Name: Canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via Duct de Whartons (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Leer canulatie van de submandibulaire speekselklier bij muizen via het ductus van Wharton met trypanblauw voor visualisatie. Deze methode ondersteunt regeneratief geneeskundig onderzoek naar speekselklierherstel.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs zijn dank verschuldigd aan dr. Ana Cotrim voor technisch advies en aan Dr Monzur Murshed voor apparatuur. Dit werk werd deels gefinancierd door de Canadese Institutes for Health Research.

1. Procedurele Beschrijving <ol><li> Subcutaan injecteren 1 pi / g lichaamsgewicht van 0,5 mg / ml atropinesulfaat monohydraat (Cat # 11330, Fluka, USA) in elke muis om de speekselvorming voorkomen dat het verstoren van de beweging van de infusies. </li><li> Verdoven elke muis met een ul / g lichaamsgewicht van een 100 mg / ml ketamine en 20 mg / ml xylazine (Phoenix Scientific, AR, USA)-oplossing geïnjecteerd intraperitoneale (IP) </li><li> Plaats de muis op een custom-made plastic platform in het ventrale positie: het bovenfront opgesloten op een metalen draad, en het onderfront zijn verslaafd aan een elastische koord om de mond open te houden. </li><li> Gebruik een insulinespuit met een 29-gauge naald (Cat # 600145, Tyco Healthcare, MA, USA) geplaatst in een 0,58 mm diameter polyethyleen buis (Cat # 427410, Becton Dickinson, MD, USA; afb. 2). De polyethyleen buis is ingebracht 5mm over de top van een 29-gauge naald. De naald wordt gebruikt als een stijve gids voor de polyethyleen buis te verplaatsen naar kanaal van de Wharton&#39;s. De polyethyleen buis is ingebracht 3-5 mm in het kanaal. Merk op dat alleen de polyethyleen buis de speekselklier buis komt, terwijl de naald blijft buiten het kanaal. Injecteer 50ul van gefilterde 0,4% trypan blauwe vlek-oplossing (Cat # 15250, Gibco, USA) in de glandula submandibularis via kanaal van de Wharton, die is gelegen onder de tong. Het infuus is steeds geleverd met positieve druk op de spuit zuiger, de vinger blijft op de zuiger, zelfs na al van het infuus is afgeleverd bij de klier, om een ​​terugstroming van de infusie te voorkomen dat intra-oraal. De trypan blauwe oplossing wordt gebruikt in de video als een kleurstof om de techniek te demonstreren. </li><li> N a de injectie van de trypan blauwe oplossing werd de muis voor inslapen naar dissectie. De speekselklier is chirurgisch blootgesteld om te bepalen hoeveel van de infusies daadwerkelijk bleef in de klier. </li></ol> 2. Representatieve resultaten: Na de infusies werden geïnjecteerd, was de muis ontleed om operatief bloot de post-gecanuleerde speekselklier. Zoals weergegeven op Image-2, de donkere kleur van de buis van de Wharton&#39;s levert bewijs dat de trypan blauwe oplossing met succes werd toegediend. <img src="/files/ftp_upload/3074/3074fig1.jpg" alt="Figuur 1" /> Figuur 1. Canulatie van de muis submandibulaire klier. <img src="/files/ftp_upload/3074/3074fig2.jpg" alt="Figuur 2" /> Figuur 2. Polyethyleen buis is omhuld rond het uiteinde van een 29-gauge naald. De naald wordt gebruikt als een stijve gids voor de polyethyleen buis te verplaatsen naar kanaal van de Wharton&#39;s. De polyethyleen buis is ingebracht (gecanuleerde) 3-5 mm in het kanaal. Merk op dat alleen de polyethyleen buis de speekselklier buis komt, terwijl de naald blijft buiten het kanaal.

<ol><li>Fox, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquired+salivary+dysfunction.+Drugs+and+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Acquired salivary dysfunction. Drugs and radiation.</a> Ann N Y Acad Sci. 842, 132-137 (1998).</li>
<li>Bhide, S. A., Miah, A. B., Harrington, K. J., Newbold, K. L., Nutting, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation-induced+xerostomia%3A+pathophysiology%2C+prevention+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oncol+%28R+Coll+Radiol%29%22%5BJournal%5D)">Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, prevention and treatment.</a> Clin Oncol (R Coll Radiol). 21, 737-744 (2009).</li>
<li>Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dispersed+donor+salivary+gland+cells+are+widely+distributed+in+the+recipient+gland+when+infused+up+the+ductal+tree%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree.</a> Biotech Histochem. 84, 253-260 (2009).</li>
</ol>

Alle experimenten zijn goedgekeurd door de Universiteit Animal Care Comite en waren in overeenstemming met de richtlijnen van de Canadese Raad van Animal Care.

