Name: Een methode voor het labelen van bloedvaten in Embryonic Muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 58 s
Description: Leer een methode voor het labelen van embryonale bloedvaten door injectie van fluorescerende kleurstof in de gezichtsader. Deze techniek maakt driedimensionale visualisatie van vaatstructuren mogelijk voor onderzoek naar vasculaire ontwikkeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door subsidie ​​nummers R01AI055001 en R01AI082127 van NIAID naar NRM en SREB Proefschrift Fellowship Award aan JLB.

1. Fluoresceïne gelabelde dextran en GSL I-isolectin B 4 gezicht ader injecties om embryonale vasculatuur label <ol><li> Bereid FITC-dextran (50ug/mL) in fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) of GSL 1 - isolectin B 4 (20ug/200uL) in PBS in een 1,5 ml Eppendorf buis en warm tot 37 ° C. Voeg 100uL op voorraad 1.25mm snel groen / PBS om de FITC-dextran-oplossing (totaal volume 1 ml) en 180uL voorraad 1.25mm snel groen / PBS om de GSL 1 - isolectin B 4 (totaal volume 200uL), zodat de oplossing is zichtbaar blauw. </li><li> Samen ontleden E14.5-E18.5 embryo&#39;s en dooierzak, waardoor het allantoïs steeltje (navelstreng slagader en ader) intact. </li><li> Transfer embryo&#39;s om een ​​nieuw gerecht Petrie (60 X 15 mm) en dompel hen in PBS bij kamertemperatuur. </li><li> Positie van het embryo naar een sagittale uitzicht op het hoofd / gezicht te geven. Gebruik micro ontleden tang voor het embryo zachtjes greep aan het hoofd. </li><li> Met behulp van een 30G naald injecteren 50uL FITC-dextran (50ug/mL) of GSL 1 - isolectin B 4 (20ug in 200uL PBS) in het gelaat ader wijst de naald naar de achterkant van het hoofd. </li><li> Wanneer de kleurstof zichtbaar is in de navelstreng ader, verwijder de naald en scheiden het embryo van de allantoïs steeltje (arteria umbilicalis en ader). </li><li> Na de injecties, laat embryo in PBS te blijven bij kamertemperatuur gedurende 2-3 minuten, zodat de kleurstof circuleert de hele embryo. </li></ol> 2. Whole-mount analyse van de huid vasculatuur <ol><li> Na aftrek van de kleurstof te laten circuleren in de hele embryo, verwijder de huid monsters uit de regio&#39;s van de ledematen, rug en buik, etc. 8,9. </li><li> Was de huid monster in koude PBS, en vast te stellen 4% PFA / PBS gedurende 2 uur 8,9. Was drie keer voor 10 minuten elk in 4 ml flacon met 2 ml heldere koude PBS. </li><li> Plaats huid monster op een objectglaasje en voeg 100 ul van montage media om elke dia en een afdekglas. </li><li> Laat dia&#39;s te drogen in een donkere opslagruimte. </li><li> Ga verder met twee &#39;Image Acquisition&#39; sectie Step. </li></ol> 3. Multi-color etikettering van thymus en hart bloedvaten en perivasculaire cellen voor vriescoupes (Vervolg van deel 1, Stap 7) <ol><li> Hele embryo &#39;Flash bevriezen&#39; in vloeibare stikstof. Embryo&#39;s kunnen worden en bewaard bij -80 ° C tot analyse. </li><li> Als alternatief, ontleden uit thymus, spoelen in 4 ° C PBS, en vast te stellen 2 ml 4% paraformaldehyde (PFA) / PBS gedurende 2 uur. Was drie keer gedurende 10 minuten in koud PBS, plaats thymi in oktober, en vries en bewaar tot gebruik bij -80 ° C. </li><li> Voor cryosectioning, verspreid LGO op &#39;blok&#39; een sectie en monteren van de embryo of ontleed organen / weefsels voor het snijden. </li><li> Snijd bevroren weefsel in 10 urn dikke secties en het verzamelen van op dia&#39;s. </li><li> Fix secties in aceton gedurende 5-10 minuten. Was drie keer in koude TBS. </li><li> Blok in 10% ezel serum / TBS in een vochtige kamer bij kamertemperatuur. </li><li> Incubeer profielen voor een uur &#39;s nachts-met 100 ul van de primaire antilichamen in een vochtige kamer bij 4 ° C: In dit voorbeeld gebruiken we rat anti-muis-CD31 (1:100) naar label endotheel, en de geit anti-muis PDGFR-β (1:100) naar perivasculaire cellen label. Het is nuttig om dia&#39;s te dekken met een individueel gesneden Parafilm strips om ervoor te zorgen dat het antilichaam gelijkmatig is verdeeld over de sectie. </li><li> Na incubatie met het primaire antilichaam, wassen secties 3 keer in koude TBS. Incubeer met 100 ul van een passende secundaire antilichamen gedurende 30 minuten minimum. </li><li> Was drie keer in koude TBS. Voeg 100 ul van de montage media om elke dia en een afdekglas. </li><li> Laat dia&#39;s te drogen in een donkere opslagruimte. </li><li> Ga verder naar sectie &#39;Image Acquisition&#39;. </li></ol> 4. Multi-color etikettering van thymus bloedvaten en perivasculaire cellen voor vibratome secties (Vervolg van deel 1, Stap 7) <ol><li> Ontleden van zwezerik kwabben van de embryo en spoel met koud PBS. </li><li> Fix zwezerik