Name: De Ex vivo Geïsoleerd Skeletal microvaatjes Voorbereiding Voor het onderzoek van vasculaire reactiviteit (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Leer de ex vivo isolatie en dubbele canulatie van resistente arteriolen uit de gracilisspier. Deze methode maakt gestandaardiseerde evaluatie van vasculaire reactiviteit en wandmechanica mogelijk voor cardiovasculair onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de American Heart Association (EIA 0740129N) en NIH T32 HL90610.

<ol><li>Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Chronic+Anticholesterol+Therapy+on+Development+of+Microvascular+Rarefaction+in+the+Metabolic+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome.</a> Microcirculation. , 1-18 (2009).</li>
<li>Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascular+thromboxane+generation+impairs+dilation+of+skeletal+muscle+arterioles+of+obese+Zucker+rats+with+reduced+oxygen+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth-dependent+changes+in+endothelial+factors+regulating+arteriolar+tone%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Growth-dependent changes in endothelial factors regulating arteriolar tone.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H207-H214 (2007).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+peroxide+emerges+as+a+regulator+of+tone+in+skeletal+muscle+arterioles+during+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth.</a> Microcirculation. 15, 151-161 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+myogenic+responsiveness+of+skeletal+muscle+arterioles+with+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).</li>
<li>Dacey, R. G., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+of+rat+intracerebral+arterioles%3A+methods%2C+morphology%2C+and+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).</li>
<li>Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+of+extraparenchymal+resistance+arteries+of+rat+skeletal+muscle+to+reduce+PO2%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2.</a> Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).</li>
<li>Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin-%281-7%29+and+low-dose+angiotensin+II+infusion+reverse+salt-induced+endothelial+dysfunction+via+different+mechanisms+in+rat+middle+cerebral+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).</li>
<li>LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+inhalation+impairs+endothelium-dependent+vasodilation+in+subepicardial+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Toxicol.+Environ.+Health+A%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles.</a> J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).</li>
<li>Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+salt+enhances+benzamil-sensitive+component+of+myogenic+constriction+in+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).</li>
<li>Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+mechanisms+of+endothelium-dependent+dilation+in+skeletal+muscle+arterioles+with+genetic+hypercholesterolemia%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).</li>
<li>Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+arachidonic+acid-induced+thromboxane+generation+impairs+skeletal+muscle+arteriolar+dilation+with+genetic+dyslipidemia%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia.</a> Microcirculation. 15, 621-631 (2008).</li>
<li>Baumbach, G. L., Hadju, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+and+composition+of+cerebral+arterioles+in+renal+and+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension. 21, 816-826 (1993).</li>
<li>Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+studying+isolated+resistance+vessel+from+rabbit+mesentery+and+brain+and+their+responses+to+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs.</a> Circ. Res. 4, 525-536 (1967).</li>
<li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. solated Chapter 23. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDavis%2C+MJ+%22Isolated%2C+perfused+microvessels.+In%3A+Clinically+Applied+Microcirculation+Research%22">Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research</a>. Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. 32, CRC Press, Inc. 435-456 (1995).</li>
