Name: CD4 + T-lymfocyten Capture Met behulp van een Wegwerp Microfluïdische Chip voor HIV (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:03:52.000+00:00
Duration: 12 min 44 s
Description: Leer CD4+ T-lymfocyten capturen met een wegwerp microfluïdische chip voor HIV-diagnostiek in omgevingen met beperkte middelen. Deze methode biedt precieze kwantificering van T-helpercellen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li> Bereid microfluïdische kanaal met anti-CD4 + biotinlayted oppervlak. </li><li> Injecteer 10 ml van het monster bloed op 5 ml / min in de microfluïdische kanaal met injectiepomp. </li><li> Spoel het bloed van 20 ml / min voor 20 min met PBS. </li><li> Injecteer verdunde FACS lyseren oplossing (verdund tot 10% uit voorraad oplossing met PBS) op 5ul/min gedurende 15 minuten. </li><li> Incubeer gedurende 15 minuten. </li><li> Injecteer primair CD3 + antilichaam-oplossing (verdund tot 10% uit voorraad oplossing met PBS) op 5 ml / min voor 20 minuten. </li><li> Incubeer 2 uur. </li><li> Spoel kanaal met PBS bij 5 ml / min gedurende 15 minuten. </li><li> Injecteer 20% AF488 CD4 + antilichaam, 0,2% DAPI stockoplossing, en 10% secundair CD3 + antilichaam op 5 ml / min gedurende 20 minuten op hetzelfde moment. </li><li> Incubeer gedurende 20 minuten. </li><li> Spoel het kanaal met PBS bij 5 ml / min gedurende 15 minuten. </li><li> Count cellen onder fluorescentiemicroscoop: <ol><li> White (optisch) - Zwart-wit: cel-en stof </li><li> UV (DAPI) - Blauw: cel slechts </li><li> Blauw (CD4 +) - Groen: T-lymfocyten en monocyten </li><li> Groen (CD3 +) - Rood: T-lymfocyten alleen </li></ol></li></ol>

<table><tbody><tr><td>PDMS-microkanaal</td><td></td><td></td><td></td><td>Gefabriceerd met SU-8 mal</td></tr><tr><td>Bloed</td><td></td><td></td><td></td><td>Gedoneerd bloed van een gezond menselijk subject. Mass General Hospital, 10 X hoge dichtheid WBC of Brigham and Women&amp;rsquo;s Hospital.</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Buffer</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td>1x Dulbecco&amp;rsquo;s gefosfateerde gebufferde zoutoplossing.</td></tr><tr><td>FACS-lyseeroplossing</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>349202</td><td>Verdund tot 10% vanuit de stamoplossing met PBS.</td></tr><tr><td>Anti-CD4+ biotinylatie Ab</td><td></td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>IM0704</td><td>Oppervlak geprepareerd met Anti-CD4+ biotinylatie Ab, verdund tot 10% vanuit de stamoplossing met PBS/BSA na menging met 0,2mg stamoplossing en 1ml gedeïoniseerd water.</td></tr><tr><td>geit anti-hCD3delta</td><td>pAB</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-1128</td><td>Verdund tot 10% vanuit de stamoplossing met PBS</td></tr><tr><td>konijn anti-geit IgG PE</td><td></td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-3755</td><td>Secundair Ab voor anti-CD3 Ab, verdund tot 10% vanuit de stamoplossing met PBS</td></tr><tr><td>anti-humaan CD4+</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>557695</td><td>Alexa Fluor 488 gelabeld, verdund tot 20% vanuit de stamoplossing met PBS.</td></tr><tr><td>DAPI</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td>4&amp;rsquo;,6-dianidino-2-fenylindool, dihydrochloride-oplossing, verdund tot 0,2% vanuit de stamoplossing met PBS.</td></tr></tbody></table>

cd4 + t-lymfocyten capture met behulp van een wegwerp microfluïdische chip voor hiv

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

CD4 + T-lymfocyten Capture Met behulp van een Wegwerp Microfluïdische Chip voor HIV

Hallo, mijn naam is Richard Lin en ik ben onderzoeker in de groep van professor TI Mercy bij de Harvard MIT Division of Health Sciences and Technology. Het project waaraan ik werk, is het kwantificeren en vastleggen van CD4-positieve en C3-positieve T-lymfocyten. Hiervoor wordt patiëntenbloed gebruikt in omgevingen met beperkte middelen.Hier voor me hebben we een microvullingsapparaat dat is samengesteld uit PDMS, oftewel polymethylsiloxaan. Het apparaat, het kanaal zelf, heeft een hoogte van 50 µm en het totale volume in het apparaat is 10 µL. Dit is dus een uiterst nauwkeurig apparaat dat we gaan gebruiken om T-helperlymfocyten op te vangen.In feite de diagnostische benchmark voor hiv-patiënten. Het oppervlak van het microfluïdische apparaat is reeds geprepareerd met proteïne en er bevinden zich CD4-positieve antilichamen in de spuit. Op dit moment hebben we enkel PBS-biologische buffer bij een pH van 7.4 en we zullen dit nu door het kanaal laten stromen om het overtollige CD4-positieve antilichaam weg te spoelen.In dit stadium hoeft de stroomsnelheid niet te worden gecontroleerd, omdat we enkel de overtollige vloeistof proberen uit te spoelen en de snelheid daarbij geen rol spee

cd4-t-lymphocyte-capture-using-a-disposable-microfluidic-chip-for-hiv

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Cel Capture Met behulp van een apparaat Microfluïdische

Dit gevisualiseerd experiment is een gids voor het gebruik van een fluorescerende moleculaire kloon van HIV voor live confocale imaging experimenten.