in 4% PFA / PBS bij kamertemperatuur gedurende 2 uur. </li><li> Wassen in PBS-Triton X (0,15%) drie keer, 10 minuten en plaats thymi in een kleine plastic cartridge en onder te dompelen in 4% low melt agarose / PBS (~ 4 ° C). De thymus moet in contact komen met de onderkant van de cartridge. </li><li> Laat agarose stollen op ijs (3-5 minuten). Gebruik een scheermesje af te snijden overtollige agarose. Voeg lijm op de vibratome blokkeren en houden monster het blok. </li><li> Voeg koude PBS aan vibratome waterbad tot het monster en het blad worden ondergedompeld. </li><li> Ingestelde snelheid en amplitude (hoge amplitude en lage gemiddelde snelheid is ideaal voor zachte thymus secties). De amplitude moet worden verminderd als secties breken als gevolg van teveel onrust. </li><li> Snijd 50 um secties. </li><li> Met behulp van een penseel, verzamelen secties in een 24-wells microtiterplaat in koude PBS. </li><li> Blok secties in 500 pi van 10% ezel serum in PBS-Triton X (0,15%) voor 30 minuten. </li><li> Incubeer secties voor 8 uur &#39;s nachts met primaire antilichaam, zoals anti-CD31 en anti-PDGFR-β, In een overdekte 24-wells microtiterplaat. </li><li> Was drie keer in PBS-Triton X (0,15%) over een totaal van 8 uur bij 4 ° C. </li><li> Blok secties in 10% ezel serum in PBS-Triton X (0,15%) voor 30 minuten. </li><li> Incubeer secties voor 8 uur &#39;s nachts bij 4 ° C met passende secundaire antilichamen. </li><li> Was drie keer in PBS-Triton X (0,15%) over een totaal van 8 uur bij 4 ° C. </li><li> Re-fix samples in 4% PFA / PBS gedurende 30 minuten op ijs. </li><li> Was drie keer in PBS-Triton X (0,15%) meer dan 30 minuten op ijs. </li><li> Uitdrogen monsters door een gegradeerde MeOH / PBS-Triton X-serie: 25% MeOH, 50% MeOH, 75% MeOH, en 100% MeOH in 10 minuten voor elke stap. Vervang de 100% MeOH met verse MeOH na 10 minuten en incubeer 1 uur bij kamertemperatuur. </li><li> In een glazen container, mix Babb (benzylalcohol: Benzyl Benzoate) in een 1:2 verhouding. Combineer Babb met MeOH voor een uiteindelijke concentratie van 50% Babb en 50% MeOH. Incubeer het monster in Babb: MeOH gedurende 10-15 minuten. </li><li> Transfer monster tot een glazen fles met 100% Babb en incubeer gedurende 10-15 minuten of tot gewist, bij kamertemperatuur. </li><li> Vul depressie dia (0,7 mm diepte) met verse 100% Babb en overdracht monster aan de zijkant. Voeg afdekglas (nr. 1.5) en de afdichting met 2-3 lagen van de nagellak. Laat nagellak uit te harden in het donker bij kamertemperatuur, vervolgens monster bewaren bij 4 ° C. Let op: Dia&#39;s moeten volledig worden voorafgaand aan de confocale beeldacquisitie verzegeld. Afbeeldingen moeten worden verworven binnen 12-24 uur, als fluorescerende kleurstoffen kunnen vervagen in Babb. </li><li> Ga verder naar sectie &#39;Image Acquisition&#39;. </li></ol> 5. Beeldacquisitie <ol><li> Image 10 urn bevroren secties met een confocale microscoop met behulp van de Plan-Apochromat 20X/0.8 doelstelling (512 x 512 pixels) met 488 - (FITC-dextran/GSL 1 - isolectin B 4), 543 - en 633-nm laser lijnen. </li><li> Acquire confocale z-secties van ganse berg huid en 50 um agarose ingebedde coupes met behulp van de Plan-Apochromat 10X/0.4 doelstelling (512 x 512 pixels) met 488 - (FITC-dextran/GSL 1 - isolectin B 4), 543 -, en 633-nm laser lijnen. Serial Z-profielen moeten achtereenvolgens worden verzameld op 1-micron voor de respectievelijke kanaal. </li><li> Reconstrueren serial Z-profielen met behulp van Zeiss AxioVision 4.6 of andere software voor beeldanalyse. </li></ol> 6. Representatieve resultaten: Efficiëntie-etikettering van de embryonale vasculatuur is van cruciaal belang voor de beoordeling van bloedvaten defecten in de embryonale muizen. Figuur 1 toont de specifieke kenmerken van E16.5 thymus bloedvaten (1A-B) en co-labeling met CD31 (1B), in aanvulling op kleuring van de rechter en linker ventrikel (1E-F), respectievelijk. De GSL I-isolectin B 4 protocol voor vriescoupes, zoals beschreven in de secties 1, 3 en 5 werd gebruikt in deze experimenten. Whole-mount etikettering van de huid bloedvat netwerk op E16.5 muizen, met behulp van protocollen beschreven in de secties 1, 2 en 5 is weergegeven in figuur 1C-D. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/3267/3267fig1.jpg" /> Figuur 1 Legend. FITC GSL I - isolectin B 4 gezichts-ader injecties in E16.5 muis embryo&#39;s. a. Cryosection van embryonale thymus na de injectie. b. samenvoegen van CD31 co-labeling met isolectin B 4. c. en d. Whole-mount van de embryonale bloedvaten de huid na de injectie. e. en f. Cryosection van de embryonale hart e. (rechts ventrikel) f. (linker ventrikel) na injectie.

