Name: Evaluatie van kankerstamcel Migratie Met behulp van compartimentering microfluïdische apparaten en live cell imaging (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-12-23T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 36 s
Description: Leer hoe je kankerstamcelmigratie bestudeert met een compartimenterend microfluïdisch apparaat en live cell imaging. Deze methode maakt real-time visualisatie van celbeweging mogelijk voor inzicht in metastase.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

PAC wordt gedeeltelijk ondersteund door een NIH T32 subsidie ​​bij Universiteit van Wisconsin Stem Cell Training Program (PA Clark). JSK werd gedeeltelijk ondersteund door de HEADRUSH Hersentumor Onderzoek hoogleraar, Roger Loff Memorial GBM Onderzoek Fonds, en de UW Foundation / Neurochirurgie hersentumor onderzoek en onderwijs Fonds. JCW en YH worden gedeeltelijk ondersteund door NIH subsidie ​​NIBIB 1R01EB009103-01.

1. BTSC's cel dissociatie BTSCs zijn afgeleid van bestaande culturen gekweekt in serumvrij medium stamcel als neurosferen. cultuur waarvan eerder beschreven 10, 11. <ol><li> Bereid celsuspensie van BTSC afgeleide neurosferen. BTSC afgeleide neurosferen worden verzameld in een 15 ml conische buis en gecentrifugeerd bij 900 rpm gedurende 5 minuten. Snellere centrifugeren kunt scheren, en / of schade aan het neurosferen. Supernatant wordt afgezogen en neurosfeer cultuur wordt opnieuw gesuspendeerd in 0,5 ml voorverwarmde Accutase. Deze oplossing wordt gedurende 5-10 minuten bij 37 ° C waardoor de neurosferen los te maken. Cellen worden mechanisch afgebroken met 10-20 zachte bewegingen van een P100 pipet en vervolgens 1,5 ml van stamcellen medium wordt toegevoegd aan de cellen aan de Accutase neutraliseren. </li><li> De BTSCs gecentrifugeerd bij 1300 rpm gedurende 5 minuten en opnieuw gesuspendeerd in 1 ml van stamcellen medium. </li><li> Een 50 pi aliquot wordt verwijderd uit de Suspension en in een microcentrifuge buis celtelling. 50 ul van trypan blue wordt toegevoegd aan de Eppendorf buis en de suspensie wordt in een hemocytometer voor celtelling. </li><li> Eventueel na celtellingen, wordt extra stamcel medium toegevoegd aan de BTSC suspensie tot een celdichtheid van 20.000 levende cellen / ul media geven. </li></ol> 2. Fabricage van bi-gelaagde su-8 meester en gieten van PDMS stempel (zie figuur 1) We maken gebruik van optische lithografie en zachte lithografie om su-8 meester en PDMS stempel, die essentieel zijn voor de montage van de microfluïdische apparaten te fabriceren. Iets anders dan de standaard procedure 12, wordt onze su-8 meester bestaat uit twee lagen. De 3-urn hoge microkanalen zijn gegoten in de eerste / onderste laag eerder in het proces, terwijl de 250 urn hoge zaaien en die kamers in de tweede / bovenlaag. Met het oog op een juiste aansluiting tussen twee cultuur compartimenten (microkanaals en kamers), de twee lagen moeten nauwkeurig worden uitgelijnd in positie. Echter, de dikte en dichtheid van de tweede laag groot genoeg zijn om het referentiemerkteken / optische aligner blokkeren toegang tot de bodemkenmerken. Hier hebben we het ontwerp van de maskers met de vaste markers worden op afstand geplaatst. Aldus kunnen deze merkers in de eerste laag selectief worden afgeschermd tijdens het draaien van de tweede laag. Daardoor zijn beide lagen functies die in een master en klaar voor het vormen in reliëf van de PDMS stempel. <ol><li> Ontwerp en bereidt u twee foto-maskers. Een masker bestaat uit twee referentiepunten markers en een array van microkanalen (400 um lang en 10-50 urn breed) voor de eerste laag. Ander masker bestaat uit zaaien en ontvangen kamers (2 mm lang en 600 um breed) voor de tweede laag. Beide maskers zijn ontworpen in Illustrator (Adobe, California), laser-geprint op transparante films (Thin metalen onderdelen, Colorado), gereinigd met isopropanol en lucht gedroogd. </li><li> Maak de eerste laag metsu-8 fotolak (Microchem, Massachusetts) volgens de handleiding van het product van leverancier. Eerste spin-coat de handgreep wafer (WRS Materials, California) met 3-urn dikke fotoresist van su-8 (5), gevolgd door zacht bakken. De fotolak wordt dan blootgesteld ultraviolet en uitgehard met de bijbehorende masker in close-contact, gevolgd door post-bakken en ontwikkelen. </li><li> Spin-coat de tweede laag met 250 pm dikke su-8 (2100). Om dikke fotoresist verstopt raakt het referentiemerkteken markers van de eerste laag behandelen we deze gebieden met plakband in voor spin-coating van de tweede laag. De band wordt dan afgepeld de markers openbaren uitlijning doel. </li><li> UV-bloot de tweede laag met de tweede masker. Met de uitlijningstekens geopenbaard, is het eenvoudig