Een moeilijkheid het gebruik van deze canulatie methode is om te voorkomen dat het terugstromen van de geïnjecteerde oplossing. Zelfs als de trypan blauwe oplossing is tijdelijk gemigreerd naar de speekselklier met succes, kan het speeksel secretie interfereren met de infusen en de oorzaak terugstroming van de trypan blauwe oplossing uit de klier. Uit voorzorg, naast het gebruik van atropine tot afgifte van speeksel remmen, moet de polyethyleen canule blijft in het kanaal van de Wharton en de zuiger van de spuit aangeho...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Type </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogus nummer </td><td> Commentaar (optioneel) </td></tr><tr><td> Atropine </td><td> Drug </td><td> Fluka </td><td> 11330 </td><td> De remming van speeksel secretie </td></tr><tr><td> Ketamine </td><td> Drug </td><td> Phoenix Wetenschappelijke </td><td></td><td> Verdoving </td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> Drug </td><td> Phoenix Wetenschappelijke </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Polyethyleen buis (0,58 mm diameter) </td><td> Buis </td><td> Intramedic PE-10, Becton Dickinson Diagnostic Systems </td><td> 427410 </td><td> Voor het invoegen van kantelen van de naald om weefsel letsel te voorkomen tijdens het inbrengen in het kanaal Wharton&#39;s. </td></tr><tr><td> Ultra Comfort Insuline spuit (met een 29g naald) </td><td> Injectiespuit </td><td> Tyco Healthcare </td><td> 600145 </td><td></td></tr><tr><td> 4% trypan blauw </td><td> Vlek </td><td> Gibco </td><td> 15250 </td><td></td></tr></tbody></table>

canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via duct de wharton&#39;s

Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct

Ernstige speekselklier hypofunction wordt vaak gevonden bij patiënten met het syndroom van Sjögren en degenen die die therapeutische bestraling in hun hoofd en nek regio&#39;s voor de behandeling van kanker. Beide groepen patiënten ervaren symptomen, zoals xerostomie (droge mond), dysfagie (verminderde kauwen en slikken), ernstige cariës, veranderde smaak, oro-faryngeale infecties (candidiasis), mucositis, pijn en ongemak. Een innovatieve benadering van de regeneratieve geneeskunde voor de behandeling van de speekselklieren hypo-functie wordt gespeculeerd in de RS Redman, E Mezey et al. 2009:. Stamcellen kunnen direct worden afgezet door cannulatie in de klier als een krachtige methode in de heropleving van de functies van de verminderde orgel. Vermoedelijk zal de gemigreerde vreemde stamcellen differentiëren in kliercellen om te functioneren als onderdeel van de gastheer speekselklier. Ook deze canulatie techniek is een hulpmiddel en effectieve levering methode voor klinische genoverdracht toepassing. Hier hebben we illustreren de stappen die betrokken zijn bij het ​​uitvoeren van de cannulatie procedure op de muis submandibulaire speekselklier via de Wharton&#39;s kanaal (afb. 1). C3H muizen (Charles River, Montreal, QC, Canada) worden gebruikt voor dit experiment, die zijn onder schone conventionele omstandigheden bewaard op de McGill University dier resource center. Alle experimenten zijn goedgekeurd door de Universiteit Animal Care Comite en waren in overeenstemming met de richtlijnen van de Canadese Raad van Animal Care. Voor dit experiment, is een trypan blauwe oplossing toegediend in de klier door de opening van het kanaal Wharton&#39;s met behulp van een insuline spuit met een 29-gauge naald verpakt in een polyethyleen buis. Vervolgens wordt de muis ontleed aan te tonen dat de infusies gemigreerd succesvol in de klier.

Een protocol voor de canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via kanaal van de Wharton is beschreven. Voor dit experiment wordt het trypaan blauw-oplossing gebruikt als een verver om aan te tonen hoe deze techniek effectief infusies levert in de gerichte klier, en om de betrouwbaarheid van deze nieuwe aanpak voorstellen als een potentieel klinisch drug / celtherapie voor het herstel van de speekselklieren.

Canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via Duct de Wharton&#39;s

Ernstige hypofunctie van de speekselklieren wordt frequent aangetroffen bij patiënten met het syndroom van Sjögren en bij patiënten die therapeutische bestraling ondergaan in hun ...

