Name: Combinatie Radiotherapie in een orthotope Mouse hersentumor Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Leer hoe je glioblastoomcellen orthotopisch implanteert in muizenhersenen voor oncologisch onderzoek. Deze methode maakt evaluatie van chemoradiatiebehandelingen mogelijk via overlevingscurves.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit onderzoek wordt ondersteund door de financiering van de intramurale programma van de NIH.

I. celpreparaat <ol><li> De cellen worden gekweekt tot confluentie in DMEM met 10% FBS over een 80% confluent 225 cm 3 kolf per 5 muizen ingeplant. </li><li> Zuig media af van de cellen; wassen met 10 ml PBS zonder calcium of magnesium. Zuig het PBS uit cellen. </li><li> Trypsinize cellen met 3 ml trypsine, wacht 10-15 minuten, en neutraliseren van de trypsine met 15 ml van de media. </li><li> Pipetteer alle cellen en media in een 50 ml conisch. Twee grote flessen passen in een 50 ml conische. </li><li> Spin cellen bij 1600 rpm gedurende 7 min bij 4 ° C. Volledig aspireren supernatant. Resuspenderen cellen in 10 ml koud PBS, en spoel cellen zachtjes en neer te pipetteren. Zorg de celpellet gelijkmatig is gemengd met het PBS. De schorsing moet bewolkt. </li><li> Op dit moment een celgetal gebeurt met een Coulter Counter. De cellen opnieuw gecentrifugeerd bij 1600 rpm gedurende 7 min bij 4 ° C. </li><li> Na de 2e centrifugeren van de cellen,piraat alle PBS en resuspendeer in 1 ml PBS. </li><li> De cellen worden gecentrifugeerd in 1 ml PBS bij 3000 rpm gedurende 10 minuten bij 4 ° C. De PBS wordt afgezogen en PBS toegevoegd aan de eindconcentratie passen aan 1x10 6 per 5 ul van U87 cellen kunnen andere cellijnen nodig een ander aantal en concentratie van cellen voor optimale groei van tumoren. </li><li> Na de laatste volume concentratie verkregen cellen op ijs gehouden in een eppendorf buisje. </li></ol> II. Xenograft <ol class="ualpha"><li> Voorbereiden van de muis <ol><li> De muizen zijn verdoofd met behulp van een injectie mix van ketamine / xylazine / Saline. Het mengsel wordt 120 mg / kg Ketamine, 16 mg / kg Rompun en zoutoplossing. De muizen werden gewogen en individueel gegeven 0,1 ml per 10 g gebaseerd op het gewicht. De verdoving wordt gegeven met 26G naald tot 1 ml spuit IP. Het duurt ongeveer 15 min voor de muizen om een ​​slapende fase voor geen pijn reactie te bereiken. U kunt de pijn reactie van demuizen door te knijpen hun voetzool. </li><li> Nadat de muis is volledig onder narcose gebracht, wordt oogzalf toegediend aan hun ogen om te voorkomen dat uitdrogen. </li><li> De muis wordt geplaatst op het bed van de stereotaxische met de voorste boventanden in de inkeping op de mond bar. Het bed werd vervolgens geplaatst in de stereotaxisch. </li><li> De neus wacht wordt geplaatst over de neus van de muis om beweging van het hoofd te voorkomen, en het oor bars zijn voorzichtig te plaatsen in de gehoorgang van de muizen. Zorg ervoor dat u een plaatsing van de neus of oor bar bars te strak te doen, als de schedel kunnen breken en / of te voorkomen dat de muis van de ademhaling. </li><li> Zorg ervoor dat het hoofd van de muis is niveau met de streepjes op de stereotaxische is handig tijdens dit proces. </li><li> Om prep de muis, alcohol en providine jodium wordt royaal aangebracht op de kop van de muis afwisselend voor een totaal van 3 Toepassing van alcohol en 3 toepassingen van jodium. Een laatste toepassing van een doekje met alcohol met 70% wordt toegepast ophet hoofd. </li></ol></li><li> Chirurgische procedure <ol><li> Alle instrumenten van de procedure moet ofwel worden gesteriliseerd in de autoclaaf of onderdompelen instrumenten in 70% ethanol voor het begin van de procedure. </li><li> Een incisie gemaakt op de schedel achter het rechteroog schuin naar links achterkant van de schedel. De incisie moet ongeveer 10 mm tot 15 mm lang. </li><li> Met behulp van een Q-tip, langzaam scheiden de incisie aan de schedel bloot te leggen en weg te vegen het membraan dat tussen de schedel en de huid. Gebruik een wattenstaafje om het even welk bloed deppen en pas op voor overmatig bloedverlies. </li><li> Ver top van de schedel van de bregma visualiseren. Met behulp van de Hamilton spuit punt, plaats deze over de bregma. De juiste positie van het gat te boren in de schedel 2 mm rechts en 1 mm voorste deel van bregma (figuur 2). Een chirurg vilt mondstuk marker, die wordt verkocht steriel wordt gebruikt om de plaats van de te boren gat markeren. Houd er rekening mee dat het gat dicht is gelegen aan de eenterior hechting. </li><li> Vervolgens boort een klein gaatje in de schedel op de aangegeven positie met behulp van de punt van een 22G naald in een pin vaas of gevoed door middel van een 