om ze af te stemmen op die in de tweede masker met behulp van optische masker aligner. De tweede laag fotolak wordt dan ultraviolet belicht en uitgehard in close-contact, gevolgd door post-bakken en ontwikkelen. &lt;/ Li&gt; </li><li> Anti-stick de vacht van de geresulteerd meester. Om te helpen bij het verwijderen van uitgeharde PDMS, kan de su-8 meester worden gesilaniseerd via damp depositie op het oppervlak een anti-aanbak-type coating. Plaatst deze in een exsiccator gedurende ten minste een uur, met enkele druppels trichloor (1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctyl) silaan oplossing onder vacuum. </li><li> Mold PDMS met de master. Meng prepolymeer basis en genezer van PDMS Sylgard 184 (Dow Corning, Michigan) in verhouding 10:1 grondig. Plaats het in een exsiccator voor vacuüm ontgassen tot er geen luchtbel wordt gezien. Opnieuw giet het mengsel op het masker en ontgas als nieuwe luchtbel geïntroduceerd. Hard de schimmel op een niveau kookplaat 2 uur bij 90 C. Na afkoeling tot kamertemperatuur voorzichtig laat de PDMS stempel. Aldus worden kanalen kweken gegraveerd in PDMS en klaar voor montage van de inrichting. De master is herbruikbaar voor het vormen totdat deze is gebarsten of versleten. De anti-aanbaklaag opnieuw moet worden uitgevoerd wanneer de kleverigheid herwint. </li></ol> 3.Montage van microfluïdische apparaten en celcultuur (figuur 2) Met het oog op de cultuur-cellen, is voorzien van gegraveerde PDMS stempel bevestigd aan een glazen dekglaasje op ingesloten kanalen te vormen. En uitlaten zijn gemaakt voor het laden van de cultuur / media. Ondertussen cleanup en andere procedures om het glassubstraat en PDMS stempel zijn nodig om de cel-compatibiliteit. <ol><li> Maak reservoirs door de PDMS stempel met behulp van een biopsie perforator. We kiezen hun diameter tot 6 mm. Deze reservoirs dienen voor twee doeleinden. Men te houden extra voedingsstof voor celgroei. De andere is voor de toegang van pipet laden en vacuüm aspiratie. </li><li> Week de PDMS stempel in 70% ethanol gedurende 30 min en vervolgens te spoelen met gedeïoniseerd water nog 10 minuten. Het doel is om duidelijk mogelijke organische reststromen die tijdens fabricage proces, en niet-verknoopte PDMS besmetting. Meer intense en grondige reiniging processen zoals biologische extractie 13 14 werden elders gebruikt. Maar we vonden het niet nodig in BTSC cultuur. </li><li> Steriliseer de PDMS stempel met autoclaaf (121 ° C, 35 min). Deze stap voltooit de verdere verknoping reactie van PDMS. Uitgaande van deze stap en tot stap 3.6, alle procedures zijn genomen in een steriele manier. </li><li> De PDMS stempel wordt dan gelegd op een glazen dekglaasje die tevoren is bekleed met poly-L-lysine. 15-17 De inrichting wordt dan bedekt met laminine door het invullen van het kanaal met laminine oplossing overnacht bij 37 ° C. Laminine wordt aangezogen uit de inrichting en de inrichting wordt gewassen met stamcellen medium. </li><li> Laad celsuspensie van stap 1 in reservoirs en kanalen. 11 pl van gedissocieerde cellen zijn geplaatst in een reservoir zaaien. Vacuüm aspiratie wordt gebruikt om cellen te ver in de kamer zaaien, indien nodig. Eens 7 pl cellen worden de aangrenzende seeding reservoir. Opmerking: De gemiddelde celdichtheid van 20.000 cellen / ul media. Achteruiter vijf minuten, het zaaien en het ontvangen van reservoirs worden overspoeld met media. </li><li> Plaats een 0,5-1 mm pre-geautoclaveerd PDMS vel bovenop. De natuurlijk opgetreden oppervlaktehechting tussen twee PDMS stukken zal de celcultuur afgesloten en klaar voor transport, incubatie en microscopische beeldvorming. </li></ol> 4. Lange termijn time-lapse imaging van BTSC migratie met BioStation IM (Nikon Instruments Inc, Melville, VS). De combinatie van camera, software en incubator in een doos, dit microscopische systeem maakt het mogelijk om beeld celcultuur zonder verstoring voor dagen. Daarnaast zijn unieke motor ontwerp beweegt het objectief en houdt monstertafel stationair op point-bezoek-functie. Dit maakt het praktisch is om beeld parallelle experimenten en spoor cel locomotie van high-throughput assay. <ol><li> Pre-equilibreren de Biostation IM gedurende 45 minuten om de temperatuur, vocht en lucht te stabiliseren. Toevoeging van een aantal water-contained schotels in monsterkamer wordt gebruikt om de juiste vochtigheid te handhaven. </li><li> Laad de cel-inrichting die in de monsterkamer van de microscoop, en centreer deze met behulp van micro pincet. </li><li> Stel de scherpstelling, stand-punten en tijdstippen in Biostation software en start de time-lapse. </li></ol> 5. Representatieve resultaten: Voorbeelden van visuele inspectie en karakterisatie van Kankercel