Alle experimenten zijn goedgekeurd door het Animal Care Committee van de McGill University en zijn uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen van de Canadian Council on Animal Care. Het doel van dit experiment is om progenitorcellen of stamcellen in de mandibulaire speekselklier van de muis te brengen via canulatie van de ductus Whartonii. Voor deze video wordt trypaanblauwoplossing gebruikt als kleurstof om de celinfusie te visualiseren.Hypofunctie van de speekselklieren is een van de meest voorkomende bijwerkingen van het syndroom van Sjögren en therapeutische bestraling voor kankerbehandeling in het hoofd-halsgebied. Een disfunctie van de speekselklieren kan vaak leiden tot tandheelkundige aandoeningen, zoals infecties van het mondslijmvlies en tandbederf. Een innovatieve regeneratieve geneeskundige benadering voor de behandeling van beschadigde speekselklieren is als volgt.Stamcellen kunnen direct in de klier worden afgezet door canulatie via de gangen van de speekselklier als een krachtige methode om de functies van de beschadigde klier te herstellen; vermoedelijk zullen de gemigreerde vreemde stamcellen differentiëren tot kliercellen om functioneel deel uit te maken van de speekselklier. Hier illustreren wij de stappen die komen kijken bij het uitvoeren van de canulatieprocedure op de submandibulaire speekselklier van de muis via de ductus van Wharton. Voor dit experiment wordt een trypaanblauw-oplossing in de klier geïnjecteerd via de opening van de ductus van Wharton met een ultra comfort 29 gauge naald en spuit.Vervolgens wordt de muis gedisseceerd om aan te tonen dat de infusies succesvol naar de klier zijn gemigreerd. Stap één: per gram lichaamsgewicht wordt 1 µL atropinesulfaatmonohydraat (0,5 mg/mL) subcutaan in elke muis geïnjecteerd om te voorkomen dat speekselsecretie de beweging van de infusies verstoort. Stap twee: per gram lichaamsgewicht wordt 1 µL van een oplossing bestaande uit 100 mg/mL ketamine en 20 mg/mL xylazine intraperitoneaal in elke muis geïnjecteerd om de muis te sederen.Stap drie. Na het sedatieproces wordt de muis op een platform geplaatst. In buikligging wordt de maxillaire snijtand vastgezet aan een metalen draad en de mandibulaire snijtand gehaakt aan een elastiek om de bek open te houden.Stap vier: met een ultra comfort 29 Gauge naald wordt een spuitgefilterde 0,4% Trian blue-oplossing geïnfuseerd in de submandibulaire speekselklier via de ductus Wharton, die zich direct onder de tong bevindt. De naald is nu gericht op de opening van de ductus Wharton en is de ductus binnengegaan om de infusies toe te dienen. Stap vijf.Direct na de canulatieprocedure wordt de speekselklier chirurgisch blootgelegd om vast te stellen welk deel van de infusies daadwerkelijk in de klier is achtergebleven. Nadat de infusies waren geïnjecteerd, werd de muis gedisseceerd om de canuleerde speekselklier chirurgisch bloot te leggen. Zoals in deze afbeelding te zien is, geeft de donkere kleur van de ductus van Wharton een sterk bewijs dat de trypaanblauw-oplossing succesvol is geïnfuseerd in het geval van speekselklierhypofunctie.De lokale applicatie, namelijk de injectie van geneesmiddelen en cellen via deze canulatieprocedure, kan worden beschouwd als een directere en effectievere methode om de functies van de parotis-, submandibulaire en sublinguale speekselklieren te herstellen. Zoals blijkt uit de representatieve resultaten, werd de infusie, in dit geval de Trian blue-oplossing, succesvol afgezet in de submandibulaire speekselklier van de muis via de ductus Whartonii. Daarom kan deze canulatietechniek worden gebruikt als een betrouwbaar model voor de regeneratieve geneeskunde van de speekselklier bij muizen.En als toekomstig perspectief kan deze procedure een doelmatige methode zijn voor klinische gentransfertoepassingen. Het zou een groot genoegen zijn als dit visuele artikel kan dienen als een effectief hulpmiddel voor studenten en onderzoekers die geïnteresseerd zijn in verdere studies naar de regeneratieve geneeskunde van de speekselklier.

cannulation-mouse-submandibular-salivary-gland-via-wharton-s

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

This video demonstrates a technique to cannulate the mesenteric lymph duct in rats. This method enables direct access to the entire volume of components present in the lymph fluid.

Mesenteric Lymph Duct Cannulation in a Rat Model to Harvest Lymph Fluid

Opklaren is een krachtige tool waarmee beeldvorming verschillende biologische processen in levende dieren. In dit artikel presenteren we een gedetailleerde werkwijze voor het afbeelden van de dynamiek van subcellulaire structuren, zoals de secretoire granules in de speekselklieren van levende muizen.

