Name: Intravitale Microscopie van de milt: Kwantitatieve Analyse van Parasite Mobiliteit en Blood Flow (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 36 s
Description: Leer intravitale microscopie van de milt om parasietmobiliteit en bloedstroom te kwantificeren bij muizen met GFP-transgene malariaparasieten. Deze methode vergelijkt dynamiek tussen stammen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We zijn bijzonder dankbaar dat S. en V. Graewe Heussler voor de initiële opleiding en permanente input in intravitale microscopie van malariaparasieten, aan J. Burns voor het doneren van GFP transgene parasieten, aan A. Bosch (Confocale Unit, CCIT-UB, IDIBAPS) voor hulp bij beeldanalyse en kwantificering en aan P. Astola voor technische ondersteuning. Wij danken R. Tous en I. Caralt voor video productie. MF is een ontvanger van een afgestudeerde beurs van de algemeenheid van Catalonië. HAP is een ICREA research professor. Werken in het laboratorium van de HAP wordt gefinancierd door het zevende van de Europese Gemeenschap Kaderprogramma (FP7/2007-2013) onder subsidieovereenkomst nr. 242095, door de Private Stichting CELLEX (Catalonië, Spanje), en door het Spaanse ministerie van Wetenschap en Innovatie ( SAF2009-07760).

