Name: Diagnose van longtuberculose met de Xpert MTB / RIF Test (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-09T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 10 s
Description: Leer de Xpert MTB/RIF-test voor snelle diagnose van longtuberculose en rifampicineresistentie in sputummonsters. Deze PCR-gebaseerde methode levert resultaten binnen twee uur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs erkennen WJ Looney voor nauwkeurig onderzoek van het manuscript.

Standaard 2 van de internationale normen voor tuberculose Care stelt dat alle patiënten met verdenking van het hebben van pulmonale tuberculose moeten ten minste twee sputum monsters voor bacteriologisch onderzoek in te dienen. Indien mogelijk, moet ten minste een 's morgens vroeg exemplaar worden verkregen, zoals sputum verzameld op dit moment heeft de hoogste opbrengst. 11 De Xpert MTB / RIF-test kan worden toegepast op sputum monsters of geconcentreerde sputum sedimenten bereid uit geïnduceerde of expectorated sputa die . ofwel zuurvaste bacillen (AFB) uitstrijkje positief of negatief 6, 12, 13 De test is bedoeld voor gebruik met specimens van patiënten voor wie er klinische verdenking van pulmonale TB die: 1) niet ontvangen anti-tuberculose therapie, 2 ) had &lt;7 dagen van de therapie, of 3) niet ontvangen therapie in de laatste 60 dagen. Vergeet niet dat het niet mag worden gebruikt voor het bewaken van de effecten van de therapie 7 omdat bacterieel DNA zou kunnen blijven bestaan ​​na antimicrobiële therapie. <pclass behandel klinische monsters met inbegrip van gebruikte cartridges alsof die in staat overdracht infectieuze agentia. gebruik de juiste voorzorgsmaatregelen zoals het dragen beschermende wegwerphandschoenen laboratorium-jassen en oogbescherming volg uw instelling veiligheid procedures richtlijnen.> 1. Opgehoest sputum monsters Let op: Proces slechts zoveel exemplaren in een keer, want er zijn GeneXpert DX-systeem modules beschikbaar voor de test uit te voeren! <ol><li> Label elke Xpert MTB / RIF cartridge met de bijbehorende monster ID. </li><li> Breng 1,0 ml opgehoest sputum tot een conische, buisje met schroefdeksel behulp van een steriele transferpipet. Als alternatief kan het gehele monster worden verwerkt in de oorspronkelijke lekvrije sputum verzamelhouder. </li><li> Voeg 2,0 ml Xpert MTB / RIF Sample Reagens (2:1, v / v) aan de opgehoest sputum met behulp van een steriele transferpipet. </li><li> Plaats het deksel en schud de buis krachtig 10-20 Tijden. Ook kan het mengsel worden gewerveld (30 sec). </li><li> Laat de buis rechtop staan ​​gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur. </li><li> Schud de buis krachtig 10-20 keer. U kunt ook een vortex (30 sec). </li><li> Laat de buis rechtop staan ​​nog 10 min bij kamertemperatuur. </li><li> Inspecteer de monsters: monsters dienen te worden vloeibaar gemaakt zonder zichtbare bosjes van het sputum. </li></ol> 2. Geconcentreerde Sedimenten Let op: Proces slechts zoveel exemplaren in een keer want er zijn GeneXpert DX-systeem modules ter beschikking van de tests uit te voeren! <ol><li> Label elke Xpert MTB / RIF cartridge met de bijbehorende monster ID. </li><li> Breng 1,5 ml Xpert MTB / RIF Sample reagens tot een conische, buisje met schroefdeksel behulp van een steriele transferpipet. </li><li> Voeg ten minste 0,5 ml geconcentreerde sediment naar de Sample Reagens met buis met behulp van een steriele transferpipet. </li><li> Plaats het deksel, en schud de buis vigorously 10-20 maal. U kunt ook een vortex (30 sec). </li><li> Laat de buis rechtop staan ​​gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur. </li><li> Schud de buis krachtig 10-20 