<ol><li>Cuddihy, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF-mediated+cross-talk+within+the+neonatal+murine+thymus%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">VEGF-mediated cross-talk within the neonatal murine thymus.</a> Blood. 113, 2723-2731 (2009).</li>
<li>Muller, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+targeting+of+VEGF-A+in+thymus+epithelium+disrupts+thymus+blood+vessel+architecture%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Gene targeting of VEGF-A in thymus epithelium disrupts thymus blood vessel architecture.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 102, 10587-10592 (2005).</li>
<li>Muller, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+origin+of+perivascular+mesenchyme+in+the+adult+thymus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neural crest origin of perivascular mesenchyme in the adult thymus.</a> J. Immunol. 180, 5344-5351 (2008).</li>
<li>Foster, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+neural+crest-derived+cells+in+the+embryonic+and+adult+thymus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Contribution of neural crest-derived cells in the embryonic and adult thymus.</a> J. Immunol. 180, 3183-3189 (2008).</li>
<li>Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordination+between+CCR7-+and+CCR9-mediated+chemokine+signals+in+prevascular+fetal+thymus+colonization%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Coordination between CCR7- and CCR9-mediated chemokine signals in prevascular fetal thymus colonization.</a> Blood. 108, 2531-2539 (2006).</li>
<li>Lavine, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+growth+factor+signals+regulate+a+wave+of+Hedgehog+activation+that+is+essential+for+coronary+vascular+development%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Fibroblast growth factor signals regulate a wave of Hedgehog activation that is essential for coronary vascular development.</a> Genes Dev. 20, 1651-1666 (2006).</li>
<li>Lavine, K. J., Kovacs, A., Ornitz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+signaling+is+critical+for+maintenance+of+the+adult+coronary+vasculature+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Hedgehog signaling is critical for maintenance of the adult coronary vasculature in mice.</a> J. Clin Invest. 118, 2404-2414 (2008).</li>
<li>Mukouyama, Y. S., Gerber, H. P., Ferrara, N., Gu, C., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+nerve-derived+VEGF+promotes+arterial+differentiation+via+neuropilin+1-mediated+positive+feedback%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Peripheral nerve-derived VEGF promotes arterial differentiation via neuropilin 1-mediated positive feedback.</a> Development. 132, 941-952 (2005).</li>
<li>Mukouyama, Y. S., Shin, D., Britsch, S., Taniguchi, M., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensory+nerves+determine+the+pattern+of+arterial+differentiation+and+blood+vessel+branching+in+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Sensory nerves determine the pattern of arterial differentiation and blood vessel branching in the skin.</a> Cell. 109, 693-705 (2002).</li>
<li>Murphy, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+Notch4+signaling+induces+hallmarks+of+brain+arteriovenous+malformations+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Endothelial Notch4 signaling induces hallmarks of brain arteriovenous malformations in mice.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 105, 10901-10906 (2008).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Whole-mount en PECAM-1 (CD31) kleuring op de afdelingen zijn de conventionele methoden voor etikettering van het vaatstelsel in de embryonale muizen. Deze methoden vereisen het gebruik van directe en / of indirecte immunofluorescentie, en reinigingsmiddelen om de muis weefsel permeabilize. Dit blijkt een nogal tijdig proces. Hier hebben we in dienst FITC-dextran of isolectin B 4 gezicht ader injecties om direct het etiket van de embryonale vaatstelsel, zodat er geen vereiste voor antilichaam labeling stappen....