18G naald. </li><li> Laad de 10 ul glazen Hamilton spuit met 5 pi van cellen. De Hamilton spuit is 10 pl met een stomp 30G tot 33G vaste naald die eraan verbonden zijn. Zorg ervoor dat de cellen te mengen voordat u ze, hetzij door pipetteren hen of het gebruik van een 1 ml spuit met een bijlage 25G naald. Na de Hamilton spuit is geladen, plaatst u deze terug in de arm om het line-up met het gat in de schedel. </li><li> Laat de bunt uiteinde van de naald op het oppervlak van de schedel, wanneer de naald hoogte van de schedel, verlagen de naald tot het op een diepte van 3 mm onder het oppervlak van de schedel. </li><li> Nadat de naald omlaag, stelt zij daar blijven gedurende 2 minuten aan een ernstig trauma van de naald die de hersenen te voorkomen. Implantatie van de cellen is met een snelheid van 1 pi per minuut voor een totaal van 6-8 minuten, wees voorzichtig met een backflow. Na de laatste van de cellen zijn geïmplanteerd, laat de naald op zijn plaats voor nog 2 minuten, zodat alle cellen om zich te vestigen binnen </li><li> Verwijder de naald uit de hersenen, en maak het gat met een Q-tip. Ga naar de naald en spuit schoon met 50% aceton, 100% EtOH, en PBS, 3x in elke oplossing en in die volgorde. </li><li> De huid op de schedel is klaar om te worden gehecht op dit punt. Met behulp van 5-0 PBS Sluit de incisie met ongeveer 3 steken. </li><li> Laat de muis om wakker te worden op een warmte-pad, en opnieuw oogzalf indien nodig. De muis kan worden teruggestuurd naar de kooi na het toont beweging op zijn eigen (dat wil zeggen het opheffen van het hoofd of het verplaatsen van de schouders). </li></ol></li></ol> III. Behandeling van de IC-implantaat door straling and Drug <ol class="ualpha"><li> Bestraling <ol><li> Afhankelijk van de cellijn behandeling van de muizen kan plaatsvinden 5 nemen tot 7 dagen na de implantatie. Onze afdeling maakt gebruik van een Orthovoltage radiotherapie-eenheid voor straling traktatiement. </li><li> Imaging zoals BLI (bioluminescentie) MRI of CT kan worden gebruikt om de tumor visualiseren vóór randomisatie (figuur 3A). </li><li> De muizen zijn verdoofd met de Ketamine / Xylazine / zoutoplossing cocktail als voorheen, en oogzalf wordt toegepast op hun ogen. </li><li> De muizen zijn geplaatst in een op maat gemaakte mal straling die is geconfigureerd als een taart wiel, waarbij de hoofden van de muizen wijzen naar het centrum. De lichamen van de muizen zijn afgeschermd van de straling met lood. </li><li> Medicamenteuze behandeling kan worden gegeven voor of straling via verschillende routes de levering, dat wil zeggen SQ, IP en IV. </li></ol></li></ol> IV. Resultaten De muis moet wakker te worden uit de procedure binnen 45-60 minuten na de anesthesie injectie. Als de muis heeft moeilijkheid wakker worden na de procedure en de tijd is meer dan 1 ½ uur na de procedure kan de muis niet te herstellen en euthanasie kan een effectief alternatief zijn. Als eEre is overmatig bloeden of de schedel wordt gekraakt op enig moment tijdens de procedure euthanasie wordt geadviseerd. Als alles goed gaat en afhankelijk van de cellijn, moet een tumor gaan vormen binnen 2-4 weken na de ingreep heeft plaats vinden. Bij het ​​gebruik van intracraniële xenotransplantaatmodellen, wordt de therapeutische werkzaamheid meestal gemeten als overleven na implantatie 5. Echter, aangezien dit een IC-model tekenen en symptomen zal voorafgaand aan het overlijden plaatsvinden. Een deel van de lichamelijke tekenen met de muis kan vertonen een gebogen houding, verlies van lichaamsgewicht, en inactiviteit. Sommige van de neurologische symptomen kunnen aanvallen, hoofd kantelen, en het verlies van balans. Figuur 3B toont een HE van een tumor vlek op sterfte. Een Kaplan-Meier plot wordt gebruikt om de data (figuur 4) te evalueren. Het aantal dagen van overleving op 50% worden berekend en vergeleken met de controle. Als de combinatie groep leefde langer dan de toevoeging van de individuele straling en drug armen combinatie succesvol. <img alt = &quot;Figuur 1&quot; src = &quot;/ files/ftp_upload/3397/3397fig1.jpg&quot; /&gt; Figuur 1. Stoelting stereotaxisch apparatuur. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig2.jpg" /> Figuur 2. Een diagram van de locatie van het boorgat in de muis schedel. <img alt="Figuur 3A" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig3A.jpg" /> Figuur 3A. BLI beeldvorming na GBM implantatie. <img alt="Figuur 3B" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig3B.jpg" /> Figuur 3B. H en E van de GBM tumor op sterfte. <img alt="Figuur 4" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig4.jpg" /> Figuur 4. Resultaten van U87 IC implantaten geïnjecteerd met PARP-remmer 7 dagen na de operatie.