<li>Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+and+mechanical+responses+of+rat+middle+cerebral+arterieal+to+reduced+PO2+and+prostacyclin%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin.</a> Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De gepresenteerde protocol beschrijft de isolatie, de verwijdering en dubbele cannulatie van een skeletspier microvaatje, hoewel dit algemene techniek gemakkelijk kan worden toegepast op de meeste weefsels. Voor de huidige manuscript, is de term &quot;arteriole&quot; is gebruikt door de auteurs op een weerstand schip variërend van 70 tot 120 micrometer in diameter onder rust actief toon, die ook een belangrijke bijdrage aan de regulering van perfusie weerstand tegen een orgaan of te beschrijven weefsel. <p class="jo...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagentia en apparatuur </td><td> Vennootschap </td><td> Opmerkingen / Catalogus # </td></tr><tr><td> Schip Kamer </td><td> Gewoonte </td><td> Dave Eick (MCW) </td></tr><tr><td> Verwarmde circulerende water bad </td><td> PolyScience en Haake </td><td> Haake DC 10 </td></tr><tr><td> Pipetten </td><td> Frederick Haer &amp; Co </td><td> Capillaire buis 2,0 mm OD x 1,0 mm ID (27-33-1) </td></tr><tr><td> Pressure Monitor </td><td> Wereld Precision Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Watermantel Reservoir </td><td> Gewoonte </td><td></td></tr><tr><td> Externe lichtbron </td><td> Wereld Precision Instruments </td><td> Novaflex </td></tr><tr><td> Pipet Puller </td><td> Microdata Instrumenten </td><td> PMP102 micropipet Puller </td></tr><tr><td> Volledige voltooiingling van chirurgische instrumenten </td><td> Fine Science Tools </td><td> Dumont </td></tr><tr><td> Ultra Fine tang </td><td> Fine Science Tools </td><td> Inox # 5 </td></tr><tr><td> Silk hechtdraad </td><td> Ethilon </td><td> # 10-0 of 9-0 </td></tr><tr><td> Stereo Microscoop </td><td> Olympus </td><td> Olympus SZ-11 </td></tr><tr><td> Analoge video Schuifmaten </td><td> Boeckeler </td><td> Via Controller (Via-100) </td></tr><tr><td> Hoge resolutie analoge camera </td><td> Panasonic </td><td> GP-MF 602 </td></tr><tr><td> Zuurstoftank </td><td> Regionaal </td><td> 21% rest stikstof en 5% CO2 rest stikstof </td></tr><tr><td> Buis </td><td> Tygon </td><td></td></tr><tr><td> Laat de pomp </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td></td></tr><tr><td> Gewijzigd Rat PSS </td><td> Zie recept </td><td></td&gt; </tr><tr><td> Relaxant PSS van Breemen&#39;s </td><td> Zie recept </td><td></td></tr></tbody></table> Tabel 1. Een lijst van de belangrijkste componenten van geïsoleerde microvaatjes station setup gepresenteerd in de figuren. <table border="1"><tbody><tr><td> Gewijzigd Rat PSS Recept </td><td> Om twee liter PSS te maken </td><td> 20X Salt Stock (2L) </td><td> 20X buffervoorraad (2L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 278,0 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 14,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSÜ4-7H 2 O </td><td></td><td> 11,5 g </td><td></td></tr><tr><td> CaCl2-H 2 O </td><td></td><td> 9,4 g </td><td></td></tr><tr> &lt;td&gt; NaHCÛ3 </td><td></td><td></td><td> 80,8 g </td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0,4 g </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glucose </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Zout Stock </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x buffervoorraad </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Gedestilleerd water </td><td> 1800 ml </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabel 2. Recept voor standaard fysiologische zoutoplossing (PSS) van de geïsoleerde microvaatje protocollen. Reacties op Recept: Maak 2 L van Salt Stock en 2 L van de buffervoorraad. Deze ceen koelkast worden bewaard als deze niet wordt gebruikt, maar schud ze goed en vaak voor de voorbereiding van PSS. De extra bestanddelen worden toegevoegd bij de bereiding van definitieve PSS. <table border="1"><tbody><tr><td> Relaxant PSS van Breemen&#39;s </td><td> Om 2 liter PSS te maken </td><td> 20X Salt Stock (1L) </td><td> 20X buffervoorraad (1L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 107,4 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 7,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSÜ4-7H 2 O </td><td></td><td> 5,76 g </td><td></td></tr><tr><td> MgCl2-6H 2 O </td><td></td><td> 81,32 g </td><td></td></tr><tr><td> NaHCÛ3 </td><td></td><td></td><td> 40,4 g </td></tr><tr><td> EDTEen </td><td></td><td></td><td> 0,2 g </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 15,22 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glucose </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Zout Stock </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x buffervoorraad </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Gedestilleerd water </td><td> 1800 ml </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabel 3. Recept voor relaxerend fysiologisch zout Van Breemen De oplossing van (PSS) gebruikt in de geïsoleerde microvaatje protocollen, onder de voorwaarden van nul actieve toon. Reacties op Recept: Maak 1 L van Salt voorraad Eennd 1 L van de buffervoorraad. Deze kunnen in de koelkast wanneer deze niet wordt gebruikt, maar schud ze goed en vaak voor de voorbereiding van PSS. De extra bestanddelen worden toegevoegd bij de bereiding van definitieve relaxerende PSS.