keer. U kunt ook een vortex (30 sec). </li><li> Laat de buis rechtop staan ​​nog 10 min bij kamertemperatuur. </li><li> Inspecteer de monsters: monsters dienen te worden vloeibaar gemaakt zonder zichtbare bosjes van het sputum. </li></ol> 3. Het laden van de Xpert MTB / RIF Cartridge Let op: Start de test binnen 30 minuten na toevoeging van het monster aan de patroon! <ol><li> Controleer de etiketten op de Xpert MTB / RIF cartridge en het monster-ID. </li><li> Open het cartridge deksel. </li><li> Met behulp van het bijgeleverde transferpipet, aspireer het vloeibaar monster in de transferpipet totdat de meniscus is boven het minimum merk en overdracht van het monster in de open poort van de Xpert MTB / RIF cartridge. </li></ol> Opmerking:Breng langzaam het risico van aërosolvorming minimaliseren! <ol start="4"><li> Sluit de patroonhouder deksel. </li></ol> 4. Het starten van de test Opmerking: Voordat de test begint, ervoor zorgen dat de GeneXpert DX-systeem is uitgerust met de GX2.1 software, en de Xpert MTB / RIF-test wordt geïmporteerd in de software 9! <ol><li> Zet de computer aan en schakel de GeneXpert Dx instrument. </li><li> Op het Windows-bureaublad, dubbelklikt u op het GeneXpert Dx snelkoppeling. </li><li> Meld u aan bij de GeneXpert DX-systeem software met behulp van uw gebruikersnaam en wachtwoord. </li><li> In de GeneXpert DX-systeem venster, klikt u op Test. De Scan Cartridge Barcode dialoogvenster verschijnt. </li><li> In de Sample ID box, scannen of typ het monster ID. </li><li> Scan de barcode op de Xpert MTB / RIF cartridge. Het aanmaken Test-venster verschijnt. </li><li> Klik op Start Test </li><li> Open het instrument module deur met het knipperen van het groene licht, en laad de cartridge. </li><li> Sluit de deur. De test wordt gestart en het lampje stopt met knipperen en blijft continu groen. Wanneer de test klaar is, het lampje uit. </li><li> Wacht tot het systeem vrijgeeft het deurslot aan het eind van de run, dan opent u de module en verwijder de cartridge. </li><li> Gooi de gebruikte cartridges in de daarvoor bestemde afvalcontainers op basis van uw instelling standaard praktijken. </li></ol> 5. Representatieve resultaten Elke Xpert MTB / RIF patroon omvat reagentia voor het aantonen van MTB complex RIF weerstand en een monster verwerking (SPC) te controleren voldoende verwerking van het doel bacteriën en de aanwezigheid van inhibitor (s) monitoren van de PCR reactie . De Probe Check Control (PCC) controleert reagens rehydratie, PCR buis in te vullende cartridge probe integriteit en kleurstof stabiliteit. 9 primers in het Xpert MTB / RIF assay amplificeren een deel van de rpoB gen dat de 81 basenparen "kern" gebied. Vijf verschillend gekleurde fluorogene nucleïnezuur hybridisatie probes, de zogenaamde moleculaire bakens, ondervragen de hele 81-bp kern. 14 Elk moleculair beacon is ontworpen om zo specifiek dat het niet binden aan zijn doel als de doelsequentie verschilt van de wild-type rpoB sequentie met slechts een nucleotide substitutie. Aangezien moleculaire bakens fluorescentie alleen wanneer zij gebonden zijn aan hun doelen, namelijk wild-type sequentie rpoB het ontbreken van een van de vijf kleuren in de assay onderscheid tussen wild-type geconserveerde sequentie en mutaties in het kerngebied die geassocieerd zijn met RIF weerstand 6. De SPC moet positief zijn in een negatieve monster en kan negatief of positief zijn in een positief monster. De testresultaat zal zijn "Invalid" als de SPC wordt niet gedetecteerd in een negatieve test. Voor de start van de PCR reactie, de GeneXpert Dx meet de fluorescentiesignaal van de probes te controleren kraal rehydratatie, reactie-buis vulling probe