<table border="1"><tbody><tr><th> Naam van het reagens </th><th> Vennootschap </th><th> Catalogus nummer </th></tr><tr><td> FITC-dextran </td><td> Sigma </td><td> FD150S-1G </td></tr><tr><td> Fluoresceïne gelabelde GSL 1 - isolectin B 4 </td><td> Vector Laboratories </td><td> FL-1201 </td></tr><tr><td> Fast Green </td><td> MP Biomedicals </td><td> 195178 </td></tr><tr><td> PFA </td><td> Fluka </td><td> 76240 </td></tr><tr><td> Foetaal Bovine Serum </td><td> Atlanta Biologicals </td><td> S11550 </td></tr><tr><td> Optimale Cutting Temperatuur Compound (OCT </td><td> VWR </td><td> 25608-930 </td></tr><tr><td> Aceton </td><td> JT Baker </td><td> 9006-33 </td></tr><tr><td> Donkey Serum </td><td> Jackson </td><td> 017-000-121 </td></tr><tr><td> rat anti-muis CD31, </td><td> BD Pharmingen </td><td> 558736 </td></tr><tr><td> geit anti-muis PDGFR-β </td><td> R &amp; D Systems </td><td> AF1042 </td></tr><tr><td> ezel anti-rat CD31 Alexa 647 (Invitrogen) </td><td> Biolegend </td><td> 102516 </td></tr><tr><td> ezel anti-geit Alexa 594 (Invitrogen) </td><td> Invitrogen </td><td> A11058 </td></tr><tr><td> Triton X -100 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> X-100 </td></tr><tr><td> Low melt agarose / PBS </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A9414-25G </td></tr><tr><td> Methanol </td><td> Fisher Scientific </td><td> A413-4 </td></tr><tr><td> Benzylalcohol </td><td> Acros Wetenschappelijke </td><td> 148390010 </td></tr><tr><td> Benzylbenzoaat </td><td> Acros Wetenschappelijke </td><td> 105860010 </td></tr><tr><td> Depressie dia&#39;s </td><td> Fisher Scientific </td><td> S175201 </td></tr><tr><td> Fluorogel </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 17985-10 </td></tr><tr><td> Dekglas (22x22) -1,5 </td><td> Thermo Scientific </td><td> 152222 </td></tr><tr><td> Zeiss LSM 510 Meta confocale microscoop </td><td> Zeiss </td><td></td></tr><tr><td> Micro ontleden tang </td><td> Roboz </td><td> RS-5135 </td></tr><tr><td> Parafilm Nee OM992 </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-374-16 </td></tr><tr><td> 12 en 24 goed microplaten </td><td> Evergreen Wetenschappelijke </td><td> 222-8044-01F </td></tr><tr><td> Superfrost / Plus Microscope Slides </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> 4 ml flacons duidelijk </td><td> Nationale Wetenschappelijke </td><td> B7800-2 </td></tr></tbody></table>