Migratie door een compartimentering microfluïdische apparaat zijn in figuur 3 en figuur 4. De cel-lijn is BTSC. Met de huidige opstelling kunnen fasebeelden van celkweek continu opgenomen zolang 5 dagen (figuur 3) en zo vaak als elke 2 seconden (Figuur 4). Meer dan 5 dagen, cultuur media moeten worden vervangen voor aanvullen van en afval verwijderd. Onze lange termijn time-lapse identificeert een draaiende reeks van zes cel stadia tijdens de migratie op basis van de morfologische veranderingen. Zoals afgebeeldgeconcentreerd in figuur 3, beschrijven we ze als (i) pre-migratie, (ii) inleiding, (iii) pad-exploratie, (iv) cruisen, (v) bestemming-exloration en (vi) na de migratie. In de opvangkamer, spoelvormige cellen verblijven in stap (i) als in bulk tumoren die kunnen groeien, delen en geleidelijk over. Bij het naderen van de microkanaal ingang, een paar cellen overgaan tot fase (ii) wanneer zij uit te breiden en het genereren van lijm uitsteeksel. Slechts een van hen kan de ingang bezetten en trap (iii) dat de migratie richting kan verkennen doorgaan. Zodra de cel bepaalt de migratie richting, bespreekt dit stadium (iv) om mee te varen door de microkanaal in een gestage en hoge snelheid, die wordt gedragen door de hele microkanaal. Eind microkanaal, cel verder naar stap (v) om de open ruimte van opneemkamer verkennen en naar trap (vi). In microkanaal, migreert vermogen veelal afkomstig blaarachtig activiteit zoals geïllustreerd in figuur 4, vergelijkbaar met die van amoeboïde cell. Cel blaarachtig en membraan vervorming zijn volledig hier opgenomen. <img src="/files/ftp_upload/3297/3297fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Schema's van de fabricage van microfluïdische apparaat. Het hele proces wordt uitgevoerd op een 3-inch silicium wafer handvat door middel van een aangepaste techniek van zachte lithografie. 3 urn hoge microkanalen en uitlijningstekens worden gemaakt in de eerste laag. Dan 250 urn dikke su-8 spin-coating, terwijl de centreermarkeringen zijn bedekt met plakband, zodat zij later kunnen toegankelijk zijn aligner maskeren zonder zicht-blokkerende door dikke fotoresistlaag. Aldus kan kamer eigenschappen worden als de tweede laag en nauwkeurig uitgelijnd op de eerste laag. PDMS stempel wordt uiteindelijk gevormd uit de resulterende master. <img src="/files/ftp_upload/3297/3297fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Schema van het apparaat assemblage en cel zaaien proces. Ingesloten door PDMS en glkont dekglaasje, wordt de 3D kweken ruimte bestaat uit kamers, reservoirs en microkanalen. Het zaaien wordt gevuld met celkweek, terwijl de opvangkamer wordt aanvankelijk gevuld met celvrije media. De microkanalen die verbinding tussen hen cel migratie pad van zaaien links naar ontvangende kant. <img src="/files/ftp_upload/3297/3297fig3.jpg" alt="Figuur 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 3"> Figuur 3. BTSC migratie door microkanaal. Boven: snapshots van time-lapse tonen een enkele cel (groen gemarkeerd) migreert meer dan 400 micrometer uit de seeding kant aan de ontvangende kant. De hele reis duurt ongeveer 2 dagen, waarbij een reeks van cel morfologische veranderingen. De schaalstaaf is 40 pm. Onder: een cartoon vertegenwoordiging van zes migratie fasen. Pre-migratie (i) het zaaien kamer spoelvormige en deelbaar cellen geleidelijk migreren langs elkaar. De cellen in de buurt microkanaal ingang race met elkaar door polariserende cellichaam en e xerting lamellipodia uitsteeksel. Initiatie (ii): De trekkende cel met de hoogste capaciteit neemt het kanaal ingang, terwijl haar concurrenten terugtrekken zal. Path-exploratie (iii): De trek cel verandert in een amoeboïde mode met weinig polariteit. Deze migratie-modus is uiterst beweeglijk en in staat om weg te verkennen in alle richtingen door blaarachtig kleine membraan uitsteeksels. Cruising (iv): Zodra de migratie pad wordt bepaald, de cel verandert in een aangepast amoeboïde modus door het behoud van een extra groot uitsteeksel rubriek naar voren. Zo cel handhaaft een hoge motiliteit en een constante richting en snelheid. Bestemmings-exploratie (v): Bij path-end, de cel vertraagt ​​en ontwikkelt filopodias te verkennen de opvangkamer voor invasie doel. Post-migratie (vi): Na het invoeren van de ontvangende kamer, cel verandert in stervormige en behoudt een hoge beweeglijkheid, maar geen bepaalde richting. "/&gt; . Figuur 4 Snapshots van time-lapse tonen de cyclus van blaarachtig activiteit en membraan vervorming van een BTSC: (AB). initiatie; (BD). Uitbreiding; (DF). Terugtrekken. De pijlen en curve-lijn geven de richting en de plaats van membraan vervorming respectievelijk. De snapshots worden verzameld om de 8 seconden.