integriteit en kleurstof stabiliteit. De PCC passeert wanneer het fluorescentiesignaal van de probes aan de toegewezen acceptatiecriteria. De resultaten worden geïnterpreteerd door de GeneXpert DX-systeem van de gemeten fluorescentie-signalen en embedded algoritmen en worden weergegeven in het venster 9 Bekijk de resultaten, zoals hieronder aangegeven: MTB gedetecteerd: MTB target-DNA wordt gedetecteerd, beide controles, SPC en PCC, voldoen aan de toegewezen acceptatiecriteria. Lagere Ct-waarden vertegenwoordigen een hogere beginconcentratie van DNA-template; hogere Ct-waarden vertegenwoordigen een lagere concentratie van DNA-template. In MTB GEDETECTEERD resultaten "RIF Resistance gedetecteerd" (Figuur 1A), "RIF Resistance niet mogelijk" ( MTB Niet gedetecteerd: MTB target-DNA wordt niet herkend, beide controles, SPC en PCC, voldoen aan de criteria voor acceptatie toegewezen (figuur 2). Ongeldig: Aanwezigheid of afwezigheid van MTB niet kan worden bepaald: SPC voldoet niet aan de criteria voor acceptatie, dat wil zeggen de steekproef niet goed is verwerkt, of PCR werd geremd (figuur 3). Opmerking: Herhaal de test met extra exemplaar! Fout: een of meer van de PCC resultaten mislukt (FAIL). Zowel de MTB en SPC weer te geven geen resultaat. Opmerking: Herhaal de test met extra exemplaar! Als de PCC gepasseerd (PASS), wordt de fout veroorzaakt door een systeem van componenten tot gevolg. Figuur 1: MTB target-DNA wordt gedetecteerd, beide controles, SPC en PCC, voldoen aan de toegewezen acceptatiecriteria. Lagere Ct-waarden vertegenwoordigen een hogere startconcentratie van DNA-template en een hoger Ct-waarden geven een lagere concentratie van DNA-template. In MTB GEDETECTEERD resultaten "RIF Resistance niet mogelijk" (Figuur 1A), "RIF Resistance gedetecteerd" (Figuur 1B), of "RIF Resistance ONBEPAALDE" wordt weergegeven op een aparte regel. <img alt="Figuur 1A" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig1A.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figuur 1A"> . Figuur 1A MTB gedetecteerd; RIF Resistance niet wordt gevonden, dat wil zeggen alleen de wild-type nucleïnezuursequentie van de 81-bp RIF-resistentie-bepalend gebied (RRDR) van de rpoB gen aanwezig was 6. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3547/3547fig1A.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere afbeelding te bekijken</a> . <img alt="Figuur 1B" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig1B.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figuur 1B"> . Figuur 1B MTB gedetecteerd; RIF Resistance DETECTED. Compleet uitvallen van Probe B (pijl), die betrekking heeft op de posities 513 tot 517 van de R RDR van de rpoB gen. 6 In het voorbeeld, gedeeltelijke sequentie bleek dat de rpoB genmutatie D516V werd ontdekt. ​​8 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3547/3547fig1Blarge.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere afbeelding te bekijken</a> . <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2 MTB-doel-DNA is niet aangetroffen;.. Beide knoppen, SPC en PCC, voldoen aan de toegewezen acceptatiecriteria <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3547/3547fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere afbeelding te bekijken</a> . <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig3.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figuur 3"> . Figuur 3 ongeldig resultaat, namelijk aanwezigheid of afwezigheid van MTB kan worden bepaald: SPC niet aan acceptatiecriteria, omdat het monster niet goed verwerkt, of omdat PCR werd geremd.3547fig3large.jpg "target =" _blank "&gt; Klik hier voor een grotere afbeelding weer te geven. </pclass>