de ex vivo geïsoleerd skeletal microvaatjes voorbereiding voor het onderzoek van vasculaire reactiviteit

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

De geïsoleerde microvaatjes voorbereiding is een ex vivo voorbereiding die het mogelijk maakt voor het onderzoek van de verschillende bijdragen van de factoren die de controle bloedvaten, en dus perfusie weerstand 1-5. Dit is een klassiek experimenteel preparaat dat, was in hoge mate, in eerste instantie beschreven door Uchida et al. 15. Enkele decennia geleden. Deze eerste beschrijving vormt de basis voor de technieken die op grote schaal werd gewijzigd en aangevuld, met name in het laboratorium van Dr Brian Duling aan de Universiteit van Virginia 6-8, en we presenteren een huidige aanpak op de volgende pagina&#39;s. Deze voorbereiding zal specifiek verwijzen naar de gracilis arteriole in een rat als het microvaatje van keuze, maar de basis bereiding gemakkelijk kan worden toegepast op schepen geïsoleerd van bijna elk ander weefsel of orgaan bij verschillende diersoorten 9-13. Mechanische (dat wil zeggen, dimensionaal) veranderingen in de geïsoleerde micro-vaatjes kan gemakkelijk worden geëvalueerdin antwoord op een breed scala van fysiologische (bijvoorbeeld hypoxie, intravasculaire druk of afschuiving) of farmacologische problemen en kan inzicht in mechanische elementen die geïntegreerd reacties in een intacte, maar ex vivo, weefsel. De betekenis van deze methode is dat het mogelijk maakt gemakkelijke manipulatie van de invloeden van de geïntegreerde regulering van diameter microvaatje, en daarbij tevens de controle van vele van de bijdragen van andere bronnen, zoals intravasculaire druk (myogene) autonome innervatie hemodynamische ( bijvoorbeeld, shear stress), endotheel afhankelijke of onafhankelijke stimuli, hormonale en parenchymale invloeden, om een ​​deel van de lijst te verstrekken. Onder geschikte proefomstandigheden en met geschikte doelen kan dit als een voordeel ten opzichte in vivo of in situ weefsel / orgaan preparaten, die niet gemakkelijk mogelijk om de eenvoudige besturing van bredere systemische variabelen. Het major beperking van dit preparaat in hoofdzaak het gevolg van de sterke. Per definitie is het gedrag van deze schepen wordt bestudeerd onder omstandigheden waar veel van de meest belangrijke mate bijdragen aan de regulering van vasculaire weerstand hebben afgeschaft, ook neurale, humorale, metabole, enz. Als zodanig wordt de onderzoeker gewaarschuwd om over-te voorkomen de interpretatie en de extrapolatie van de gegevens die worden verzameld gebruik te maken van deze voorbereiding. Het andere belangrijke punt van zorg met betrekking tot deze voorbereiding is dat het kan heel gemakkelijk om cellulaire componenten zoals de endotheliale bekleding of de vasculaire gladde spieren beschadigen, kunnen dergelijke die variabele bron van fouten worden ingevoerd. Het wordt ten zeerste aanbevolen dat de individuele onderzoeker juiste metingen om de kwaliteit van de voorbereiding te garanderen gebruiken, zowel bij de start van het experiment en periodiek in de loop van een protocol.

Een<em&gt; Ex vivo</em&gt; Voorbereiding wordt beschreven voor het isoleren van de grootste gracilis spier weerstand arteriolen is voor raadpleging van zowel vasculaire reacties op vasoactieve stimuli en de beoordeling van de fundamentele structurele eigenschappen via passieve muur mechanica.