<ol><li>Carke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+Stem+Cells-Perspectives+on+Current+Status+and+Future+Directions%5BTitle%5D)+AND+%22AACR+Workshop+on+Cancer+Stem+Cells.+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cancer Stem Cells-Perspectives on Current Status and Future Directions.</a> AACR Workshop on Cancer Stem Cells. Cancer Research. 66, 9339-9344 (2006).</li>
<li>Stupp, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> New England Journal of Medicine. 352, 987-996 (2005).</li>
<li>Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+cancer+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Genetics+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of cancer cell invasion.</a> Current Opinion in Genetics & Development. 15, 87-96 (2005).</li>
<li>Shackleton, M., Quintana, E., Fearon, E. R., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+in+Cancer%3A+Cancer+Stem+Cells+versus+Clonal+Evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity in Cancer: Cancer Stem Cells versus Clonal Evolution.</a> Cell. 138, 822-829 (2009).</li>
<li>Karnoub, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+within+tumour+stroma+promote+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells within tumour stroma promote breast cancer metastasis.</a> Nature. 449, 557-557 (2007).</li>
<li>Huang, Y., Agrawal, B., Sun, D., Kuo, J. S., Williams, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidics-based+Devices%3A+New+Tools+for+Studying+Cancer+and+Cancer+Stem+Cell+Migration%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">Microfluidics-based Devices: New Tools for Studying Cancer and Cancer Stem Cell Migration.</a> Biomicrofluidics. 5, (2011).</li>
<li>Rolli, C. G., Seufferlein, T., Kemkemer, R., Spatz, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Tumor+Cell+Cytoskeleton+Organization+on+Invasiveness+and+Migration%3A+A+Microchannel-Based+Approach%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Impact of Tumor Cell Cytoskeleton Organization on Invasiveness and Migration: A Microchannel-Based Approach.</a> Plos One. 5, (2010).</li>
<li>Chung, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+migration+into+scaffolds+under+co-culture+conditions+in+a+microfluidic+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Cell migration into scaffolds under co-culture conditions in a microfluidic platform.</a> Lab on a Chip. 9, 269-275 (2009).</li>
<li>Irimia, D., Toner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+migration+of+cancer+cells+under+conditions+of+mechanical+confinement%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Biology%22%5BJournal%5D)">Spontaneous migration of cancer cells under conditions of mechanical confinement.</a> Integrative Biology. 1, 506-512 (2009).</li>
<li>Svendsen, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+for+the+rapid+and+long+term+growth+of+human+neural+precursor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A new method for the rapid and long term growth of human neural precursor cells.</a> Journal of Neuroscience Methods. 85, 141-152 (1998).</li>
<li>Clark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioblastoma+cancer+stem+cells+exhibit+decreased+dependence+on+exogenous+growth+factors+for+proliferation+and+survival%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Glioblastoma cancer stem cells exhibit decreased dependence on exogenous growth factors for proliferation and survival.</a> , Forthcoming Forthcoming.</li>
<li>Xia, Y. N., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soft+lithography%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie-International+Edition%22%5BJournal%5D)">Soft lithography.</a> Angewandte Chemie-International Edition. 37, 551-575 (1998).</li>
<li>Millet, L. J., Stewart, M. E., Sweedler, J. V., Nuzzo, R. G., Gillette, M. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+devices+for+culturing+primary+mammalian+neurons+at+low+densities%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Microfluidic devices for culturing primary mammalian neurons at low densities.</a> Lab on a Chip. 7, 987-994 (2007).</li>
<li>Regehr, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+implications+of+polydimethylsiloxane-based+microfluidic+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Biological implications of polydimethylsiloxane-based microfluidic cell culture.</a> Lab on a Chip. 9, 2132-2139 (2009).</li>
<li>Dent, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filopodia+are+required+for+cortical+neurite+initiation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Filopodia are required for cortical neurite initiation.</a> Nature Cell Biology. 9, 1347-1347 (2007).</li>
<li>Hu, X. D., Viesselmann, C., Nam, S., Merriam, E., Dent, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity-Dependent+Dynamic+Microtubule+Invasion+of+Dendritic+Spines%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Activity-Dependent Dynamic Microtubule Invasion of Dendritic Spines.</a> Journal of Neuroscience. 28, 13094-13105 (2008).</li>
<li>Vitzthum, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+Na%28%2B%29%2FH%28%2B%29+exchange-mediated+pH%28i%29+regulations+in+neuronal+soma+and+neurites+in+compartmentalized+microfluidic+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Biology%22%5BJournal%5D)">Study of Na(+)/H(+) exchange-mediated pH(i) regulations in neuronal soma and neurites in compartmentalized microfluidic devices.</a> Integrative Biology. 2, 58-64 (2010).</li>
<li>Clark, P. A., Treisman, D. M., Ebben, J., Kuo, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+signaling+pathways+in+brain+tumor-derived+stem-like+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Developmental signaling pathways in brain tumor-derived stem-like cells.</a> Developmental Dynamics. 236, 3297-3308 (2007).</li>
<li>Chen, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Hierarchy+of+Self-Renewing+Tumor-Initiating+Cell+Types+in+Glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">A Hierarchy of Self-Renewing Tumor-Initiating Cell Types in Glioblastoma.</a> Cancer Cell. 17, 362-375 (2010).</li>
<li>Pollard, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioma+Stem+Cell+Lines+Expanded+in+Adherent+Culture+Have+Tumor-Specific+Phenotypes+and+Are+Suitable+for+Chemical+and+Genetic+Screens%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Glioma Stem Cell Lines Expanded in Adherent Culture Have Tumor-Specific Phenotypes and Are Suitable for Chemical and Genetic Screens.</a> Cell Stem Cell. 4, 568-580 (2009).</li>
<li>Lobo, N. A., Shimono, Y., Qian, D., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The biology of cancer stem cells.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 23, 675-699 (2007).</li>
<li>Singh, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432, 396-401 (2004).</li>
<li>Lee, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+stem+cells+derived+from+glioblastomas+cultured+in+bFGF+and+EGF+more+closely+mirror+the+phenotype+and+genotype+of+primary+tumors+than+do+serum-cultured+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor stem cells derived from glioblastomas cultured in bFGF and EGF more closely mirror the phenotype and genotype of primary tumors than do serum-cultured cell lines.</a> Cancer Cell. 9, 391-403 (2006).</li>