<ol><li>Sudre, P., Dam, ten, Chan, G., C,, Kochi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuberculosis+in+the+present+time%3A+a+global+overview+of+the+tuberculosis+situation%5BTitle%5D)+AND+%22World+Health+Organisation+Document+WHO%2FTUB%2F91%22%5BJournal%5D)">Tuberculosis in the present time: a global overview of the tuberculosis situation.</a> World Health Organisation Document WHO/TUB/91. 158, 1-47 (1991).</li>
<li>World Health Organisation. Global tuberculosis control: epidemiology, strategy, financing. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22WHO+report+2010%22">WHO report 2010</a>. , (2010).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22The+global+plan+to+stop+TB%2C+2006-2015%22">The global plan to stop TB, 2006-2015</a>. , World Health Organization. Geneva. (2006).</li>
<li>Morris, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+multiple+drug+resistance+in+clinical+isolates+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of multiple drug resistance in clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis.</a> J. Infect. Dis. 171, 954-960 (1995).</li>
<li>Traore, H., Fissette, K., Bastian, I., Devleeschouwer, M., Portaels, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+rifampicin+resistance+in+Mycobacterium+tuberculosis+isolates+from+diverse+countries+by+a+commercial+line+probe+assay+as+aninitial+indicator+of+multidrug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Tuberc.+Lung+Dis%22%5BJournal%5D)">Detection of rifampicin resistance in Mycobacterium tuberculosis isolates from diverse countries by a commercial line probe assay as aninitial indicator of multidrug resistance.</a> Int. J. Tuberc. Lung Dis. 4, 481-484 (2000).</li>
<li>Helb, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Detection+of+Mycobacterium+tuberculosis+and+Rifampin+Resistance+by+Use+of+On-Demand+Near-Patient+Technology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid Detection of Mycobacterium tuberculosis and Rifampin Resistance by Use of On-Demand Near-Patient Technology.</a> J. Clin. Microbiol. 48, 229-237 (2010).</li>
<li>Blakemore, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+Analytical+Performance+of+the+Xpert+MTB%2FRIF%5BTitle%5D)+AND+%22Assay.+J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the Analytical Performance of the Xpert MTB/RIF.</a> Assay. J. Clin. Microbiol. 48, 2495-2501 (2010).</li>
<li>Telenti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+rifampicin-resistance+in+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Detection of rifampicin-resistance in Mycobacterium tuberculosis.</a> Lancet. 341, 647-650 (1993).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22GeneXpert+Dx+System+Operator+Manual%22">GeneXpert Dx System Operator Manual</a>. , Cepheid Inc. Sunnyvale, CA, USA. (2011).</li>
<li>Foundation for new innovative diagnostics [Internet]. , Geneva, Switzerland. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.finddiagnostics.org/about/what_we_do/successes/find-negotiated-prices/xpert_mtb_rif.html">http://www.finddiagnostics.org/about/what_we_do/successes/find-negotiated-prices/xpert_mtb_rif.html</a> (2011).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22International+Standards+for+Tuberculosis+Care+%28ISTC%29%22">International Standards for Tuberculosis Care (ISTC)</a>. , Tuberculosis Coalition for Technical Assistance. The Hague. (2009).</li>
<li>Boehme, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Molecular+Detection+of+Tuberculosis+and+Rifampin+Resistance%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Rapid Molecular Detection of Tuberculosis and Rifampin Resistance.</a> N. Engl. J. Med. 363, 1005-1015 (2010).</li>
<li>Marlowe, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+Cepheid+Xpert+MTB%2FRIF+assay+for+the+Direct+Detection+of+Mycobacterium+tuberculosis+Complex+from+Respiratory+Specimens%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the Cepheid Xpert MTB/RIF assay for the Direct Detection of Mycobacterium tuberculosis Complex from Respiratory Specimens.</a> J. Clin. Microbiol. 49, 1621-1623 (2011).</li>
<li>El-Hajj, H. H., Marras, S. A. M., Tyagi, S., Kramer, F. R., Alland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+rifampin+resistance+in+Mycobacterium+tuberculosis+in+a+single+tube+with+molecular+beacons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Detection of rifampin resistance in Mycobacterium tuberculosis in a single tube with molecular beacons.</a> J. Clin. Microbiol. 39, 4131-4137 (2001).</li>
