Name: Intracraniële Implantatie met Latere 3D In Vivo Bioluminescent Imaging van Murine Gliomen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Leer intracraniële implantatie van GL261-gliomacellen in muizen met 3D bioluminescentiebeeldvorming. Deze methode maakt kwantitatieve monitoring van tumorprogressie in vivo mogelijk voor neuro-oncologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

We willen graag Dr Joshua B. Rubin erkennen voor de gulle gift van de plasmiden voor het lentivirus systeem, alsook Mahil Rao voor nuttige suggestie over de voorbereiding van de GL261-luc cellen. Wij danken Studenten ondersteunen hersentumor Research (SSBTR), The Barrow Neurological Foundation en The Wallace Foundation voor hun genereuze steun. Experimenten op dieren werden uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen en voorschriften uiteengezet door de Institutional Animal Care en gebruik Comite van het ziekenhuis St. Joseph en Medisch Centrum in te stellen.

<ol><li>Candolfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology%3A+neuropathological+characterization+and+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li>
<li>Stafford, P., Abdelwahab, M. G., do, K. im, Preul, Y., Rho, M. C., M, J., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ketogenic+diet+reverses+gene+expression+patterns+and+redudes+reactive+oxygen+species+levels+when+used+as+an+adjuvant+therapy+for+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+Metab%22%5BJournal%5D)">The ketogenic diet reverses gene expression patterns and redudes reactive oxygen species levels when used as an adjuvant therapy for glioma.</a> Nutr Metab. 7, (2010).</li>
<li>Caliper Life Sciences, Inc. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Living+Image+Software+Version+4.0.+VivoVision+Systems%22">Living Image Software Version 4.0. VivoVision Systems</a>. , (2010).</li>
<li>Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , 2nd Ed, Academic Press. (2001).</li>
<li>Jouanneau, E., Poujol, D., Gulia, S., Le, M. I., Blay, J. Y., Belin, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+are+essential+for+priming+but+inefficient+for+boosting+antitumour+immune+response+in+an+orthotopic+murine+glioma+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Immunother%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells are essential for priming but inefficient for boosting antitumour immune response in an orthotopic murine glioma model.</a> Cancer Immunol Immunother. 55, 254-267 (2006).</li>
</ol>

Gratis toegang tot dit artikel wordt gesponsord door Remklauw Life Sciences.

