Name: In vitro metingen van Tracheale Vernauwing bij muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-25T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 20 s
Description: Leer tracheale gladde spiercontractiliteit meten bij muizen via in vitro tensometrie van geïsoleerde tracheale ringen. Deze methode onderzoekt luchtwegfysiologie en farmacologische mechanismen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gefinancierd door een subsidie ​​van het Centrum voor Innovatie in preventie en behandeling van aandoeningen van de luchtwegen, NINDS-subsidie ​​(NS052574), en van de Sandler-programma voor astma Research.

1. Uitrusting De belangrijkste componenten van een contractie meetinrichting zijn schematisch getoond in figuur 2A). <ol><li> Een weefsel bad. Het weefsel bad onderhoudt een zuurstofrijk fysiologische oplossing bij warme temperatuur. Voor muizen trachea ringen we een 10 ml weefsel bad dat een watermantel bevat voor rondvoeren van een opwarming oplossing, een gefrit glas inlaat bubble zuurstof (95% / 5% O 2 / CO 2 mengsel) en in-en uitlaatpoorten te veranderen oplossingen. Een reservoir PSS oplossing opgeslagen constante borrelen van 95% / 5% O 2 / CO 2 mengsel in een 37 ° C waterbad (niet getoond). Voor oplossing uitwisseling wordt PSS oplossing gepompt het reservoir aan het weefsel baduitloop (onder poort) bij ongeveer 100 ml per minuut relatief snelle oplossing uitwisseling mogelijk. De oplossing uitlaat is door middel van een overloop-poort (bovenste poort) die constant volume (~ 10 ml) kan in het weefsel bath tijdens oplossingspolymerisatie uitwisseling. We maken gebruik van een Haake verwarmingscirculatiepomp om warm water te pompen door het weefsel bad jas (tot 37 ° C te houden). Weefsel baden kan worden verkregen bij een aantal leveranciers en komen in een verscheidenheid van formaten en stijlen aan de experimentele behoeften van de onderzoeker te passen. </li><li> Een krachtopnemer. Te isometrische spanning meten, de luchtpijp buis schroefdraad op L-vormige einden van twee staven aan (figuur 2A). Men dient een roestvrij stalen type dat geschikt biologisch materiaal. De topstang is via een klem om een ​​isometrisch krachtopnemer. De onderste stang houdt de trachea op een vaste positie en is bevestigd op een micrometer voor aanpassing van passieve spanning en / of spierlengte. Samentrekking van de trachea ontstaat spanning op de krachtopnemer, die wordt omgezet in een spanningssignaal van de voorversterker. De onderste stang kan ook worden geconfigureerd om twee rechthoekige platina platen (4 mm van elkaar) t zijn<html> hoed flank van de luchtpijp (Figuur 2B). De platina platen worden aangesloten op een Grass S88 stimulator dat de levering van een elektrisch veld in de luchtpijp kan. Open draden en soldeer worden bekleed met Sylgard (Sylgard 184 siliconenelastomeer, Dow Corning Corp, Midland, MI), om lekkage van metalen te voorkomen in de badoplossing. </li><li> A / D omzetter, computer en acquisitie software. Signalen van de voorversterker is opgenomen op een MacLab 8 A / D-systeem. Dit is een oudere versie van de huidige ADInstrument Powerlab hardware. We maken gebruik van het programma Grafiek (ADInstruments) die continue registratie van de spanning kan gedurende het experiment. Spanning generatie trachea spier is vrij langzaam, en daarom vinden we dat de verwerving van 100 punten per seconde voldoende is. De spanning meting wordt gekalibreerd met bekende gewichten (tot 5 gram) voor elk experiment. Vergelijkbare systemen zijn beschikbaar van andere venders (bijv. Biopac, GW Instruments). </li></ol>titel &quot;&gt; 2. Luchtpijp Isolatie <ol><li> Voor isolatie weefsel de krachtopnemer is gekalibreerd bekende gewichten en het weefsel bad gevuld met normale PSS (zie Tabel I). De lucht wordt ingesteld op een lichtstroom van O 2 / CO 2 te verkrijgen. </li><li> Luchtpijpen van twee maand of oudere muizen optimaal zijn. Jongere dieren worden gebruikt, maar luchtpijpen verkregen uit deze vereisen een grotere vaardigheid te monteren op de krachtopnemer draden vanwege hun kleine omvang. Voorafgaand aan de dissectie, worden muizen diep gesedeerd met isofluraan. Het juiste niveau van sedatie is bereikt, wanneer een teen-snuifje met een pincet niet in staat is om een ​​reactie uit te lokken. Muizen worden onmiddellijk opgeofferd door cervicale dislocatie Een belangrijke opmerking:. We hebben gezien dat Avertin (tribroomethanol), een kalmerend middel vaak gebruikt in muizen, sterk relaxerend effect op gladde spieren heeft dan ook en mag niet worden gebruikt voor de luchtpijp krimp studies. </li><li> De huid (en bont) wordt verwijderd uit thorax naar de keel. RIBS gesneden uit de bodem van het borstbeen, lateraal (aan beide zijden) naar de top van het hart. Het borstbeen en de ribben worden dan naar voren getrokken naar de keel naar het hart / longen, thymus, luchtpijp (ventrale) en de slokdarm (bevestigd aan - en dorsaal van trachea) te onthullen. </li><li> In de luchtpijp wordt uitgesneden door te snijden onder de bronchiale bifurcatie en boven de keelholte. De trachea wordt geplaatst in een ijskoude zuurstof (95/5) PSS oplossing (samenstelling zie tabel I). </li><li> In de luchtpijp wordt doorsneden schoon van de omliggende weefsels. Tijdens het reinigen kan de luchtpijp worden gehouden in de keelholte of onder de bifurcatie. Voorzichtigheid is echter geboden worden genomen niet rechtstreeks de tang van toepassing op de luchtpijp zelf. Fijne schaar kan worden afgesneden omringende weefsels, maar de snede moet worden altijd evenwijdig aan de trachea te