<li>Hillemann, D., Ruesch-Gerdes, S., Boehme, C., Richter, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+molecular+detection+of+extrapulmonary+tuberculosis+by+automated+GeneXpert+MTB%2FRIF+system%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid molecular detection of extrapulmonary tuberculosis by automated GeneXpert MTB/RIF system.</a> J. Clin. Microbiol. 49, 1202-1205 (2011).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De Xpert MTB / RIF assay integreert monster ontsmetting, hands-free bediening, on-board steekproef verwerking, en ultra-gevoelige hemi-geneste PCR voor de simultane detectie van MTB en RIF weerstand, zowel in opgehoest sputum of geconcentreerde sedimenten, in een enkel , eenvoudig te gebruiken systeem. De test De analytische detectielimiet bleek 131 CFU / ml van sputum. 6 log-lineaire relatie tussen Ct waarden en het aantal cellen aanwezig MTB geldt van 10 februari-10e juli CFU / ml van sputum. Als klinisch relevante MTB concentraties vallen allemaal binnen het lineaire gebied van de test, de test biedt semi-kwantitatieve schattingen van de bacteriële verontreiniging. 7 De test vereist slechts een matige laboratorium infrastructuur en opleiding. De detectiegrens ligt ten minste twee grootte-ordes kleiner dan die van conventionele microscopie. 6 specificiteit is uitstekend. Verder is de gelijktijdige detectie van RIF-resistant MTB is een significant voordeel in de setting van point-of-care testen in het tijdperk van resistente TB. 3 Als u alleen een beperkte gepubliceerde gegevens over de prestaties van de test voor de diagnose van pulmonale tuberculose in klinische settings op heden zijn beschikbaar 12;. 13 De Xpert MTB / RIF test de algemene klinische gevoeligheid van het opsporen van MTB in het sputum van patiënten met verdenking op longtuberculose was 97,6% in vergelijking met de cultuur als referentie. Dit waren de resultaten van een prospectief multi-center studie dat vijf studiegebieden (Lima, Peru, Baku, Azerbeidzjan, Kaapstad &amp; Durban, Zuid-Afrika, Mumbai, India) die betrokken zijn en een totaal van 1462 patiënten. De totale pre-test waarschijnlijkheid van cultuur bevestigde tuberculose in de studiepopulatie was 50,7%. De gevoeligheid was 99,8% voor het uitstrijkje-en cultuur-positieve gevallen en 90,2% voor de smear-negatieve, cultuur-positieve gevallen. Onder hiv-positieve patiënten met pulmonale tbc, de gevoeligheid van de MTB / RIF test was 93,9%, in vergelijking met 98,4% in. HIV-negatieve patiënten van 12 In een omgeving van lage tbc-prevalentie, de algemene overeenkomst voor het opsporen van MTB was 89% in vergelijking met de cultuur, de sensitiviteit was 98% voor smear-positieve en 72% voor smear-negatieve monsters, respectievelijk, en de specificiteit was uitstekend. 13 Er was geen significant verschil in gevoeligheid tussen de tests op onbehandeld sputum en die op geconcentreerde sediment. 12 In dezelfde studie, de MTB / RIF test correct gedetecteerd RIF weerstand in 209 van de 211 patiënten (99,1% gevoeligheid) en in alle 506 patiënten met RIF gevoeligheid (100% specificiteit), toen sequencing resultaten werden in aanmerking genomen. 12 De auteurs ontdekten dat de prestaties zowel voor de detectie, en discriminatie van RIF verzet, was vergelijkbaar in diverse sites, wat suggereert dat de bevindingen waarschijnlijk zijn breed toepasbaar. 12 Bovendien, geconcentreerde sedimenten van respiratoire specimens die geen sputum, zoals broncho-alveolaire lavage en luchtwegenl afscheidingen, werden getest met een vergelijkbare gevoeligheid en specificiteit. 13 Gegevens over de prestaties van de test van de bij het ​​testen van extra-pulmonaire tuberculose is in opkomst. 15 Global TB controle heeft dringend behoefte aan doeltreffende instrumenten die een snelle diagnose van nieuwe tbc-gevallen en de opsporing van RIF-resistente MTB in de universele-toegang mogelijk point-of-care-instellingen. 3 Huidige nucleïnezuuramplificatie methoden die worden gebruikt om MTB te detecteren zijn complex, arbeidsintensief, en technisch veeleisend. De Xpert MTB / RIF-test heeft de potentie om gestandaardiseerde, gevoelig en zeer specifieke diagnostische testen te brengen voor zowel TB en resistentie tegen deze instellingen, op voorwaarde dat zij in staat zullen zijn om dit te bekostigen. Om de toegang te vergemakkelijken, heeft de Stichting voor Innovatief New Diagnostics (FIND) onderhandeld over aanzienlijke prijsverlagingen voor de Xpert MTB / RIF test. De huidige FIND-onderhandelingen vastgestelde prijzen, samen met de lijst van landen in aanmerking komen voor de kortingen, zijn beschikbaar op het web. 10 </sup&gt;

