Name: Een algemene methode voor het evalueren van Incubatie van sucrose Craving in ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-04T12:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 44 s
Description: Leer een methode om sucrosecraving bij ratten te evalueren na gedwongen abstinentie. Dit gedragsmodel helpt onderzoekers verslavingsmechanismen en terugvalrisico's bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Productie van dit manuscript en video werd ondersteund door National Institute on Drug Abuse / National Institutes of Health subsidie ​​R15 DA016285-02, de Western Washington University Biomedical Research Activiteiten in Neuroscience Initiative, en Western Washington University.

1. Onderwerpen dier <ol><li> Man Long-Evans ratten zijn 3 maanden oud bij het begin van een studie. Ratten zijn Simonsen-afgeleide (Gilroy, California, USA), gefokt in de Western Washington University terrarium en zijn individueel gehuisvest op een 12-h achteruit dag / nacht cyclus (licht uit bij 0700) met Purina Mills Inc Mazuri Rodent Pellets (Gray Summit , MO, USA) en water ad libitum beschikbaar. </li><li> Alle trainingen en testen vindt plaats tussen 0900-1300 met cohorten van ratten altijd getraind en getest op hetzelfde moment dagelijks. </li><li> Ratten worden gewogen elke maandag, woensdag en vrijdag voor de duur van de studie. </li><li> Onmiddellijk voorafgaand aan de training fase worden ratten verstoken van water voor ongeveer 20 uur tot sucrose zelfbestuur op de eerste dag van de opleiding aan te moedigen. </li></ol> 2. Behavioral Procedures Alle operante gedrag procedures gebruik maken van standaard operante conditionering kamers (Med Associates Inc, St. Albans, VT, USA) met een infuuspomp (Razel Scientific Instruments, St. Albans, VT, USA) gelegen op de top van elke operante conditionering kamer. Operante conditionering kamers zijn ingesloten in het geluid-verzachtende kasten met ventilatoren (Western Washington University, USA). Alle experimentele condities en het verzamelen van gegevens worden gecontroleerd door Med PC IV-software (Med Associates Inc, St. Albans, VT, USA). Operante conditionering kamers (30 x 20 x 24 cm) bevatten twee hendels (een stationair en een intrekbaar), een toongenerator, een witte stimulus licht boven de intrekbare hendel, en een rode huis licht op de tegenoverliggende muur. De infusie pomp levert sucrose in een beloning bakje aan de rechterkant van de actieve hefboom. Hefbomen zijn 10 cm van de roostervloer. Vier infrarood photobeams kriskras elke kamer. De voorste balken zijn elk 10,5 cm van de zijwanden en de zijkant balken elk 6 cm van de zijwanden. Elke balk is 4,5 cm boven de roestvast stalen staaf vloer. De balken eenopnieuw ingesteld op het aantal volledige pauzes tellen. Het totaal aantal van de balk pauzes worden geregistreerd in Training en verlangen testen. Met uitzondering van water beperking voorafgaand aan de eerste training, zijn ratten voorzien van voedsel en water ad libitum, zowel in huis kooien en in de operante conditionering kamers. Kamers zijn in een speciale testruimte dat, zoals met de vivarium, is op een omgekeerde lichtcyclus. Ratten worden vervoerd in huis kooien tussen de kamers op een wagen die bedekt is met licht blokkerende stof. Aan het einde van elke sessie, zijn ratten terug naar huis kooien. Er zijn drie fasen aan de typisch experiment: Training, Gedwongen Onthouding, en testen. Testen is de sessie waarin verlangen wordt beoordeeld. Wij beoordelen verlangen in twee algemene testprocedures, afhankelijk van de studie. Deze twee procedures zijn beschreven in de paragrafen 2.3.1 en 2.3.2. <ol><li> Opleiding <ol><li> In de typisch experiment, ratten besteden 2 uur / dag voor10 opeenvolgende dagen in de operante conditionering kamers waar ze zijn toegestaan ​​om de intrekbare (actief) hendel te dringen op een 0,2 ml levering van 10% sucrose oplossing in het bakje aan de rechterkant van de hendel. </li><li> Deze reactie activeert ook een verbinding stimulans bestaande uit een toon (2 kHz, 15 dB boven het omgevingsgeluid) en het witte licht. De verbinding stimulans duurt 5 s en wordt gevolgd door een 40-s time-out, waarbij drukt op de actieve hefboom zijn opgenomen, maar hebben geen gevolg geprogrammeerd. </li><li> Een antwoord op de inactieve (stilstaande) hendel heeft geen gevolgen geprogrammeerd, maar persen worden opgenomen. De nummers van de balk pauzes worden opgenomen tijdens trainen en testen. Alle reactie en bewegingsapparaat maatregelen worden opgenomen als de tijd cursussen (2 minuten bakken), maar worden gewoonlijk weergegeven als totalen per sessie. </li></ol></li><li> Gedwongen onthouding. Ratten blijven in huis kooien voor de duur van gedwongen onthouding. De typische gedwongen onthouding periodes die we gebruiken zijn om ratten te hebben getest ee dag onmiddellijk na de laatste dag van de opleiding (Dag 1 van gedwongen onthouding) of 30 dagen na de laatste dag van de opleiding (Dag 30 van gedwongen onthouding). </li><li> Testen <ol><li> Extinction zonder cues. In deze testen procedure, ratten worden eerst toegestaan ​​om de actieve hendel in identieke omstandigheden te Training druk met de uitzondering dat de reactie geen gevolgen en de sessie duur is is 1 h. Ratten ervaring ten minste zes van deze uitsterven sessies op de testdag. Elke uitsterven sessie wordt gescheiden door een periode van 5 minuten, waar de actieve hefboom is teruggetrokken en het huis licht wordt