Name: Isolatie en Cultuur van neurale stamcellen uit menselijke haarzakjes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Leer de isolatie en cultuur van neurale stamcellen uit menselijke haarzakjes voor regeneratieve geneeskunde. Dit protocol toont flowcytometrie en neurosfeervorming voor betrouwbaar onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk wordt ondersteund door NIH subsidie ​​R01AR054593 en R01AR054593-S1 aan Xu.

1. Bereiding van weefselkweekplaten <ol><li> Coat elk putje met voldoende Poly-D-Lysine (PDL) aan de bodem van de put te dekken. Laat de platen te drogen in de kap. </li><li> Nadat de putjes droog, spoelen met steriel water en aspireren. Laat de platen te drogen in de kap. </li><li> Na droging laag met fibronectine (dat werd opgelost in water BioWhittaker nacht bij 37 ° C bij een concentratie van 1 mg in 6 ml). </li><li> Voeg NCSC medium [95 ml DMEM/F12, 1 ml Penn / Strep (P / S), 1 ml N2, 2 ml B27, 100 pl mercaptoethanol (2ME, 50 mM stock), bFGF (20 ng / ml medium), IGF -1 (20 ng / ml medium) en EGF (20 ng / ml medium)] bij droge fibronectine in de platen, </li></ol> 2. Extract Haar Follikel Cellen van menselijke hoofdhuid <ol><li> Alvorens de procedure te isoleren NCSCs moet men de respectieve media en reagentia te bereiden (zie Tabel 1). </li><li> Verse volwassen menselijke hoofdhuid huid van facelift procedures of fetal scalp weefsel wordt verzameld, gewassen met PBS bevattende penicilline-streptomycine. </li><li> De huid wordt vervolgens overgebracht in 50 ml buizen en geïncubeerd in DMEM met Dispase (10 mg / ml) gedurende de nacht bij 4 ° C. Incubatie gedurende 2-4 uur bij 37 ° C is ook effectief. Huidstukken moet een breedte van 1 cm om voor enzym te dringen zijn. </li><li> Breng de huid in een gesteriliseerde petrischaal; trek elke haar van de huid door het vastgrijpen van de haarschacht in de buurt van het huidoppervlak en trekken stevig en soepel. De haarzakjes tonen morfologie van zowel anagen (Figuur 1A) of telogen (Figuur 1B). </li><li> Incubeer de geïsoleerde fragmenten follikel in 0,05% trypsine-EDTA (Invitrogen) gedurende 15-20 minuten bij kamertemperatuur onder schudden periodiek wordt 4 ml DMEM met 10% FBS om reactie te stoppen. De folliculaire epitheel getrypsiniseerd en gefiltreerd door 40 urn filter om een ​​enkele celsuspensie bevattende cellen van verschillende grootte en vorm te verkrijgen. </li><li> Spinnenbij 200 xg gedurende 5 minuten, verwijder het supernatant voorzichtig, resuspendeer in 1 ml PBS met 2% serum (FBS). </li><li> Als alternatief kan geplukt haarzakjes worden geplaatst in cultuur zonder trypsine digestie om haar bollen groeien in situ. </li></ol> 3. Isolatie van haarfollikel NCSCs Met behulp van flowcytometrische cell sorteren <ol><li> Haarfollikel enkele celsuspensie werd verkregen door trypsine digestie en gelabeld met antilichamen tegen CD271 (APC-geconjugeerd) / HNK1 (FITC-geconjugeerd) of CD271 / alfa4-integrine (PE-geconjugeerd) gedurende 40 min op ijs in het donker. </li><li> Centrifugeer gedurende 5 min bij 200 xg bij kamertemperatuur en zuig de supernatant. </li><li> Resuspendeer cellen in PBS dat 2% serum (FBS) en vóór sortering, wordt PI toegevoegd aan de gate dode cellen. </li><li> Voer celsortering door flow cytometrie (FACS). Verzamel CD271 +, HNK1 + dubbele positieve cellen of CD271 +, alfa4 integrine + dubbele positieve cellen (Figuur 2). </li><li> Na sorterening, CD271 +, HNK1 + dubbele positieve cellen of CD271 +, alfa4 integrine + dubbele positieve cellen worden gekweekt in ultra-lage bevestigingsplaten in de NCSC medium </li></ol> 4. Cultuur van Primaire NCSCs <ol><li> Cultuur de gedistantieerd folliculaire cellen of FACS gesorteerde cellen in ultra-lage bevestigingsplaten in de NCSC medium, verandert medium elke dag. </li><li> Controleer celcultuur elke dag onder de microscoop. NCSCs begint te kleine drijvende aggregaten na enkele dagen en goed gevormde bollen in 2-5 weken in cultuur afhankelijk van de leeftijd van de donors (Figuur 3A). Uitgroei zal verschijnen in een paar dagen in het bultgebied en goed gevormde bollen in situ in enkele weken (figuur 3B) als hele haarfollikels worden gekweekt in het NCSC medium. </li></ol> 5. Uitbreiding van NCSCs <ol><li> Was de cellen eenmaal met PBS. </li><li> Voeg voorverwarmde (tot 37 ° C, kritische) Accutase en incubeer bij 37 ° C gedurende 5-10min onder schudden regelmatig zodat neurale stamcel bollen gedissocieerd tot afzonderlijke cellen (voor bevestiging gekweekte NCSC, incubeer cellen met Accutase bij 37 ° C gedurende 5 min ervoor zorgen haarfollikel stamcellen vrijstaand). </li><li> Wassen en centrifugeren cellen tweemaal gedurende 5 min bij 200 xg bij kamertemperatuur in DMEM/F12 medium om de resterende oplossing te verwijderen Accutase. </li><li> Re-schorten cellen met NCSC kweekmedium. </li><li> Voor drijvende cultuur, zet de cellen in ultra-low bevestigingsplaten. Voor bevestiging cultuur gebracht in de cellen voorbehandeld weefselkweekplaten. </li></ol> 6. Representatieve resultaten NCSC kweekmedium voldoende om hNCSCs in een ongedifferentieerde toestand te houden zonder voedingscellen. Keratinocyten niet prolifereren en geleidelijk stierf in het medium. Bepaalde kleine ronde cellen prolifereren en vormen kleine aggregaten in suspensie na 3 tot 5 dagen. Deze drijvende aggregaten langzaam toegenomen in formaat gegenereerd driedimensionale bol structuren die we noemen haar gebied (Figuur 3A). Indien gekweekt in beklede platen, zal de NCSCs hechten aan het oppervlak en vormen geen bollen. De bijgevoegde NCSCs sneller groeien dan in suspensie. De bol-vormende of bevestigde stamcellen expressie NCSCs markers. Als hele haarfollikels culturen worden bolletjes gevormd op het gebied dat de uitstulping (Figuur 3B). <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/3194/3194fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Uitgetrokken anagene (A) en telogen (B) haarfollikels. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/3194/3194fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Afbeeldingen slechts ter illustratie van de FACS-analyse van NCSCs Links paneel:. Cellen zijn gated met behulp van anti-CD271 en anti-alphe 4 integrine antilichamen. Rechter paneel: cellen zijn gated met behulp van anti-CD271 en anti-HNK1 antilichamen. <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/3194/3194fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 3"> Figuur 3. Morfologie van het haar bollen (A) Morfologie van drijvende haar bollen, linkerpaneel:. Laag vermogen, rechter paneel:. Hoog vermogen (B) morfologie van het haar bol in situ op de bultgebied, linkerpaneel: een haar bol in telogene bult, rechterpaneel: een haar bol op de bobbel gebied van een anagene haarfollikel.