beschadigen. Dit deel van de procedure wordt vergemakkelijkt indien de trachea preparaat vastgemaakt onder de bifurcatie en boven de keelholte op een Sylgard bekleed schaal (Sylgard 184 SiliconeElastomeer, Dow Corning Corp, Midland, MI). </li><li> Na het verwijderen van het omliggende weefsel, wordt de luchtpijp afgesneden onder de keelholte en boven de bronchiale bifurcatie en voorzichtig gemonteerd op de krachtopnemer draden. </li><li> De trachea wordt schroefdraad dan twee L-vormige metalen uitsteeksels (Figuur 2A). Een uitsteeksel is verbonden met een kracht-verplaatsing transducer voor continue registratie van isometrische spanning. Een uitsteeksel is verbonden met een micrometer. Het weefsel bad wordt vervolgens verhoogd zodat de trachea wordt ondergedompeld in PSS. Montage van de trachea worden uitgevoerd zo snel mogelijk de tijd die trachea wordt gehouden buiten PSS minimaliseren. Met wat oefening kun montage van de luchtpijp worden gedaan binnen een minuut, maar wij in het algemeen te voorkomen keer langer dan 3 minuten om het verlies van levensvatbaarheid te voorkomen. </li><li> De micrometer wordt aangepast langzaam naar een passieve spanning van ~ 10 mN (~ 1 gram-force) te verkrijgen. De optimale rust spanning werd empirisch bepaald en we hebben gemerkt dat passieve spanning van ~ 5-10 mN resulteert in een gelijkwaardige, maximale respons op hoge kalium stimulatie. Dit komt overeen met een aantal andere studies passieve spanning in dit bereik 16,17,18 gebruiken. In de eerste 5-10 minuten, trachea passieve spanning de neiging om enigszins dalen (spanningsrelaxatie verschijnsel) en micrometer wordt gebruikt om de passieve spanning ~ 10 mN in evenwicht regelen. De trachea mag evenwicht ten minste 1 uur voor experimentele problemen. </li></ol> 3. Hoog kalium Stimulatie Na equilibrering wordt de luchtpijp tweemaal gechallenged met een hoog kaliumgehalte PSS oplossing (67 mM KCl, Tabel I). De krimp vereist in het algemeen ~ 5-10 minuten te bereiken steady-state op welk moment de weefsel bad is meerdere malen gespoeld met een normale PSS om volledig te ontspannen de luchtpijp. Het kalium contractie een keer herhaald, en derde (indien nodig) tot reproduceerbare weeën verkregen. <pclass = &quot;jove_title&quot;&gt; 4. Contractie Evoked door elektrische stimulatie In de luchtpijp wordt geflankeerd door twee rechthoekige platina platen (elektroden) die elektrisch veld stimulatie (EFS) maken het mogelijk aan de voorbereiding. De contractie reactie EFS is een functie van frequentie en spanning. Het wordt ook beïnvloed door fysische parameters zoals het gebied van de elektroden en de onderlinge afstand. De kracht kenmerken van de stimulator ook van invloed zijn de reacties zodanig dat bij hogere spanningen en de huidige uitgangen van de stimulator kan zijn maximum bereiken. De kenmerken van een EFS-systeem moet worden bepaald door het onderzoeken van de spier contractie de reacties op verschillende prikkels duur, frequentie, spanningen en pulsduren. Voor onze experimentele opstelling, hebben we ontdekt dat elektroden gescheiden door ~ 4 mm, en het stimuleren amplitude van 44 V (0,5 ms pulsen) en 30 Hz zijn optimaal om reproduceerbare bijna-maximale contractiele respons te bereiken. 5. Contractie Evoked door cholinerge en dopaminerge stimulatie De reactie van de trachea om exogeen toegepast verbindingen ofwel geëvalueerd door toevoeging van een enkele dosis van het geneesmiddel van belang of door meerdere toevoeging van het geneesmiddel in een cumulatieve dosis wijze. Voor de luchtpijp, ons laboratorium routinematig gebruikt carbachol aan cholinerge receptoren te activeren, omdat, in tegenstelling tot acetylcholine, carbachol is niet afgebroken door acetylcholinesterase. Een redelijke dosis-respons loopt van 10 -8 tot 10 -5 M carbachol. Montage van de Log [carbachol]-contractiel response curve een Hill-type vergelijking kan een schatting van EC 50 (half-maximale effectieve concentratie) dat een maat is voor de gevoeligheid van tracheale contractie tot de cholinerge agonist 19. Het is vermeldenswaard dat een bepaalde dosis van carbachol een iets grotere reactie in een enkele dosis dan als onderdeel van een cumulatieve dosis-respons curve geeft. 6. Representatieve resultaten </p&gt; Een voorbeeld van een contractiele gevolg van de hoge kalium is weergegeven in figuur 3A. De contractie bereikt een maximum binnen ongeveer 10 minuten, maar kan een kleine daling daarna te laten zien. Tijdens de vroege wash-out van hoge kalium, kan de spier laten een tijdelijke toename in contractie dat is te wijten aan een daling van de temperatuur als het kleine volume van de niet-verwarmde PSS oplossing in de oplossing lijnen tijdelijk de voorbereiding perfuses. Dit kan worden geminimaliseerd door met een minimale dood volume in de buis verbinden van de verwarmde PSS reservoir en weefsels bad, en door uitwisseling oplossing relatief snel (in het algemeen we oplossingen pompen 100 ml / min). Elke voorbereiding zal een aantal verschillen in contractiele respons als gevolg van verschillen in spiermassa of schade opgelopen tijdens de dissectie. Figuur 3B toont twee luchtpijpen van verschillende spiermassa uitgedaagd met een hoge kalium en carbachol. Hoewel de cholinerge-opgeroepen contracties verschillen, zijn dey is gelijk na normalisatie naar de reactie met hoog kaliumgehalte oplossing (Figuur 3C). Figuur 4 toont een voorbeeld van een carbachol (cholinerge) opgeroepen contractie enkelvoudige doses (A) en cumulatieve groei (B). De carbachol oplossingen worden direct toegevoegd aan het bad en het