<ol><li>Bleau, A. M., Holland, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trapping+the+mouse+genome+to+hunt+human+alternations%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Nat.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Trapping the mouse genome to hunt human alternations.</a> Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 104, 7737-7738 (2007).</li>
<li>McGrady, B. J., McCormick, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+intracranial+invasion%3A+morphological+observations+on+central+nervous+system+invasion+by+melanoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">A murine model of intracranial invasion: morphological observations on central nervous system invasion by melanoma cells.</a> Clin. Exp. Metastasis. 10, 387-393 (1992).</li>
<li>Fei, X., Zhang, Q., Dong, J., Diao, y, Wang, Z., Li, R., Wu, Z., Wang, A., Lan, Q., Zhang, S., Huang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+clinically+relevant+orthotopic+xenograft+mouse+model+of+metastatic+lung+cancer+and+glioblastoma+through+surgical+tumor+tissues+injection+with+trocar%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+%26+Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Development of clinically relevant orthotopic xenograft mouse model of metastatic lung cancer and glioblastoma through surgical tumor tissues injection with trocar.</a> Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. 29, 84-84 (2010).</li>
<li>Fujita, M., Zhu, X., Sasaki, K., Ueda, R., Low, K., Pollack, I., Okada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+STAT3+Promotes+the+Efficacy+of+Adoptive+Transfer+Therapy+Using+Type-1+CTLs+by+Modulation+of+the+Immunological+Microenvironment+in+a+Murine+Intracranial+Glioma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of STAT3 Promotes the Efficacy of Adoptive Transfer Therapy Using Type-1 CTLs by Modulation of the Immunological Microenvironment in a Murine Intracranial Glioma.</a> J. Immunol. 180, 2089-2098 (2008).</li>
<li>Candolfi, M., Curtin, J. F., Nichols, W. S., Muhammad, A. K. M. . G., King, G., Pluhar, G. D., McNiel, G. E., Ohlfest, E. A., Freese, J. R., Moore, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology%3A+neuropathlogical+characterization+and+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathlogical characterization and tumor progression.</a> J. Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li>
<li>Kaye, A., Morstyn, G., Gardner, I., Pyke, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+xenograft+glioma+model+in+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Development of a xenograft glioma model in mouse brain.</a> Cancer Research. 46, 1367-1373 (1986).</li>
<li>Zhao, Y., Xiao, A., diPierro, C., Carpenter, J., Abdel-Fattah, R., Redpath, G., Lopez, M., Hussaini, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Extensive+Invasive+Intracranial+Human+Glioblastoma+Xenograft+Model%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">An Extensive Invasive Intracranial Human Glioblastoma Xenograft Model.</a> American Journal of Pathology. 176, 3032-3049 (2010).</li>
<li>Learn, C., Grossi, P., Schmittling, R., Xie, W., Mitchell, D., Karikari, I., Wei, Z., Dressman, H., Sampson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+Analysis+of+Intracranial+Tumors+in+a+Murine+Model+of+Glioma+Demonstrate+a+Shift+in+Gene+Expression+in+Response+to+Host+Immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Genetic Analysis of Intracranial Tumors in a Murine Model of Glioma Demonstrate a Shift in Gene Expression in Response to Host Immunity.</a> J. Neuroimmunol. 182, 63-72 (2007).</li>
<li>Martens, T., Laabs, Y., Günther, H., Kemming, D., Zhu, Z., Witte, L., Hagel, C., Westphal, M., Lamszus, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+Glioblastoma+Growth+in+a+Highly+Invasive+Nude+Mouse+Model+Can+Be+Achieved+by+Targeting+Epidermal+Growth+Factor+Receptor+but+not+Vascular+Endothelial+Growth+Factor+Receptor-2%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Inhibition of Glioblastoma Growth in a Highly Invasive Nude Mouse Model Can Be Achieved by Targeting Epidermal Growth Factor Receptor but not Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2.</a> Clin. Cancer Res. 14, 5447-5458 (2008).</li>
<li>Purow, B., Schiff, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+genetics+of+glioblastoma%3A+are+we+reaching+critical+mass%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Advances in the genetics of glioblastoma: are we reaching critical mass.</a> Nat. Rev. Neurol. 5, 419-426 (2009).</li>
</ol>

