Name: Titel Cell Encapsulation door Droplets (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:09:54.000+00:00
Duration: 13 min 10 s
Description: Leer celinkapseling door druppels voor 3D-bioprinting met behulp van een solenoïdeklep en drukgestuurde ejectie. Deze methode ondersteunt onderzoek naar levensvatbaarheid van cellen in weefseltechniek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

NIH3T3 cellen voorbereiding: A. Cellen voor Ejection <ol><li> Trypsinize cellen, dan verdunnen 1:1 met cel-media, en de transfer van een T75 kolf met een 15 ml Falcon buis </li><li> Spin down cellen in een pellet door centrifugeren, aspireren supernatant en wassen cellen met DPBS </li><li> Spin down cellen in een pellet weer, en zuig supernatans </li><li> Resuspendeer cellen in de media </li><li> Bepaal celdichtheid met hemocytometer (~ 200 X 10 4 cellen / ml per fles T75) </li><li> Centrifuge cel oplossing, aspireren supernatant, en resuspendeer in de juiste hoeveelheid media voor uiteenlopende celconcentraties </li></ol> B. Cel uitwerpen <ol><li> Vortex cellen voordat u voor het uitwerpen </li><li> Overdracht 200 pi van de cel oplossing in de spuit </li><li> Zet juiste modus op pulsgenerator <ol><li> Voor het uitwerpen van een enkele druppels en meerdere druppels (uitbarstingen), ingesteld pulsgenerator &quot;E. BUR&quot;-modus </li><li> Voor continue druppel uitwerpen, stelt pulsgenerator op &quot;NORM&quot;-modus </li></ol></li><li> Veranderen signaal instellingen <ol><li> Stel hoog niveau en laag niveau uitgangsspanning: HIL tot 5 V en LOL op 0 V en zorg ervoor dat de &quot;LIM&quot; LED is op </li><li> Stel signaal als een vierkant puls </li><li> Wijzig de hoeveelheid tijd die de magneetklep staat open voor druppel het uitwerpen door het veranderen van de waarde voor &quot;WID&quot; of veranderen duty cycle (&quot;DUTY&quot;) </li><li> Verander de frequentie van de uitwerpen door het veranderen van de waarde voor &quot;PER&quot; </li><li> Wijzig het aantal druppels uitgestoten in een uitbarsting door het veranderen van de waarde voor &quot;BUR&quot; </li></ol></li><li> Eject cel oplossing op voorbereide ondergrond voor beeldvorming met een microscoop </li></ol> C. kleuring <ol><li> Make-up dye-oplossing met 0,5 pi calceïne-AM en 2 pl ethidium homodimeer per ml DPBS </li><li> Dompel bereid substraat in kleurstofoplossing </li><li> Laat monster gedurende 10 minuten incuberen bij 37 ° C voor imaging </li></ol> Experiment Validatie <ol><li> Op een Nikon Eclipse TE-2000 U fluorescentiemicroscoop <ol><li> Spot geavanceerde software (Diagnostics, Inc) </li><li> Live / Dead Assay </li></ol></li></ol>

De auteurs hebben niets te melden.

<table><tbody><tr><td>Fluorescentiemicroscoop</td><td></td><td>Nikon Instruments</td><td>Eclipse TE-2000 U</td><td></td></tr><tr><td>Solenoidklep-celejector</td><td></td><td></td><td></td><td>Bedieningsfrequentie: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V klepaandrijver: 2,5 Amp aanstuurstroom</td></tr><tr><td>Draagbare luchttank van 5 gallon</td><td></td><td>Coleman</td><td>Powermate CT5</td><td>Perslucht: 30 PSI </td></tr><tr><td>Drukregelaars</td><td></td><td>Marsh Bellofram</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pulsgenerator</td><td></td><td></td><td>HP8112A</td><td>Activeringsfrequentiegeneratie: 50 MHz</td></tr><tr><td>XYZ-tafel</td><td></td><td>Newmark Systems</td><td></td><td>Met stappenmotor: xy-tafel met 6 inch bereik (NLS4-6-25), z-tafel met 2,5 inch bereik (NLS4-2.5-25), 3-assige controller (NSC-G3), 0,1um resolutie</td></tr><tr><td>NIH 3T3</td><td>Cellijn</td><td></td><td></td><td>fibroblasten</td></tr><tr><td>Trypsine</td><td></td><td></td><td></td><td>0,05% oplossing</td></tr><tr><td>NIH 3T3 celmedium</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Buffer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>T75</td><td></td><td></td><td></td><td>Weefselkweekflessen</td></tr><tr><td>Plastic conische buisjes</td><td></td><td></td><td></td><td>15 ml, voor weefselkweek</td></tr></tbody></table>