borrelde gas helpt bij het snel mengen. Opgemerkt dat de toevoeging van een enkele dosis (bijvoorbeeld 1 pm, figuur 4A) een iets groter dan de reactie equivalenten tijdens een cumulatieve dosis-response curve (1 uM, Figuur 4B). Figuur 4C toont een grafiek van contractie als functie van carbachol concentraties met gegevens van Figuur 4B. Effecten van carbachol verzadigen op 10 -5 M concentratie. Hoewel cholinerge agonisten initieert krimp door calcium release mechanismen, wordt een substantieel onderdeel van de krimp ook gemedieerd door depolarisatie enactivering van voltage-afhankelijke calciumkanalen 20. Figuur 5A toont een voorbeeld van EFS-opgeroepen contracties. Luchtpijpen worden gestimuleerd met behulp van 0,5 milliseconde duur, 40 volt pulsen tot contracties een plateau te bereiken (zie kader a1). Een verhoging stimulatie frequenties veroorzaakt een verhoogde contractiele reactie (frekwentiekarakteristiek is weergegeven in figuur 5B). Elektrisch veld stimulatie is gebleken voornamelijk wekken contracties door activering presynaptische zenuwen. Dit blijkt uit het effect van botulinum toxine, een blocker van neurotransmitters die de meerderheid van de EFS-opgeroepen contracties van de luchtpijp 21 blokkeert. Bovendien tetrodotoxine, een agent die blokken Na + kanalen ook activiteit van de nervus remt en elimineert de reactie van de luchtpijp naar EFS. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/3703/3703fig1.jpg" /> Figuur 1. Schema thij grote signaal transductie in een geïsoleerde trachea voorbereiding. Afgebeeld is een cholinerge axon terminal innerveren een tracheale gladde spiercellen. De belangrijkste signaalwegen zijn M3-en M2-muscarine acetylcholine receptor activering (mAChR) die calcium vrijstelling veroorzaken door middel van IP3 receptoren (M3) en vermindering van cAMP (M2). M2-receptoren (en sommige bijdragen van de M3-receptoren) ook leiden tot cholinerge-opgeroepen depolarisatie dat L-type voltage-afhankelijke calciumkanalen en calcium influx activeert. Gemeenschappelijke contractiele agenten en hun effectoren zijn: 1. hoog kalium (depolariseren gladde spiercellen en cholinerge axon), 2. elektrisch veld stimulatie (EFS, depolariseert cholinerge axon) en 3. exogene toepassing van cholinerge middelen zoals acetylcholine of carbachol (activeert muscarinereceptoren rechtstreeks). <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/3703/3703fig2.jpg" /> Figuur 2. Schema van apparatuur die wordt gebruikt om de weeën te meten tracheale. A. De krachtopnemer, micrometer en weefsel bad gemonteerd zijn op het ondersteunen van stangen met schroef klemmen. De tracheale ring is voorzien van schroefdraad op de bovenste en onderste staven. In het diagram, wordt het weefsel bad gepositioneerd onder de bereiding (dat wil zeggen bij de montage van de luchtpijp naar de krachtopnemer). Tijdens de contractie studies, wordt het weefsel bad verticaal verplaatst naar de voorbereiding baden. B. elektrisch veld stimulatie onder stang aangepast twee platina platen die zijdelings zijn bevestigd aan de trachea bedrijf draad omvat. De platina platen zijn verbonden door elektrische draden een stimulator. <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/3703/3703fig3.jpg" /> Figuur 3. Voorbeelden van hoge kalium (67 mM) contractiele respons van de luchtpijp. (A) toont dubbele, reproduceerbare reacties op hoge kalium. (B) Voorbeelden van contractiele respons op carbachol van twee verschillende luchtpijpen. (C) De reacties op de luchtpijpen in B zijn vergelijkbaar wanneer normaliserend de hoge kalium respons. <img alt="Figuur 4" src="/files/ftp_upload/3703/3703fig4.jpg" /> Figuur 4. Voorbeelden van carbachol geïnduceerde contracties. (A) carbachol geïnduceerde contracties enkelvoudige doses, gevolgd door uitwassen. (B) Voorbeeld cumulatieve dosis-response curve voor trachea in A. (C) Piek contracties van B uitgezet als functie van carbachol concentratie. <img alt="Figuur 5" src="/files/ftp_upload/3703/3703fig5.jpg" /> Figuur 5. Voorbeelden van contracties opgeroepen door elektrisch veld stimulatie. (A) elektrisch veld stimulatie van trachea krimp met 0,5 ms puls, 40 volt, en verschillende stimulatie frequenties zoals aangegeven. Inzet is het tijd-uitgebreide krimp bij 30 Hz. (B) Peak contracties van A zijn plotted als functie van stimulatie frequenties. Normaal PSS <table border="1"><tbody><tr><td> Zout </td><td> Conc. (MM) </td><td> Bedrag (g / 2 L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 119 </td><td> 13,91 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 4,7 </td><td> 0,7 </td></tr><tr><td> KH 2 PO 4 </td><td> 1,18 </td><td> 0,32 </td></tr><tr><td> MgSO 4 x 7H 2 O </td><td> 1,17 </td><td> 0,58 </td></tr><tr><td> NaHCÛ3 </td><td> 18 </td><td> 3,02 </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> 0,026 </td><td> 0,1 ml 0,5 M </td></tr><tr><td> Glucose </td><td> 11 </td><td> 3,96 </td></tr><tr><td> Sucrose </td><td> 12,5 </td><td> 8,56 </td></tr><tr><td> CaCl2 </td><td> 2 </td><td> 400 ml 10 mM </td></tr></tbody></table> Hoge K + PSS (NACl en KCl aanpassingen) <table border="1"><tbody><tr><td> Zout </td><td> Conc. (MM) </td><td> Bedrag (g / 2 L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 56,7 </td><td> 6,628 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 67 </td><td> 9,991 </td></tr></tbody></table> . Tabel 1 Recept voor PSS-oplossingen. Opmerking: Oplossingen worden vers gemaakt per week, met ultrapuur water van goede kwaliteit, en worden opgeslagen in een koelkast niet langer dan 5 dagen om te voorkomen dat vervuilende groei.