uitgeschakeld. "Extinction" is geïndiceerd indien actief hefboom inspelen is teruggebracht tot minder dan 20 persen / h. Sommige ratten vereisen een zevende zitting. De volgende sessie (na de andere 5 minuten vertraging) is de testsessie waar de ratten en druk vervolgens op de toon + licht cue die oorspronkelijk was gekoppeld aan elke levering van sucrose tijdens trainen. </li><li> Extinction met cues. In dit afkortenD voor tests procedure, ratten mogen de actieve hefboom pers in omstandigheden identiek aan opleiding, behalve dat sucrose is niet geleverd. </li></ol></li><li> Inactief hendel te drukken wordt gebruikt als een maatstaf voor de hefboom discriminatie. Het is ook, samen met Fotocellen breaks, gebruikt als een maat voor niet-specifieke motorische activering. Motorische vs motiverende veranderingen bemoeilijken de interpretatie van verlangen gedrag. De inactieve hendel reageert en Fotocellen breken gegevens zijn nuttig bij het ​​verduidelijken motor vs motivatie bijdragen aan verlangen, evenals vergelijking groepen in farmacologische studies waarbij ratten te reageren op een hoog tarief voor sacharose of een ander levensmiddel worden uitgedaagd met een potentiële verlangen die verbinding (bijv. 7 , 8). </li></ol> 3. Vertegenwoordiger van manipulaties aan Sucrose Craving Affect na Variabele Perioden van gedwongen onthouding De algemene methode hier beschreven biedt een manier om de gedrags-en neurobiologische Determina probegen van verlangen na een variabele periode van gedwongen onthouding. Hier beschreven zijn methoden met betrekking tot representatieve resultaten die in hoofdstuk 4. <ol><li> Verzadiging. Sommige ratten flessen van 10% sucrose in hun eigen kooien ontvangen voor de 17 uur onmiddellijk voorafgaand aan het testen 8. Ratten in deze studie werden getest met behulp van het uitsterven, zonder aanwijzingen procedure. </li><li> Milieu-verrijking. Tijdens de gedwongen onthouding-periode, een aantal ratten bleef in individuele huisvesting (Controls), terwijl andere werden verplaatst naar een grote (36 "width x 20" diepte x 40 "height; Quality Products Cage, Portland, OR, USA) kooi met drie cohorten (Verrijkt). De Enriched dieren had verschillende speeltjes in hun omgeving met inbegrip van PVC buizen en kregen ook nieuwe speeltjes elke M, W, F 10. ratten in deze studie werden getest met behulp van het uitsterven, zonder aanwijzingen procedure. </li><li> Farmacologische uitdaging. Testen op de dag werden de ratten voorbehandeld met een dosis van de dopamine D1-antagonist SCH 23390. Ratten in deze studie were getest met behulp van het uitsterven met de signalen procedure. </li></ol> 4. Representatieve resultaten: <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1 vertegenwoordiger Training en testen gegevens voor een incubatie van sucrose verlangen experiment. Datapunten geven gemiddelden ± SEM. Groepsgrootte voor de figuur 1a is 77 ratten en voor de figuur 1b groepsgrootte varieerde 11 tot 12 per groep. * Significant verschil van dag 1 groep, p &lt;0,05. Dit cijfer is een bewerking van gegevens in acht met toestemming van Springer. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2 Effect van sucrose verzadiging op de sucrose trek na 1 of 30 dagen van gedwongen onthouding. Groep 8-9 maten zijn per groep. * Significant verschil van dag 1 groep, † significant verschil met controle groep, p &lt;0,05. Dit cijfer is aangepastvan 9 met toestemming van Elsevier. <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 3"> Figuur 3 Een maand milieuverrijking verminderde sacharose verlangen. Groepsgrootte zijn elk acht ratten. * Significant verschil van dag 1, † significant verschil met controle groep, p &lt;0,05. Dit cijfer is aangepast van 10 met toestemming van Wolters Kluwer Health. <img alt="Figuur 4" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 4"> Figuur 4 Systemische SCH 23.390 afgenomen sucrose verlangen effectiever na een dag van gedwongen onthouding. Groepsgrootte zijn 8-12 per groep. * Significant verschil van dag 1 groep, † significant verschil tussen 0 en de dosis-groep, p &lt;0,05. Dit cijfer is aangepast van 8 met toestemming van Springer. <ol><li> Figuur 1 geeft representatieve Opleiding en testen van gegevens voor ratten zichzelf toedienen van sucrose (zie figuurEen TOP) en daarna reageren op Extinction met de sucrose-gepaarde cue beschikbaar (figuur 1 onderaan). Zoals afgebeeld, ratten selectief reageren op de actieve hefboom tijdens trainen en tijdens het testen. Interessant, inactieve reageert en locomotorische activiteit vertonen enige incubatie, hoewel het effect is het meest robuust op actieve hendel reageert. </li><li> Figuur 2 toont het effect van verzadiging met sucrose op sucrose trek na 1 of 30 dagen van gedwongen onthouding. Verzadiging verminderd Extinction, zonder aanwijzingen te reageren na een periode van gedwongen onthouding, maar alleen minder reageert op de sucrose cue alleen in ratten die slechts een dag van gedwongen onthouding had. </li><li> Zoals weergegeven in figuur 3, milieuverrijking verminderde geïncubeerd Extinction zonder cue te reageren en te reageren voor de sucrose cue alleen gedrag tot een niveau gevonden na slechts een dag van gedwongen onthouding. </li><li> Figuur 4 toont een onthouding-afhankelijk effect van SCH 23390 op Extinction met signalen reageert. SCH 23390 was het meest effectieve op het verminderen van sucrose verlangen na 1, vs 30, dagen van gedwongen onthouding. </li></ol>