Wij hebben niets te onthullen.

Maligne gliomen, zoals glioblastoma multiforme, de meest algemeen voorkomende primaire hersentumoren en hebben een sombere prognose 4. De overleving van patiënten die lijden aan GBM is nagenoeg ongewijzigd gebleven in het afgelopen decennium (dwz 9-12 maanden na de diagnose), ondanks de vooruitgang in de chirurgie, bestraling en chemotherapie 5. De eigenschappen van een geschikt model voor de studie van glioma behandeling moet een reproduceerbare tumorlokalisatie en groei van de cellen relatief dis...

<table border="1"><tbody><tr><td> Lab Standaard stereotaxische Instrutment </td><td> Stoelting muis en rat-adapter </td></tr><tr><td> Betadine </td><td> 100% EtOH </td></tr><tr><td> 70% EtOH </td><td> 50% aceton </td></tr><tr><td> 6 &quot;wattenstaafjes </td><td> Alcoholdoekjes </td></tr><tr><td> Hamilton spuit 80008 </td><td> Ethicon 5-0 PD </td></tr><tr><td> 1701 SN 31-33G / 1 &quot;/ PT3 naald </td><td> 1 ml spuiten </td></tr><tr><td> 25G naalden </td><td> Verwarming pad </td></tr><tr><td> Kunstmatige Tears Zalf </td><td> Zeer fijne getipt permanent marker </td></tr></tbody></table>

combinatie radiotherapie in een orthotope mouse hersentumor model

Combination Radiotherapy in an Orthotopic Mouse Brain Tumor Model

Glioblastoma multiforme (GBM) zijn de meest voorkomende en agressieve volwassen primaire hersentumoren 1. In de afgelopen jaren is er aanzienlijke vooruitgang geboekt in het begrijpen van de mechanismen van tumor invasie en directe intracerebrale inoculatie van de tumor biedt de mogelijkheid van het observeren van de invasieve proces in een fysiologisch geschikte omgeving 2. Voor zover de menselijke hersentumoren betreft, worden de orthotope modellen die nu beschikbaar is tot stand gebracht door stereotaxische injectie van celsuspensies of implantatie van een massief stuk van de tumor door middel van een ingewikkelde craniotomie procedure 3. In de techniek wordt oogsten cellen van weefselkweek aan een celsuspensie gebruikt om rechtstreeks implanteren in de hersenen te maken. De duur van de behandeling is ongeveer 30 minuten, en de muis moet in een constante chirurgische vlak een injecteerbare verdoving wordt gebruikt. De muis is geplaatst in een stereotaxisch mal van Stoetling (figuur 1). Aftre het operatiegebied wordt gereinigd en wordt een incisie gemaakt, en de bregma bevindt zich de plaats van de craniotomie bepalen. De locatie van de craniotomie 2 mm naar rechts en 1 mm rostraal de bregma. De diepte van 3 mm van het oppervlak van de schedel en de cellen worden geïnjecteerd met een snelheid van 2 pi elke 2 minuten. De huid wordt gehecht met 5-0 PDS, en de muis is toegestaan ​​om wakker te worden op een verwarmingselement. Uit onze ervaring, afhankelijk van de cellijn kan de behandeling plaatsvinden van 7-10 dagen na chirurgie. Drug delivery is afhankelijk van de drug samenstelling. Voor bestraling de muizen zijn verdoofd, en in een op maat gemaakte mal. Lood heeft betrekking op de muis het lichaam en bloot alleen de hersenen van de muis. De studie van tumorvorming en de evaluatie van nieuwe therapieën voor GBM een nauwkeurige en reproduceerbare hersentumor diermodellen. Zo gebruiken we deze orthotope hersenen model om de interactie van de micro-omgeving van de hersenen en de tumor te bestuderen, aan de effectiven te testeness van de verschillende therapeutische middelen met en zonder straling.

Het doel van dit artikel is het beschrijven van het gebruik van een orthotope glioblastoma model voor chemoradiatie studies. Dit artikel gaat echter cel verwerking, het implanteren, en radiotherapie van de muis met behulp van een intracraniële model.

Combinatie Radiotherapie in een orthotope Mouse hersentumor Model

Glioblastoma multiforme (GBM) zijn de meest voorkomende en agressieve primaire hersentumoren bij volwassenen1. In recente jaren is er aanzienlijke vooruitgang geboekt in de ...