titel cell encapsulation door droplets

Title Cell Encapsulation by Droplets

Titel Cell Encapsulation door Droplets

Mijn naam is Hang Moon. Ik werk samen met de professor condomen. Hij en ik werken met de XYJ-tafel om een 3D-structuur van cellen te maken.Hallo, ik ben PE en Lynn en ik werk aan het celprintproject met celencapsulatie, media en gels. Dit is de solenoïde voor de ejectie van een cel- en celmengsel van aros over celmedium. De solenoïdeklep wordt geactiveerd door twee signaallijnen.De signaallijn komt hier van een droge printplaat. Het signaal komt hiervandaan. Via die lijn loopt het signaal naar de eerste functiegenerator.Ten eerste wordt deze gegenereerd via onze geprogrammeerde methode. Als u de puls wilt wijzigen, kunt u het programma aanpassen via de schakellijn of het proces via de computer aansturen. De cellulaire klep wordt geopend en gesloten door een elektrisch signaal, maar de cel wordt via die lijn gevoed.De cellen en het medium of de agrogel worden via de spuiten toegediend. De spuiten bevinden zich in het water; de inhoud van de spuit wordt door lucht voortgestuwd. De perslucht wordt geleverd vanuit een tank via de leiding, zoals hier te zien is.De luchtstroom stroomt via de leiding door het luchtfilter. Het luchtfilter scheidt het stof en andere soorten vuil. De drukgenerator genereert het signaal dat wordt gebruikt om de zonne-luchtklep te openen of te sluiten; de computer is hiermee verbonden via de P-I-B-U-S-V-connector.We kunnen de USB-poort rechtstreeks op onze computer, de laptop, gebruiken. Deze is aan die zijde aangesloten. Vervolgens kunnen we de besturing uitvoeren via deze laptop.Om de beweging van de tafel en het openen van de klok te synchroniseren, kunnen beide door dezelfde controller, zoals een laptop, worden aangestuurd. Hierdoor kunnen we de timing regelen van wanneer de klok opent, sluit, wanneer de tafel beweegt en wanneer deze stopt. Zo kunnen we de beweging en het openen van de klok met elkaar synchroniseren.Dat plateau is het gemotoriseerde plateau. Het wordt automatisch verplaatst via de stuurlijn en de motor. De motorisering bedraagt 0,1 micrometers.Het kan idealiter een lijn trekken tot 100 millimeter. De jet-as beweegt zich dus op die manier op en neer. Zo wordt de afstand tussen het substraat en de solar belt geregeld.Hierdoor kan de ejectiehoogte worden geregeld. Dat substraat is hier verbonden met de XY-traversen, X hier en Y daar. Het beweegt dus over een XY-vlak.Hierdoor worden enkele demonstratiefuncties getekend; de juiste fasen zijn 3X, X, Y en G. De jet-as, ofwel de XY-as, wordt door een signaal hier aangestuurd. De signaallijn is verbonden met de bewegingscontroller hier. Deze bewegingscontroller heeft geen enkele handmatige schakelaar, omdat deze niet handmatig kan worden bediend.Het wordt aangestuurd via de laptop. De laptop is dus aangesloten. Aan de achterzijde van de controller hebben we drie assen voor een printcel XY-jet.Zo worden er onafhankelijk van elkaar drie verschillende soorten signalen gegenereerd. Vervolgens communiceert de bewegingsregelaar via de rf 2, 3, 2-connectoren die rechtstreeks zijn verbonden met de USV. De USV is vervolgens verbonden met een laptop.Dus een door een laptop aangestuurd boorapparaat. We gebruiken het AutoCAD-programma, we maken een G-code pad op die manier, bam. En vervolgens wordt dit omgezet in machietaal zoals dat.Zo wordt de machinetaal overgedragen, met eenvoudige tekens en getallen. Elke positie is gerelateerd aan de X-, Y- en Z-traverses. Ik selecteer hier het bestand dat dit type programma bevat en open het programma via de downloadfunctie. Vervolgens kies ik uit het bestand precies hetzelfde tekstbestand.Download alleen het tekstbestand, selecteer het tekstbestand en download het automatisch van de laptop naar de com motion controller executive, waarna het het BAM-karakter volgt, zoals ik eerder noemde, BAM. In deze kolf bevinden zich NIH 3T3-muis fibroblastcellen. Ik zal eerst het oude medium aspireren.Dit proces dient om de cellen te passeren, waarbij de cellen aan de bodem van de kolf zijn gehecht. Na het aspireren van het medium voeg ik zes µL trypsine toe, wat een enzym is. Nadat de trypsine in de kolf is aangebracht, moeten we drie tot vijf minuten wachten tot de cellen loskomen van de bodem van de kolf.Nu zijn we klaar om het