De Ex vivo Geïsoleerd Skeletal microvaatjes Voorbereiding Voor het onderzoek van vasculaire reactiviteit

De geïsoleerde microvaatpreparatie is een ex vivo preparatie die het mogelijk maakt om de verschillende bijdragen van factoren die de vaat... te onderzoeken.

Het algemene doel van deze procedure is om individuele resistentiearteriën chirurgisch te isoleren, te verwijderen en dubbel te canuleren. Voor studie in een ex vivo-setting wordt dit bereikt door eerst microvaten te identificeren en chirurgisch te isoleren in een geanestheseerd dier. Na het overbrengen van de microvaten naar een vatkamer worden zowel het proximale als het distale uiteinde van de microvaten gecanuleerd.Ten slotte worden de microvaten blootgesteld aan farmacologische of fysiologische uitdagingen en experimentele interventies om de mechanismen te beoordelen die ten grondslag liggen aan functies of dysfuncties die intrinsiek zijn aan het vat zelf. Uiteindelijk tonen de resultaten de patronen en bijbehorende mechanismen aan die ten grondslag liggen aan de vasculaire reactiviteit in een geïsoleerde setting via adequaat gerichte stimuli en interventies. Over het algemeen zullen personen die nieuw zijn met deze methode moeite hebben, aangezien deze preparatie niet alleen de ontwikkeling van uitstekende chirurgische vaardigheden vereist om onder een microscoop te werken, maar ook het geduld en de fijne motoriek die nodig zijn om geïsoleerde microvaten met een diameter die vaak veel kleiner is dan honderd micron dubbel te cannuleren.Dit moet gebeuren met een absoluut minimum aan trauma aan het vat, anders zal de gehele procedure resulteren in een niet-reagerend vat; de procedure zal worden gedemonstreerd door Joshua Butcher, een promovendus uit mijn laboratorium. Voorafgaand aan het uitvoeren van geïsoleerde microvaten. Voorbereiding. Begin met het buigen van eerder geprepareerde glazen micropipetten naar een passende configuratie door ze te verhitten boven een butaanvlam. Gebruik vervolgens een fijne pincet om de uiteinden af te breken tot een passende diameter.Plaats twee micropipetten tegenover elkaar in de pipethouders voor de kamer van de microvaten, waarbij ze zo worden georiënteerd dat de tips zich in hetzelfde verticale en horizontale vlak binnen de vatenkamer bevinden. Bereid vervolgens een fysiologische zoutoplossing of PSS voor en controleer of de pH is ingesteld op de juiste waarden voor de specifieke experimentele omstandigheden. Kalibreer met behulp van een hemocytometer of een objectglasmicrometer de digitale videocaliper die zal worden gebruikt om de diameter van de vaten te meten.Gebruik ooghechtmateriaal van maat 8-0 of kleiner om enkelvoudige lusjes te maken voor het bevestigen van de microvaten aan de pipetten. Bewaar de lusjes op de dag van het experiment in een petrischaal op een klein stukje plakband dat rond een objectglas is gewikkeld. Zet de equilibratiegassen in de vatenkamer en in de PERFUSE 8- en SUSE 8-reservoirs aan.Vul alle reservoirs, buizen en kamers met de PSS-oplossing. Gebruik indien nodig een spuit om de PSS voorzichtig volledig door de pipet te duwen om te controleren of deze niet geblokkeerd is en geheel gevuld is. Houd de instroomdruk binnen redelijke grenzen om beschadiging van de druktransducers te voorkomen.Nadat het dier is gebouteerd en de microvaten zijn blootgelegd, verwijdert u de microvaten door met fijne pincetten de