<ol><li>Lloyd, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Building+better+mouse+models+of+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Allergy+Asthma+Rep%22%5BJournal%5D)">Building better mouse models of asthma.</a> Curr. Allergy Asthma Rep. 7, 231-236 (2007).</li>
<li>Hausding, M., Sauer, K., Maxeiner, J. H., Finotto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+models+in+allergic+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Transgenic models in allergic responses.</a> Curr. Drug Targets. 9, 503-510 (2008).</li>
<li>Eglen, R. M., Hegde, S. S., Watson, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscarinic+receptor+subtypes+and+smooth+muscle+function%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Rev%22%5BJournal%5D)">Muscarinic receptor subtypes and smooth muscle function.</a> Pharmacol Rev. 48, 531-565 (1996).</li>
<li>Ehlert, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+role+of+M2+and+M3+muscarinic+receptors+in+gastrointestinal%2C+airway+and+urinary+bladder+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Contractile role of M2 and M3 muscarinic receptors in gastrointestinal, airway and urinary bladder smooth muscle.</a> Life Sci. 74, 355-366 (2003).</li>
<li>Hall, I. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Second+messengers%2C+ion+channels+and+pharmacology+of+airway+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir.+J%22%5BJournal%5D)">Second messengers, ion channels and pharmacology of airway smooth muscle.</a> Eur. Respir. J. 15, 1120-1127 (2000).</li>
<li>Berridge, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inositol+trisphosphate+and+calcium+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Inositol trisphosphate and calcium signalling.</a> Nature. 361, 315-325 (1993).</li>
<li>Ehlert, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+analysis+of+the+contractile+role+of+M2+and+M3+muscarinic+receptors+in+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Receptors+Channels%22%5BJournal%5D)">Pharmacological analysis of the contractile role of M2 and M3 muscarinic receptors in smooth muscle.</a> Receptors Channels. 9, 261-277 (2003).</li>
<li>Sankary, R. M., Jones, C. A., Madison, J. M., Brown, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscarinic+cholinergic+inhibition+of+cyclic+AMP+accumulation+in+airway+smooth+muscle.+Role+of+a+pertussis+toxin-sensitive+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+Rev.+Respir+Dis%22%5BJournal%5D)">Muscarinic cholinergic inhibition of cyclic AMP accumulation in airway smooth muscle. Role of a pertussis toxin-sensitive protein.</a> Am. Rev. Respir Dis. 138, 145-150 (1988).</li>
<li>Widdop, S., Daykin, K., Hall, I. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+muscarinic+M2+receptors+in+cultured+human+airway+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Cell+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Expression of muscarinic M2 receptors in cultured human airway smooth muscle cells.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 9, 541-546 (1993).</li>
<li>Karaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+movements%2C+distribution%2C+and+functions+in+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Calcium movements, distribution, and functions in smooth muscle.</a> Pharmacol. Rev. 49, 157-230 (1997).</li>
<li>Somlyo, A. V., Somlyo, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electromechanical+and+pharmacomechanical+coupling+in+vascular+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">Electromechanical and pharmacomechanical coupling in vascular smooth muscle.</a> J. Pharmacol Exp. Ther. 159, 129-145 (1968).</li>
<li>Fryer, A. D., Jacoby, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscarinic+receptors+and+control+of+airway+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Muscarinic receptors and control of airway smooth muscle.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 158, 154-160 (1998).</li>
<li>Fernandez-Rodriguez, S., Broadley, K. J., Ford, W. R., Kidd, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+muscarinic+receptor+activity+of+airway+smooth+muscle+isolated+from+a+mouse+model+of+allergic+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Pulm.+Pharmacol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Increased muscarinic receptor activity of airway smooth muscle isolated from a mouse model of allergic asthma.</a> Pulm. Pharmacol. Ther. 23, 300-307 (2010).</li>
<li>Garssen, J., Loveren, H. V. an, Van Der Vliet, H., Nijkamp, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+isometric+method+to+study+respiratory+smooth+muscle+responses+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Methods%22%5BJournal%5D)">An isometric method to study respiratory smooth muscle responses in mice.</a> J. Pharmacol. Methods. 24, 209-217 (1990).</li>
<li>Vass, G., Horvath, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenosine+and+adenosine+receptors+in+the+pathomechanism+and+treatment+of+respiratory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">Adenosine and adenosine receptors in the pathomechanism and treatment of respiratory diseases.</a> Curr. Med. Chem. 15, 917-922 (2008).</li>
<li>Borchers, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methacholine-induced+airway+hyperresponsiveness+is+dependent+on+Galphaq+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Methacholine-induced airway hyperresponsiveness is dependent on Galphaq signaling.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 285, 114-120 (2003).</li>
<li>Sausbier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+rather+than+enhanced+cholinergic+airway+constriction+in+mice+with+ablation+of+the+large+conductance+Ca2%2B-activated+K%2B+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Faseb.+J%22%5BJournal%5D)">Reduced rather than enhanced cholinergic airway constriction in mice with ablation of the large conductance Ca2+-activated K+ channel.</a> Faseb. J. 21, 812-822 (2007).</li>
<li>Scheerens, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+topical+exposure+to+toluene+diisocyanate+in+mice+leads+to+antibody+production+and+in+vivo+airway+hyperresponsiveness+three+hours+after+intranasal+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care.+Med%22%5BJournal%5D)">Long-term topical exposure to toluene diisocyanate in mice leads to antibody production and in vivo airway hyperresponsiveness three hours after intranasal challenge.</a> Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 159, 1074-1080 (1999).</li>
<li>Kenakin, T. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKenakin%2C+TP+%22A+pharmacology+primer+%3A+theory%2C+applications%2C+and+methods%22">A pharmacology primer : theory, applications, and methods</a>. , 3rd edn, Academic Press/Elsevier. (2009).</li>