<li>Galli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+tumorigenic%2C+stem-like+neural+precursors+from+human+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of tumorigenic, stem-like neural precursors from human glioblastoma.</a> Cancer Research. 64, 7011-7021 (2004).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De microfluïdische apparaat en beeld-opnametechniek hier gepresenteerde maakt een visuele karakterisering van cellulaire morfologie tijdens de migratie. In vergelijking met bestaande conventionele methoden, de microfluïdische platform biedt voordelen van kosteneffectiviteit, high throughput en design flexibiliteit. De gepresenteerde microscopische visualisatie systeem maakt studie en opnemen van langdurige levende celmigratie. De lens-gemotoriseerde functie maakt het mogelijk om meerdere migratie paden te volgen in een hoge beeld-resolutie zonder verstoring van het monster. Tijdens assemblage van de inrichting, de PDMS stempel niet vast op de glazen dekglaasje voor het gemak van PDL coating (stap 3.4). Is het essentieel om een ​​goede afdichting voor het succes van dit protocol bereiken. Verontreiniging die vanaf het apparaat fabricage, zoals luchtbel in de stempel of stof / vuil op het substraat kan brengen de hechting en resulteren in het weglekken van vocht. Daarom TREATIng van het apparaat in een stofvrije manier is belangrijk om te voorkomen dat apparaat defect. Voorafgaand aan de PDL-coating, de dekglaasjes zijn salpeterzuur behandeld en de oplossing wordt gecentrifugeerd PDL stof / vuil te verwijderen. We vinden Scotch tape, alcohol spoelen, en waterbad zeer behulpzaam bij het verwijderen van stof / puin van de PDMS stempel, als een schone kamer is niet toegankelijk. Na de PDMS stempel maken van contact met het glas dekglaasje, het aanboren van de stempel voorzichtig met een pincet vergemakkelijkt de afdichting. BTSCs kan worden verrijkt door menselijke operatiekamer exemplaren via bol cultuur in stamcel medium, vergelijkbaar met de cultuur van de normale neurale stamcellen 10. BTSCs verrijkt op deze manier tonen stamcelachtige eigenschappen, zoals expressie van markers stamcellen (CD133, nestin), differentiatie meerdere neurale lineages (gliale en neuronale) en tumorinitiatie in een orthotope immunodeficiënte muismodel met zo weinig als 100 cellen 18. Hoewel enige discussie bestaat over zuiveringcatie en het onderhoud van BTSCs 1, 19-21, bol-grown BTSCs beter behouden het fenotype en genotype van de ouders tumor 22-24. De gecompartimenteerde ruimte bootst de fysiologische omgeving voor cel migratie. In ons apparaat, BTSC vertonen een sterke capaciteit van migratie door middel van een op grootte beperkte ruimte door het reguleren van cellulaire morfologie. Onze karakterisering van de cel morfologische veranderingen geeft mode-transformaties in een zestal theaterproducties sequentie die een mogelijke nieuwe gedetailleerde beschrijving van BTSC invasie van aangrenzende hersenen kan modelleren. In vroege stadia de cellen een aanmerkelijk hoeveelheid polariteit en genereren kleefstof effectief uitsteeksels zich verankeren in het microkanaal. Zodra de cel bezetting in de microkanaal is gevestigd, het converteert naar een cruise-modus en onderhoudt deze modus voor de volledige reis door een microkanaal. In dit stadium, BTSC behoud van een hoge beweeglijkheid en consistente richting, maar energie te besparen. Interestingly blijkt dat een microkanaal beperkt tot een cruising cel tegelijk, zodanig dat wanneer een cel door naar dit stadium andere cellen terugtrekken uit het microkanaal. Dit mechanisme zorgt ervoor dat de verwachte doeltreffendheid van de tumor te verspreiden en voorkomt overconsumptie van voedingsstoffen in microkanaal. Na het voltooien van de migratie over de microkanaal, een cel herwint haar neiging tot multidirectionele uitsteeksels en verdere exploratie invasie doelen of nieuwe migratie paden. De compartimentering microfluïdische apparaat biedt een nieuwe in vitro betekent het creëren van een micro-omgeving voor het bestuderen van BTSC infiltratie van de hersenen parenchym. Deze werkwijze kan gemakkelijk worden aangepast aan de studie van kanker stamcellen (CSC) en trekkende cellijnen afgeleid van andere soorten tumoren. Kweken van cellen in de microfluïdische inrichting kan uitgevoerd worden in elke moderne biologie laboratorium dat is uitgerust met een incubator en weefselkweek expertise. Uitgerust met een su-8 meester, PDMSgieten en het apparaat assemblage haalbaar zijn met een aantal fundamentele opleiding in zachte lithografie. Daarnaast kan het platform worden uitgebreid voor andere toepassingen met integratie van andere functionele modules zoals gradiënt mixer, oppervlakte patronen, vloeibare controle en microelectrode.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Dulbecco&#39;s gemodificeerd Eagle&#39;s medium (DMEM), hoge glucose </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 11965 </td><td> Hersentumor stamcellen (BTSC) cultuur benodigdheden </td></tr><tr><td> Ham&#39;s F12 </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 31765 </td><td> Hersentumor stamcellen (BTSC) cultuur benodigdheden </td></tr><tr><td> B27 supplement minus vitamine A </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 12587-010 </td><td> Hersentumor stamcellen (BTSC) cultuur benodigdheden </td></tr><tr><td> Antibiotica-Antimycoticum (PSA) </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 15240 </td><td> Hersentumor stamcellen (BTSC) cultuur benodigdheden </td></tr><tr><td> Epidermale groeifactor (EGF), humane recombinant </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> PHG0313 &lt;/ Td&gt; <td> Hersentumor stamcellen (BTSC) cultuur benodigdheden </td></tr><tr><td> basic Fibroblast Growth Factor (bFGF), humaan recombinant </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> PHG0021 </td><td> Hersentumor stamcellen (BTSC) cultuur benodigdheden </td></tr><tr><td> Heparine natriumzout van varkens intestinale mucosa </td><td> Sigma </td><td> H1027-250KU </td><td> Hersentumor stamcellen (BTSC) cultuur benodigdheden </td></tr><tr><td> Laminine (natuurlijke muis) </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 23017-015 </td><td> Hersentumor stamcellen (BTSC) cultuur benodigdheden </td></tr><tr><td> Accutase </td><td> Millipore </td><td> SCR005 </td><td> Hersentumor stamcellen (BTSC) cultuur benodigdheden </td></tr><tr><td> Stamcel medium </td><td></td><td></td><td><ul><li> 30% Hams F12 </li><li> 70% DMEM </li><li> 1% antibioticum-antimycoticum </li><li> 2% B27 zonder vitamine A </li><li> EGF (20 ng / ml) en bFGF / heparine (20 ng/ ML bFGF, 5 mg / ml heparine) Meng ingrediënten steriel filter voor gebruik </li></ul></td></tr><tr><td> Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF) / heparine </td><td></td><td></td><td><ul><li> Aliquot concentratie 20 pg / ml </li><li> Voor 25 ug: Voeg 1,25 ml heparine 5mg/ml tot 25 pg bFGF. </li><li> Voor 250 ug: Voeg 1 mL 5mg/ml Heparin tot 250 pg bFGF. Overbrengen naar 15 ml conische en voeg 11,5 ml 5 mg / ml heparine conische. </li><li> Store als 50 ul of 250 ul aliquots bij -80 ° C. </li></ul></td></tr><tr><td> Epidermale groeifactor (EGF) </td><td></td><td></td><td><ul><li> Aliquot concentratie 20 pg / ml </li><li> Voor 200 ug: Voeg 1 mL steriel DMEM (Gibco 11965-118) tot 200 ug EGF. Overbrengen naar 15 ml conische en voeg 9 ml DMEM. </li><li> Voor 500 mg: Voeg 1 mL steriel DMEM (Gibco 11965-118) tot 200 ug EGF. Overbrengen naar 50 ml conische en voeg 24 ml DMEM. <li> Bewaar als 50 &amp; mu, L of 250 ul aliquots bij -80 ° C. </li></ul></td></tr><tr><td> Heparine </td><td></td><td></td><td><ul><li> Aliquot concentratie 5 mg / ml </li><li> Weeg 100 mg heparine. </li><li> Voeg 100 mg heparine bij 20 ml (70%) DMEM-(30%) F12-(1%) PSA (14 ml DMEM, F12 6 ml, 200 pi PSA) </li><li> Steriel filter </li><li> Store als 50 ul of 250 ul aliquots bij -80 ° C </li></ul></td></tr><tr><td> su-8 fotolak </td><td> Microchem </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Silicon handgreep wafer </td><td> WRS Materialen </td><td> 3P01-5SSP-INV </td><td></td></tr><tr><td> trichloor (1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctyl) silaan </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 448931 </td><td></td></tr><tr><td> PDMS Sylgard 184 </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> laminine </td><td> BD Bioscience </td><td></td><td> 50 ug /ml in PBS buffer voor de eindconcentratie </td></tr><tr><td> Biostation IM </td><td> Nikon instrumenten </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