<ol><li>Sobik, L., Hutchison, K., Craighead, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cue-elicited+craving+for+food%3A+a+fresh+approach+to+the+study+of+binge+eating%5BTitle%5D)+AND+%22Appetite%22%5BJournal%5D)">Cue-elicited craving for food: a fresh approach to the study of binge eating.</a> Appetite. 44, 253-2561 (2005).</li>
<li>Geiger, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficits+of+mesolimbic+dopamine+neurotransmission+in+rat+dietary+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Deficits of mesolimbic dopamine neurotransmission in rat dietary obesity.</a> Neuroscience. 159, 1193-1199 (2009).</li>
<li>Grimm, J. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGrimm%2C+JW+%22Craving+In+Animal+Models+of+Drug+Addiction%22">Craving In Animal Models of Drug Addiction</a>. Olmstead, C. , Humana Press. New York. 311-336 (2011).</li>
<li>Grimm, J. W., Kruzich, P. J., See, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contingent+access+to+stimuli+associated+with+cocaine+self-administration+is+required+for+reinstatement+of+drug-seeking+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Psychobiology%22%5BJournal%5D)">Contingent access to stimuli associated with cocaine self-administration is required for reinstatement of drug-seeking behavior.</a> Psychobiology. 28, 383-386 (2000).</li>
<li>Bossert, J. M., Ghitza, U. E., Lu, L., Epstein, D. H., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurobiology+of+relapse+to+heroin+and+cocaine+seeking%3A+an+update+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Neurobiology of relapse to heroin and cocaine seeking: an update and clinical implications.</a> Eur. J. Pharmacol. 526, 36-50 (2005).</li>
<li>Bossert, J. M., Poles, G. C., Wihbey, K. A., Koya, E., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+blockade+of+dopamine+D1-family+receptors+in+nucleus+accumbens+core+or+shell+on+reinstatement+of+heroin+seeking+induced+by+contextual+and+discrete+cues%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Differential effects of blockade of dopamine D1-family receptors in nucleus accumbens core or shell on reinstatement of heroin seeking induced by contextual and discrete cues.</a> J. Neurosci. 27, 12655-12663 (2007).</li>
<li>Grimm, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+systemic+or+nucleus+accumbens-directed+dopamine+D1+receptor+antagonism+on+sucrose+seeking+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Effects of systemic or nucleus accumbens-directed dopamine D1 receptor antagonism on sucrose seeking in rats.</a> Psychopharmacology (Berl). , (2011).</li>
<li>Grimm, J. W., Fyall, A. M., Osincup, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incubation+of+sucrose+craving%3A+effects+of+reduced+training+and+sucrose+pre-loading%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Incubation of sucrose craving: effects of reduced training and sucrose pre-loading.</a> Physiol Behav. 84, 73-79 (2005).</li>
<li>Grimm, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+enrichment+attenuates+cue-induced+reinstatement+of+sucrose+seeking+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Environmental enrichment attenuates cue-induced reinstatement of sucrose seeking in rats.</a> Behav Pharmacol. 19, 777-785 (2008).</li>
<li>Shaham, Y., Shalev, U., Lu, L., De Wit, H., Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+reinstatement+model+of+drug+relapse%3A+history%2C+methodology+and+major+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">The reinstatement model of drug relapse: history, methodology and major findings.</a> Psychopharmacology (Berl). 168, 3-20 (2003).</li>
<li>Childress, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limbic+activation+during+cue-induced+cocaine+craving%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Limbic activation during cue-induced cocaine craving.</a> Am J Psychiatry. 156, 11-18 (1999).</li>
<li>Gearhardt, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+Correlates+of+Food+Addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Gen.+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Neural Correlates of Food Addiction.</a> Arch. Gen. Psychiatry. , (2011).</li>
<li>Markou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+drug+craving%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Animal models of drug craving.</a> Psychopharmacology (Berl). 112, 163-182 (1993).</li>
<li>Phillips, R. G., LeDoux, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+contribution+of+amygdala+and+hippocampus+to+cued+and+contextual+fear+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Differential contribution of amygdala and hippocampus to cued and contextual fear conditioning.</a> Behav. Neurosci. 106, 274-285 (1992).</li>
<li>Holland, P. C., Bouton, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampus+and+context+in+classical+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Hippocampus and context in classical conditioning.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 9, 195-202 (1999).</li>
<li>Epstein, D. H., Preston, K. L., Stewart, J., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+a+model+of+drug+relapse%3A+an+assessment+of+the+validity+of+the+reinstatement+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Toward a model of drug relapse: an assessment of the validity of the reinstatement procedure.</a> Psychopharmacology (Berl). 189, 1-16 (2006).</li>
<li>Kupferschmidt, D. A., Brown, Z. J., Erb, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Procedure+for+Studying+the+Footshock-Induced+Reinstatement+of+Cocaine+Seeking+in+Laboratory+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats.</a> J. Vis. Exp. (47), (2011).</li>
</ol>