medium toe te voegen en de cellen over te brengen naar een centrifugebuis. Het is een verdunning van één-op-één. Ik voeg daarom 6 mL van dit medium toe en spoel de cellen voorzichtig los om ervoor te zorgen dat ze allemaal worden overgeplaatst.De cellen zijn nu klaar om in deze buis te worden gecentrifugeerd. We gaan deze cellen nu centrifugeren bij 1000 RPM gedurende drie tot vijf minuten. Nu de cellen tot een pellet zijn gecentrifugeerd, ga ik het supernatant aspireren.Nu ga ik de cellen uitwassen met PBS. Dit is ter voorbereiding op het kleuren van de cellen. De kleurstoffen die we gebruiken zijn esterasesubstraten.Oké, nu gaan we opnieuw centrifugeren om de cellen in een pellet te brengen. Vervolgens zal ik de PBS aspireren en de cellen resuspenderen in medium om ze te tellen.Ik meng de cellen zodat de concentratie in de gehele buis gelijkmatig is wanneer we er een monster van nemen. Nu neem ik honderd µL van de cellen om de celdichtheid te meten. Vervolgens voeg ik honderd µL trypaanblauw toe, wat een kleurstof is.We wachten drie tot vijf minuten zodat de kleurstof door de membranen van dode cellen kan dringen. Bij het tellen van de cellen laten we de blauwe cellen buiten beschouwing. De cellen zijn nu klaar om geteld te worden met de hemocytometer; ik breng 50 µL van het cellenmengsel over naar elke zijde van de hemocytometer.Oké, ik ga het afdekken met een dekglas. De hemocytometer heeft twee zijden. Ik ga de eerste zijde tellen en nadat beide zijden geteld zijn, neem ik het gemiddelde en vermenigvuldig ik dit met twee, omdat we een één-op-één verdunning hadden met trypaanblauw.In feite zal onze celdichtheid 135 × 10⁴ cellen per ml zijn. Voor ons experiment gebruiken we een celoplossing met een concentratie van een half miljoen cellen per ml. Aangezien we 13,5 miljoen cellen hebben, zal ik de cellen resuspenderen in 27 ml medium.We gebruiken twee verschillende soorten kleurstoffen. Dit is een live-dead assay van Molecular Probes. Onze eerste kleurstof wordt calcium am genoemd.Onze tweede kleuring wordt AUM-homodimeer genoemd. Deze kleurt dode cellen. We gebruiken blauwe excitatie om groene fluorescentie te verkrijgen en groene excitatie voor rode fluorescentie. Voor deze twee kleuringen wordt our dice-oplossing in PBS bereid wanneer we beelden vastleggen.Eerst zal ik 5 mL PBS (fosfaatgebufferde zoutoplossing) in een buisje overbrengen. Dat is een zoutoplossing. Nu voeg ik een halve µL calcium am per mL toe.Nu voeg ik 2,5 µL calcium am toe aan de buis en twee µL van de homodimeer per ml PBS. Hier is de btex-machine. Deze zorgt ervoor dat de cellen en het medium gelijkmatig over het gehele volume worden verdeeld.Nu laden we 200 microliter cellen in de zeven hier. Vervolgens plaatsen we de dop; dit is een strak afgesloten systeem op deze manier. Ik open de klep, waarna de luchtdruk naar binnen stroomt en ik de riem zo afstel. Vervolgens verandert de druk.Dus ik pas het aan. De druk is 5 PSI. De druk in de slang is 5 PSI.Van hier naar hier is de verbinding gemaakt via dit onderdeel in het gat. We openen hier de bel, waarna de cel wordt geïnjecteerd met een druk van 5 PSI en vervolgens wordt geopend. Daarna begint de Sona-klep te werken.Vervolgens rollen we het substraat. Het substraat is simpelweg een glazen objectglas. Daarna brengen we de juiste hoeveelheid aan en ik gebruik wat schilderstape om het substraat zo te fixeren, klopt dat?En ik fixeer het simpelweg. We plaatsen het geheel, de cel, de ary-klep en het substraat, zodat de ary-werking kan beginnen zodra deze in beweging komt. We stellen dus alles in en openen vervolgens de ary-klep om te starten.Vervolgens bewegen we de tafel op deze manier, toch? Daarna maken we een patroon op het substraat, een patroon op het substraat en voilà. Ik ga deze druppels die we hebben geprint onderdompelen in de kleurolossing die we eerder hebben gemaakt.Vervolgens worden de druppels 10 minuten geïncubeerd en daarna gefotografeerd. Eerst zal ik het beeld via het oculair afstellen. Onze eerste opname is een eenvoudige brightfield-opname.Ik ga het licht uitschakelen en het filter wijzigen zodat we blauwe excitatie hebben, wat groene fluorescentie zal tonen. En het derde beeld dat we zullen maken is van de dode cellen, met de Thm Homodimer-kleuring. En met groen licht zullen we rode fluorescentie krijgen.