<ol><li>Amino, R., Menard, R., Frischknecht, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+malaria+parasites--recent+advances+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of malaria parasites--recent advances and future directions.</a> Curr. Opin. Microbiol. 8, 407-414 (2005).</li>
<li>Heussler, V., Doerig, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+enters+parasitology%5BTitle%5D)+AND+%22Trends.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging enters parasitology.</a> Trends. Parasitol. 22, 192-195 (2006).</li>
<li>Amino, R., Thiberge, S., Blazquez, S., Baldacci, P., Renaud, O., Shorte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+malaria+sporozoites%5BTitle%5D)+AND+%22in+the+dermis+of+the+mammalian%22%5BJournal%5D)">Imaging malaria sporozoites.</a> in the dermis of the mammalian. 2, 1705-1712 (2007).</li>
<li>Gueirard, P., Tavares, J., Thiberge, S., Bernex, F., Ishino, T., Milon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+malaria+parasite+in+the+skin+of+the+mammalian+host%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Development of the malaria parasite in the skin of the mammalian host.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 107, 18640-18645 (2010).</li>
<li>Sturm, A., Amino, R., van de Sand, C., Regen, T., Retzlaff, S., Rennenberg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manipulation+of+host+hepatocytes+by+the+malaria+parasite+for+delivery+into+liver+sinusoids%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Manipulation of host hepatocytes by the malaria parasite for delivery into liver sinusoids.</a> Science. 313, 1287-1290 (2006).</li>
<li>Gruring, C., Heiber, A., Kruse, F., Ungefehr, J., Gilberger, T. W., Spielmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+host+cell+modifications+of+Plasmodium+falciparum+blood+stages+in+four+dimensions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Development and host cell modifications of Plasmodium falciparum blood stages in four dimensions.</a> Nat. Commun. 2, 165-165 (2011).</li>
<li>Martin-Jaular, L., Ferrer, M., Calvo, M., Rosanas-Urgell, A., Kalko, S., Graewe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-specific+spleen+remodelling+in+Plasmodium+yoelii+infections+in+Balb%2Fc+mice+facilitates+adherence+and+spleen+macrophage-clearance+escape%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Strain-specific spleen remodelling in Plasmodium yoelii infections in Balb/c mice facilitates adherence and spleen macrophage-clearance escape.</a> Cell. Microbiol. 13, 109-122 (2011).</li>
<li>Linden, M. vander, R, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Plasmodium+berghei+reference+line+that+constitutively+expresses+GFP+at+a+high+level+throughout+the+complete+life+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biochem.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">A Plasmodium berghei reference line that constitutively expresses GFP at a high level throughout the complete life cycle.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 137, 23-33 (2004).</li>
<li>Cormack, B. P., Valdivia, R. H., Falkow, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS-optimized+mutants+of+the+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">FACS-optimized mutants of the green fluorescent protein.</a> 173, 33-38 (1996).</li>
<li>Dunn, K. W., Sandoval, R. M., Kelly, K. J., Dagher, P. C., Tanner, G. A., Atkinson, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+studies+of+the+kidney+of+living+animals+using+multicolor+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Cell.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Functional studies of the kidney of living animals using multicolor two-photon microscopy.</a> Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 283, C905-C916 (2002).</li>
<li>Zhong, Z., Petrig, B. L., Qi, X., Burns, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+measurement+of+erythrocyte+velocity+and+retinal+blood+flow+using+adaptive+optics+scanning+laser+ophthalmoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Opt.+Express%22%5BJournal%5D)">In vivo measurement of erythrocyte velocity and retinal blood flow using adaptive optics scanning laser ophthalmoscopy.</a> Opt. Express. 16, 12746-12756 (2008).</li>
<li>Miller, M. J., Wei, S. H., Parker, I., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+imaging+of+lymphocyte+motility+and+antigen+response+in+intact+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Two-photon imaging of lymphocyte motility and antigen response in intact lymph node.</a> Science. 296, 1869-1873 (2002).</li>
<li>Bowdler, A. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBowdler%2C+AJ+%22The+complete+spleen%22">The complete spleen</a>. , Totowa. Humana Press. (2002).</li>
<li>Grayson, M. H., Hotchkiss, R. S., Karl, I. E., Holtzman, M. J., Chaplin, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy+comparing+T+lymphocyte+trafficking+to+the+spleen+and+the+mesenteric+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart.+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy comparing T lymphocyte trafficking to the spleen and the mesenteric lymph node.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 284, H2213-H2226 (2003).</li>
<li>Khandoga, A. G., Khandoga, A., Reichel, C. A., Bihari, P., Rehberg, M., Krombach, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+and+quantitative+analysis+of+leukocyte+directional+migration+and+polarization+in+inflamed+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS.+One%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging and quantitative analysis of leukocyte directional migration and polarization in inflamed tissue.</a> PLoS. One. 4, 4693-4693 (2009).</li>
<li>Weiss, L., Geduldig, U., Weidanz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+splenic+control+of+murine+malaria%3A+reticular+cell+activation+and+the+development+of+a+blood-spleen+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Anat%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of splenic control of murine malaria: reticular cell activation and the development of a blood-spleen barrier.</a> Am. J. Anat. 176, 251-285 (1986).</li>
<li>Swirski, F. K., Nahrendorf, M., Etzrodt, M., Wildgruber, M., Cortez-Retamozo, V., Panizzi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+splenic+reservoir+monocytes+and+their+deployment+to+inflammatory+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of splenic reservoir monocytes and their deployment to inflammatory sites.</a> Science. 325, 612-616 (2009).</li>
<li>Grayson, M. H., Chaplin, D. D., Karl, I. E., Hotchkiss, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confocal+fluorescent+intravital+microscopy+of+the+murine+spleen%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Confocal fluorescent intravital microscopy of the murine spleen.</a> J. Immunol. Methods. 256, 55-63 (2001).</li>
<li>Bajenoff, M., Glaichenhaus, N., Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblastic+reticular+cells+guide+T+lymphocyte+entry+into+and+migration+within+the+splenic+T+cell+zone%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Fibroblastic reticular cells guide T lymphocyte entry into and migration within the splenic T cell zone.</a> J. Immunol. 181, 3947-3954 (2008).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De implementatie van intravitale microscopie van de milt in dit knaagdier malaria model opende de mogelijkheid van onderzoek naar de dynamische passage van parasieten door dit orgaan dat tot op heden beschouwd als een &quot;black-box&quot; te wijten aan technische overwegingen. Hier werd een grote inspanning te maken aan een kwantitatieve methode die vergelijkende analyse van verschillende parasieten lijnen op de single en de bevolking niveaus mogelijk aan te passen. In tegenstelling tot andere weefsels en cellen die ee...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogus nummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Leica TCS-SP5 confocale microscoop </td><td> Leica Microsystems, Heidelberg, Duitsland </td><td> TCS-SP5 Serienr. 5100000419 </td><td></td></tr><tr><td> Ketamine (Ketolar 50 mg / ml) </td><td> Pfizer </td><td> 631028 </td><td></td></tr><tr><td> Midazolam 15 mg / 3 ml </td><td> Normon </td><td> 838193 </td><td></td></tr><tr><td> 70.000 MW Dextran, geconjugeerd met Texas Red </td><td> Molecular Probes </td><td> D1830 </td><td></td></tr><tr><td> Fluoresceïne isothiocyanaat, isomeer I (FITC) </td><td> Sigma </td><td> F7250 </td><td></td></tr><tr><td> Hoechst 33342 </td><td> Sigma </td><td> H1399 </td><td></td></tr><tr><td> Giemsa vlek </td><td> Sigma </td><td> GS1 </td><td> Werkende oplossing is op 10% in gedestilleerd water </td></tr><tr><td> Super Glue-3 Loctite </td><td> Loctite </td><td> 9975-0880 </td><td></td></tr></tbody></table>

intravitale microscopie van de milt: kwantitatieve analyse van parasite mobiliteit en blood flow