De cel inoculum wordt toegediend op een diepte van 2,6 mm van het oppervlak van de hersenen na het maken van een 0,4 mm zak. Om een ​​goede plaatsing en de diepte van de naald zorgen voor een X-ray kan worden genomen met behulp van een C-arm of een soortgelijke X-ray beeld intensivering van het apparaat, maar dit is optioneel. Complicaties van de operatie kan ontstaan ​​als het dier niet goed verdoofd, waarna het dier kan bewegen tijdens de celdeling infusie. Dit kan leiden tot lekkage van cel-mix of bloeden van de naald track. Lekkage van cellen veroorzaakt ectopische groei van tumorcellen. Het is ook belangrijk niet te doorboren het ventrikel, die kan worden gedaan als de burrhole wordt gemaakt mediaal van de 2,3 mm beschreven in het protocol 4. Een juiste plaatsing van de naald en cel verspreid werd getest door het inbrengen van een muis met 2 pi methyleenblauw kleurstof en ontleden van het hersenweefsel om de locatie van de kleurstof toegediend te controleren. In dit protocol hebben we de IVIS Spectrum in vivo imaging-systeem en tHij Living Image software (v 4.0) is ontworpen voor gebruik met dit instrument. (Caliper Life Sciences). Een vergelijkbaar systeem in vivo beeldvorming en beeldanalyse tools kunnen worden gebruikt om vergelijkbare resultaten te verkrijgen. Deze systemen bieden een aantal voordelen ten opzichte van de traditionele magnetische resonantie beeldvorming (MRI) om de groei van een experimentele intracraniale tumor te volgen. De meest voor de hand liggende is de relatieve kosten van de twee instrumenten - dieren MRI-machines zijn veel duurder en vergen doorgaans de diensten van een ervaren MRI-technicus. In vivo beeldvorming, zoals wat hier beschreven kan worden gedaan door de eindgebruiker. De bioluminescentie data is kwantitatief, terwijl de kwantificatie van de MRI-gegevens is tijdrovend en enigszins onnauwkeurig. Verder MRI-beelden tonen oedeem en ontsteking in aanvulling op tumorcellen en het kan moeilijk zijn om de tumor te scheiden van effect van de behandeling. Om deze redenen het verkrijgen van nauwkeurige volumetrische metingen van groeiende tumor kan een uitdaging zijn. Bioluminescentie vereist ATP, Dus alleen levende tumorcellen bijdrage leveren aan de tumorgrootte gegevens. Ondanks dit, zijn er een aantal voordelen aan het MRI als een machine beschikbaar is. Cellen hoeven niet te worden geëtiketteerd met een lichtgevend marker te gevisualiseerd worden door MRI. De mogelijkheid om peri-tumorale oedeem visualiseren kan een voordeel voor sommige experimentele protocollen worden. Een sterk punt van beide technologieën is dat het gebruik van een niet verzet tegen het gebruik van de andere, zodat gegevens kunnen worden verkregen op de groei van de tumor en de aanwezigheid van peri-tumorale oedeem en ontsteking van hetzelfde dier wanneer beide technologieën beschikbaar zijn aan de onderzoeker.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum of de levering </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogus nummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> GL261-luc2 Bioware Ultra </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> GL261-luc2 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 10313039 </td><td></td></tr><tr><td> Geneticine (G418) </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 11811-023 </td><td></td></tr><tr><td> Foetaal Calf Serum (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) </td><td> Invitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr Muizen </td><td> NCI-Frederick </td><td></td><td></td></tr><tr><td> AKWA Tears Glijmiddel oogzalf </td><td> Akorn Inc </td><td> 17478-062-35 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaset (ketamine hydrochloride) </td><td> Wyeth </td><td> 11570775 </td><td></td></tr><tr><td> Sedazine (xylazine hydrochloride) </td><td> Wyeth </td><td> 10031894 </td><td></td></tr><tr><td> Small Animal stereotaxische Instrument </td><td> Kopf Instruments </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> UltraMicroPump met SYS-Micro4 Controller </td><td> Wereld precisie-instrumenten </td><td> UMP3-1 </td><td> Indien niet beschikbaar, is het mogelijk om handmatig te bezielen </td></tr><tr><td> 10μl injectiespuit met 26 gauge schuine naald </td><td> Wereld precisie-instrumenten </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Adison Forceps </td><td> Wereld precisie-instrumenten </td><td> 500092 </td><td></td></tr><tr><td> Penfield dissector </td><td> Codman </td><td> 65-1015 </td><td></td></tr><tr><td> 16g 1 ½ Precision Glide Naald </td><td> Beckton, Dickinson and Company (BD) </td><td> 305198 </td><td></td></tr><tr><td> Chirurgische Blade handgreep </td><td> BD </td><td> 371030 </td><td></td></tr><tr><td> Grootte 15 Blade </td><td> BD </td><td> 371315 </td><td></td></tr><tr><td> 4-0 Vicryl Suture </td><td> Ethicon </td><td> VCP496G </td><td></td></tr><tr><td> Bot Wax </td><td> Medline </td><td> DYNJBW25 </td><td></td></tr><tr><td> Povidine-Jodium Swab Sticks </td><td> Medline </td><td> MD93901 </td><td></td></tr><tr><td> D-Luciferine kaliumzout </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> 122796 </td><td></td></tr><tr><td> Forane (Isofluraan) </td><td> Baxter </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> OPMI Pentero Microscoop </td><td> Carl Zeiss, Inc </td><td></td><td> Elke chirurgische microscoop kan worden volstaan ​​met </td></tr><tr><td> Xenogen IVIS Spectrum met optionele anesthesie-systeem </td><td> Caliper Life Sciences </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

intracraniële implantatie met latere 3d in vivo bioluminescent imaging van murine gliomen