evaluatie van kankerstamcel migratie met behulp van compartimentering microfluïdische apparaten en live cell imaging

Evaluation of Cancer Stem Cell Migration Using Compartmentalizing Microfluidic Devices and Live Cell Imaging

In de laatste 40 jaar, de Verenigde Staten meer dan 200 miljard dollar geïnvesteerd in onderzoek naar kanker, wat resulteert in slechts een daling van 5% in sterfte. Een belangrijk obstakel voor het verbeteren van patiëntresultaten is het slecht begrip van de mechanismen die ten grondslag liggen aan cellulaire migratie geassocieerd met agressieve kankercel invasie, metastasering en therapeutische resistentie 1. Glioblastoma multiforme (GBM), de meest voorkomende primaire kwaadaardige volwassen hersentumor 2, is een voorbeeld van dit probleem. Ondanks standaard chirurgie, bestraling en chemotherapie, patiënten mediane overleving is slechts vijftien maanden, als gevolg van agressieve GBM infiltratie in aangrenzende hersenen en snelle kanker terugkeert 2. De interacties van afwijkende cellen trekkende mechanismen en de tumor micro-omgeving waarschijnlijk onderscheiden kankercellen van normale cellen 3. Het verbeteren van therapeutische benaderingen voor GBM vereist een beter begrip van kanker celmigratie mechanismen. Recent onderzoek wijst erop thata kleine subpopulatie van cellen in GBM kan de hersentumor stamcellen (BTSC), verantwoordelijk voor therapeutische weerstand en herhaling. Onderliggende mechanismen van BTSC trekkende capaciteit nu pas een begin worden gekenmerkt 1,4. Door een beperking in visueel onderzoek en geometrische manipulatie conventionele migratie assays 5 beperkt tot kwantificeren totale celpopulaties. In tegenstelling, microfluïdische apparaten toestaan ​​single cell analyse vanwege compatibiliteit met moderne microscopie en controle over de micro-omgeving 6-9. We presenteren een methode voor gedetailleerde karakterisering van BTSC migratie met behulp van compartimentering microfluïdische apparaten. Deze PDMS-en-klare apparaten wierp de weefselkweek omgeving in drie verbonden compartimenten: zaaien kamer, ontvangst kamer en het overbruggen van microkanalen. We toegesneden het apparaat zodanig dat beide kamers voldoende media houden om levensvatbare BTSC ondersteuning voor 4-5 days zonder media-uitwisseling. Zeer mobiele BTSCs eerste instantie in de seeding kamer worden geïsoleerd na de migratie wel overbruggen microkanalen op de parallelle opvangkamer. Deze migratie simuleert kanker cellen verspreid door de interstitiële ruimten van de hersenen. De fase live beelden van celmorfologie tijdens de migratie worden opgenomen over meerdere dagen. Over grote afstanden trekkende BTSC kan dus geïsoleerd, recultured, en geanalyseerd verder. Compartimentering microfluidics kan een veelzijdig platform om het trekgedrag van BTSCs en andere kanker stamcellen te bestuderen. Door het combineren gradiënt generatoren, vloeistofverwerking, micro-elektroden en andere microfluïdische modules kunnen deze inrichtingen ook worden gebruikt voor het screenen van geneesmiddelen en diagnose van de ziekte 6. Isolatie van een agressieve subpopulatie van migrerende cellen van studies van de onderliggende moleculaire mechanismen.

Een compartimentering microfluïdische apparaat voor het onderzoeken van kanker stamcellen migratie wordt beschreven. Deze roman platform creëert een levensvatbare cellulaire micro-omgeving en maakt microscopische visualisatie van levende cellen voortbewegen. Zeer beweeglijke kankercellen worden geïsoleerd om moleculaire mechanismen van agressieve infiltratie, wat kan leiden tot een meer doeltreffende toekomstige therapieën te bestuderen.

Evaluatie van kankerstamcel Migratie Met behulp van compartimentering microfluïdische apparaten en live cell imaging

In de afgelopen 40 jaar heeft de Verenigde Staten meer dan 200 miljard dollar geïnvesteerd in kankeronderzoek, wat resulteerde in een afname van het sterftecijfer van slechts 5%. Een belangrijke ...