Intravital Microscopy of the Spleen: Quantitative Analysis of Parasite Mobility and Blood Flow

De komst van intravitale microscopie in experimentele knaagdier malaria-modellen heeft het mogelijk grote stappen om de kennis van parasiet-gastheer interacties 1,2. Zo zijn in vivo beeldvorming van malariaparasieten tijdens de pre-erytrocytaire fase onthulde de actieve ingang van parasieten in de huid lymfeklieren 3, de volledige ontwikkeling van de parasiet in de huid 4, en de vorming van een hepatocyt-afgeleide merosome tot migratie te garanderen en vrijkomen van merozoïeten in de bloedstroom 5. Bovendien heeft de ontwikkeling van de individuele parasieten in erytrocyten is onlangs gedocumenteerd met behulp van 4D-imaging en daagde onze huidige visie op eiwit-export in malaria 6. Zo heeft intravitale imaging radicaal veranderd onze visie op belangrijke gebeurtenissen in Plasmodium ontwikkeling. Helaas, studies van de dynamische passage van malariaparasieten via de milt, een belangrijke lymfe-organen prachtig aangepast aan de geïnfecteerde rode b duidelijklood cellen ontbreekt wegens technische beperkingen. Met behulp van de muizenmodel van malaria Plasmodium yoelii in Balb / c muizen, hebben we intravitale beeldvorming van de milt en rapporteerde een differentieel verbouwen ervan en de naleving van de parasitering rode bloedcellen (pRBCs) naar barrière-cellen van fibroblast oorsprong in de rode pulp tijdens het infectie met het niet-dodelijke parasiet lijn P.yoelii 17x in tegenstelling tot infecties met de P.yoelii 17XL dodelijke parasiet lijn 7. Het bereiken van deze conclusies, werd een specifieke methodologie met ImageJ gratis software ontwikkeld om de karakterisering van de snelle drie-dimensionale beweging van single-pRBCs mogelijk te maken. Resultaten verkregen met dit protocol laten het bepalen van de snelheid, richting en verblijftijd van parasieten in de milt, alle parameters het aanpakken van hechting in vivo. Daarnaast hebben we het verslag van de methodologie voor de bloedstroom kwantificeren met behulp van intravitale microscopie en het gebruik van DIFlende kleurstoffen om inzicht te krijgen in de complexe structuur microcirculatie van de milt. Ethiek verklaring Alle dieren werden uitgevoerd op het dier faciliteiten van de Universiteit van Barcelona in overeenstemming met richtlijnen en protocollen zijn goedgekeurd door de ethische commissie voor Dierproeven van de Universiteit van Barcelona CEEA-UB (Protocol nr. DMAH: 5429). Vrouwelijke Balb / c muizen van 6-8 weken oud werden verkregen van Charles River Laboratories.

We tonen de methode voor het uitvoeren van intravitale microscopie van de milt met behulp van GFP transgene malariaparasieten en de kwantificering van de parasiet de mobiliteit en de bloedstroom binnen dit orgaan.

Intravitale Microscopie van de milt: Kwantitatieve Analyse van Parasite Mobiliteit en Blood Flow

De komst van intravitale microscopie in experimentele malaria-modellen bij knaagdieren heeft geleid tot belangrijke vorderingen in de kennis over interacties tussen parasiet en gastheer 1,2. ...