buitenzijde vast te pakken en langs de lengte van het vat te knippen. Wees uiterst voorzichtig om het vat niet weg te trekken of te plukken. Plaats het vat vervolgens in het gevulde waterbad en houd, met behulp van een fijne pincet en een bescheiden perfusiesnelheid, elke zijde van de wand van het proximale vatlumens vast en canuleer het proximale uiteinde op de instroompipet.Schuif vervolgens het vat over de canulepunten en beweeg het vat op de punt tot op het punt waar de T-lussen het vat kunnen vastzetten. Plaats de T-lus voor het distale uiteinde van het vat en canuleer dit op de uitstroompipet, waarbij het met de T-lussen wordt vastgezet. Pas de canule aan tot er minimale vervorming in het vat is en het vat de in vivo lengte benadert.Plaats een kleine diffusiesteen die het juiste gasmengsel afgeeft in het bad en breng plastic folie of een glazen afdekking over de kamer aan om spatten op de microscooplens te voorkomen. Klem periodiek de uitstroomleiding af om vast te stellen of er druk in het vat wordt opgebouwd.Controleer de vaten op lekken door de druk in het vat te verhogen en de uitstroomlijnen, gevolgd door de instroomlijnen, af te klemmen. Als de intraluminale druk stabiel is, zijn er geen waarneembare lekken. Indien het vat een kleine zijtak heeft die lekt, bind deze dan af met een enkele lus van 10-0 ooghechtmateriaal. Begin na canulatie van de microvaten, equilibrium en validatie met het experiment om de initiële controleresponsen te bepalen.Voor een fysiologische stimulus, zoals myogene activatie of door druk geïnduceerde constrictie, kan men bijvoorbeeld de intraluminale druk willekeurig variëren over een gewenst bereik en het vat de tijd geven om te reageren op de uitdaging met fenylefrine in verschillende concentraties in een willekeurige volgorde. Na een passende interventietijd wordt een tweede ronde van gegevensverzameling gestart door ofwel aanvullende interventies uit te voeren, of door de initiële oplossing uit te spoelen of de fysiologische uitdaging te verwijderen en te verifiëren dat het vat is teruggekeerd naar het evenwicht. Zodra het vat zijn actieve tonus verliest, wordt het experiment beëindigd of, indien gewenst, worden gegevens verzameld over de mechanica van de vaatwand.Wanneer het experiment is voltooid, spoel alle leidingen en kamers door met PSS en ruime hoeveelheden gedestilleerd of gedeïoniseerd water, en laat ze vervolgens volledig drogen. Hier wordt een gecannuleerd microvat getoond met zowel instroom- als uitstroompipetten, evenals lussen bij hoge vergroting. De binnendiameter van 12 microns, bepaald met een digitale schuifmaat, is hier duidelijk zichtbaar.Een gecannuleerd microvat wordt getoond na equilibratie. Hier is hetzelfde vat na dilatatie als reactie op een uitdaging met acetylcholine. En tot slot is dit het geconstringeerde vat na een uitdaging met fenylefrine.Deze grafieken vatten de reacties van geïsoleerde microvaten samen op prikkeling met hypoxie, toenemende concentraties acetylcholine of veranderingen in de intravasculaire druk onder controlecondities. Vervolgens gebeurt dit in de aanwezigheid van calciumvrije PSS. Zodra deze techniek onder de knie is, kan deze in ongeveer één uur worden uitgevoerd indien correct uitgevoerd, en het vat kan gemakkelijk gedurende vele uren levensvatbaar blijven in de kamer bij behoud van de juiste temperatuur, gas- en SUSE eight of perfuse eight condities.