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

De muis glioom 261 (GL261) wordt erkend als een in vivo model systeem dat recapituleert veel van de kenmerken van de menselijke glioblastoma multiforme (GBM). De cel lijn werd oorspronkelijk veroorzaakt door intracraniale injectie van 3-methyl-cholantrene in een C57BL / 6 syngene muizenstam 1, daarom immunologisch bevoegde C57BL / 6 muizen gebruikt kan worden. Terwijl we gebruiken GL261, kan het volgende protocol worden gebruikt voor de implantatie en monitoring van iedere intracraniële tumor muis model. GL261 cellen werden ontworpen om stabiel te uiten vuurvlieg luciferase (GL261-luc). We hebben ook het helderder GL261-luc2 cellijn door stabiele transfectie van de luc2-gen tot expressie gebracht van de CMV promoter. C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr muizen (albino variant van C57BL / 6) van het National Cancer Institute, Frederick, MD werden gebruikt om het licht demping veroorzaakt door de zwarte huid en vacht te elimineren. Met het gebruik van albino C57BL / 6 muizen, in vivo beeldvorming met behulp van de IVIS Spectrum in vivo imaging-systeem is mogelijk vanaf de dag van implantatie (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA). De GL261 en GL261-luc-luc2 cellijnen toonde hetzelfde in vivo gedrag als het ouderlijk GL261 cellen. Een deel van de gedeelde histologische kenmerken aanwezig zijn in de menselijke GBMS en dit muismodel zijn onder andere: tumor necrose, pseudopalisades, neovascularisatie, invasie, hypercellularity, en ontsteking 1. Voorafgaand aan de implantatie dieren werden verdoofd door een intraperitoneale injectie van ketamine (50 mg / kg), xylazine (5 mg / kg) en buprenorfine (0,05 mg / kg), geplaatst in een stereotactisch apparaat en een incisie werd gemaakt met een scalpel over de craniale middellijn. Een burrhole werd 0,1 mm posterior van de bregma en 2.3mm rechts van de middellijn. Een naald werd ingebracht tot een diepte van 3 mm en 0,4 mm teruggetrokken tot een diepte van 2,6 mm. Twee pi van GL261-luc of GL261-luc2 cellen (10 7 cellen / ml) werden toegediend in de loop van 3 minuten. De burrhole werd geslotenmet bonewax en de incisie gehecht was. Naar aanleiding van stereotactische implantatie van de lichtgevende cellen detecteerbaar vanaf de dag van implantatie en de tumor kan worden geanalyseerd met behulp van de 3D-beeldreconstructie kenmerk van de IVIS Spectrum instrument. Dieren krijgen een subcutane injectie van 150μg luciferine / kg lichaamsgewicht 20 minuten voorafgaand aan de beeldvorming. Tumorlast wordt gekwantificeerd met behulp van bioluminescentie betekenen tumor in de tijd. Tumor-dragende muizen werden dagelijks geobserveerd om te beoordelen en morbiditeit werden gedood wanneer een of meer van de volgende symptomen aanwezig zijn: lusteloosheid, gebrek aan wandelen, gebogen houding, niet te verzorgen, anorexia wat resulteert in&gt; 10% gewichtsverlies. Tumoren werden duidelijk in alle van de dieren op autopsie.

Intracraniële implantatie van GL261 cellen in C57BL / 6 muizen produceert kwaadaardige gliomen dat veel van de kenmerken van de menselijke glioblastoma multiforme samenvatten. We gebruikten GL261 cellen die stabiel uitdrukken luciferase om ons in staat om te gebruiken<em&gt; In vivo</em&gt; Beeldvorming tot tumorprogressie te volgen. De operatie en 3D<em&gt; In vivo</em&gt; Beeldvorming worden aangetoond.

Intracraniële Implantatie met Latere 3D In Vivo Bioluminescent Imaging van Murine Gliomen

Het muisglioma 261 (GL261) wordt erkend als een in vivo modelsysteem dat veel kenmerken van het menselijke glioblastoma multiforme (GBM) reproduceert. De ...