Alle procedures volgden de richtlijnen die zijn uiteengezet in de &quot;Principles of Laboratory Animal Care&quot; (NIH publicatie nr. 86-23) en werden goedgekeurd door de Western Washington University Institutional Animal Care en gebruik Comite.

De procedures beschrijven we hier zouden kunnen worden geïdentificeerd als herstel procedures, hoewel dit technisch onjuist als hefboom te drukken voor het actiepunt is niet voorafgaand aan de hunkering testsessie gedoofd. In een typisch herstel procedure, reageert met een beloning gekoppeld signalen uitgedoofd en dan &quot;weer&quot; met de toediening van een niet-contingent presentatie van de beloning (priming-geïnduceerde herstel) of een stressor, zoals footshock (stress-geïnduceerde herstel) 11. Het uitst...

<table border="1"><tbody><tr><td> Item </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> Verrijking Cage </td><td> Kwaliteit van Cage Company </td><td> FH-36 ½ T-N </td></tr><tr><td> Operante kamer </td><td> Med Associates </td><td> MED-008-CT-B3 </td></tr><tr><td> SCH 23390 </td><td> Sigma </td><td> D054 </td></tr></tbody></table>

een algemene methode voor het evalueren van incubatie van sucrose craving in ratten

A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

Voor iemand op een voedsel-dieet, voedsel verlangen in reactie op voedsel-gepaarde signalen kan dienen als een belangrijk gedrags-overgangspunt tussen onthouding en terugval om voedsel te nemen van een. Voedsel hunkeren geconceptualiseerd op deze manier is verwant aan drugs verlangen als reactie op drugs-gepaarde cues. Een rijke literatuur is ontwikkeld rond het begrijpen van de gedrags-en neurobiologische determinanten van drugs verlangen, wij en anderen zijn onlangs gericht op het vertalen van technieken van basis-verslaving onderzoek beter te begrijpen verslaving-achtige gedragingen in verband met voedsel 2-4. Zoals in eerdere studies van drugs verlangen, onderzoeken we sucrose verlangen gedrag door gebruik te maken van een rat model van terugval. In dit model, ratten zelf toedienen beide geneesmiddelen of voedsel in de sessies over meerdere dagen. In een sessie, hefboom inspelen levert de beloning samen met een toon + licht stimulus. Craving gedrag wordt dan gedefinieerd als operationeel reageren op eenvolgende zitting waar de beloning is niet beschikbaar. Ratten betrouwbaar zal reageren op de toon + licht stimulus, waarschijnlijk als gevolg van zijn verworven onder de voorwaarde versterkende eigenschappen 5. Dit gedrag wordt soms aangeduid als sacharose zoeken naar of het cue reactiviteit. In de huidige discussie zullen we gebruik maken van de term &quot;sucrose verlangen&quot; aan beide van deze constructen ingepast. In de afgelopen tien jaar hebben we ons gericht op hoe de lengte van de tijd na te belonen zelf toedienen invloeden beloning verlangen. Interessant is dat ratten te verhogen reageert voor de beloning-gepaarde cue in de loop van enkele weken van een periode van gedwongen-onthouding. Deze &quot;incubatie van verlangen&quot; is waargenomen bij ratten die zijn eigen beheer, hetzij voedsel of drugs 4,6. Deze keer-afhankelijke stijging van de trek hebben we aangegeven in het diermodel kan hebben een groot potentieel belang voor de menselijke drug en eetverslaving gedrag. Hier presenteren we een protocol voor de beoordeling van incubatie van sucrose verlangen bij ratten. Varianten van de procedure zal worden aangegeven waar verlangen wordt beoordeeld als reageert voor een discrete sucrose-gepaarde cue na het uitsterven van de hendel te drukken binnen de sucrose zelftoediening context (Extinction zonder signalen) of als reactie voor sucrose-gepaarde cues in een algemene context uitsterven (Extinction met cues).