<li>Semenov, I., Wang, B., Herlihy, J. T., Brenner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BK+Channel+%7Bbeta%7D1+Subunits+Regulate+Airway+Contraction+Secondary+to+M2+Muscarinic+Acetylcholine+Receptor+Mediated+Depolarization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">BK Channel {beta}1 Subunits Regulate Airway Contraction Secondary to M2 Muscarinic Acetylcholine Receptor Mediated Depolarization.</a> J. Physiol. , 1803-1817 (2011).</li>
<li>Moffatt, J. D., Cocks, T. M., Page, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+epithelium+and+acetylcholine+in+mediating+the+contraction+to+5-hydroxytryptamine+in+the+mouse+isolated+trachea%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Role of the epithelium and acetylcholine in mediating the contraction to 5-hydroxytryptamine in the mouse isolated trachea.</a> Br. J. Pharmacol. 141, 1159-1166 (2004).</li>
<li>Bachar, O., Adner, M., Uddman, R., Cardell, L. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+growth+factor+enhances+cholinergic+innervation+and+contractile+response+to+electric+field+stimulation+in+a+murine+in+vitro+model+of+chronic+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Allergy%22%5BJournal%5D)">Nerve growth factor enhances cholinergic innervation and contractile response to electric field stimulation in a murine in vitro model of chronic asthma.</a> Clin. Exp. Allergy. 34, 1137-1145 (2004).</li>
<li>Weigand, L. A., Myers, A. C., Meeker, S., Undem, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+cell-cholinergic+nerve+interaction+in+mouse+airways%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mast cell-cholinergic nerve interaction in mouse airways.</a> J. Physiol. 587, 3355-3362 (2009).</li>
<li>Kao, J., Fortner, C. N., Liu, L. H., Shull, G. E., Paul, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ablation+of+the+SERCA3+gene+alters+epithelium-dependent+relaxation+in+mouse+tracheal+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Ablation of the SERCA3 gene alters epithelium-dependent relaxation in mouse tracheal smooth muscle.</a> Am. J. Physiol. 277, 264-270 (1999).</li>
<li>Krane, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin+5-deficient+mouse+lungs+are+hyperresponsive+to+cholinergic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Aquaporin 5-deficient mouse lungs are hyperresponsive to cholinergic stimulation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 14114-14119 (2001).</li>
<li>Semenov, I., Wang, B., Herlihy, J. T., Brenner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BK+channel+beta1-subunit+regulation+of+calcium+handling+and+constriction+in+tracheal+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung.+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">BK channel beta1-subunit regulation of calcium handling and constriction in tracheal smooth muscle.</a> Am. J. Physiol. Lung. Cell Mol. Physiol. 291, L802-L810 (2006).</li>
<li>Fortner, C. N., Breyer, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EP2+receptors+mediate+airway+relaxation+to+substance+P+ATP%2C+and+PGE2%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">EP2 receptors mediate airway relaxation to substance P ATP, and PGE2.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 281, 469-474 (2001).</li>
<li>Hay, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+modulation+of+endothelin+ligand-induced+contraction+in+isolated+tracheae+from+endothelin+B+%28ET%28B%29%29+receptor+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Differential modulation of endothelin ligand-induced contraction in isolated tracheae from endothelin B (ET(B)) receptor knockout mice.</a> Br. J. Pharmacol. 132, 1905-1915 (2001).</li>
<li>Stengel, P. W., Yamada, M., Wess, J., Cohen, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M%283%29-receptor+knockout+mice%3A+muscarinic+receptor+function+in+atria%2C+stomach+fundus%2C+urinary+bladder%2C+and+trachea%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">M(3)-receptor knockout mice: muscarinic receptor function in atria, stomach fundus, urinary bladder, and trachea.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp Physiol. 282, R1443-R1449 (2002).</li>
<li>Trevisani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+in+vitro+expression+of+B1+receptor+in+the+mouse+trachea+and+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Evidence for in vitro expression of B1 receptor in the mouse trachea and urinary bladder.</a> Br. J. Pharmacol. 126, 1293-1300 (1038).</li>
<li>Mehats, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PDE4D+plays+a+critical+role+in+the+control+of+airway+smooth+muscle+contraction%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">PDE4D plays a critical role in the control of airway smooth muscle contraction.</a> FASEB J. 17, 1831-1841 (2003).</li>
<li>Kumar, R. K., Herbert, C., Foster, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%22classical%22+ovalbumin+challenge+model+of+asthma+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">The "classical" ovalbumin challenge model of asthma in mice.</a> Curr. Drug Targets. 9, 485-494 (2008).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Het protocol hier gepresenteerde biedt een fysiologische voorbereiding op de luchtwegen spierfunctie te beoordelen. Wij over het algemeen 3-4 orgel badpreparaten gelijktijdig te werken, echter, voorverpakte systemen zijn verkrijgbaar bij een aantal leveranciers dat de gelijktijdige metingen van maximaal 8 preparaten (ADInstruments, World precisie-instrumenten, en Harvard Apparatus) mogelijk te maken. We hebben gebruik gemaakt van een aantal krachtopnemers en weefsel orgaan baden met gelijkwaardige resultaten opleveren. ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Analoog-digitaal converter </td><td> ADInstruments </td><td> PowerLab 4/35 </td><td></td></tr><tr><td> Carbachol (Carbamoylcholine Chloride) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C4832 </td><td> 10 -2 M in water (aliquots kunnen worden opgeslagen bij -20 ° C) </td></tr><tr><td> Grafieken Software </td><td> ADInstrtuments </td><td> LabChart </td><td></td></tr><tr><td> Verwarming Circulator </td><td> Haake </td><td> Mixer Mill MM400 </td><td></td></tr><tr><td> Isometrische Force Transducer </td><td> Kent Wetenschappelijk </td><td> TRN001 </td><td></td></tr><tr><td> Stimulator </td><td> Grass Technologies </td><td> S88 Dual Output Squzijn Pulse Stimulator </td><td></td></tr><tr><td> Tissue Bath </td><td> WPI </td><td> 47264 </td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro metingen van tracheale vernauwing bij muizen