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens / Equipment </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> Xpert MTB / RIF-test </td><td> Cepheid </td><td> GXMTB/RIF-10 </td></tr><tr><td> Transfer pipetten </td><td> Sarstedt </td><td> 86.1172.001 </td></tr><tr><td> Conisch 15 ml, 120 x 17 mm, PS </td><td> Sarstedt </td><td> 62.553.542 </td></tr></tbody></table>

diagnose van longtuberculose met de xpert mtb / rif test

Diagnosing Pulmonary Tuberculosis with the Xpert MTB/RIF Test

Tuberculose (TB) veroorzaakt door Mycobacterium tuberculosis (MTB) blijft een belangrijk probleem voor de volksgezondheid: de infectie beïnvloedt tot een derde van de wereldbevolking 1, en ​​bijna twee miljoen mensen zijn gedood door TB elk jaar 2 Universele toegang tot hoge kwaliteit. , patiënt-gerichte behandeling van alle tbc-patiënten wordt benadrukt door de WHO Stop TB-strategie. 3 De snelle detectie van MTB in respiratoire monsters en medicamenteuze behandeling op basis van betrouwbare resistentietest resultaten zijn een voorwaarde voor de succesvolle implementatie van deze strategie. Echter, in veel gebieden van de wereld, TB diagnose steunt nog steeds op ongevoelig, slecht gestandaardiseerde sputum microscopie methoden. Niet effectief TB detectie en het ontstaan ​​en de overdracht van resistente stammen in toenemende mate in gevaar brengen MTB wereldwijde tbc-bestrijding activiteiten. 2 Een efficiënte diagnose van pulmonaire TB vereist de beschikbaarheid - op wereldschaal - van standardized, gemakkelijk te gebruiken, en robuuste diagnostische instrumenten die de directe detectie van zowel de MTB-complex en resistentie tegen belangrijke antibiotica, zoals rifampicine (RIF) mogelijk zou maken. Dit laatste resultaat kan als marker dienen voor multiresistente MTB (MDR TB) en is gemeld bij&gt; 95% van de MDR-TB-isolaten. 4, 5 De snelle beschikbaarheid van betrouwbare testresultaten waarschijnlijk direct te vertalen in geluid behandeling van de patiënt beslissingen te nemen die, uiteindelijk, zal de individuele patiënt te genezen en breek de keten van TB transmissie in de gemeenschap. 2 Cepheid&#39;s (Sunnyvale, CA, USA) Xpert MTB / RIF-test 6, 7 voldoet aan de eisen hierboven beschreven op een opmerkelijke wijze. Het is een nucleïne-zuren versterking test voor 1) het opsporen van MTB complexe DNA in het sputum of geconcentreerde sputum sedimenten, en 2) de detectie van RIF-resistentie geassocieerde mutaties van de rpoB gen 8 Het is ontworpen voor gebruik met Cepheid&#39;s GeneXpert Dx. Systeem eop integreert en automatiseert steekproef verwerking, nucleïnezuuramplificatie, en detectie van de doelsequenties met behulp van real-time PCR en reverse transcriptase PCR. Het systeem bestaat uit een instrument, personal computer, barcode scanner en voorgeladen software voor het uitvoeren van tests en het bekijken van de resultaten. 9 Er werken voor eenmalig gebruik disposable Xpert MTB / RIF cartridges die PCR-reagentia te houden en gastheer van de PCR-proces. Omdat de cartridges zijn op zichzelf staande, wordt kruisbesmetting tussen de monsters geëlimineerd. 6 Huidige nucleïnezuuramplificatie methoden die worden gebruikt om MTB te detecteren zijn complex, arbeidsintensief, en technisch veeleisend. De Xpert MTB / RIF-test heeft de potentie om gestandaardiseerde, gevoelig en zeer specifieke diagnostische testen te brengen voor zowel TB en resistentie tegen de universele-access point-of-care-instellingen 3, op voorwaarde dat zij in staat zullen zijn om dit te bekostigen. Om de toegang te vergemakkelijken, heeft de Stichting voor Innovatief New Diagnostics (FIND) onderhandeld over aanzienlijkcant prijsverlagingen. De huidige FIND-onderhandelingen vastgestelde prijzen, samen met de lijst van landen in aanmerking komen voor de kortingen, zijn beschikbaar op het web. 10

De Xpert MTB / RIF-test integreert monster ontsmetting, hands-free bediening, on-board steekproef verwerking, en ultra-gevoelige hemi-geneste PCR voor de simultane detectie van<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; En rifampicine weerstand, zowel in opgehoest sputum of geconcentreerde sputum sedimenten, in ongeveer twee uur. Testen is gestandaardiseerd en vereist slechts een matige laboratorium infrastructuur en opleiding.

Diagnose van longtuberculose met de Xpert MTB / RIF Test

Tuberculose (TB), veroorzaakt door Mycobacterium tuberculosis (MTB), blijft een belangrijk volksgezondheidsprobleem: de infectie treft tot een derde van de wereldbevolking ...