Reageert voor voedsel of drug-gepaarde signalen toeneemt in de loop van een periode van onthouding en dit kan betrekking hebben op een verhoogde gevoeligheid voor terugval gedrag. Hier hebben we een detail procedure voor het beoordelen van deze &quot;incubatie van craving&quot; bij ratten die in eigen beheer sucrose hebben.

Een algemene methode voor het evalueren van Incubatie van sucrose Craving in ratten

Voor iemand met een beperkt voedingsdieet kan voedselverlangen als reactie op met voedsel geassocieerde signalen dienen als een cruciaal gedragsmatig overgangspunt tussen onthouding en ...

Het algemene doel van dit experiment is om de hunkering naar sucrose bij ratten te beoordelen na een korte of langdurige periode van geforceerde onthouding van sucrose-zelftoediening. Dit wordt bereikt door ratten eerst sucrose toe te dienen in 10 dagelijkse zelftoedieningssessies. Vervolgens worden de ratten in een periode van geforceerde onthouding van sucrose-zelftoediening geplaatst, simpelweg door ze gedurende één of 30 dagen in hun thuiskooien te houden.De laatste stap van de procedure is om de ratten terug te brengen naar de omgeving voor zelftoediening en hen de mogelijkheid te geven te reageren op signalen die voorheen expliciet geassocieerd waren met de zelftoediening van sucrose, maar niet op sucrose zelf. Uiteindelijk laten de resultaten zien hoe de mate van respons op signalen die gekoppeld zijn aan sucrose varieert afhankelijk van de duur van de geforceerde onthouding. Zoals wij eerder hebben gerapporteerd, neemt de hunkering naar sucrose toe of vindt er incubatie plaats gedurende een maand van geforceerde onthouding van sucrose.Zelfadministratie-experimenten kunnen met deze procedure worden uitgevoerd om de gedragsmatige en neurobiologische substraten van de incubatie van craving te onderzoeken. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden is dat de tijdsduur na de laatste zelfadministratiesessie kan variëren. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen het verslavingsonderzoek, in het bijzonder hoe de duur van een periode van gedwongen onthouding de craving beïnvloedt.De implicaties van het gebruik van deze techniek strekken zich uit tot therapie voor terugvalgedrag. In het bijzonder, aangezien een grote meerderheid van de individuen is teruggevallen na een langere periode van onthouding. Hoewel deze methode inzicht kan bieden in suikerbegeerte.Het kan ook worden toegepast op andere beloningen, zoals drugs van misbruik. In deze studie worden mannelijke long Evans-ratten gebruikt die aan het begin van het onderzoek drie maanden oud zijn. De ratten worden individueel gehuisvest met een omgekeerde dag-nachtcyclus van 12 uur, waarbij korrelvoer en water ad libitum beschikbaar zijn; weeg vóór aanvang van de procedure alle experimentele dieren en controledieren.De dieren moeten elke maandag, woensdag en vrijdag worden gewogen gedurende de looptijd van de studie. Begin tot slot ongeveer 20 uur voordat de studie naar suikerbegeerte start met het onthouden van water. Dit zal de zelfadministratie van sucrose op de eerste trainingsdag stimuleren.Alle training en testen vindt plaats tussen 900 en 1300 uur, waarbij de cohorten dagelijks op hetzelfde tijdstip in de testruimte worden getraind en getest. De operante conditioneringskamers zijn geplaatst in geluidsisolerende kasten met ventilatoren. De in deze studie gebruikte kamers hebben afmetingen van 30 bij 20 bij 24 centimeter en bevatten twee hendels: een stationaire hendel en een intrekbare hendel.Beide hendels zijn gepositioneerd op 10 centimeter van de roosterbodem. Daarnaast bevatten de kamers een toongenerator, een wit stimuluslicht boven de intrekbare hendel en een rood omgevingslicht op de tegenoverliggende wand. Om de locomotorische activiteit te beoordelen, zijn de kamers uitgerust met infraroodfotobalken; de voorste balken bevinden zich op 10,5 centimeter van de zijwanden en de zijbalken bevinden zich elk op zes centimeter van de zijwanden.Elke balk bevindt zich 4,5 centimeters boven de vloer van roestvrijstalen staven. Voeg verse 