In vitro Measurements of Tracheal Constriction Using Mice

Transgene en knock-out muizen zijn krachtige tools voor het onderzoek van de fysiologie en pathofysiologie van de luchtwegen 1,2. In vitro tensometry van geïsoleerde tracheapreparaten heeft bewezen een bruikbare test van de luchtweg-gladde spier (ASM) contractiele respons in genetisch gemodificeerde muizen zijn. Deze in vitro tracheapreparaten zijn relatief eenvoudig, zorgen voor een stevige reactie, en behouden van zowel functionele cholinerge zenuwuiteinden en spieren reacties, zelfs na lange incubaties. Tracheale tensometry biedt ook een functioneel onderzoek naar verschillende second messenger signaalwegen dat contractie van glad spierweefsel invloed bestuderen. Contractie in de luchtpijp wordt voornamelijk gemedieerd door parasympathische, cholinerge zenuwen die acetylcholine los op ASM (figuur 1). De belangrijkste ASM acetylcholine receptoren zijn muscarine M2 en M3 die zijn G i / o en GQ gekoppelde receptoren, respectievelijk <sup&gt; 3,4,5. M3-receptoren op te roepen krimp door het koppelen aan Gq aan fosfolipase C, verhoging van IP3 de productie en de IP3-gemedieerde calcium vrijstelling uit het sarcoplasmatisch reticulum 3,6,7 te activeren. M2 / G i / o signalering wordt dat contracties verbeteren door remming van adenylaatcyclase leidt tot een afname van cAMP 5,8,9,10. Deze wegen vormen de zogenaamde &quot;farmaco-contractie koppeling&quot; van de luchtweg-gladde spier 11. Bovendien cholinerge signalering via M2 receptoren (gemoduleerd door M3 signaal) omvat signaalwegen die de ASM die op zijn beurt activeren L-type, voltage-afhankelijk calcium kanalen (figuur 1) en calciuminflux (zogenaamde &quot;excitatie-contractie&quot; depolariseren ) 4,7. Meer gedetailleerde recensies over signaalwegen het regelen van luchtwegvernauwing kan worden gevonden 4,12. De bovenstaande paden lijken te zijn geconserveerd tussen muizen en andere soorten. Echter, de muis luchtpijpen verschillen van andere soorten in een aantal signaalwegen. Het meest prominent is hun gebrek aan contractiele respons op histamine en adenosine 13,14, zowel bekende ASM modulatoren in mensen en andere soorten 5,15. Hier dienen protocollen voor de isolatie van muizen tracheale ring en de in vitro meten van de contractiele output. Inbegrepen zijn beschrijvingen van de apparatuur configuratie, de luchtpijp ring isolatie en contractiele metingen. Voorbeelden worden gegeven voor het oproepen van contracties indirect met behulp van hoge kalium stimulatie van zenuwen en rechtstreeks door depolarisatie van ASM spier om voltage-afhankelijke calcium influx te activeren (1. Hoge K +, figuur 1). Daarnaast worden methoden beschreven voor stimulatie zenuwen alleen door elektrische veld stimulatie (2. EFS, figuur 1), of directe stimulatie van ASM spier gebruik van exogene neurotransmitter bij het ​​bad (3. Exogene ACH figuur 1). Dit FLExibility en gemakkelijke bereiding maakt de geïsoleerde trachea ring model een robuust en functionele assay voor een aantal signaleringscascades betrokken luchtweg gladde spieren.

Transgene muizen zijn zeer nuttig in het toeschrijven van een fysiologische functie van genen. Als zodanig onderzoek in het algemeen, en functionele studies van de luchtwegen, in het bijzonder, hebben ondergaan een opmerkelijke verschuiving in de richting van muismodellen. Hier voorzien protocollen<em&gt; In vitro</em&gt; Luchtpijp vernauwing studies om een ​​soepele spierfunctie in muriene luchtwegen te evalueren.

In vitro metingen van Tracheale Vernauwing bij muizen

Transgene en knockout-muizen zijn krachtige instrumenten geweest voor het onderzoek naar de fysiologie en pathofysiologie van de luchtwegen1,2. In vitro tensometrie van ...