Het algemene doel van deze procedure is om de migratie van kankercellen door een compartimenterend microfluïdisch apparaat visueel te inspecteren en te karakteriseren. Dit wordt bereikt door eerst reeds bestaande neurosferen van hersentumorstamcellen, gekweekt in serumvrij medium, te dissociëren. De tweede stap is het vervaardigen van een dubbellaagse SU-8 master en het gebruik van zachte lithografie om een PDMS-stempel te maken met een compartimenterend ontwerp.Assembleer vervolgens het microfluïdische apparaat en laad het met hersentumorstamcellen. Ten slotte wordt langdurige time-lapse imaging van de migratie van hersentumorstamcellen uitgevoerd met behulp van een all-in-one microscopiesysteem. Uiteindelijk laten de resultaten zien dat hersentumorstamcellen een terugkerende sequentie van morfologische stadia vertonen tijdens hun migratie door een ultra-beperkte ruimte.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande systemen zoals de Transwell Boyton Chamber, is dat micro-apparaten visuele inspectie van het migratieproces, gecontroleerde plaatsing van cellen en de nauwkeurige toediening van factoren mogelijk maken. Daarom beschikt microfluidische technologie over kenmerken voor betrouwbare, efficiënte en kosteneffectieve selectie en navigatie van individuele cellen. De implicaties van deze techniek strekken zich uit tot de therapie van kankermetastasen en recidieven, aangezien analyse van individuele, sterk migrerende cellen potentiële toekomstige chemotherapeutische doelwitten kan identificeren.Hoewel deze methode inzicht kan verschaffen in het migratiegedrag van kankersystemen, kan ze ook worden toegepast op andere systemen, zoals embryonale ontwikkeling, immuunresponsen, wondgenezing en orgaanregeneratie. Begin met de celsuspensie van uit BTSC afgeleide neurosferen. Verzamel de cellen in een conische buis van 15 ml en centrifugeer deze gedurende vijf minuten bij 900 RPM, maar niet sneller.Pipetteer het supernatant af. Laat de neurosfere vervolgens loskomen door deze vijf tot 10 minuten te incuberen in 0,5 milliliters voorverwarmd Accutane bij 37 °C. Ontricht de cellen na de incubatie mechanisch met 10 tot 20 voorzichtige bewegingen van een P 100 pipette.Voeg vervolgens 1,5 milliliters stamcelmedium toe om de Accutane te neutraliseren, centrifugeer de celsuspensie bij 1300 RPM gedurende vijf minuten en resuspendeer de cellen in één milliliter stamcelmedium. Controleer de celdichtheid met een hemocytometer en stel de dichtheid bij naar 20 000 cellen per microliter. Om te beginnen met de vervaardiging van de SU-8 master, worden twee fotomaskers voorbereid met Adobe Illustrator en laserprint-transparantiefolie met behulp van een Image Setter.Het fotomasker van de eerste laag bestaat uit twee referentiemarkeringen en een reeks microkanalen, en het fotomasker van de tweede laag bevat de zitting- en ontvangstkamers. Reinig beide maskerlagen met isopropanol en laat ze aan de lucht drogen. Spin-coat vervolgens een handle-wafer met een SU-8 fotorezist met een dikte van drie micron, gevolgd door een soft-bake.Belicht vervolgens de fotorezist met het fotomasker voor de eerste laag in nauw contact met uv-licht en laat deze uitharden. Voer daarna een post-bake uit en ontwikkel de uitgeharde wafer. Bedek de gebieden met de fiduciale markeringen van de handle wafer met plakband.Breng vervolgens met spin-coating een fotoresistlaag van 250 micron dik aan op de wafer. Verwijder daarna de tape om de markeringen voor de uitlijning zichtbaar te maken. Breng de tweede laag fotoresist aan en lijn de referentiemarkeringen uit.Belicht vervolgens de tweede laag van het fotomasker met UV-licht en hard deze, gevolgd door nabakken en ontwikkelen. Behandel nu de SU-8 master via dampafzetting om de kleverigheid van het oppervlak te verminderen. Plaats de wafers in een desiccator met enkele druppels trichlooretheenoplossing onder vacuüm gedurende ten minste één uur.De mal is nu klaar voor gebruik om PDMS met de mal te gieten. Begin met het grondig mengen van de prepolymeerbasis met de harder in een verhouding van 10 op 1. Plaats het mengsel vervolgens in een vacuümdroger voor vacuümontgassing totdat er geen luchtbellen meer zichtbaar zijn.Giet het mengsel op het masker en ontgas het opnieuw. Als er nieuwe luchtbellen zijn ontstaan, laat de mal dan twee uur uitharden op een vlakke warmteplaat bij 90 °C. Nadat het is afgekoeld tot kamertemperatuur, wordt de PDMS-stempel voorzichtig losgemaakt.De kweekkanalen zijn hiermee in het PDMS gegraveerd en klaar voor de assemblage van het microfluïdische apparaat. De master is herbruikbaar voor het gieten totdat deze barst of versleten is. Wanneer de master plakkerig wordt, kan de anti-aanbaklaag opnieuw worden aangebracht.Begin met het maken van in- en uitlaten in het microfluïdische apparaat via de PDMS-stempel. Reinig de PDMS-stempel door deze 30 minuten te weken in 70% ethanol en vervolgens 10 minuten te spoelen met gedeïoniseerd water met behulp van een biopsiepons. Steriliseer de PDMS-stempel en voltooi de cross-link reacties via autoclaveren.Plaats nu de PDMS-stempel op een glazen dekglas dat is gecoat met poly-L-lysine. Het apparaat wordt vervolgens gecoat met laminaat door de kamers via de reservoiringangen te vullen met laminaatoplossing, waarna het gedurende de nacht wordt geïncubeerd bij 37 °C. Aspireer de volgende dag het laminaat uit het apparaat.Was vervolgens het apparaat door het twee keer te spoelen met stamcelmedium. Laad nu 11 µL gedissocieerde cellen in een van de zaaireservoirs. Gebruik indien nodig vacuümaspiratie om de cellen de kamer in te dwingen. Laad vervolgens nog eens zeven µL cellen in het aangrenzende zaaireservoir.Na vijf minuten zullen de zittings- en ontvangstreservoirs gevuld zijn met medium. Plaats nu een steriele PDMS-plaat met een dikte van 0,5 tot 1 millimeter op het apparaat. De natuurlijke oppervlakteadhesie van PDMS aan zichzelf zal het apparaat afsluiten; zodra het is afgedicht, is het klaar voor transport, incubatie en microscopische beeldvorming.Pre-equilibreer de biot, IM door deze 45 minuten te laten draaien. Voeg meerdere schaaltjes water toe aan de monsterkamer om de juiste luchtvochtigheid te verkrijgen en zo de temperatuur, vochtigheid en luchttoevoer te stabiliseren. Plaats het voorbereide apparaat in de monsterkamer van de microscoop.Centreer het apparaat met behulp van micro-pincetten. Stel nu de focuspositiepunten en tijdspunten in met de Biot-software en start indien nodig de time-lapse opnames. Vervang na vijf dagen in cultuur het cultuurmedium.De BTC's die in het apparaat waren gezaaid, werden continu vastgelegd met fasencontrastbeelden. Gedurende vijf dagen in de behuizingskamer bleven spoelvormige cellen in het pre-migratie stadium. Terwijl ze de ingang van het microkanaal naderden, zetten enkele cellen uit en vormden zij adhesieve uitlopers.Slechts één cel kon de ingang bezetten en de migratierichting verkennen. Zodra de cel de migratierichting had bepaald, bewoog deze zich met een constante hoge snelheid door het volledige microkanaal. Aan het einde van het microkanaal verkende de cel de open ruimte van de ontvangstkamer voordat deze daar uiteindelijk binnentrad.Door de cellen te observeren met twee seconden tussen de beeldopnames, leek de migratiekracht hoofdzakelijk te worden gegenereerd door blabbing-activiteit, vergelijkbaar met die van OID-cellen. Bij het uitvoeren van de procedure is het belangrijk om te onthouden dat het ontwerp van het apparaat zo flexibel is dat de afmetingen van het microkanaal kunnen worden aangepast om een gewenste mate van celmigratie te bereiken. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u een uniek compartimenterend microfluidisch apparaat kunt maken dat geschikt is voor het kweken van de door u gewenste cellen, om vervolgens langdurige time-lapse-beeldvorming uit te voeren om de migratiekenmerken van deze cellen na deze procedure kwalitatief en kwantitatief te definiëren.Andere methoden, zoals next generation sequencing of DNA-microarrays, kunnen worden toegepast om aanvullende vragen te beantwoorden, zoals in hoeverre de sterk migrerende kankercellen genetisch verschillend zijn.