Het algemene doel van deze procedure is het beschrijven, tonen en behandelen van glioblastoomcellen die intracraniaal in de hersenen van een muis zijn geïmplanteerd. Dit wordt bereikt door eerst de cellen voor te bereiden en deze vervolgens in de hersenen van een muis te implanteren. Na de chirurgische ingreep groeit er een tumor in de hersenen waarmee geëxperimenteerd kan worden met verschillende behandelingen.Uiteindelijk kan een overlevingscurve uitwijzen of de behandeling effectief was of niet. De implicaties van deze techniek strekken zich uit tot de therapie van glioblastoom, omdat dit een effectievere manier kan zijn om nieuwe behandelingen, zoals geneesmiddelen en bestraling, te testen in vergelijking met weefselkweek. Begin met het kweken van de betreffende cellen, zoals U 87-cellen, tot 80% confluentie. In DMEM met 10% FBS zal één kolf van tweehonderdvijfentwintig kubieke centimeter voldoende cellen opleveren om vijf muizen te implanteren; aspireer het medium van de cellen en was de cellen kort met 10 milliliter PBS zonder calcium of magnesium door middel van handmatig schudden.Nadat de wasoplossing is afgezogen, worden de cellen gedurende 10 tot 15 minuten behandeld met trypsine, waarna de trypsine wordt geneutraliseerd met 15 milliliter medium. Breng vervolgens alle cellen en het medium over in een conische buis van 50 milliliter. Twee kolfjes cellen passen in één buis.Centrifugeer de cellen gedurende zeven minuten bij 1600 RPM en verwijder het supernatant volledig door aspiratie. Resuspendeer de pellet in 10 milliliters koud PBS en spoel de cellen door ze voorzichtig met een pipet op en neer te bewegen in de oplossing totdat een uniforme troebele suspensie is ontstaan. Nadat de celconcentratie met een celenteller is gemeten, wordt de PBS-wasstap herhaald voor een optimale tumorgroei.Pas de uiteindelijke concentratie van de U 87-cellen aan naar 200.000 cellen per µL. Andere cellijnen kunnen een andere concentratie vereisen voor een optimale tumorgroei. Houd de cellen, zodra deze voor injectie zijn voorbereid, op ijs en ga verder met het voorbereiden van het dier.Begin met de voorbereiding van de muizen door de gastmuizen te anesthetiseren. Controleer na ongeveer 15 minuten met een knijptest in de teen of de muizen ongevoelig zijn voor pijn. Breng, zodra ze onder narcose zijn, een zalf aan op de ogen om uitdroging te voorkomen.Plaats de muis vervolgens op het bed van het stereotaxische frame. Bevestig de tanden in de inkeping van de mondstang. Positioneer vervolgens het bed in het frame.Om de kop nu te stabiliseren, voorziet u de muis van een neusbeschermer en brengt u vervolgens voorzichtig de oorstaven in het gehoorkanaal aan. Zorg ervoor dat geen van beide staven te strakten, aangezien de schedel kan breken of de muis kan stikken. Controleer op dit punt of de kop waterpas staat.De laatste voorbereiding is om de kop afwisselend drie keer met alcohol en jodium te reinigen en af te sluiten met een vierde applicatie van alcohol. Begin de implantatiechirurgie met een incisie die start achter het rechteroog en diagonaal naar het linkerachterste gedeelte van