10%sucrose oplossing toe aan de infusiepomp die zich bovenop elke kamer bevindt. Programmeer de bijbehorende software om de pomp te activeren, zodat er 0,2 milliliters van de 10%sucrose oplossing in het reservoir rechts van de hendel wordt afgegeven.Daarnaast wordt de kamer via het bijbehorende softwareprogramma zo ingesteld dat het indrukken van de intrekbare of actieve hendel ook een samengestelde stimulus activeert, bestaande uit een toon en wit licht. De samengestelde stimulus moet vijf seconden duren, gevolgd door een timeout van 42 seconden, gedurende welke drukken op de actieve hendel worden geregistreerd maar geen geprogrammeerd gevolg hebben. De stationaire of inactieve hendel is zo geprogrammeerd dat het indrukken ervan geen gevolg heeft, maar enkel het aantal drukken registreert.In essentie moet de software alle indrukkingen van beide hendels en het aantal onderbrekingen van de infraroodstraal tijdens elke trainingssessie registreren. Plaats de rat op de eerste trainingsdag gedurende in totaal twee uur in de operante conditioneringskamer. Gedurende deze tijd mag de rat zich vrij bewegen en kan deze de intrekbare hendel indrukken voor de toediening van een 10% Sucrose-oplossing, of kan de rat de inactieve stationaire hendel indrukken.Alle respons- en locomotie-metingen worden vastgelegd als tijdscursussen in intervallen van twee minuten, maar worden gewoonlijk gerapporteerd als totalen per sessie. Zodra er twee uur zijn verstreken, wordt de rat verwijderd en teruggeplaatst in de thuiskooi. Zorg ervoor dat de operante conditioneringskamer grondig wordt gereinigd om alle residuen en olfactorische signalen te verwijderen die opeenvolgende trainingssessies kunnen verstoren.Tijdens de periode van gedwongen onthouding blijven de ratten in de thuiskooi met pelletvoer en water beschikbaar ad libitum. De periode van gedwongen onthouding kan zo lang duren als nodig is. Een typisch tijdsbestek voor incubatie bij craving-studies is één tot 30 dagen.Daarnaast kunnen andere te testen parameters, zoals sucrose, verzadiging of het effect van omgevingsverrijking, onder controlecondities worden toegediend. Gedurende deze periode worden hier twee testparadigma's gepresenteerd. De eerste daarvan illustreert extinctie zonder cues.Stel eerst de operante conditioneringskamer zo in dat de trainingscondities worden gereproduceerd, met uitzondering van het feit dat de toon en het witte licht niet worden geactiveerd wanneer de actieve hendel wordt ingedrukt. Programmeer de kamer om zes van deze uitdovingssessies van één uur uit te voeren, elk gescheiden door een periode van vijf minuten waarin het kamerlicht wordt uitgeschakeld en de actieve hendel wordt ingetrokken, waarbij de sessies ononderbroken verlopen. Plaats de rat vervolgens in de operante conditioneringskamer nadat de periode van gedwongen onthouding is voltooid, en laat de rat reageren op de actieve hendel gedurende zes uitdovingssessies van één uur.Gedragsmatige extinctie is vastgesteld indien de actieve hendelrespons is afgenomen tot minder dan 20 drukken per uur in de zesde extinctiesessie. Indien extinctie niet is opgetreden, krijgt de rat de gelegenheid voor een zevende extinctiesessie. De volgende sessie, na een vertraging van vijf minuten, is de testsessie van één uur waarin de ratten kunnen drukken voor de toon plus lichtsignaal die aanvankelijk was gekoppeld aan elke toediening van sucrose tijdens de training voor de tweede testprocedure; bij extinctie met signalen is de operante conditioneringskamer zo ingericht dat de trainingsomstandigheden worden gereproduceerd.Met uitzondering van het feit dat er geen sucrose-oplossing wordt toegediend bij indrukking van de actieve hendel, wordt de te testen rat gedurende twee uur in de operante conditioneringskamer geplaatst. Het indrukken van de inactieve hendel in combinatie met data van de lichtstraalonderbreking kan tevens worden gebruikt als maatstaf voor aspecifieke motorische activatie. Dit is noodzakelijk aangezien motorische versus motivationele veranderingen de interpretatie van het Q-reactiviteitsgedrag potentieel