Visualiseren Cel-cel Overdracht van hiv met behulp van TL-Klonen van HIV en Live confocale microscopie

We hebben een lentivirale vector die, bezit naast de Tat-responsieve LTR, de Rev-respons element (RRE) die reporter genexpressie kan reguleren in een HIV-1-Tat en Rev-afhankelijke manier. De vector maakt de specifieke detectie van HIV-replicatie in levende cellen via de expressie van GFP.

Specifieke markering van de HIV-1 positieve cellen met behulp van een Rev-afhankelijke lentivirale vector uitdrukken van de Green Fluorescent Protein

Een geïntegreerde microfluïdische thermoplastische chip is ontwikkeld voor gebruik als een moleculaire diagnostische. De chip voert nucleïnezuur extractie, reverse transcriptase, en PCR. Werkwijzen voor het vervaardigen en gebruiken van een chip worden beschreven.

Microfluïdische chip fabricage en methode om Influenza Detect

In dit artikel presenteren we een microfluïdische chip voor single cell analyse. Het maakt de kwantificering van intracellulaire eiwitten, enzymen, cofactoren, en tweede boodschappers via fluorescentie assays of immunoassays.

Een Microfluïdische Chip voor de Versatile chemische analyse van enkele cellen

Dit protocol beschrijft de methoden voor het construeren van een gehumaniseerd muismodel voor beenmerg/lever/thymus met stamcelgebaseerde geëngineerde immuniteit tegen HIV-infectie.

Stamcel-Based Engineered immuniteit tegen HIV infectie in het gehumaniseerde muismodel

Beschreven is een methode om te kwantificeren van de expressie van genen die 96 en 18 oppervlakte eiwitten door afzonderlijke cellen ex vivo, waardoor voor de identificatie van differentially uitgedrukte genen en proteïnen in virus-geïnfecteerde cellen ten opzichte van niet-geïnfecteerde cellen. Passen we de aanpak van de studie SIV-geïnfecteerde CD4+ T cellen geïsoleerd van rhesus makaken.

Eencellige kwantificatie van mRNA en oppervlak eiwituitdrukking in Simian Immunodeficiëntie Virus-geïnfecteerde CD4+ T cellen geïsoleerd van Rhesus Makaken

Hier wordt een protocol gepresenteerd voor een fluorescentiebeeldvormingsbenadering, multiplex immunofluorescent cell-gebaseerde detection van DNA, RNA en protein (MICDDRP), een methode die in staat is tot gelijktijdige fluorescentie eencellige visualisatie van virale eiwitten en nucleïnezuren van verschillende type en gestrandheid. Deze aanpak kan worden toegepast op een breed scala aan systemen.

Eencellige multiplexed fluorescentie beeldvorming om virale nucleïnezuren en eiwitten te visualiseren en HIV, HTLV, HBV, HCV, Zika-virus en influenza-infectie te controleren

Hier presenteren we een protocol waarin afzonderlijke cellen worden gecontroleerd op acute gebeurtenissen en productieve HIV-1-infectie op een nanofluïdisch apparaat. Beeldvormingsgegevens definiëren virus-host receptorinteracties en signaalroutedynamiek. Dit is de eerste methode voor nanofluïdische longitudinale eencellige cultuur en beeldvorming met hoge doorvoer om signaalkinetiek en moleculaire interacties te bestuderen.

Eencellige karakterisering van calciuminstroom en HIV-1-infectie met behulp van een Multiparameter Optofluidic Platform

De klinische microfluïdische chip is een belangrijke biomedische analysetechniek die de voorbewerking van bloedmonsters van klinische patiënten vereenvoudigt en immunofluorescentiekleurig circulerende tumorcellen (CTC's) in situ op de chip kleurt, waardoor een snelle detectie en identificatie van een enkele CTC mogelijk is.

Klinisch microfluïdisch chipplatform voor de isolatie van veelzijdige circulerende tumorcellen

Circulerende tumorcellen (CTC's) zijn van cruciaal belang voor de studie van kankerprogressie en metastase. Dit artikel presenteert een high-throughput, geïntegreerd protocol voor CTC-verrijking en single-CTC-sequencing, waardoor de opname-efficiëntie en CTC-zuiverheid worden verbeterd en tegelijkertijd de contaminatie- en sequencingkosten worden verlaagd, waardoor precisie-oncologisch onderzoek en klinische toepassingen worden bevorderd.

Op microfluïdica gebaseerde high-throughput circulerende tumorcelsortering en single-cell sequencing-technologie

Leer CD4+ T-lymfocyten capturen met een wegwerp microfluïdische chip voor HIV-diagnostiek in omgevingen met beperkte middelen. Deze methode biedt precieze kwantificering van T-helpercellen.

CD4 + T-lymfocyten Capture Met behulp van een Wegwerp Microfluïdische Chip voor HIV

Meer video's verkennen