de schedel loopt. De incisie moet ongeveer 10 tot 15 millimeter lang zijn.Gebruik een wattenstaafje om de incisie langzaam te spreiden zodat de schedel zichtbaar wordt, veeg het membraan tussen de schedel en de huid weg en dep eventueel bloed of overmatig bloeden weg. Lokaliseer nu de bgma en positioneer een glazen Hamilton-spuit van 10 µL erboven met behulp van een viltstift. Zet een markering twee mm rechts en één mm anterieur van de bgma, vlakbij de anterieure sutuurlijn.Verwijder nu de spuit en boor een klein gat in de schedel op de gemarkeerde positie. De boor is ter grootte van een 22 gauge naald. Laat de boor het gat in de schedel boren.Er is geen extra druk nodig. Vul een injectiespuit met een naald van 30 tot 33 gauge met vijf microliters goed gemengde cellen en bevestig deze vervolgens opnieuw aan het frame. Lijn de naald uit met het gat in de schedel en laat deze vanaf het schedeloppervlak naar het schedeloppervlak zakken.Laat de naald drie millimeter zakken en wacht twee minuten. Deze pauze vermindert de kans op trauma. Druk de zuiger langzaam in om de cellen te implanteren met een snelheid van ongeveer één microliter per minuut.Voorkom zorgvuldig elke terugstroom nadat de laatste cellen zijn geïmplanteerd. Laat de naald nog twee minuten op zijn plaats zitten zodat alle cellen kunnen bezinken. Trek na het wachten de naald voorzichtig uit de hersenen en veeg het gaatje zorgvuldig schoon met een wattenstaafje.Sluit nu de incisie met ongeveer drie hechtingen met behulp van 5-0 PBS-hechtmateriaal. Plaats de muis op een warmteplateau en breng, indien nodig, opnieuw oogzalf aan.Zodra de muis zijn kop optilt of met zijn schouders beweegt, mag hij terug naar zijn thuiskooi. Vanaf het moment van de anesthesie-injectie neemt deze procedure tussen de 30 en 60 minuten in beslag. Als de muis na 90 minuten nog niet is bewogen, is het mogelijk dat de muis niet herstelt en kan euthanasie een effectief alternatief zijn.Daarnaast wordt euthanasie geadviseerd indien er sprake is van overmatige bloedingen of als de schedel op enig moment tijdens de procedure scheurt. Afhankelijk van de cellijn kan de bestralingsbehandeling van de muizen vijf tot zeven dagen na implantatie plaatsvinden. Voor de bestralingsbehandeling kan bijvoorbeeld een orthovoltagesysteem voor radiotherapie worden gebruikt.Gebruik beeldvormingstechnieken zoals B-L-I-M-R-I of CT om de tumor te visualiseren voordat de muizen willekeurig over de experimentele groepen worden verdeeld. Na de celimplantatie vormden zich doorgaans binnen twee tot vier weken tumoren, afhankelijk van de cellijn. Na het overlijden werd de kleuring uitgevoerd op de hersenweefsels om de tumor te onderzoeken.Een belangrijke evaluatie van de behandelingswerkzaamheid is het uitzetten van een Kaplan-Meier overlevingscurve. Hiermee wordt de gemiddelde levensduur na injectie vergeleken van dieren die een medicamenteuze behandeling, bestraling of een gecombineerde therapie hebben ondergaan. Na deze ontwikkeling heeft deze techniek de weg vrijgemaakt voor onderzoek in het veld van de oncologie naar therapieën voor hersentumoren bij muizen.