kunnen bemoeilijken.Deze figuur illustreert typische gegevens verkregen van een groep van 77 normale ratten die werden getraind om sucrose zelf toe te dienen. Volgens het trainingsparadigma dat in dit protocol wordt beschreven, is te zien dat de ratten tijdens de training selectief reageren op de actieve hendel. Hier worden de gegevens getoond die tijdens een testsessie zijn verkregen.Er is waargenomen dat de ratten reageren bij extinctie met de gekoppelde cue beschikbaar en bij extinctie met cues. Opnieuw reageren de ratten tijdens het testen selectief op de actieve hendel; de respons op de inactieve hendel en de locomotorische activiteit vertonen enige incubatie, hoewel het effect hier het meest robuust is bij de respons op de actieve hendel. De groepsgroottes varieerden van 11 tot 12 per groep, en er werd een significant verschil waargenomen tussen de groepen van dag 1 en dag 30 met een P-waarde van minder dan 0,05. Deze figuur toont het effect van sucrose-verzadiging op de sucrose-Q-reactiviteit na één of 30 dagen gedwongen onthouding; sommige ratten kregen flessen met 10% sucrose in hun thuiskooien gedurende de 17 uur direct voorafgaand aan het testen met extinctie zonder cues.Procedure, verzadiging verminderde extinctie zonder respons op cues na beide periodes van geforceerde onthouding, maar verminderde de respons alleen voor sucrose Q bij ratten die slechts één dag geforceerde onthouding hadden; de groepsgroottes bedragen acht tot negen per groep. Het asteriskteken geeft een significant verschil aan ten opzichte van de dag één-groep en het kruissymbool geeft een significant verschil aan ten opzichte van de controlegroep waarbij P minder is dan 0,05. Deze resultaten illustreren dat één maand omgevingsverrijking de sucrose Q-reactiviteit bij ratten verminderde.Tijdens de periode van geforceerde onthouding bleven de controle-ratten in individuele huisvesting, terwijl de verrijkte cohort werd verplaatst naar grote kooien met verschillende speeltjes in hun omgeving, waaronder PVC-buizen. Deze ratten kregen daarnaast elke maandag, woensdag en vrijdag nieuwe speeltjes. De ratten in deze studie werden getest met behulp van de extinctie-procedure zonder Q'S.Omgevingsverrijking verminderde de gedragingen van geïncubeerde extinctie zonder Q-respons en respons op sucrose Q alleen tot niveaus die werden gevonden na slechts één dag van geforceerde onthouding; elke groep bestond uit acht ratten. Het asteriskteken geeft een significant verschil aan ten opzichte van de groep van dag één en het kruissymbool geeft een significant verschil aan ten opzichte van de controlegroep waarbij P kleiner is dan 0,05. Hier werden de ratten op de testdag voorbehandeld met een dosis van de dopamine D1-antagonist SCH 23390 en getest met de extinctie met QS-procedure.Er kan worden gezien dat systemische s CH 2 3 3 9 0 het zoeken naar sucrose effectiever vermindert na één dag geforceerde onthouding; elke groep bestond uit acht tot 12 ratten per groep. Het asteriskteken geeft een significant verschil aan ten opzichte van de groep van dag één. Het kruissymbool geeft een significant verschil aan ten opzichte van de controlegroep waarbij P kleiner is dan 0,05.Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te onthouden dat de groepen die aan de gedwongen onthoudingscondities zijn toegewezen, moeten worden gebalanceerd op basis van hun trainingsgedrag. Na deze procedure kunnen andere methoden, zoals zelfadministratie van drugs, worden toegepast om aanvullende vragen te beantwoorden, zoals de generaliseerbaarheid van het incubatie-effect van craving na de ontwikkeling ervan. Deze techniek biedt onderzoekers in het veld van verslaving een manier om de neurale substraten van onthoudingsgerelateerde afhankelijke veranderingen in craving bij ratten te onderzoeken.Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht moeten hebben in hoe u een studie uitvoert om sucrose-craving afhankelijk van onthouding bij ratten te meten, beoordeeld aan de hand van de respons van ratten op een hendel die voorheen geassocieerd was met sucrose-zelftoediening.