In deze procedure tonen we een kwantitatieve intravitale microscopiebenadering om de dynamiek van de passage van parasieten door de milt te beoordelen. In een knagermalariamodel worden muizen die geïnfecteerd zijn met GFP-transgene parasieten voorbereid voor intravitale microscopie van de milt; canulatie van de miltader maakt de injectie van intravitale kleurstoffen mogelijk. Tijdens het experiment worden fluorescente cellen afgebeeld terwijl ze door verschillende gebieden van de milt bewegen.Wij bieden de methodologie om de mobiliteit van parasieten in het driedimensionale trage compartiment van de rode pulpa te beschrijven en de bloedstroom in de vaten te berekenen. Deze parameters werden gebruikt om de miltendynamiek van twee PULE-stammen te vergelijken. Hallo iedereen.Mijn naam is Nando El Portillo en een van de belangrijkste onderzoeksvragen in mijn laboratorium is het begrijpen van de rol van de milt bij malaria. Splenomegalie is een van de kenmerken van deze ziekte, maar vanwege technische en ethische kwesties is het zeer moeilijk om studies naar dit orgaan uit te voeren. Om dit mogelijk te maken, hebben we technologieën ingezet die ons in staat stellen de dynamische passage van deze parasiet te observeren en dit fenomeen te kwantificeren.Dit is wat Lorena en MI in deze protocollen zullen uitleggen. Dit onderzoek wordt gedeeltelijk uitgevoerd in samenwerking met de groepen van Dr. Ler van de Universiteit van Hamburg in Duitsland en Dr. Maria Kbo hier bij het Hospital Clinic en is algemeen gefinancierd door fund fion Cellex en ministerieel CIA In Espanol. De infectie wordt gestart bij Donor M, geïnfecteerd met GFP-parasieten (lethaal of niet-lethaal) bij een parasitemie van 10%. Om de parasieten te controleren, neemt u een kleine druppel bloed uit de staartvin van de muis en brengt u deze aan op een microscoopglas.Maak een dikke druppel kleuring met GIMs. Een oplossing maakt geïnfecteerde rode bloedcellen zichtbaar na het drogen; fixeer het bloedsmeer gedurende twee minuten met methanol, breng de GIMs-oplossing aan en incubeer 20 minuten. Was de plaat met stromend kraanwater en droog deze. Tel het percentage pbc's ten opzichte van het totaal aantal RBC's met behulp van een lichtmicroscoop met een 100x olie-objectief.Infecteer muizen met lethale of niet-lethale parasieten, verkregen uit het staartbloed van donormuizen en verdund in PBS. Stel de dosis zo in dat er een halve miljoen parasieten per muis wordt geïnjecteerd om op dag drie na infectie een perifere parasitemie van 1% te bereiken; injecteer intraperitoneaal. Alternatief kunnen FITC-gelabelde RBC's in de controle worden gebruikt. Verzamel één milliliter arterieel bloed van een muis en was de pellet door centrifugatie in PBS met EDTA, resuspendeer in FITC-oplossing en incubeer gedurende twee uur in het donker onder zachte agitatie. Verwijder na die tijd het supernatant door centrifugatie en was uitgebreid. Injecteer in een controlemuis om een gemiddelde van 1% in de perifere circulatie te bereiken en ga over tot de in vivo-experimenten.Hallo, ik ben mija. Om de milt in vivo te visualiseren, moeten we een kleine chirurgische ingreep bij het dier uitvoeren om de milt bloot te leggen; deze techniek heb ik geleerd van Stephanie GR in het laboratorium van worker Heisler, die ik graag wil bedanken, en nu zal ik u laten zien hoe u te werk moet gaan.Beeldvorming van geïnfecteerd myosis uitgevoerd op dag drie na infectie wanneer parat 1% is in beide stammen. Houd de muis gedurende de gehele procedure onder narcose en bij een gereguleerde temperatuur. Bescherm de ogen tegen hydratatie en verifieer dat de muis volledig is geanestheseerd door op het voetkussentje te tikken voordat u verder gaat, om de intraveneuze toediening van stoffen te vergemakkelijken.Cannuleer tijdens het verloop van het experiment de staartvene van de muis om de canule aan te leggen. Steek een kleine naald in het ene uiteinde van een buisje en de applicator in het andere uiteinde. Vul de canule met fysiologische zoutoplossing onder verwijdering van luchtbellen en controleer of de oplossing correct door de canule stroomt.De laterale staartvena wordt gecannuleerd. Verbeter de zichtbaarheid door een lichte constrictie aan de basis van de staart aan te brengen. Voer de