the-ex-vivo-isolated-skeletal-microvessel-preparation-for

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Een nieuwe veelzijdige methode voor het observeren van de microcirculatie wordt gepresenteerd. Het wordt beschouwd als geschikt voor waarneming op lange termijn, en voor de combinatie met pharmacophysiological of moleculaire biologische interventies.

In vivo micro-circulatie meting in de skeletspier door Intra-vitale Microscopie

We presenteren een voorbereiding voor het visualiseren en manipuleren van calcium signalering in de moedertaal, intact microvasculaire endotheel. Endotheliale buizen vers geïsoleerd uit muis weerstand slagaders die skeletspieren behouden in vivo morfologie en dynamische signalisatie binnen en tussen naburige cellen. Endotheliale buizen kunnen worden bereid uit microvaten van andere weefsels en organen.

Isolatie van microvasculaire endotheelcellen Buizen van Mouse Resistance Arteries

De dunne darm wordt vaak blootgesteld aan giftige stoffen die de bloedstroom kunnen beïnvloeden en een negatieve invloed op de opname van voedingsstoffen. Met een multimyograph en mesenteriale slagader en ader isolaten, verbindingen of toxinen plaats kunnen worden gescreend vasoactiviteit.

Isoleren en het gebruik van de afdelingen van Bovine mesenterica en Vein als Bioassay om te testen voor vasoactiviteit in de dunne darm

We presenteren een protocol voor humane endotheliale pericyte-interacties in muizen te bestuderen onder toepassing van een variatie van de matrix gel plug angiogenese assay.

In vivo studie van humane endotheliale-pericyte Interaction Met behulp van de Matrix Gel Plug Assay in Mouse

Een procedure voor het maken van een gezichtspreparatie van de muizencarotisarterie en aorta wordt beschreven. Dergelijke preparaten, wanneer immunofluorescent gekleurd met specifieke antilichamen, ons in staat stellen om lokalisatie van eiwitten en identificatie van celtypen in de gehele vaatwand door confocale microscopie te bestuderen.

En Voorbereiding van Muis Bloedvaten

Videomicroscopy systemen worden gebruikt voor het onderzoeken van de functionele eigenschappen van geïsoleerde adipeus weefsel arteriolen in reactie op fysiologische en farmacologische stimuli. Deze techniek kan worden gebruikt om te onderzoeken microvasculaire fenotypen in verschillende adipeus weefsel domeinen bij zwaarlijvige mensen.

Beoordeling van menselijk vetweefsel microvasculaire functie met behulp van Videomicroscopy

Dit manuscript wordt beschreven in vitro videomicroscopie protocollen voor de beoordeling van de vasculaire functie in rat weerstand van de cerebrale bloedvaten. Het manuscript wordt ook beschreven technieken voor het evalueren van microvessel dichtheid met fluorescently geëtiketteerde lectine en weefsel perfusie met behulp van Laser Doppler flowmetrie.

Evaluatie van vasculaire controlemechanismen met behulp van videomicroscopie van geïsoleerde resistentie slagaders van ratten

Dit manuscript wordt een eenvoudig protocol voor de isolatie van de arteriolen uit het netvlies rat die kunnen worden gebruikt in elektrofysiologische, calcium beeldvorming en druk myography studies beschreven.

Isolatie van retinale arteriolen voor Ex Vivo cel fysiologie Studies

Hier presenteren we een protocol voor immunofluorescentie kleuring om de endotheliale cellen van de muis aorta direct te observeren. Deze techniek is nuttig bij het bestuderen van het cellulaire en moleculaire fenotype van endotheel cellen in verschillende stromingspatronen en in de ontwikkeling van atherosclerose.

Met en gezichts immunofluorescentie kleuring om vasculaire endotheel cellen direct te observeren

Het doel van dit protocol is het isoleren van micro vaartuigen uit meerdere regio's van het centrale zenuwstelsel van lissencefische en gyrencephalic vertebraten.

Betrouwbare isolatie van micro vaten van het centrale zenuwstelsel in vijf gewervelde groepen

Intensieve voorbereiding van intacte cerebrale endotheelbuizen van muizen uit cerebrale parenchymale arteriolen wordt geïllustreerd voor het bestuderen van cerebrale bloedstroomregulatie. Verder demonstreren we de experimentele sterke punten van dit endotheelstudiemodel voor fluorescentiebeeldvorming en elektrofysiologische meting van belangrijke cellulaire signaalroutes, inclusief veranderingen in intracellulaire [Ca2 +] en membraanpotentiaal.

Isolatie en functionele analyse van arteriolar endotheel van muishersenparenchym

Leer de ex vivo isolatie en dubbele canulatie van resistente arteriolen uit de gracilisspier. Deze methode maakt gestandaardiseerde evaluatie van vasculaire reactiviteit en wandmechanica mogelijk voor cardiovasculair onderzoek.

De Ex vivo Geïsoleerd Skeletal microvaatjes Voorbereiding Voor het onderzoek van vasculaire reactiviteit

Meer video's verkennen