<ol><li>Cotsarelis, G., Cheng, S. Z., Dong, G., Sun, T. T., Lavker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Existence+of+slow-cycling+limbal+epithelial+basal+cells+that+can+be+preferentially+stimulated+to+proliferate%3A+implications+on+epithelial+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Existence of slow-cycling limbal epithelial basal cells that can be preferentially stimulated to proliferate: implications on epithelial stem cells.</a> Cell. 57, 201-209 (1989).</li>
<li>Cotsarelis, G., Sun, T. T., Lavker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-retaining+cells+reside+in+the+bulge+area+of+pilosebaceous+unit%3A+implications+for+follicular+stem+cells%2C+hair+cycle%2C+and+skin+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Label-retaining cells reside in the bulge area of pilosebaceous unit: implications for follicular stem cells, hair cycle, and skin carcinogenesis.</a> Cell. 61, 1329-1337 (1990).</li>
<li>Tanimura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hair+follicle+stem+cells+provide+a+functional+niche+for+melanocyte+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Hair follicle stem cells provide a functional niche for melanocyte stem cells.</a> Cell Stem Cell. 8, 177-187 (2011).</li>
<li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+novel+population+of+multipotent+adult+stem+cells+from+human+hair+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Isolation of a novel population of multipotent adult stem cells from human hair follicles.</a> Am. J. Pathol. 168, 1879-1888 (2006).</li>
<li>Yu, H., Kumar, S. M., Kossenkov, A. V., Showe, L., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+with+neural+crest+characteristics+derived+from+the+bulge+region+of+cultured+human+hair+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Stem cells with neural crest characteristics derived from the bulge region of cultured human hair follicles.</a> J. Invest. Dermatol. 130, 1227-1236 (2010).</li>
<li>Wong, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest-derived+cells+with+stem+cell+features+can+be+traced+back+to+multiple+lineages+in+the+adult+skin%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Neural crest-derived cells with stem cell features can be traced back to multiple lineages in the adult skin.</a> J. Cell Biol. 175, 1005-1015 (2006).</li>
<li>Sieber-Blum, M., Grim, M., Hu, Y. F., Szeder, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pluripotent+neural+crest+stem+cells+in+the+adult+hair+follicle%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Pluripotent neural crest stem cells in the adult hair follicle.</a> Dev. Dyn. 231, 258-269 (2004).</li>
<li>Amoh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implanted+hair+follicle+stem+cells+form+Schwann+cells+that+support+repair+of+severed+peripheral+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Implanted hair follicle stem cells form Schwann cells that support repair of severed peripheral nerves.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 17734-17738 (2005).</li>
<li>Koliatsos, V. E., Xu, L., Yan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+stem+cell+grafts+as+therapies+for+motor+neuron+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Biol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Human stem cell grafts as therapies for motor neuron disease.</a> Expert Opin. Biol. Ther. 8, 137-141 (2008).</li>
<li>McKenzie, I. A., Biernaskie, J., Toma, J. G., Midha, R., Miller, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin-derived+precursors+generate+myelinating+Schwann+cells+for+the+injured+and+dysmyelinated+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Skin-derived precursors generate myelinating Schwann cells for the injured and dysmyelinated nervous system.</a> J. Neurosci. 26, 6651-6660 (2006).</li>
<li>LeDouarin, N. M., Kalcheim, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLeDouarin%2C+NM+%22The+Neural+Crest%22">The Neural Crest</a>. , Cambridge University Press. Cambridge. (1999).</li>
<li>Tumbar, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+epithelial+stem+cell+niche+in+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Defining the epithelial stem cell niche in skin.</a> Science. 303, 359-363 (2004).</li>
<li>Roh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-potentiality+of+a+new+immortalized+epithelial+stem+cell+line+derived+from+human+hair+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev.+Biol.+Anim%22%5BJournal%5D)">Multi-potentiality of a new immortalized epithelial stem cell line derived from human hair follicles.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. Anim. 44, 236-244 (2008).</li>
</ol>

We hebben niets te onthullen.