combination-radiotherapy-in-an-orthotopic-mouse-brain-tumor-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Hersentumorpatiënten regelmatig een craniale radiotherapie, en terwijl voordelig, deze behandeling resulteert vaak in slopende cognitieve dysfunctie. Dit ernstige onopgeloste probleem is op dit moment geen klinische verhaal, en heeft gedreven onze inspanningen om op basis van stamcellen therapieën ontwikkelen voor het herstel van straling geïnduceerde cognitieve verlaagt.

Stamceltransplantatie strategieën voor het herstel van de cognitieve disfunctie veroorzaakt door Cranial Radiotherapie

We beschrijven een geïntegreerde methode voor de exacte, stereotactische implantatie van menselijke glioblastoma multiforme cellen in de hersenen van muizen en vervolgens naakt...

Stereotactische Intracraniale Implantatie en<em&gt; In vivo</em&gt; Bioluminescent Imaging van tumorxenograften in een Muis Model Systeem van glioblastoma multiforme

De video toont de orthotopische inentingstechniek voor borstkanker in een muismodel. Deze techniek produceert een hoge tumorigenesesnelheid met minder variabiliteit in tumorgrootte en vorm in vergelijking met subcutane of niet-chirurgische injectie.

Orthotopische injectie: weefselspecifieke kankercellen implanteren in een volwassen muis

This video demonstrates implantation of tumor cells in the mouse brain by performing intracranial injection.