Het algemene doel van deze procedure is om de contractiliteit van het gladde spierweefsel van de luchtpijp van muizen te meten. Dit wordt bereikt door eerst de weefselbaden voor te bereiden en de isometrische krachttransducer te kalibreren. Vervolgens wordt de trachea van de muis geïsoleerd en bevestigd aan de staven van de krachttransducer.Vervolgens wordt de trachea gestimuleerd en wordt de resulterende spanning gemeten en geanalyseerd. Uiteindelijk kunnen de resultaten de contractiliteit van de tracheale spieren aantonen via isometrische krachtmetingen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals in vivo metingen van de luchtwegweerstand, is dat in vitro spanningsmetingen een directere analyse van de contractiliteit van de gladde spiercellen bieden.Het nadeel van deze techniek is dat het gaat om een organenbad-preparaat, waardoor circulerende factoren die de contractiliteit van glad spierweefsel in vivo kunnen beïnvloeden, mogelijk afwezig zijn in het in vitro preparaat. Hoewel deze methode inzicht kan bieden in het gladde spierweefsel van de trachea van de muis, kan deze ook worden toegepast op andere gladde spierweefsels, zoals grote vaten en diverse gladde spieren van de darm en blaas, mits ringpreparaten van het spierweefsel groot genoeg zijn om op de draden van een krachttransducer te worden gemonteerd.Twee componenten van het apparaat voor contractiemeting vereisen een nadere beschrijving: het weefselbad en de krachttransducer. Het weefselbad houdt een zuurstofrijke fysiologische oplossing op een warme temperatuur voor trachea-ringen van muizen. Er wordt gebruikgemaakt van een weefselbad van 10 milliliter, dat is uitgerust met een watermantel voor warmte, een glazen inlaat om zuurstof in te bellen, en inlaat- en uitlaatpoorten om de opgeslagen oplossingen te vervangen.Er is een reservoir met PSS-oplossing die is belucht met zuurstof en op 37 °C wordt gehouden door middel van een waterbad voor oplossinguitwisselingen. De PSS-oplossing wordt vanuit het reservoir naar de inlaat van het weefselbad gepompt met een snelheid van ongeveer 100 mL per minuut. Ondertussen pompt een verwarmde circulatiepomp water van 37 °C door de mantel van het weefselbad.Het tweede relevante stuk apparatuur is de krachttransducer. Deze wordt gebruikt om de isometrische spanning in de trachea te meten. De tracheabuis wordt over de L-vormige uiteinden van twee staven geschoven, gemaakt van biologisch compatibel materiaal zoals roestvrij staal.De bovenste staaf is via een clip verbonden met een isometrische krachttransducer. De onderste staaf houdt de trachea in een vaste positie en is gemonteerd op een micrometer voor de aanpassing van de passieve spanning en/of spierlengte. Contractie van de trachea creëert spanning op de krachttransducer, die bij de voorversterker voor elektrische stimulatie wordt omgezet in een voltagesignaal.De onderste staaf is voorzien van twee rechthoekige platinen platen die vier millimeter uit elkaar zijn geplaatst om de trachea te flankeren. De platinen platen zijn aangesloten op een conventionele stimulator, zoals een grass S 88.Bij deze preparatie moeten de open draden worden gesoldeerd en bekleed met bescherming om uitloging van metalen in de badoplossing te voorkomen. Aanvullende apparatuur omvat een computer met ad-converter en acquisitie-software. Signalen van de voorversterkers worden geregistreerd op een Mac Lab eight ad-systeem.Voordat u begint met de isolatie van het weefsel, moet het weefselbad zijn gevuld met normale PSS en moet de luchttoevoer worden ingesteld om een lichte stroom zuurstof te verkrijgen. Kalibreer daarnaast de krachttransducers door bekende gewichten aan de draden van de krachttransducer te bevestigen en kalibreer de acquisitiesoftware dienovereenkomstig.Offer muizen die ten minste twee maanden oud zijn, omdat de kleinere trachea's van jongere muizen moeilijker te dissekeren en te monteren zijn. We hebben waargenomen dat het sedativum aine triol, dat veelvuldig bij muizen wordt gebruikt, sterke ontspannende effecten heeft op de gladde spieren van de luchtwegen en daarom niet gebruikt mag worden voor studies naar trachea-contractie. Plaats de geïsoleerde trachea na isolatie in een schaal gecoat met s cigar met ijskoude, zuurstofrijke PSS-oplossing.Zet de trachea met spelden vast op de schaal onder de bifurcatie en boven de pharynx onder een dissectiemicroscoop. Verwijder het omliggende weefsel met een pincet. Houd de trachea vast bij de pharynx of onder de bifurcatie, maar breng het pincet nooit direct aan op de trachea zelf.Op dezelfde manier, bij het wegsnijden van weefsel, mag er alleen parallel aan de trachea worden gesneden nadat het omringende weefsel is verwijderd. Snijd de trachea loodrecht onder de farynx en boven de bronchiale bifurcatie door. De trachea kan nu op het apparaat worden gemonteerd.De montage van de trachea moet zo snel mogelijk gebeuren om de tijd dat de trachea buiten de PSS verblijft te minimaliseren. Rijg de trachea voorzichtig, maar snel, over de twee L-vormige metalen pinnen. Til vervolgens het weefselbad snel op om de trachea in warme PSS te dompelen. Nu de trachea weer in PSS ligt, wordt de micrometer langzaam bijgesteld om een passieve spanning van ongeveer vijf tot 10 millinewtons of een halve tot één gram kracht te verkrijgen.Dit is de optimale rustspanning gedurende de volgende vijf tot 10 minuten. De spanning zal afnemen, dus blijf aanpassingen maken om de gewenste spanning te behouden totdat deze is gestabiliseerd. Zodra de spanning stabiel is, laat de trachea ten minste één uur equilibreren voordat er experimenteel contracties worden opgewekt.Na het equilibreren kunnen contracties worden opgewekt met kalium, elektrische veldstimulatie of relevante geneesmiddelen. Voor kaliumstimulatie wordt de trachea blootgesteld aan een PSS-oplossing met een hoog kaliumgehalte. Over het algemeen bereiken de contracties na vijf tot 10 minuten een steady state; spoel het bad op dat moment meerdere keren met normale PSS om de trachea volledig te laten ontspannen.Schakel vervolgens telkens terug naar de PSS-oplossing met een hoog kaliumgehalte. Totdat reproduceerbare contracties zijn verkregen, zijn er gewoonlijk maximaal drie baden nodig. Elektrische veldstimulatie wordt toegediend via platinen platen die de trachea flankeren.De contractiele respons wordt beïnvloed door het oppervlak van de elektroden en de afstand tussen hen. Vanwege de vermogenskenmerken van de stimulator bereiken de stroomuitgangen een maximum bij hogere voltages. Een respons die dicht bij het maximum ligt, kan worden bereikt met pulsen van 0,5 milliseconde of 44 volt toegedient met intervallen van 30 hertz.Dit zal echter variëren per systeem en dient empirisch te worden bepaald. Het systeem maakt het ook mogelijk om de respons van de trachea op een exogeen toegediend geneesmiddel te meten. De badoplossing, enkelvoudige doses van een geneesmiddel of opeenvolgende toevoegingen van een geneesmiddel in de vorm van een cumulatieve dosis kunnen worden geëvalueerd.Carbahol kan bijvoorbeeld worden gebruikt om cholinerge receptoren te activeren. In tegenstelling tot acetylcholine wordt het niet afgebroken door acetylcholinesterase en produceert het een stabielere respons. Door de resultaten via een vergelijking van het Hill-type aan een logaritmische responscurve te fitten, kan de half-maximale effectieve concentratie of C 50 worden geschat.Een tracheale preparatie werd gestimuleerd met een bad met een hoge kaliumconcentratie. De contractie bereikte binnen ongeveer 10 minuten een maximum. Tijdens het begin van het uitwassen van het hoge kalium vertoonde de spier een voorbijgaande toename van de contractie als gevolg van een temperatuurdaling.Gebruik een klein volume onverwarmde PSS-oplossing. Perfundeer de preparatie kortstondig via de oplossingslijnen. Vervolgens werden twee tracheae met verschillende spiermassa uitgedaagd met hoog kalium en carbachol.Hoewel de door cholinerge stimulatie opgewekte contracties verschilden, waren ze vergelijkbaar na normalisatie ten opzichte van de respons op een oplossing met een hoge kaliumconcentratie. Vervolgens werd carbachol gebruikt om contractie op te wekken met behulp van enkelvoudige doses en een cumulatieve toename. OL-oplossingen werden direct aan het bad toegevoegd.Het is vermeldenswaard dat de toevoeging van een enkele dosis een iets sterkere respons gaf dan de equivalente concentratie tijdens een cumulatieve dosis-responscurve. Het uitzetten van de contractiekracht als functie van de carbacholconcentraties toonde aan dat de effecten van carbachol verzadigen bij 10⁻⁵ M. Trachea's werden onderworpen aan EFS met pulsen van 0,5 milliseconde en 40 volt totdat de contracties een plateau bereikten. Een verhoging van de stimulatiefrequentie veroorzaakte een toegenomen contractierespons.Dit kan worden verklaard doordat is aangetoond dat EFS contracties hoofdzakelijk opwekt door presynaptische zenuwen te activeren. Botulinetoxine blokkeert bijvoorbeeld het grootste deel van de door EFS opgewekte contracties van de trachea. Bovendien remt tetrodotoxine de zenuwactiviteit en elimineert het de respons van de trachea op EFS.Zodra de techniek beheerst is, kan deze in ongeveer anderhalf uur worden uitgevoerd als dit correct gebeurt. Trachea's blijven echter gedurende vele uren levensvatbaar in een organenbus tijdens log-experimenten.