een methode voor het labelen van bloedvaten in embryonic muizen

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

De oprichting van een functioneel bloedvat-netwerk is een essentieel onderdeel van organogenese, en is noodzakelijk voor een optimale orgaanfunctie. Bijvoorbeeld, in de thymus juiste vaatstelsel vorming en patroonvorming is essentieel voor thymocyt toegang tot het orgel en de mature T-cel uitgang naar de periferie. De ruimtelijke ordening van de bloedvaten in de thymus is afhankelijk van signalen uit de lokale micro-omgeving, namelijk de thymus epitheelcellen (TEC). Diverse recente rapporten suggereren dat verstoring van deze signalen leidt tot thymus bloedvat gebreken 1,2. Eerdere studies hebben beschreven technieken die gebruikt worden om de neonatale en volwassen thymus bloedvaten 1,2 label. We zien hier een techniek voor de etikettering de bloedvaten in de embryonale thymus. Deze methode combineert het gebruik van de FITC-dextran of Griffonia (Bandeiraea) simplicifolia Lectin I (GSL 1 - isolectin B 4) gezichts-ader injecties en CD31 antilichaam kleuring om thymus vasculaire structuren en PDGFR-β aan thymus perivasculaire mesenchym 3-5 label te identificeren. De optie van het gebruik van vriescoupes of vibratome secties is ook voorzien. Dit protocol kan worden gebruikt om de thymus vasculaire defecten, wat essentieel is voor het definiëren van de rol van TEC-afgeleide moleculen in thymus bloedvatvorming te identificeren. Als de methode labels van de gehele vaatstelsel, het kan ook gebruikt worden om de vasculaire netwerken te analyseren in meerdere organen en weefsels in het hele embryo inclusief huid en hart 6-10.

Dit artikel beschrijft een methode voor het labelen van embryonale huid en thymus bloedvaten.

Een methode voor het labelen van bloedvaten in Embryonic Muizen

De totstandkoming van een functioneel bloedvatnetwerk is een essentieel onderdeel van de organogenese en is vereist voor een optimale orgaanfunctie. Bijvoorbeeld, in ...

Het algemene doel van het volgende experiment is om de effecten van specifieke genetische mutaties op de vasculaire ontwikkeling en structuur te bepalen. Dit wordt bereikt door het embryo en de extra-embryonale weefsels samen te dissecteren om een geschikt monster voor injectie te verkrijgen. Vervolgens wordt de facialisader geïnjecteerd met een fluorescerende kleurstof om het intacte vaatstelsel te labelen.Vervolgens wordt het embryo klaargemaakt voor analyse. Ten slotte worden hole mounts of coupes van de gelabelde vasculatuur afgebeeld om de driedimensionale structuur van de normale vasculatuur te tonen, op basis van immunofluorescentiemicroscopie van hole mounts of weefselcoupes. Ik kreeg voor het eerst het idee voor deze methode toen ik geïnteresseerd was in het bepalen van het ontwikkelingstijdstip waarop de perifere vasculatuur via angiogenese verbinding maakt met de thymus.Om te beginnen, bereid FXI dextran of GS L one I selectin B four in PBS voor in een 1,5 milliliter eppendorfbuisje; voeg 100 microliters van de 1,25 millimolar fast green PBS-stock toe aan de FXI dextran, of 180 microliters aan de GS L one I selectin B four, zodat de oplossingen zichtbaar blauw zijn. Warm

a-method-for-labeling-vasculature-in-embryonic-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

We introduceren een hele-mount immunohistochemie en laser scanning confocale microscopie met meerdere etikettering voor het analyseren van complexe vasculaire netwerk-vorming in de muis embryonale ledematen huid.

Whole-mount Immunohistochemische Analyse voor Embryonale Limb Skin vaatstelsel: een modelsysteem voor Vasculaire Vertakkingen Morphogenesis in Embryo Study

De neonatale muizen netvlies biedt een goed gekarakteriseerd fysiologisch model van angiogenese, die onderzoeken van de rol van de verschillende genen of medicijnen die angiogenese moduleren in een...

Hele Mount immunofluorescentiekleuring van de Neonatale Mouse Retina naar Angiogenese Onderzoek<em&gt; In vivo</em

We beschrijven een aantal methoden om kleurstoffen injecteren van DNA vectoren, virussen en cellen om zowel cellot en fenotype van endogene en geënte cellen uit embryonale of pluripotente cellen in muizenembryo's op embryonale dag (E) 9,5 en latere stadia bewaken ontwikkeling.