Intracranial Orthotopic Model: A Procedure to Implant Cancer Cells in Mouse Brain

Kleine dierlijke bestraling werd in het verleden meestal uitgevoerd zonder de mogelijkheid om gericht een goed afgebakende tumor volume. Het doel was om na te bootsen de behandeling van menselijke glioblastoma bij ratten. Met behulp van een kleine dierlijke bestraling platform, wij uitgevoerd MRI geleide 3D hoekgetrouwe bestraling met PET gebaseerde sub volume boost in een preklinische instelling.

PET en MRI geleide bestraling van een Glioblastoma Rat-Model met behulp van een Micro-irradiator

Hier presenteren we een protocol voor de voorbereiding en het stereotaxic beheer van allogene menselijke lymfocyten in immunodeficiëntie muizen uitvoering orthotopic menselijke primaire hersentumoren. Deze studie biedt een bewijs-van-concept voor zowel de haalbaarheid en antitumorale werkzaamheid van cellulaire immuuntherapie intrabrain-geleverd.

Stereotactische adoptief overdracht van cytotoxische immuuncellen in lymfkliertest modellen van Orthotopic mens Glioblastoma Multiforme Xenografts

Onderzoek inzake behandelingsstrategieën voor pluripotente stamcel-afgeleide teratomas is belangrijk voor de klinische vertaling van stamcel therapie. Hier beschrijven we een protocol, ten eerste genereren van stamcellen cel afkomstige teratomas in muizen en vervolgens selectief doel en behandeling van deze tumoren in vivo met behulp van een kleine-dier-irradiator.

Gerichte en selectieve behandeling van pluripotente stamcel afkomstige Teratomas met behulp van externe Beam straling in een kleine-dier-Model

Intracraniale hersenen metastase modellering wordt gecompliceerd door een onvermogen om tumorgrootte en reactie op de behandeling met nauwkeurige en tijdige methoden te controleren. De gepresenteerde methodologie paren intracraniale tumor injectie met magnetische resonantie imaging analyse, die wanneer gecombineerd, cultiveert nauwkeurige en consistente injecties, verbeterde dier monitoring, en nauwkeurige tumor volume metingen.

Modellering van hersenmetastasen door middel van intracraniale injectie en magnetische resonantie beeldvorming

Hier presenteren we een protocol om preklinische positronemissietomografie-gebaseerde radiotherapie uit te voeren in een rattenglioblastoommodel met behulp van algoritmen die intern zijn ontwikkeld om de nauwkeurigheid en efficiëntie te optimaliseren.

Positronemissie Tomografie-gebaseerde dosis schilderen Bestralingstherapie in een glioblastoom rat model met behulp van het Small Animal Radiation Research Platform

Hier beschrijven we een preklinisch orthotopisch muismodel voor GBM, vastgesteld door intracraniële injectie van cellen afgeleid van genetisch gemanipuleerde muismodeltumoren. Dit model toont de ziektekenmerken van menselijke GBM. Voor translationele studies wordt de hersentumor van de muis gevolgd door in vivo MRI en histopathologie.

Translationele orthotopische modellen van glioblastoom multiforme

De ontwikkeling van orthotope pediatrische hersentumormodellen vereist nauwgezette precisie, waarbij een stereotactisch apparaat wordt gebruikt om kankercellen nauwkeurig te implanteren. De hier gepresenteerde methodologie schetst de stappen die betrokken zijn bij het voorbereiden van hersentumorcellen, het uitvoeren van intracraniële injecties en het implementeren van een postoperatief monitoringsysteem om implantatie van hersentumoren te beoordelen.

Opstelling van orthotope patiënt-afgeleide xenotransplantaatmodellen voor hersentumoren met behulp van een stereotactisch apparaat

Leer hoe je glioblastoomcellen orthotopisch implanteert in muizenhersenen voor oncologisch onderzoek. Deze methode maakt evaluatie van chemoradiatiebehandelingen mogelijk via overlevingscurves.

Combinatie Radiotherapie in een orthotope Mouse hersentumor Model

Meer video's verkennen