Het algemene doel van deze procedure is om binnen twee uur gelijktijdig mycobacterium, tuberculosis en rifampicine-resistentie aan te tonen in opgehoest sputum of geconcentreerde sputumsedimenten. Begin met een eenvoudig, zeer effectief protocol voor de descontaminatie van de monsters. Breng vervolgens elk bewerkt monster over naar een wegwerp-expert M-T-B-R-I-F cartridge voor eenmalig gebruik, waarin de PCR-reagentia zitten en waar het PCR-proces plaatsvindt.Plaats de cartridges in een gene expert DX-systeem en start de ultra-gevoelige HEMI-nested PCR voor de gelijktijdige detectie van Mycobacterium tuberculosis en rifampicine-resistentie. Lees ten slotte de testresultaten af en rapporteer deze aan de arts. De expert MTPR-assay is bedoeld voor gebruik met monsters van patiënten bij wie een klinisch vermoeden is van pulmonale tuberculose en die voldoen aan de criteria zoals beschreven in de begeleidende tekst.Let op dat dit niet gebruikt mag worden voor het monitoren van de effecten van een medicamenteuze therapie. Kristal. Een technicus uit mijn laboratorium zal nu het protocol demonstreren volgens standaard twee van de internationale standaarden voor tuberculosezorg. Neem twee monsters af voor bacteriologisch onderzoek bij elke patiënt met een vermoeden van pulmonale tb.Wijs één GeneXpert DX-systeemmodule toe voor elk testmonster en label elke cartridge met het monster-id. Breng vervolgens voor elke monsteranalyse één milliliter sputum over naar een conische schroefbuis van 15 milliliter met een andere steriele transferpipet. Voeg twee milliliter M-T-B-R-I-F monsterreagens toe.Sluit het dopje stevig. Schud de buis 10 tot 20 keer. Laat de buis vervolgens vijf minuten rechtop staan bij kamertemperatuur na het stevig schudden van de buis.Equilibreer opnieuw gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Controleer of alle monsters ED zijn zonder zichtbare klonters sputum. Label eerst de cartridges met het monster-ID van elk sputumsedimentmonster. Voeg aan elk sedimentmonster 1,5 milliliter M-T-B-R-I-F monsterreagens toe en breng 0,5 milliliter over naar een conische schroefnaadbuis van 15 milliliter. Plaats het deksel terug, vortex gedurende 30 seconden en zet de buis vijf minuten rechtop na een tweede keer.Meng de monsters met een vortexmixer en laat de buisjes 10 minuten rechtop staan. Inspecteer de vloeibare monsters om te controleren of er geen klonten sputum meer aanwezig zijn. Koppel het label op de buisjes aan de overeenkomstige cartridges.Open de cartridge pas wanneer u klaar bent om de test uit te voeren en gebruik de cartridge binnen 30 minuten na het openen van het cartridgedeksel. Aspireer met de steriele transferpipet het vloeibare monster totdat de meniscus boven de minimummarkering staat. Laad het monster langzaam in de cartridge.Sluit het deksel van de cartridge. Start de test binnen 30 minuten na het toevoegen van het monster aan de cartridge. Schakel eerst de computer in en daarna het instrument op het bureaublad.Dubbelklik op het gene expert DX-icoon. Log in op de systeemsoftware. Selecteer 'create test' om het dialoogvenster voor het scannen van de barcode van de cartridge te openen.Typ vervolgens de monster-ID in en scan de barcode op de cartridge. Wanneer het venster voor het aanmaken van de test verschijnt, klikt u op 'start test' en voert u het wachtwoord in het dialoogvenster in. Open nu de deur van de instrumentmodule en plaats de cartridge.Sluit de deur om de test te starten. Wanneer het groene licht uitgaat, is de test voltooid. Zodra het systeem de deurvergrendeling ontgrendelt, opent u de deur van de module en verwijdert u de cartridge.Voer tot slot de gebruikte cartridges af in de juiste afvalbakken. Elke testcartridge bevat reagentia voor QPCR van rifampicine-resistentie van het Mycobacterium tuberculosis complex, evenals de passende experimentele controles. De probe check-controle verifieert de rehydratie van de reagentia, het vullen van de PCR-buis in de cartridge, de integriteit van de probe en de stabiliteit van de kleurstof.De monsterverwerkingscurve dient als positieve controle voor de adequate verwerking van de doelbacteriën en geeft tevens de aanwezigheid van eventuele PCR-inhibitoren aan. De primers zijn ontworpen om onderscheid te maken tussen de geconserveerde wildtype-sequentie en mutaties in de kernregio van het RPOB-gen die geassocieerd zijn met RIF-resistentie. De CT-waarden zijn omgekeerd proportioneel aan de concentratie van het doel-M-T-B-D-N-A-sjabloon in het testmonster.Het dialoogvenster met het testresultaat concludeert dat het MTB-doel-DNA is gedetecteerd en dat RIF-resistentie niet is gedetecteerd in dit patiëntmonster. Het MTB-doel-DNA is in lage concentraties gedetecteerd met een indicatie van rifampicine-resistentie. Beide controles, SPC en PCC, voldoen aan de vastgestelde acceptatiecriteria.Dit assayresultaat wordt als ongeldig beschouwd omdat de SPC negatief is en PCR-producten afwezig zijn. Ofwel het monster is niet correct verwerkt, of de PCR is geremd. Herhaal de assay.Zoals u in de video heeft gezien, is de test gestandaardiseerd en vereist deze slechts een matige laboratoriuminfrastructuur en training. Daarom ben ik van mening dat de expert M-T-B-R-F assay het potentieel heeft om gestandaardiseerde, sensitieve en zeer specifieke diagnostische tests voor zowel tuberculose als rifampicine-resistentie toegankelijk te maken in universele point-of-care settings.

diagnosing-pulmonary-tuberculosis-with-the-xpert-mtbrif-test

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

De microscopische observatie-drug-gevoeligheid (MODS) test is een low-cost, low-tech tool voor high-performance detectie van tuberculose (TB) en multiresistente tuberculose (MDRTB). Deze video beschrijft de MODS vloeistof mediacultuur methode.