punt van de canule in de ader in.Het verschijnen van bloed geeft aan dat de naald correct is geplaatst. Is dit niet het geval, herhaal de canulatie dan stroomopwaarts van de ader en fixeer vervolgens de canule met lijm en tape aan de staart. Leg het onderste deel van de milt vrij via een kleine incisie in de huid en musculatuur aan de linker dorsale zijde van het dier.Plaats een milt op een plek waar weinig ademhalingsbeweging waarneembaar is en breng PBS aan op het blootgestelde oppervlak om het vrij te houden van muizenhaar en gehydrateerd te houden. Seal de milt af met een dekglas om visualisatie mogelijk te maken. Hallo, mijn naam is Lorena.Het getoonde protocol stelt ons in staat om de beweging van PULI-parasieten door de milt te visualiseren. Dit is mogelijk gemaakt dankzij GFP-transgene parasieten. Vriendelijk geschonken door James Burnes van Drexel University.Het in beeld brengen van de beweging van fluorescerende parasieten zal ons laten weten of er verschillen zijn in het gedrag tussen letale en niet-letale stammen. De microscopie-experimenten werden uitgevoerd in een Leica multiphotonmicroscoop, uitgerust met een incubatiesysteem met temperatuurregeling en een 63 x glycerine-objectief. Plaats het dier op de tafel van de microscoop met een dekglas, waarbij de milt naar beneden is gericht naar het objectief. Aanvankelijk.Visualisatie van de milt bij lagere vergrotingen geeft een algemeen overzicht van de microcirculatoire structuur van het orgaan. Focus op de milt met behulp van autofluorescerend weefsel; GFP-parasieten zijn zichtbaar terwijl ze door de verschillende gebieden van de milt trekken. Hallo, mijn naam is Maria Albo van de Scientific and Technological Centers van de Universiteit van Barcelona, en we gaan intravitale beeldvorming van de milt uitvoeren.Om de bloedstroom en mobiliteit van geïnfecteerde rode bloedcellen te bestuderen, maken we gebruik van een confocale microscoop uitgerust met een resonante scan, die snelle beeldvorming mogelijk maakt en zeer nuttig is om de beweging van het orgaan te compenseren. Dit is een spectrale microscoop waarmee het waarnemingsbereik kan worden geselecteerd. Om zeer snel beelden vast te leggen, voeren we een simultane acquisitie uit van de twee fluoresceïne-markeringen en de reflectie.Selecteer verschillende zones om te beeldvormen met behulp van RBC, reflectie, contrast en Vidal-kleurstoffen om de microvasculatuur van de milt in beeld te brengen. We zullen nu uitleggen hoe de mobiliteit van parasieten in de bloedstroom van vaten kan worden gemeten met Vidal-microscopie en ImageJ-software om de beweging van parasieten in het driedimensionale netwerk van de rode pulpa te volgen. Neem beelden op over vijf Z-dieptes met behulp van een high-speed scanning-modus.Zet beeldstacks om in Z-gecodeerde kleurenfilms om het volgen van een enkele fluorescente cel te vergemakkelijken. Gedetailleerde informatie wordt verstrekt in de tekst om verschillende deeltjes over tijd en diepte in elke video te volgen met behulp van X-, Y-, Z- en T-coördinaten; mobiliteitsparameters zoals directionaliteit, gemiddelde snelheid en verblijftijd kunnen worden berekend en worden weergegeven als distributiekaarten om comparatieve analyse tussen stampopulaties mogelijk te maken. Vasculaire flow in de milt kan worden gebeeld door systemische injectie van verschillende fluorescente moleculen, zoals dextrine, beschreven in de ondersteunende tabel.En scan, met behulp van endogene erytrocyt-reflectiecontrast, de bloedstroom langs de middellijn door de vaten horizontaal in de richting van de laserscan te plaatsen en een verbeterde lijnmiddeling toe te passen. In deze beelden zullen de strepen die ontstaan door bewegende cellen worden gebruikt om de bloedstroom te berekenen; neem beelden op van vaten met verschillende diameters en gedurende de hartcyclus om voor fluctuaties te compenseren. De milt werd lange tijd beschouwd als een black box in malariaonderzoek en we hebben hier een kwantitatieve intravitale microscopiebenadering ontwikkeld om inzicht te krijgen in de dynamiek van parasitinfectie en bloedstroom in dit orgaan, waardoor we belangrijke biologische vragen kunnen beantwoorden, zoals de in vivo adhesie van geïnfecteerde rode bloedcellen aan de milt.Dank u wel en.

