Name: Verrijking van NK-cellen uit menselijk bloed met de RosetteSep Kit van StemCell Technologies (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 52 s
Description: Leer hoe u NK-cellen uit menselijk bloed isoleert met de RosetteSep Kit van StemCell Technologies. Deze negatieve selectiemethode garandeert hoge zuiverheid en levensvatbaarheid voor immunologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Een gedetailleerd protocol is inbegrepen bij elke Rosette september isolatie cocktail en is online beschikbaar op de website van een StemCell technologieën.

<ol><li>Procedures and instruction manuals. , 
	
 <a target="_blank" href="http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx">http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx</a> Forthcoming.</li>
</ol>

De cellen geïsoleerd met behulp van deze techniek kan verder worden opgesplitst in verschillende populaties met behulp van andere celscheiding kits.

PBS aangevuld met 2% FCS en Histopaque oplossingen moeten worden gebracht op kamertemperatuur voor het begin van de procedure.

verrijking van nk-cellen uit menselijk bloed met de rosettesep kit van stemcell technologies

Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies

Natural killer (NK) cellen zijn grote granulaire cytotoxische lymfocyten die behoren tot het aangeboren immuunsysteem en spelen belangrijke rollen in de strijd tegen kanker en infecties, maar zijn ook betrokken bij de vroege stadia van de zwangerschap en afstoting van transplantaten. Deze cellen zijn aanwezig in het perifere bloed, waaruit zij kunnen worden geïsoleerd. Cellen kunnen worden geïsoleerd met behulp van positieve of negatieve selectie. Voor de positieve selectie gebruiken we antilichamen gericht op een oppervlak marker alleen aanwezig op de cellen van belang dat de voor de negatieve selectie gebruiken we cocktails van antilichamen gericht aan het oppervlak markeringen aanwezig zijn op alle cellen, maar de cellen van belang. Deze laatste techniek heeft het voordeel van het verlaten van de cellen van renteloze van antilichamen, waardoor het risico van ongewenste cel activering of differenciation. In deze video-protocol waarin we laten zien hoe NK-cellen uit menselijk bloed gescheiden door negatieve selectie, het gebruik van de RosetteSep kit van StemCell technologieën. De procedure heeft betrekking op het verkrijgen van humaan perifeer bloed (minder dan een Institutional Review Board goedgekeurde protocol bij de proefpersonen te beschermen) en te mengen met een cocktail van antilichamen die zich binden aan markers afwezig op NK-cellen, maar aanwezig is op alle andere mononucleaire cellen aanwezig in de perifere bloed (bijvoorbeeld T-lymfocyten, monocyten ...). De antilichamen aanwezig zijn in de cocktail zijn geconjugeerd aan antilichamen gericht tegen A op erytrocyten glycophorin. Alle ongewenste cellen en rode bloedcellen zal dan ook worden gevangen in de complexen. De mix van bloed en antilichaam cocktail wordt dan verdund, overlayed op een Histopaque helling, en gecentrifugeerd. NK-cellen (&gt; 80% zuiver) kunnen worden afgehaald op het grensvlak tussen de Histopaque en de verdunde plasma. Vergelijkbare cocktails zijn beschikbaar voor de verrijking van andere celpopulaties, zoals het humaan T-lymfocyten.

Natural killer cellen zijn een kleine populatie van lymfocyten. Hier laten we zien hoe deze cellen uit menselijk bloed te isoleren door negatieve selectie, met behulp van een kit van StemCell Technologies. De verkregen cellen zijn levensvatbaar en onaangetast door antilichamen, en dus klaar om te worden gebruikt voor een aantal procedures.

Verrijking van NK-cellen uit menselijk bloed met de RosetteSep Kit van StemCell Technologies

Natural killer (NK)-cellen zijn grote granulaire cytotoxische lymfocyten die tot het aangeboren immuunsysteem behoren en een belangrijke rol spelen bij de bestrijding van kanker ...

Hallo, ik ben Christine Beaton. Ik ben assistent-onderzoeker in het laboratorium van George Chen bij de afdeling Fysiologie en Biofysica van de University of California in Irvine. Vandaag ga ik u laten zien hoe u natural killer-cellen uit menselijk bloed negatief selecteert met behulp van de cocktailkits van Stem Cell Technologies.De reden waarom we deze kit van Stem Cell Technologies gebruiken, is dat deze een zeer hoge celzuiverheid biedt en de negatieve selectie ons in staat stelt cellen te verkrijgen die niet aan een antilichaam zijn gebonden. Hierdoor treden er geen onverwachte reacties op bij deze cellen. De werking van de TSEP-kit is dat er antilichamen aanwezig zijn die binden aan alle cellen in het bloed waarin we niet geïnteresseerd zijn.In mijn geval zijn dat T-cellen, B-cellen, monocyten, en vervolgens heb je antilichamen die zullen binden aan glycophorine A in rode bloedcellen; wat zij hebben gedaan is één antilichaam tegen een witte bloedcel koppelen aan een antilichaam tegen een rode bloedcel. Wat er vervolgens gebeurt, is dat er een complex wordt gevormd bestaande uit één ongewenste witte bloedcel met meerdere rode bloedcellen en, aangezien rode bloedcellen een hoge

enrichment-nk-cells-from-human-blood-with-rosettesep-kit-from

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Hier beschrijven we een methode om efficiënt uit te breiden en te zuiveren van grote aantallen menselijke NK-cellen en beoordelen hun functie.