De cel beschreven isolatie en kweekwerkwijzen reproduceerbaar en robuust. We hebben gegenereerd NCSCs uit tientallen individuen over een breed leeftijdsbereik. Hoewel het het beste om het weefsel te verwerken direct na weefsel oogst, vonden we dat de hoofdhuid weefsels kunnen veilig worden opgeborgen in de media op ijs voor overnachting vervoer met een minimale impact op de levensvatbaarheid van de cellen. Het is belangrijk om de hoofdhuid weefsel te behandelen met antibiotica en aseptische ...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Invitrogen</td><td>11330-32</td><td></td></tr><tr><td>Hitte-inactiverd FBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30071.03</td><td></td></tr><tr><td>B27-supplement</td><td>Invitrogen</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>N2-supplement</td><td>Invitrogen</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>Invitrogen</td><td>PHG0026</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>R&amp;amp;D-systeem</td><td>236-EG-01M</td><td></td></tr><tr><td>IGF-I</td><td>R&amp;amp;D-systeem</td><td>291-G1-050</td><td></td></tr><tr><td>0,05% Trypsine/EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Invitrogen</td><td>17105041</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline-streptomycine</td><td>Invitrogen</td><td>15070063</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;p class=&quot;Kunt u de brontekst die u vertaald wilt hebben verstrekken? Zodra u de Engelse tekst van JoVE uploadt, zal ik deze nauwkeurig vertalen naar academisch Nederlands, met inachtneming van alle wetenschappelijke terminologie en protocollen.&quot;&gt;&lt;sterk&gt;Tabel 1.&lt;/strong&gt;&lt;/p&gt;</td></tr></tbody></table>

isolatie en cultuur van neurale stamcellen uit menselijke haarzakjes

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

Haarfollikels ondergaan permanente groei en haarcyclus een goed gecontroleerde proces met stamcelproliferatie en rust. Hair uitstulping is een goed gekarakteriseerd niche voor volwassen stamcellen 1. Dit segment van de buitenste wortelschacht omvat een aantal verschillende soorten stamcellen, inclusief epitheliale stamcellen 2, melanocyt stamcellen 3 en neurale stamcellen, zoals 4-7. Haarfollikels vertegenwoordigen een toegankelijke en rijke bron voor verschillende types van menselijke stamcellen. Wij en anderen hebben geïsoleerd neurale stamcellen (NCSCs) van menselijke foetale en volwassen haarzakjes 4,5. Deze menselijke stamcellen zijn label-behoud van cellen en zijn in staat zelf-vernieuwing door middel van asymmetrische celdeling in vitro. Ze drukken onvolwassen neurale cel markers, maar niet differentiatie markers. Onze expressie profilering studie toonde aan dat zij een vergelijkbaar gen expressie patroon te delen met de huid van muizen onvolwassen neurale creërenst cellen. Ze vertonen klonale multipotent die aanleiding kunnen aan myogene, melanocytaire, en neuronale cellijnen geven na in vitro klonale enkele cel cultuur. Gedifferentieerde cellen niet alleen het verwerven van afkomst-specifieke merkers, maar ook blijk geven van voldoende functies in ex vivo omstandigheden. Bovendien zijn deze NCSCs tonen differentiatie potentieel in de richting van mesenchymale geslachten. Gedifferentieerde neuronale cellen kunnen volharden in de hersenen van muizen en behouden van neuronale differentiatie markers. Het is aangetoond dat haarzakje kan afgeleid NCSCs zenuw hergroei helpen, en ze verbeteren functie in muizen getransplanteerd met deze stamcellen na doorsnijden ruggenmerg 8. Bovendien zijn perifere zenuwen gerepareerd met stamcel transplantaten 9 en implantatie van de huid afkomstige precursor cellen naast gemalen sciatic zenuwen heeft geleid tot remyelinisatie 10. Daarom hebben de haarfollikel / huid afgeleid NCSCs al veelbelovende resultaten opgeleverd voor regenerative therapie in preklinische modellen. Somatische cellen herprogrammeren om geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPS) cellen heeft aangetoond een enorm potentieel voor regeneratieve geneeskunde. Er zijn echter nog steeds veel problemen met iPS cellen, in het bijzonder op de lange termijn effect van oncogen / virus-integratie en het potentieel tumorigeniciteit van pluripotente stamcellen zijn niet adequaat aangepakt. Er zijn nog veel hindernissen worden overwonnen voordat iPS cellen kunnen worden gebruikt voor regeneratieve geneeskunde. Dat de volwassen stamcellen zijn bekend als veilig en ze zijn klinisch gebruikt voor vele jaren, zoals beenmergtransplantatie. Veel patiënten hebben al geprofiteerd van de behandeling. Autologe volwassen stamcellen zijn nog steeds de voorkeur cellen voor transplantatie. Daarom is de gemakkelijk toegankelijke en uitbreidbaar volwassen stamcellen in de menselijke huid / haarzakjes zijn een waardevolle bron voor regeneratieve geneeskunde.