Het algemene doel van deze procedure is om een intracraniaal model van gliomen te creëren dat kwantitatief in de tijd kan worden gevolgd via in vivo imaging. Dit wordt bereikt door eerst luminescente spiegelbeeld-gliomcellen te oogsten en te kweken, en een celsuspensie voor te bereiden van 1 tot 2 × 10⁷ cellen per milliliter. De tweede stap van de procedure is de stereotactische implantatie van de geoogste cellen in de rechter frontale lob van de muizenhersenen.Vervolgens volgt een subcutane injectie van Luciferian in het dier en het genereren van een kinetische curve voor de expressie van Luciferian. Met gebruik van het IVUS spectrum in vivo imaging system is de laatste stap van de procedure het serieel in beeld brengen van de dieren en het volgen van de tumorgroei. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die de groei van tumorcellen en de 3D-lokalisatie van de tumor tonen via een bioluminescent signaal dat detecteerbaar is met het IVUS spectrum in vivo imaging system.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden zoals MRI is dat bioluminescentie-imaging uitsluitend levende tumorcellen identificeert en geen speciaal opgeleide MRI-technicus vereist. Bovendien kunnen dieren in een korter tijdsbestek gelijktijdig worden gescand. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen in het veld van de neuro-oncologie, zoals de effectiviteit van nieuwe therapieën voor hersentumoren.In vivo: hoewel deze methode inzicht kan bieden in hersentumoren, kan deze ook worden toegepast op andere orgaansystemen, zoals long-, prostaat- en leverkankers. Ter voorbereiding op deze procedure wordt ten minste 3 µL van het glioomcelinoculum geladen in een spuit van 10 µL en 50 mm met een schuine naald van gauge 26.Zorg ervoor dat de cellen niet zijn samengeklonterd, anders is het mogelijk nodig om de spuit opnieuw te vullen. De geanestheseerde muis wordt in het stereotactische frame geplaatst en de kop van de muis wordt vastgezet met de mondklem, zoals in deze afbeelding wordt getoond. Plaats de gevulde spuit in de micro-injector.Om de chirurgische procedure te starten, wordt er een huidincisie gemaakt met een mesje maat 15 en tandpincetten. Maak een incisie van 10 tot 15 millimeter tussen de ogen van het dier, in de richting van de oren, om de bgma bloot te leggen. Zorg ervoor dat de bgma correct wordt geïdentificeerd voor.Het kan gemakkelijk verward worden met het sinusgebied dat distaal van de bma ligt. Maak met een naald van 16 gauge en een half inch de boorgat 0,1 mm posterieur aan de coronale sutuur en 2,3 mm rechts van de middellijn door lichte druk op de naald uit te oefenen terwijl deze wordt gedraaid tot de schedel is gepenetreerd en de hersenen zijn blootgelegd; verplaats de injectienaald met de micro-injector tot deze net het oppervlak van de hersenen raakt. Voer de naald vanuit deze positie door tot een diepte van 3 mm.Houd de naald drie minuten op plaats. Trek de naald vervolgens 0,4 millimeter terug tot een totale diepte van 2,6 millimeter onder het breinoppervlak. Hierdoor ontstaat een kleine holte waarin de cellen geïnfuseerd kunnen worden om een correcte plaatsing en diepte te garanderen.Röntgenfoto's van de naaldopeningen kunnen worden gemaakt met een C-boog. Infuseer de celsuspensie gedurende drie minuten met de micro-injector ingesteld op een volume van 2000 nanoliters met een infusiesnelheid van 667 NANOLITERS per minuut. Laat de naald na de infusie twee minuten op