Intravitale Microscopy for Imaging Subcellulaire Structuren in Levende muizen die fluorescerende eiwitten

Hypofunctie van de speekselklieren, een belangrijk nadelig effect van radiotherapie in het hoofd- en nekgebied, vermindert de kwaliteit van leven van een patiënt. Het aantonen van de werkzaamheid van nieuwe therapieën in diermodellen is een voorwaarde voordat er een klinische overgang plaatsvindt. Dit protocol beschrijft retroductale toediening en lokale bestraling van submandibulaire rattenklieren.

Retroductal Submandibulaire Gland Blaasinstillatie en gelokaliseerde gefractioneerde bestraling in een Rat Model van het speeksel hypofunction

We beschrijven een protocol om operatief bloot en stabiliseren de lymfkliertest submandibulaire speekselklier voor intravital geschikt zijn met behulp van rechtop intravital microscopie. Dit protocol is gemakkelijk aan te passen aan andere exocrine klieren van het hoofd en nek regio van muizen en andere kleine knaagdieren.

Voorbereiding van lymfkliertest submandibulaire speekselklier rechtop Intravital microscopie

Lokale drug levering aan de submandibulaire klieren is van belang in begrip speekselklier biologie en voor de ontwikkeling van nieuwe therapieën. We presenteren een bijgewerkte en gedetailleerde retroductal injectie protocol, ter verbetering van de nauwkeurigheid van de levering en experimentele reproduceerbaarheid. De hier vermelde toepassing is de levering van polymere nanodeeltjes.

Retroductal Nanoparticle injectie aan de lymfkliertest submandibulaire klier

We presenteren een gedetailleerde aanpak voor het uitvoeren van speeksel inzameling, met inbegrip van lymfkliertest tracheostomy en het isolement van de drie grote speekselklieren.

Gefractioneerde lymfkliertest speeksel functioneel-diagnostiek via Pilocarpine stimulatie volgende straling

Het doel van dit manuscript is om de microchirurgische stappen te beschrijven die nodig zijn om een heterotope larynxtransplantatie bij muizen uit te voeren. De voordelen van dit muismodel ten opzichte van andere diermodellen van larynxtransplantatie zijn de kosteneffectiviteit en de beschikbaarheid van immunologische testen en gegevens.

Een heterotopisch muismodel voor het bestuderen van larynxtransplantatie

In dit protocol werd de endotheelbarrièrefunctie van de submandibulaire klier (SMG) geëvalueerd door verschillende moleculair gewogen fluorescerende tracers in vivo in de hoekaders van proefdiermodellen te injecteren onder een laserscanmicroscoop met twee fotonen.

In vivo Vasculaire permeabiliteitsdetectie bij submandibulaire klier van muizen

Immunofluorescerende beeldvorming wordt beperkt door het vermogen om complexe, tijdsafhankelijke biologische processen in slechts één momentopname in de tijd waar te nemen. Deze studie schetst een live-imaging-benadering die wordt uitgevoerd op nauwkeurig gesneden plakjes submandibulaire klier van muizen. Deze aanpak maakt de real-time observatie mogelijk van cel-cel interacties tijdens homeostase en de processen van regeneratie en herstel.

Ondervraging van cel-celinteracties in de speekselklier via ex vivo beeldvorming van levende cellen

Reparatie van de slagader in een muismodel na injectie zorgt ervoor dat het bloed weer naar de slagader stroomt zonder de verdeling van het geïnjecteerde materiaal negatief te beïnvloeden. Reparatie op de injectieplaats vergemakkelijkt volgende injecties via dezelfde slagader en voorkomt cerebrale ischemie bij muizenstammen die geen volledige Circle of Willis hebben.

Het vergemakkelijken van herhaalde intracarotisinjecties in muismodellen door een nieuwe techniek voor het herstellen van de injectieplaats

Dit experimentele protocol demonstreert een diep cervicaal lymfebuis-canulemodel dat directe en kwantitatieve beoordeling van lymfedrainage vanuit het hoofdgebied mogelijk maakt. Het model faciliteert gedetailleerde analyse van door het centrale zenuwstelsel (CZS) afgeleide opgeloste stoffen, populaties immuuncellen en de distributie en klaring van op het CZS gerichte therapieën.

Cervicale lymfebuis-gecoruleerde rat-model voor het beoordelen van lymfetransport vanuit het hoofd en de hersenen

Leer canulatie van de submandibulaire speekselklier bij muizen via het ductus van Wharton met trypanblauw voor visualisatie. Deze methode ondersteunt regeneratief geneeskundig onderzoek naar speekselklierherstel.

Canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via Duct de Wharton's

Meer video's verkennen