a-general-method-for-evaluating-incubation-of-sucrose-craving-in-rats

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

De huidige studie evalueert een nieuwe procedure voor de beoordeling van de versterkende effecten van smakelijke oplossingen in laboratoriumratten: intraorale zelf toedienen. Daartoe operant reageert (dat wil zeggen hefboom drukken) voor intra-orale infusies van zoete oplossingen bij verschillende concentraties werd gemeten op een continue en progressieve ratio's van de wapening.

A Novel Procedure voor het evalueren van de versterkende eigenschappen van tastants in laboratoriumratten: Operante Intraoral Zelftoediening

Het Proboscis Extension Response (PER) conditioneringsprotocol, ontwikkeld voor de honingbij (Apis mellifera), biedt een ecologisch relevante en gemakkelijk kwantificeerbare manier om verschillende mechanismen van leren bij veel insectensoorten te bestuderen.

Een Proboscis Extension Response Protocol voor het onderzoeken van Behavioral Plasticiteit in Insecten: Toepassing op Basic, Biomedische en Landbouwkundig Onderzoek

Dit protocol beschrijft een nieuwe en efficiënte methode om snel te starten operante reageren voor ethanol in ratten die, in tegenstelling tot standaard methoden, geen water ontbering of saccharine / sucrose vervagen te initiëren reageren vereist.

Een methode voor het evalueren van de versterkende eigenschappen van ethanol in ratten zonder Water beroving, sacharine Fading of Extended Access Training

Het doel van deze studie is om op beloning van gedistribueerde hersenprocessen netwerken te identificeren door het afbakenen van een betrouwbare immunohistologische techniek met behulp van mobiele c-fos activering gelijktijdige veranderingen in de dopamine wegen en terminal plaatsen na roman inname van vet en suiker in ratten te meten.

Gelijktijdige detectie van c-Fos Activering van mesolimbic en mesocorticale Dopamine Beloning Sites Na Naive suiker en vet inname bij ratten

Smaak is een belangrijk sensorisch proces dat de aantrekking tot heilzame stoffen en het vermijden van giftige stoffen vergemakkelijkt. Dit protocol beschrijft een eenvoudige innametest voor het bepalen van de Drosophila smaakpreferentie voor een bepaalde chemische verbinding.

Taste Voorkeur Assay voor Volwassenenonderwijs<em&gt; Drosophila</em

Cue reactiviteit is geconceptualiseerd als gevoeligheid voor signalen die verband houden met drugsgebruik ervaringen die bijdragen aan verlangen en terugvallen in abstinent mens. Cue reactiviteit is gemodelleerd in ratten door meten attentional oriëntatie richting van drug-geassocieerde signalen, waardoor de werking van de aanpak van de appetitive in een cue reactiviteit test volgend op zelfbestuur en gedwongen onthouding.

Een Protocol voor het meten van Cue reactiviteit in een Rat Model van cocaïne gebruik wanorde

Dit protocol beschrijft een nieuwe model waarmee gezonde ratten depressie na verloop van een bepaalde tijd periodthrough besmetting door blootstelling aan chronische onvoorspelbare (CUS) ratten benadrukt kon aangaan.

Een nieuwe methode voor het induceren van een depressie-achtige werking in ratten

Hier is een morfine geconditioneerd plaats voorkeur (CPP) protocol omschreven voor het meten van de incubatie van verlangen bij ratten.

Een geconditioneerde plaats voorkeur Protocol voor het meten van de incubatie van verlangen bij ratten

Hier gepresenteerd is een protocol om depressie-achtig en anhedonisch gedrag bij ratten te bestuderen. Het combineert twee gevestigde gedragsmethoden, de sacharose voorkeur en nieuwheid-geïnduceerde hypofagie tests, met een geautomatiseerd voedsel en vloeibare inname monitoring systeem, om indirect te onderzoeken knaagdier gedrag met behulp van surrogaat parameters.

Sucrose voorkeur en nieuwheid-geïnduceerde Hypophagia Tests bij ratten met behulp van een geautomatiseerde voedselinname monitoring systeem

Dit protocol beschrijft een methode om sociale hiërarchie in een rattenmodel te onderzoeken. Ratten voeren een complexe duik-voor-voedsel-taak uit waarin ze een aparte hiërarchie vormen op basis van hun bereidheid om onder water te duiken en te zwemmen om een voedselkorrel te verkrijgen. Deze methode wordt gebruikt om besluitvorming en sociale relaties tussen zeer sociale dieren in kleine groepen te begrijpen.

Een complexe duik-voor-voedsel taak om sociale organisatie en interacties bij ratten te onderzoeken

Deze studie evalueerde de antidepressieve werkzaamheid van Qiangzhifang in een rattenmodel van door chronische terughoudendheid veroorzaakte depressie en verduidelijkte het regulerende effect ervan op HIF-1- en JAK-STAT-routes door middel van netwerkfarmacologie en moleculaire docking-analyse.

Netwerkfarmacologie en validatie van de antidepressieve mechanismen van Qiangzhifang in een door chronische terughoudendheid veroorzaakt depressie rattenmodel

Leer een methode om sucrosecraving bij ratten te evalueren na gedwongen abstinentie. Dit gedragsmodel helpt onderzoekers verslavingsmechanismen en terugvalrisico's bestuderen.

Een algemene methode voor het evalueren van Incubatie van sucrose Craving in ratten

Meer video's verkennen