zijn plaats staan om lekkage vanuit de infusieplaats te voorkomen. Trek daarna de naald langzaam volledig terug.Zodra de naald is teruggetrokken, wordt het boorgat afgedekt met botwas met behulp van een Penfield-dissector. Hecht tenslotte de incisie met een 4-0 Vicryl-hechtmateriaal, waarbij wordt gecontroleerd of er geen grote openingen in de huid zijn achtergebleven. In vivo.Bioluminescentie-imaging wordt uitgevoerd met het IVIS Spectrum-beeldvormingssysteem. Start de LivingImage-software en initialiseer het IVIS Spectrum-beeldvormingssysteem door op de knop 'initialize IVIS system' rechtsonder in het bedieningspaneel te klikken. Selecteer de luminescentie-imagingmodus linksboven in het bedieningspaneel om het optimale tijdstip voor de bioluminescentie-imaging te bepalen.Na de injectie van Lucifer bij het dier is het noodzakelijk om eerst een kinetische studie uit te voeren met het gesedeerde dier in de beeldvormingskamer. Neem de eerste afbeelding ongeveer vijf minuten na de Lucifer-injectie om een kinetische curve voor de Luciferase-expressie te genereren. Stel een sequentie in om elke drie minuten afbeeldingen te maken gedurende maximaal een uur.Klik op de knop voor de sequentie-instellingen in het bedieningspaneel. Specificeer in het bedieningspaneel de instellingen voor het eerste bioluminescente beeld in de sequentie, beginnend met medium binning en auto-exposure.Om de optimale belichting te bepalen, wordt een vertragingstijd aanbevolen. Selecteer de vertragingsknop in de sequentie-editor en specificeer een vertragingstijd van drie minuten tussen elke acquisitie. Klik op toevoegen in de sequentie-editor; de acquisitieparameters worden vervolgens aan de tabel toegevoegd.Herhaal deze stap voor elke afbeelding in de sequentie zodra de curve is vastgesteld. De optimale beeldvormingstijd kan worden bepaald door de signaalsterkte uit te zetten tegen de tijd om het sterkste en meest nauwkeurige signaal te verkrijgen. Dieren moeten worden gefotografeerd op het tijdstip van de hoogste in vivo fotonenaantal, wat ongeveer 25 minuten na de Luciferian-injectie is, zoals weergegeven door deze curve.Om het beeld van een proefdier vast te leggen, gebruikt u de auto-optie onder de acquisitietijd. Hiermee kan de software de bin en de optimale tijd voor het vastleggen van het beeld bepalen. Sla de programmabestanden en de daaropvolgende beeldcommentaren op in de computerdirectory van de gebruiker.Om te beginnen met de 3D-beeldvorming, gebruikt u de imaging wizard om de firefly reporter probe te selecteren. Selecteer in het bioluminescence delit-venster 'volgende', waarna er zes spectrale selecties op het scherm verschijnen die moeten worden verkregen; selecteer 'acquire sequence' zodat de beelden worden opgenomen met de respectieve instellingen onder het tabblad surface topography. Maskeer in het toolpalet de foto zodat deze past bij de omtrek van het dier.Om een gereconstrueerd raster van de oppervlaktetopografie van het dier te maken, gaat u naar het tabblad DLI 3D-reconstructie op het instrumentenpalet en selecteert u de juiste beeldopnames voor de signaalreconstructie. Zorg ervoor dat spiergelist is onder de weefseleigenschappen en vuurvlieg onder het bronspectrum. Klik op reconstrueren onder het tabblad analyseren; de 3D-reconstructie van het dieroppervlak en de bijbehorende reconstructie van de signaalbron moeten nu verschijnen.De data-analyse kan worden gestart nadat de afbeelding is vastgelegd