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

We presenteren protocollen voor de 3-dimensionale (3D) het inkapselen van de cellen binnen synthetische hydrogels. De inkapseling procedure is beschreven voor de twee meest gebruikte methodes van verknoping (michael-type naast en licht geïnitieerde vrije radicalen mechanismen), evenals een aantal technieken voor het beoordelen van ingekapselde cel gedrag.

Cellulaire Encapsulation in 3D Hydrogelen voor Tissue Engineering

De combinatie van monodisperse druppel generatie met traagheid ordening van cellen en deeltjes, beschrijven we een methode om een ​​gewenst aantal cellen of deeltjes in te kapselen in een enkele druppel op kHz tarieven. We laten zien efficiëntie twee maal groter dan die van niet-geordende inkapseling voor enkel-en dubbel-deeltje druppels.

High Throughput Single-cel en Multiple-cel Micro-encapsulatie

This video demonstrates a technique for immunostaining cells encapsulated in a 3D hydrogel. The hydrogel culture containing neural progenitor cells is fixed, permeabilized, and treated with a blocking solution to prevent non-specific immunostaining. A primary antibody cocktail is added to bind specific proteins, followed by fluorescently labeled secondary antibodies and a nuclear stain. The sample is then mounted on a slide and observed under a confocal microscope.

Immunostaining of Cells Encapsulated in a 3D Hydrogel System

Deze video en manuscript beschrijven een emulsie gebaseerde methode om zoogdiercellen in 0,5% tot 10% alginaatkralen te inkapselen die in grote batches kunnen worden geproduceerd onder gebruikmaking van een eenvoudig geroerd vat. De ingekapselde cellen kunnen in vitro worden gekweekt of getransplanteerd voor toepassingen op het gebied van cellotherapie.

Zoogdiercelcapsulatie in Alginaatkralen Met Een Eenvoudig Verrijkt Vaartuig

Dit artikel presenteert een protocol voor het zaaien van schaarse bevolking van cellen gebruikt pipet-tips om druppel microfluidic apparaten ten behoeve van hogere efficiëntie van de inkapseling van cellen in druppeltjes.

Een pipet-Tip gebaseerde methode voor Seeding cellen Droplet Microfluidic Platforms

Hier gepresenteerd is een protocol voor het gebruik van alginaat als een polymeer in micro-inkapseling van vereeuwigde cellen voor langdurige levering van biologische producten aan knaagdierogen.

Ingekapselde celtechnologie voor de levering van biologics aan het muisoog

Het gepresenteerde experimentele protocol kan worden gebruikt om real-time metingen uit te voeren van cavitatieactiviteit in een celkweekapparaat met als doel onderzoek mogelijk te maken naar de voorwaarden die nodig zijn voor een succesvolle medicijnafgifte en/of andere bio-effecten.

Cavitatie verbeterde therapie bestuderen

Water-in-olie druppels testen zijn nuttig voor analytische chemie, enzymevolutie en eencellige analyse, maar vereisen meestal microfluïdica om de druppels te vormen. Hier beschrijven we deeltjessjabloonemulgering, een microfluïdische benadering om druppeltests uit te voeren.

Deeltjessjabloonemulgering maakt microfluïdische druppeltests mogelijk

Dit artikel beschrijft de inkapseling van menselijke pluripotente stamcellen (hPSC's) met behulp van een co-axiale stroomfocusapparaat. We tonen aan dat deze microfluïdische inkapselingstechnologie een efficiënte vorming van hPSC-sferoïden mogelijk maakt.

Microfluïdische fabricage van core-shell microcapsules met menselijke pluripotente stamcelsferoïden

Dit artikel introduceert een eenvoudige methode voor snelle productie van gigantische unilamellaire blaasjes met ingekapselde cytoskeletale eiwitten. De methode blijkt nuttig te zijn voor bottom-up reconstitutie van cytoskeletstructuren in opsluiting en cytoskelet-membraaninteracties.

Snelle inkapseling van gereconstitueerd cytoskelet in gigantische unilamellaire blaasjes

Deze beginnershandleiding presenteert een algemeen protocol voor de bereiding van Giant Unilamellaire blaasjes (GUV's) via de druppeloverdrachtsmethode, bespreekt de kritieke stappen en biedt inzichten om mogelijke aanpassingen te helpen die nodig zijn voor verschillende toepassingen, waaronder synthetische biologie en microrobotica.

De druppeloverdrachtsmethode gebruiken om op betrouwbare wijze gigantische unilamellaire blaasjes te bereiden

Leer celinkapseling door druppels voor 3D-bioprinting met behulp van een solenoïdeklep en drukgestuurde ejectie. Deze methode ondersteunt onderzoek naar levensvatbaarheid van cellen in weefseltechniek.

Titel Cell Encapsulation door Droplets

Meer video's verkennen