intravital-microscopy-spleen-quantitative-analysis-parasite-mobility

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Een in vivo beeldvormingssysteem wordt gebruikt om kwantitatieve metingen te genereren van muisinfecties met de Trypanosomatide protozoa Leishmania. Dit is een niet-invasieve en niet-lethale methode voor het detecteren van parasieten die luciferase tot expressie brengen in diverse weefsels gedurende het verloop van een chronische Leishmania spp. infectie.

In vivo imaging van transgene Leishmania parasieten in een Live Host

Intravitale microscopie om temporele en ruimtelijke hemodynamische en inflammatoire gebeurtenissen in de pial microcirculatie te volgen.

Intravitale Microscopie van de hersenen van muizen microcirculatie met behulp van een gesloten Cranial Window

This video demonstrates an assay to quantify the intracellular growth of parasites in bone marrow-derived macrophages (BMMs). The macrophage cells are infected with the motile and non-motile invasive stages of Leishmania, metacyclic promastigotes and amastigotes, respectively. The parasites invade the macrophages, getting internalized into a parasitophorous vacuole and multiplying inside. The intracellular parasite growth is quantified using a microscope upon fluorescently staining the...

An In Vitro Assay to Quantify the Intracellular Growth of Parasite in Macrophages

Werkwijze voor isolatie van hechtende inflammatoire leukocyten uit hersenen...

Isolatie en analyse van Brain-afgezonderd Leukocyten uit<em&gt; Plasmodium berghei</em&gt; ANKA-geïnfecteerde muizen

Dit artikel beschrijft een gedetailleerde methode voor de dynamische meting en kwantificering van bloedstroomsnelheid binnen individuele bloedvaten van de muizenlevervaten met behulp van intravitale microscopie-beeldvorming in combinatie met een specifieke methodologie voor beeldverwerving en analyse.

Intravitale Microscopie Imaging van de lever volgende<em&gt; Leishmania</em&gt; Infectie: een beoordeling van de lever Hemodynamica

De malariaparasiet binnenvalt en herhalingen binnen de rode bloedcellen. Nauwkeurige vaststelling van de merozoïet invasie en parasitemia is daarom van cruciaal belang bij de beoordeling van het verloop van de malaria-infectie. Hier beschrijven we een flowcytometrie gebaseerd protocol voor het meten van deze parameters in een muismodel van malaria.

In vivo evaluatie van het knaagdier Plasmodium parasitemia en merozoïet Invasion van flowcytometrie

Deze vereenvoudigde toepassing van intravitale microscopie van mesenterische aderen bij muizen kan worden gebruikt in verschillende ontstekingsmodellen om leukocyten-endotheel en bloedplaatjes-leukemie-interacties te observeren.

Intravitale Microscopie van leukocyten-endotheel en bloedplaatjes-leukocyten Interactions in mesenteriale Veins in Muizen

We beschrijven een muismodel van experimentele cerebrale malaria en laten zien hoe inflammatoire en microvasculaire pathologie in vivo kunnen worden gevolgd met behulp van magnetische resonantie beeldvorming.

In vivo Tracking van Oedema Ontwikkeling En Microvasculaire Patologie In Een Model Van Experimentele Cerebrale Malaria Met Magnetic Resonance Imaging

Als gevolg van de opvallende gelijkenissen van de levenscyclus en de biologie van knaagdieren malariaparasieten voor menselijke malariaparasieten, knaagdieren malaria modellen zijn onmisbaar geworden voor malaria onderzoek. Hierin hebben we enkele van de belangrijkste technieken gestandaardiseerd die worden gebruikt in de fenotypische analyse van wild-type en transgene knaagdier malaria soorten.

Fenotypische analyse van knaagdieren malaria parasiet asexual en seksuele bloed stadia en muggen stadia

Alle pathogene Leishmania soorten zich bevinden en repliceren in macrofagen van hun gewervelde gastheren. Hier presenteren we een protocol om te infecteren lymfkliertest beenmerg-afgeleide macrofagen in cultuur met Leishmania, gevolgd door precieze kwantificering van intracellulaire groei kinetiek. Deze methode is handig voor het bestuderen van de afzonderlijke factoren beïnvloeden host-pathogen interactions en Leishmania virulentie.

Kwantificering van intracellulaire groei binnen macrofagen is een snel en betrouwbare methode voor de beoordeling van de virulentie van Leishmania parasieten

Leer intravitale microscopie van de milt om parasietmobiliteit en bloedstroom te kwantificeren bij muizen met GFP-transgene malariaparasieten. Deze methode vergelijkt dynamiek tussen stammen.

Intravitale Microscopie van de milt: Kwantitatieve Analyse van Parasite Mobiliteit en Blood Flow

Meer video's verkennen