in-vitro-measurements-of-tracheal-constriction-using-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Herhaalde metingen van knaagdieren respiratoire fysiologie en bemonstering van de luchtwegen ontstekingscellen wenselijk zijn, maar over het algemeen niet haalbaar. Hier beschrijven we een herhaalbare methode voor het mondeling intuberen muizen dat herhaalde metingen van de luchtwegen hyperreactiviteit en de bemonstering van de luchtwegen ontstekingscellen vergunningen.

Een reversibele, niet-invasieve methode voor Airway Resistance Metingen en bronchoalveolaire lavage Fluid Sampling in Muizen

Dwars aorta vernauwing (TAC) in de muis is een veel gebruikte experimenteel model om de mechanismen die ten grondslag liggen cardiale hypertrofie en hartfalen ontwikkeling te bestuderen. Hier beschrijven we de procedures aan vernauwen de aorta naar een reproduceerbare mate van cardiale hypertrofie in muizen te creëren.

Dwars Aorta Vernauwing in Muizen

We hebben een eenvoudige, betrouwbare en relatief goedkope methode voor endotracheale intubatie bij muizen via directe laryngoscopie behulp van een otoscoop met een 2,0 mm speculum ontwikkeld. Deze techniek is atraumatische en kan worden gebruikt voor herhaalde metingen in chronische experimenten. We vinden het superieur aan tracheostomie of eerder gerapporteerde niet-chirurgische technieken.

Luchtpijpintubatie in Muizen<em&gt; Via</em&gt; Directe laryngoscopie behulp van een otoscoop

Dit artikel beschrijft een striaghforward en efficiënte methode van intubatie muizen voor longfunctie metingen of pulmonale instillatie, die het mogelijk maakt de muizen om te herstellen en studeerde worden op latere tijdstippen. Deze procedure houdt een goedkope optische vezel lichtbron die direct verlicht de luchtpijp.

Een eenvoudige methode van de Muis van Lung intubatie

De endotheliale glycocalyx / endotheliale oppervlaktelaag is ideaal bestudeerd met behulp van intravitale microscopie. Intravitale microscopie is technisch uitdagend in een bewegend orgaan zoals de longen. We zien hoe gelijktijdige helderveld en fluorescentiemicroscopie kan worden gebruikt om endotheeloppervlak laagdikte schatten in een vrij...

In vivo meting van de muis Pulmonary Endothelial oppervlaktelaag

Het doel van dit protocol is om geautomatiseerde methoden te bieden om chronische longpathologieën te kwantificeren in een muismodel van COPD. Het protocol omvat het blootstellen van muizen aan sigarettenrook (CS), het meten van longfunctie, het opblazen van de longen en het gebruik van morfometrische methoden om emfyseem en kleine luchtwegremodellering bij muizen te meten.

Geautomatiseerde Meting van longemfyseem en Kleine luchtweg remodeling in sigarettenrook blootgesteld Muizen

Dit artikel presenteert een snelle en eenvoudige methode voor het toedienen van bleomycine rechtstreeks in de muis luchtpijp via intubatie. Belangrijkste voordelen van deze werkwijze zijn dat het zeer reproduceerbaar, gemakkelijk onder de knie, en vereist geen gespecialiseerde apparatuur of lange hersteltijden.

Een verbeterde werkwijze voor snelle intubatie van de trachea in muizen

Hier presenteren we een protocol van Transverse aorta vernauwing (TAC) via een laterale Thoracotomie. Deze techniek is een minimaal invasieve, gesloten borst chirurgische ingreep gericht om overbelasting van de druk en hartfalen in muizen met behulp van TAC laboratorium standaardinstellingen te simuleren.

Een gesloten-borst-Model voor het opwekken van transversale aorta vernauwing in muizen

Het doel van dit artikel is het beschrijven van een verfijnde methode van intubatie van de laboratoriummuis. De methode is niet-invasief en daarom ideaal voor studies die seriële controle van de ademhalingsfunctie en/of instillatie van behandelingen in de long vereisen.

Herhaalde Orotracheale intubatie bij muizen

Verschillende diermodellen van congenitale diafragmatische hernia en foetale tracheale occlusie bieden voor- en nadelen met betrekking tot ethische kwesties, kosten, chirurgische moeilijkheidsgraad, grootte, overlevingspercentages en beschikbaarheid van genetische hulpmiddelen. Dit model biedt een nieuw hulpmiddel om de impact van zowel tracheale occlusie als verhoogde luminale druk op de longontwikkeling te bestuderen.

Transuterine foetale tracheale occlusie model in muizen

Hier stellen we een protocol voor intratracheale lipopolysaccharide (LPS) levering via niet-invasieve orofaryngeale endotracheale intubatie. Deze methode minimaliseert het trauma van de chirurgische procedure voor het dier en levert LPS nauwkeurig af aan de luchtpijp en vervolgens aan de longen.

Niet-invasieve intratracheale lipopolysaccharide-instillatie bij muizen

Leer tracheale gladde spiercontractiliteit meten bij muizen via in vitro tensometrie van geïsoleerde tracheale ringen. Deze methode onderzoekt luchtwegfysiologie en farmacologische mechanismen.

In vitro metingen van Tracheale Vernauwing bij muizen

Meer video's verkennen