrogenese met behulp van de soaked-bead assay

We hebben standaard auditieve hersenstamrespons (ABR) technieken gebruikt en toegepast op broedkippen, een vroegrijp vogelmodel voor auditieve functie. Het protocol schetst diervoorbereidings- en ABR-acquisitietechnieken in detail, met stappen die zich kunnen vertalen naar andere vogel- of knaagdiermodellen.

Evaluatie van auditieve hersenstamrespons bij kippenbroedjes

Het kuiken is een kosteneffectief, toegankelijk en algemeen beschikbaar modelorganisme voor verschillende onderzoeken. Hier wordt een reeks protocollen beschreven om de moleculaire mechanismen te begrijpen die ten grondslag liggen aan de ontwikkeling en regeneratie van het aviaire binnenoor.

In Ovo en Ex Ovo methoden om aviaire binnenoorontwikkeling te bestuderen

Leer een geoptimaliseerde methode voor het prepareren van kippeneieren voor neurobiologische experimenten. Deze techniek verbetert de overlevingstijd van embryo's en faciliteert cel fate mapping in ontwikkelingsbiologisch onderzoek.

Windowing Kip Eieren voor Ontwikkelingsbiologie Studies

Meer video's verkennen