Dit artikel presenteert een robuuste protocol voor isolatie en kweek van neurale stamcellen uit menselijke haarzakjes.

Isolatie en Cultuur van neurale stamcellen uit menselijke haarzakjes

Haarfollikels ondergaan een levenslang groeiproces en de haarcylus is een nauwkeurig gereguleerd proces waarbij stamcelproliferatie en quiescentie een rol spelen. De haarbulge is een ...

Het algemene doel van deze procedure is het isoleren en kweken van primaire neurale kamstamcellen, of N CSCs, uit menselijk hoofdhuidweefsel. Dit wordt bereikt door menselijke hoofdhuid eerst te snijden in stroken van één centimeter breed en deze te incuberen in medium met disbayn. De huid wordt vervolgens geplaatst in vers medium en de haarfollikels worden uitgeplugd.De tweede stap van de procedure is het behandelen van de haarfollikels met trypsine om enkelcel-suspensies te verkrijgen. De laatste stap van de procedure is het sorteren van CD271 HNK-1 dubbel-positieve ncsc middels flowcytometrie en het uitplaten in kweekplaten. Uiteindelijk wordt fasecontrastmicroscopie gebruikt om de vorming en groei van neurosfere te bestuderen; de demonstratie van deze methoden is cruciaal, aangezien de stappen voor het extraheren en isoleren van haarfollikels moeilijk aan te leren zijn omdat het zeer lastig is om de huid en haarfollikels onder de microscoop te dissekeren.Ter voorbereiding op het kweken van stamcellen wordt de bodem van elke well van een six-well plaat gecoat met poly-D-lysine; laat de platen drogen in de zuurkast. Zodra de wells droog zijn, spoelt u deze met steriel water en as

isolation-culture-neural-crest-stem-cells-from-human-hair

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Hier laten we onze methode om de muis epidermale neurale stamcellen (EPI-NCSC) te isoleren. Techniek houdt in micro-ontleden whisker follikels, het isoleren van de verdikking en placeing het in weefselkweek. EPI-NCSC beginnen om van uitstulping explantaten op de ondergrond emigreren binnen 3 - 4 dagen.

Muis Epidermale neurale lijst Stem Cell (EPI-NCSC) culturen

Om neurale lijst stamcellen (NCSC) kweken in vitro, is een speciaal medium (NCSCM) vereist. Essentieel onderdeel van NCSCM is kippenembryo extract (CEE). We beschrijven hier accurate technieken om een ​​maximale hoeveelheid van pure en hoge kwaliteit CEE, inclusief details zoals de isolatie, maceratie, centrifugeren en filtratie processen te produceren.

Productie van Chick Embryo Extract voor de teelt van Muizen neurale lijst Stem Cells

Een snelle, robuuste manier van isoleren levensvatbare volwassen epitheliale stamcellen uit menselijke huid is beschreven. De methode maakt gebruik van enzymatische afbraak van de huid collageen matrix, gevolgd door het plukken van de haarfollikels en isolatie van single cell suspensies of weefsel fragmenten voor celkweek.