evaluation-cancer-stem-cell-migration-using-compartmentalizing

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

We tonen aan dat de overexpressie van de epidermale groeifactor (EGFR) de beweeglijkheid van neurale stamcellen (NSCs) met behulp van een roman agarose gel op basis microfluïdische toestel verbetert. Deze technologie kan gemakkelijk aan te passen aan andere zoogdiercelsystemen waar mobiele bronnen zijn schaars, zoals menselijke neurale stamcellen, en de doorlooptijd is van cruciaal belang.

Het beoordelen van neurale stamcellen Motiliteit Met behulp van een agarosegel-based Microfluïdische Device

In this video, we perform brain tumor stem cell migration assay to analyze the effect of the drug of interest on the migration of live brain tumor stem cells using chemotaxis migration plate. Live-cell imaging facilitates the visualization and quantification of cell migration during the assay.

Brain Tumor Stem Cell (BTSC) Migration Assay for Drug Treatment Studies: An In Vitro Live-cell Imaging Technique to Analyze the Effect of Drug Treatment on Migration of BTSCs

Een kwantitatief spontane migratie van cellen te bestuderen in een eendimensionale beperkte micro beschreven. Deze methode maakt gebruik van microfabricated kanalen en kan worden gebruikt om de migratie van grote aantallen cellen te bestuderen onder verschillende omstandigheden in enkele experimenten.

Studie van cel-migratie in Microfabricated Kanalen

Dit protocol Gegevens een aanpasbare werkwijze celmigratie als reactie op chemoattractanten die ook kunnen worden gebruikt om de diffusiesnelheid van een geneesmiddel te bepalen uit een polymeermatrix meten.

Een Aanpasbare Kamer voor het meten van de Cel Migratie

Deze studie meldt twee verschillende methoden voor de analyse van de invasie van de cel en migratie: de bepaling van Boyden kamer en de in vitro video Microscoop gebaseerde wondgenezing bepaling. De protocollen voor deze twee experimenten worden beschreven, en hun voor- en nadelen worden vergeleken.

Evaluatie van de invasie van de cel en het migratieproces: een vergelijking van de Video Microscoop gebaseerde kras wond Assay en de bepaling van Boyden kamer

Hier beschrijven we live-cel beeldvormingstechnieken voor het kwantitatief meten van de migratie en invasie van de cellen van de stam van tumor van de hersenen van glioblastoma na verloop van tijd en onder meerdere behandeling voorwaarden.

Live-cel Imaging tests studie Glioblastoma Brain Tumor stamcel migratie en invasie

Een HMCA gebaseerde imaging plaat wordt gepresenteerd voor invasie assay prestaties. Deze plaat vergemakkelijkt de vorming van driedimensionale (3D) tumor spheroïden en het meten van kanker cel invasie in de extracellulaire matrix (ECM). De invasie assay kwantificering wordt bereikt door semi-automatische analyse.

Analyse van kanker cel invasie en anti-metastatische Drug Screening met behulp van Hydrogel Micro-kamer Array (HMCA)-op basis van platen

Het huidige protocol beschrijft een geïntegreerde methode onderzoek naar kanker cel migratie en invasie op één platform in real-time, het verstrekken van een gemakkelijk reproduceerbaar zijn en tijd-efficiënte optie te bestuderen van de cel mobiliteit en morfologie.

Een eenvoudige migratie/invasie Workflow met behulp van een geautomatiseerde Live-cel Imager

Hier presenteren we een protocol voor het voorbereiden en kweken van een bloed-hersenbarrière gemetastaseerde tumor micro-omgeving en vervolgens kwantificeren van de toestand met behulp van confocale beeldvorming en kunstmatige intelligentie (machine learning).

Kwantificeren van de Brain Gemetastatische Tumor Micro-Environment met behulp van een Organ-On-A Chip 3D Model, Machine Learning en Confocal Tomography

In het tijdperk van immunotherapie en eencellige genomische profilering vereist kankerbiologie nieuwe in vitro en computationele hulpmiddelen voor het onderzoeken van de tumor-immuuninterface in een juiste spatiotemporale context. We beschrijven protocollen om tumor-immuun microfluïdische co-culturen te exploiteren in 2D- en 3D-instellingen, compatibel met dynamische, multiparametrische monitoring van cellulaire functies.

Microfluïdische co-cultuurmodellen voor het ontleden van de immuunrespons in in vitro tumormicro-omgevingen

Leer hoe je kankerstamcelmigratie bestudeert met een compartimenterend microfluïdisch apparaat en live cell imaging. Deze methode maakt real-time visualisatie van celbeweging mogelijk voor inzicht in metastase.

Evaluatie van kankerstamcel Migratie Met behulp van compartimentering microfluïdische apparaten en live cell imaging

Meer video's verkennen