De MODS methode voor de diagnose van tuberculose en multidrug-resistente tuberculose

Antimicrobiële gevoeligheid testen van Mycobacterium tuberculosis is een uitdaging, maar essentieel voor de patiëntenzorg. Dit microtiterplaat formaat biedt het testen van 12 antimycobacteriële drugs en zorgt voor minimale remmende concentratie (MIC) waarden, die zal helpen bij een passende behandeling.

Antimicrobiële gevoeligheid testen van Mycobacterium tuberculosis-complex voor de eerste en tweede lijn drugs door de bouillon verdund in een microtiterplaat Format

This video demonstrates a technique for the detection of extrapulmonary tuberculosis. Superparamagnetic iron oxide (SPIO) nanoprobes, conjugated to Mycobacterium-specific antibodies, are injected into a mouse previously infected with Mycobacterium bovis BCG, labeling the granuloma and providing a better imaging contrast for its detection.

A Technique to Detect Extrapulmonary Tuberculosis via Superparamagnetic Nanoprobes

Een amplificatie microarray combineert asymmetrische PCR-amplificatie en microarray hybridisatie in een enkele kamer, die aanzienlijk stroomlijnt microarray workflow voor de eindgebruiker. Vereenvoudiging microarray workflow is een noodzakelijke eerste stap voor het maken van microarray-gebaseerde diagnostiek die routinematig kan worden gebruikt in een lagere-resource-omgevingen.

Aantonen van een multiresistente<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Versterking Microarray

Om de serologische diagnostische tests voor Mycobacterium tuberculoseantigenen te verbeteren, ontwikkelden we superparamagnetische ijzeroxide nanoprobes om extrapulmonale tuberculose op te sporen.

Synthese, karakterisering en toepassing van superparamagnetische ijzeroxide nanosondes voor detectie van extrapulmonale tuberculose

We beschrijven een tuberculose moleculaire bacteriële load test uitgevoerd na warmte-inactivatie van sputum. Warmteinactivatie maakt sputummonsters niet-besmettelijk en voorkomt de noodzaak van containmentniveau 3-laboratoria voor moleculaire tests op tuberculose.

A Tuberculosis Molecular Bacterial Load Assay (TB-MBLA)

We presenteren een geoptimaliseerde methode voor DNA-extractie uit ontsmet sputum met behulp van een matrix-gebaseerde extractiemethode in combinatie met een magnetische parelzuivering voor downstream gerichte next-generation sequencing van Mycobacterium tuberculosis.

Matrix-gebaseerde DNA-extractie voor gerichte sequencing van de volgende generatie op ontsmette sputummonsters

Mycobacterium tuberculosis vormt drug tolerant biofilms wanneer gekweekt in bepaalde omstandigheden. Hier beschrijven werkwijzen voor het kweken M. tuberculose biofilms en het bepalen van de frequentie van de drug tolerante persisters. Deze protocollen zullen nuttig zijn voor verdere studies naar de mechanismen van tolerantie in M. tuberculose.

Groei Mycobacterium tuberculosis Biofilms

Een specifieke en snelle protocol tegelijkertijd onderzoeken juiste hartfunctie, longontsteking en de immuunrespons wordt beschreven als leermiddel. Video en cijfers beschrijven fysiologie en microdissectie technieken in een georganiseerd team-aanpak die aanpasbaar is om te worden gebruikt voor kleine tot grote studies.

Rechter ventrikel systolische druk Metingen in combinatie met Harvest van Lung en Immune weefselmonsters in Muizen

Tuberculose en malaria zijn twee van de meest voorkomende infecties bij mensen en de belangrijkste oorzaken van morbiditeit en mortaliteit in arme bevolking in de tropen. Wij vestigden een experimenteel model systeem om resultaten van malaria-tuberculose co-infectie te bestuderen in muizen na challenge met beide ziekteverwekkers via hun natuurlijke route van infectie.

Een experimenteel model om te studeren Tuberculose-Malaria Coinfection op Natuurlijke Transmissie van Mycobacterium tuberculosis En Plasmodium berghei</i

Leer de Xpert MTB/RIF-test voor snelle diagnose van longtuberculose en rifampicineresistentie in sputummonsters. Deze PCR-gebaseerde methode levert resultaten binnen twee uur.

Diagnose van longtuberculose met de Xpert MTB / RIF Test

Meer video's verkennen