en opgeslagen; open het programmadossier door op de knop bladeren te klikken en het bestand te selecteren. De afbeeldingsinformatie is terug te vinden onder afbeeldinginformatie bekijken. Kwantificeer de signaalintensiteit door de knop voor het selecteren van het interessegebied of ROI-tools te gebruiken.Zorg ervoor dat de afbeelding in de fotonmodus wordt geanalyseerd door foton te selecteren. Selecteer in de vervolgkeuzelijst in de linkerbovenhoek van het bedieningspaneel voor afbeeldingen de knop voor meet-ROI uit de typelijst en selecteer de gewenste ROI-vorm. De opties zijn cirkel, vierkant en/of raster.Stel de positie van de ROI in door de selectie van de ROI-vorm naar het gebied met het bioluminescentiesignaal te slepen. Zorg ervoor dat alle gebieden met intensiteit op de verkregen afbeelding worden gedekt. Klik ten slotte op de meetknop om de signaalintensiteit van de ROI te berekenen.Het ROI-label wordt weergegeven. De intensiteit van succesvolle celimplantatie is duidelijk wanneer geïmplanteerde cellen detecteerbaar zijn via bioluminescentie-imaging op de dag van de operatie, ongeacht of de cellen zijn getransfecteerd met het luck- of luck two-gen. Deze grafiek volgt de groei van GL 2 6 1 luck-tumorcellen in een albino C 57 black six-muis; bioluminescentie werd elke drie dagen gemeten en uitgezet als in vivo fotontelling versus dagen na implantatie.De foto's tonen bioluminescentie op verschillende tijdstippen. De kleur is een indicatie van de bioluminescentie, welke relatief is aan het aantal tumorcellen. Dieren worden geëuthanaseerd bij het optreden van ziekte of een verminderd welzijn.Hoewel het geen standaard onderdeel is van deze analyses, kan het brein worden gedisseceerd en kan Lucifer topisch worden toegevoegd om het ex vivo beeld te verkrijgen. Dit moet onmiddellijk na het offeren van het dier gebeuren, omdat de bioluminescentiereactie een TP vereist. Deze grafiek vergelijkt fotonenaantallen verkregen uit tumoren resulterend uit GL 2 6 1 lux-cellen versus GL 2 6 1 L two-cellen. De resultaten van gemiddeld vijf dieren tonen aan dat het L two-gen een hoger niveau van bioluminescentie verschaft.De volgende figuur toont meerdere aanzichten van een driedimensionale reconstructie van de intracraniale implantatie van GL 2 6 1 L twee cellen, gecoregistreerd met het skelet en de hersenen van de muis. Er werd ook een kinetische vergelijking uitgevoerd tussen subcutane en intraperitoneale injecties; drie minuten na de injectie van Lucifer werd de muis gesedeerd en elke drie minuten gefotografeerd gedurende een uur, en daarna elke zes minuten, om een kinetische curve van bioluminescentie te genereren. Zoals hier te zien is, is een subcutane route van Lucifer-toediening (in rood weergegeven) superieur aan een intraperitonele injectie (in zwart weergegeven), en de optimale tijd om de dieren te beelden is ongeveer 25 minuten na de Lucifer-injectie.Zodra de chirurgische techniek onder de knie is, kan deze in een uur worden uitgevoerd mits deze correct wordt toegepast. Na deze procedure kunnen andere methoden, zoals MRI of fluorescentie-imaging, worden uitgevoerd om aanvullende vragen te beantwoorden. Bijvoorbeeld of er oedeem rond de tumor aanwezig is of welke andere moleculaire of biochemische veranderingen er in en rond de tumor optreden.Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u een intracraniële implantatie en 3D in vivo beeldvorming van mire-gliomcellen uitvoert.