Uitbreiding, zuivering, en functionele beoordeling van de humane perifere bloed NK-cellen

This video demonstrates the method to analyze energy metabolism in activated human NK cells using an extracellular flux analyzer. Different inhibitors of the electron transport chain complexes impact ATP synthesis, which is measured through the oxygen consumption rate or OCR, providing insights into cellular metabolism and bioenergetics.

Real-Time Monitoring of Energy Metabolism in Human NK Cells Using an Extracellular Flux Analyzer

Dit protocol beschrijft de ontwikkeling, groei en in vivo beeldvorming van NK cellen uit hESCs en iPSCs.

Ontwikkeling, uitbreiding en<em&gt; In vivo</em&gt; Controle van Human NK cellen uit menselijke embryonale stamcellen (hESC &#39;s) en en geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSCs)

Een eenvoudige en betrouwbare werkwijze is beschreven om een ​​set van NK celfuncties zoals degranulatie cytokine en chemokine productie in verschillende NK cel subsets te analyseren.

Flowcytometrie-gebaseerde test voor het toezicht op NK celfuncties

Het doel van deze studie was om formuleren van technologieën die het mogelijk voor succesvolle gene signaaltransductie in primaire natural killer (NK) cellen maken. De dextran-gemedieerde lentivirale transductie van mens of muis primaire NK cellen leidt tot hogere rendementen van gen expressie. Deze methode van gene transductie zal sterk verbeteren NK cel genetische manipulatie.

Dextran verbetert de efficiëntie van de lentivirale transductie van lymfkliertest en menselijke primaire NK-cellen

Een stroom cytometry gebaseerde methode om kwantitatief de cytotoxische activiteit van menselijke natural killer cellen wordt hier weergegeven.

Een stroom Cytometry gebaseerde cytotoxiciteit Assay voor de beoordeling van menselijke NK cel activiteit

Hier presenteren we een protocol om de massa van gen-zwijgen lymfkliertest NK cellen met behulp van een systeem van differentiatie feeder-gratis voor mechanistisch onderzoek in vitro en in vivo.

Een nieuwe Feeder-vrij systeem voor massaproductie van lymfkliertest Natural Killer cellen In Vitro

Een protocol voor het bestuderen van FcγRIIIa-gedreven gebeurtenissen door therapeutische antilichamen in menselijke natural killer cellen wordt hier beschreven. Dit kunstmatige stimulatieplatform maakt het mogelijk om stroomafwaartse effectorfuncties te onderzoeken, zoals degranulatie, chemokine / cytokineproductie en signaalroutes gemedieerd door de FcγRIIIa- en Fc-delen van antilichamen die betrokken zijn bij binding.

Beoordeling van menselijke natural killer celgebeurtenissen gedreven door FcγRIIIa betrokkenheid bij de aanwezigheid van therapeutische antilichamen

Het huidige protocol laat zien hoe CD3−/CD45+CD56+ cellen met milde cytotoxiciteit kunnen worden onderscheiden van humane expanded potential stamcellen (hEPSC's) onder zowel 3D- als 2D-kweekomstandigheden. Dit maakt routinematige fenotypische validatie mogelijk zonder de vernietiging van de complexe micro-omgeving.

Generatie van Natural Killer Cellen uit Human Expanded Potential Stamcellen

Hier presenteren we een methode om menselijke iPSC-afgeleide chimere antigeenreceptor (CAR)-tot expressie brengende natural killer-cellen te differentiëren en uit te breiden met verbeterde doding tegen verschillende maligniteiten. Dit protocol demonstreert de differentiatie en uitbreiding van voor natural killer (NK) geoptimaliseerde iPSC-afgeleide CAR-NK-cellen en de meting van antitumoractiviteit tegen verschillende tumorcellijnen.

Vooruitgang in door mensen geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide chimere antigeenreceptor-expressie natuurlijke killercellen

Leer hoe u NK-cellen uit menselijk bloed isoleert met de RosetteSep Kit van StemCell Technologies. Deze negatieve selectiemethode garandeert hoge zuiverheid en levensvatbaarheid voor immunologisch onderzoek.

Verrijking van NK-cellen uit menselijk bloed met de RosetteSep Kit van StemCell Technologies

Meer video's verkennen