Cell Labeling en Injectie in ontwikkelingslanden Embryonale Mouse Hearts

Dit protocol beschrijft een techniek om veranderingen in de maternale vaatstructuur tijdens zwangerschap bij muizen te beoordelen. Met behulp van stereologische methoden wordt de verandering van de deciduale spiraalvormige slagaders kwantitatief beoordeeld en worden de resultaten kwalitatief bevestigd door middel van immunohistochemie.

Beoordeling van de moeder Vasculaire Verbouwing tijdens de zwangerschap in de muis Baarmoeder

Dit protocol toont een fluorescentie gebaseerde methode om de vasculatuur te visualiseren en de complexiteit ervan te kwantificeren in Xenopus tropicalis . Bloedvaten kunnen na de injectie van een fluorescerende kleurstof in het kloppende hart van een embryo worden gedetecteerd na genetische en / of farmacologische manipulaties om in vivo cardiovasculaire ontwikkeling te bestuderen.

Visualisatie en kwantitatieve analyse van embryonale angiogenese in<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Dit werk demonstreert een nieuwe aanpak om het proliferatie-, differentiatie- en vaartuigvormende potentieel van vasculaire endotheliale stamcellen (VESC's) te beoordelen door middel van transpiratie van de dikke dikvliesvoeding, gevolgd door een full-mount weefselbereiding voor microscopische observatie. Ook wordt een lineage-tracingsstrategie om het gedrag van VESC's in vivo te onderzoeken, ook voorgesteld.

Een nieuwe Mammary Fat Pad Transplantation Technique om de Vessel Generation van Vasculaire Endotheliale Stamcellen te visualiseren

Echocardiographic onderzoek wordt vaak gebruikt in muizen. Dure high-resolution echografie apparaten zijn ontwikkeld voor dit doel. Dit protocol beschrijft een betaalbare echocardiographic procedure gecombineerd met histologische Morfometrische analyses om te bepalen van cardiale morfologie.

Echocardiographic en histologisch onderzoek van cardiale morfologie in de muis

We presenteren de protocollen te onderzoeken muis hart ontwikkelen met behulp van microscopie van de hele berg epifluorescerende op muis embryo's ontleed van ventriculaire specifieke MLC-2v-tdTomato verslaggever knock-in muizen. Deze methode laat ons direct visualiseren van elke fase van de ventriculaire formatie tijdens de ontwikkeling van de hart van de muis zonder arbeidsintensieve histochemische methoden.

Analyse van de ontwikkeling van de cardiale kamer tijdens muis embryogenese met hele Mount Epifluorescence

Het artikel beschrijft een snel protocol voor het etiketteren van bloedvaten in een Teleost vis door cardiale transfusie van DiI verdund in fixatief, met behulp van Medaka (Oryzias latipes) als een model en gericht op de hersenen en de hypofyse weefsel.

Etikettering van bloedvaten in de Teleost hersenen en de hypofyse met behulp van cardiale transfusie met een DiI-fixatief

We demonstreren chemisch inducerende grote bloedvatverwijding bij muizen als een model voor het onderzoeken van cerebrovasculaire disfunctie, dat kan worden gebruikt voor modellering van vasculaire dementie en de ziekte van Alzheimer. We demonstreren ook het visualiseren van het vaatstelsel door het injecteren van een siliconenrubbersamenstelling en het bieden van duidelijke visuele richtlijnen voor het meten van veranderingen in de grootte van bloedvaten.

Een visuele benadering voor het induceren van dolichoectasia bij muizen om door grote bloedvaten gemedieerde cerebrovasculaire disfunctie te modelleren

Dit protocol introduceert een snelle methode voor kwantitatieve driedimensionale vasculaire beeldvorming op de hele berg met behulp van light-sheet fluorescentiemicroscopie. De werkzaamheid van de methode wordt aangetoond met behulp van het faryngeale boogslagadersysteem van het kuikenembryomodel, waarbij hemodynamische krachten worden gekwantificeerd via computationele vloeistofdynamica.

Snelle beeldvorming met hoge resolutie van de hele berg van het vaatstelsel van kleine dieren voor kwantitatieve studies

Leer een methode voor het labelen van embryonale bloedvaten door injectie van fluorescerende kleurstof in de gezichtsader. Deze techniek maakt driedimensionale visualisatie van vaatstructuren mogelijk voor onderzoek naar vasculaire ontwikkeling.

Een methode voor het labelen van bloedvaten in Embryonic Muizen

Meer video's verkennen