intracranial-implantation-with-subsequent-3d-vivo-bioluminescent

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Luciferase-gemodificeerd menselijk brein tumor xenotransplantaten kan intracranially worden vastgesteld athymische muizen, met de daaropvolgende controle van de tumorgroei en de respons op de therapie met behulp van bioluminescentie beeldvorming. In combinatie met survival analyse, bioluminescentie monitoring is een essentieel onderzoeksinstrument voor pre-klinisch testen van therapieën worden overwogen voor de behandeling van hersentumoren.

Tot vaststelling van Intracraniële hersentumor xenotransplantaten Met verdere analyse van de tumorgroei en de respons op de therapie met behulp van bioluminescentie Imaging

Bioluminescentie beeldvorming van hypoxie induceerbare factor-1α-activiteit wordt toegepast op intracraniale tumor hypoxie ontwikkeling in een borstkanker hersenmetastasen muismodel te controleren.

In vivo bioluminescentie van Tumor Hypoxie Dynamiek van Borstkanker hersenmetastasen in een muismodel

We beschrijven een geïntegreerde methode voor de exacte, stereotactische implantatie van menselijke glioblastoma multiforme cellen in de hersenen van muizen en vervolgens naakt...

Stereotactische Intracraniale Implantatie en<em&gt; In vivo</em&gt; Bioluminescent Imaging van tumorxenograften in een Muis Model Systeem van glioblastoma multiforme

Source: Clark, A.J., et al. Bioluminescence Imaging of an Immunocompetent Animal Model for Glioblastoma. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates bioluminescence imaging to track glioblastoma progression in an immunocompetent mouse model, using luciferase-expressing tumor cells and luciferin to quantify tumor growth non-invasively.

Bioluminescence Imaging of an Immunocompetent Mouse Model for Glioblastoma

We hebben een corticaal orthotope glioblastoom model vastgesteld muizen intravitale twee-foton microscopie dat de biofysische beperkingen recapituleert beginsel zullen spelen tijdens de groei van de tumor. Een chronische glazen venster vervangen van de schedel boven de tumor kan de follow-up van de progressie van de tumor na verloop van tijd door twee-foton microscopie.

Een orthotope Glioblastoma Muis Model Handhaving Brain Parenchymale fysieke beperkingen en geschikt voor intravitale twee-foton microscopie

GL261-glioomcellen bieden een bruikbaar immunocompetent diermodel van glioblastoom. De doelen van dit protocol zijn om de juiste technieken te demonstreren voor het monitoren van intracraniële tumorgroei met behulp van in vivo bioluminescentie-beeldvorming, en om de bruikbaarheid van luciferase-gemodificeerde GL261-cellen te verifiëren voor het bestuderen van tumorimmunologie en immunotherapeutische benaderingen voor de behandeling van glioblastoom.

Bioluminescentie beeldvorming van een Immunocompetente diermodel voor Glioblastoma

Orthotopic intracraniële injectie van tumorcellen wordt in kankeronderzoek te bestuderen hersenen tumor biologie, progressie en evolutie therapeutische respons uitgegaan. Hier presenteren we fluorescentie moleculaire tomografie van tumor xenografts, die biedt real-time intravital imaging en kwantificering van een tumor massa in preklinische glioblastoma modellen.

Fluorescentie moleculaire tomografie voor In Vivo Imaging van Glioblastoma Xenografts

Laser microdissectie (LMD) is een gevoelige en zeer reproduceerbare techniek die kan worden gebruikt om paden die glioom heterogeniteit en invasie te bemiddelen blootleggen. Hier beschrijven we een geoptimaliseerd protocol om discrete gebieden te isoleren van glioomweefsel met behulp van laser LMD, gevolgd door transcriptomische analyse.

Laser Capture Microdissection of Glioma Subregions for Spatial and Molecular Characterization of Intratumoral Heterogeneity, Oncostreams, and Invasion

We beschrijven de intraparenchymale transplantatie van menselijke neurale voorlopercellen getransduceerd met een dual reporter vector die luciferase-groen fluorescerend eiwit (GFP) in de hersenen van muizen tot expressie brengt. Na transplantatie wordt het luciferasesignaal herhaaldelijk gemeten met behulp van in vivo bioluminescentie en GFP-tot expressie brengende getransplanteerde cellen geïdentificeerd in hersensecties met behulp van fluorescentiemicroscopie.

Intracerebrale transplantatie en in vivo bioluminescentie tracking van menselijke neurale voorlopercellen in de hersenen van de muis

We presenteren een nieuwe benadering voor twee-fotonmicroscopie van de tumorafgifte van fluorescerend gelabelde ijzeroxide-nanodeeltjes aan glioblastoom in een muismodel.

Intravitale microscopie met twee fotonen van glioblastoom in een muizenmodel

Het doel van dit protocol is om onderzoekers een zeer reproduceerbare techniek te bieden voor intracraniële implantaties.

Stereotactische intracraniële implantatie van door de patiënt afgeleide xenograftcellijnen van de glioblastoom bij muizen

Leer intracraniële implantatie van GL261-gliomacellen in muizen met 3D bioluminescentiebeeldvorming. Deze methode maakt kwantitatieve monitoring van tumorprogressie in vivo mogelijk voor neuro-oncologisch onderzoek.

Intracraniële Implantatie met Latere 3D In Vivo Bioluminescent Imaging van Murine Gliomen

Meer video's verkennen