Isolatie en Cultuur van Volwassen epitheliale stamcellen uit menselijke huid

Een eenvoudige en betrouwbare methode op isolatie en de cultuur van neurale stamcellen uit afgedankte menselijke foetale corticale weefsel wordt beschreven. Culturen zijn afgeleid van bekende menselijke neurologische aandoeningen kunnen worden gebruikt voor de karakterisering van pathologische cellulaire en moleculaire processen, maar ook als een platform om de farmacologische werkzaamheid beoordelen.

Generatie van neurale stamcellen uit afgedankte menselijke foetale Cortical weefsel

Isolatie van embryonale neurale lijst van de neurale buis vergemakkelijkt het gebruik...

Isolatie en Cultuur van neurale lijst cellen van embryonale Murine Neural Tube

This video demonstrates a protocol for isolating and culturing Schwann cells from human dermis tissues. The human dermis contains various cell types, including fibroblasts and Schwann cells. After isolation, the cells are treated with an antimitotic agent to eliminate proliferating fibroblasts, resulting in a pure culture of Schwann cells.

Isolation and Culture of Primary Schwann Cells from a Human Dermis

This video illustrates a technique for isolating cranial neural folds from the midbrain region of chick embryos. It presents a detailed dissection process of the neural folds, their placement, and attachment on fibronectin-coated coverslips, followed by the observation of neural crest cell migration from the neural folds.

Isolating Cranial Neural Folds From a Chick Embryo for a Neural Crest Cell Culture

Wij rapporteren een methode om naïeve multipotente huid-afgeleide precursor (SKP) cellen uit primaire menselijke fibroblast culturen te isoleren. We laten zien dat deze SKPs afgeleid van fibroblastculturen delen dezelfde stamcel eigenschappen aan deze die direct afgeleid van de menselijke huid biopten. Deze cellen brengen de neurale marker, nestin naast multipotente merkers zoals OCT4 en Nanog.

Naïve Volwassen stamcellen Isolatie van primaire humane fibroblastkweken

Neurale lijst (NC) cellen afkomstig van menselijke pluripotente stamcellen (HPSC) hebben een groot potentieel voor het modelleren van de menselijke ontwikkeling en ziekte en voor celvervangingstherapieën. Hier, een voedingsvrije aanpassing van de momenteel...

Voedingsvrije Afleiding van neurale stamcellen uit humane pluripotente stamcellen

Dit protocol beschrijft de dissectie en de cultuur van craniale neurale Crest cellen van muismodellen, voornamelijk voor de studie van de Celmigratie. We beschrijven de gebruikte technieken voor Live Imaging en de analyse van veranderingen in snelheid en celvorm.

Dissectie, cultuur en analyse van primaire Cranial neurale Crest cellen van de muis voor de studie van neurale Crest Celdelaminatie en migratie

We presenteren een driedimensionaal (3D) in vitro differentiatieprotocol dat neurosferen van reproduceerbare grootte genereert om craniale neurale lijstcellen te produceren uit embryonale stamcellen van muizen. We laten zien dat deze methodologie de variabiliteit vermindert in vergelijking met eerdere protocollen en hoe deze kan worden gebruikt voor multiplexed assay om de ontwikkeling van craniale neurale lijstcellen te bestuderen.

Het craniale Neurale Protocol van de Lijstcellen Driedimensionaal in vitro Differentiatie voor Gemultiplexte Analyse

Leer de isolatie en cultuur van neurale stamcellen uit menselijke haarzakjes voor regeneratieve geneeskunde. Dit protocol toont flowcytometrie en neurosfeervorming voor betrouwbaar onderzoek.

Isolatie en Cultuur van neurale stamcellen uit menselijke haarzakjes

Meer video's verkennen