Name: Bepaling van de zoogdieren bloedcellen, celgrootte en Health Met behulp van de Moxi Z Mini geautomatiseerde cel Counter (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-21T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 16 s
Description: Leer hoe je de Moxi Z Mini gebruikt voor snelle celanalyse van zoogdiercellen met impedantiemeting en microfluidische technologie. Deze methode levert nauwkeurige resultaten in acht seconden.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Bereiding van de monsters <ol><li> Verdun de celsuspensie met ORFLO verdunningsmiddel of een geschikt oplosmiddel, zodat de cel concentratie binnen het bereik van het instrument (3.000 tot 500.000 cellen / ml voor Type M-cassette, of 3.000 tot 2.500.000 cellen / ml voor cassette Type S). </li><li> Een verdunning van 1u05-01u20 (Type M cassette) of geen verwatering tot 1:5 verdunning (Type S cassette) wordt aanbevolen voor de meeste zoogdiercellijnen, maar de aangewezen verdunning is afhankelijk van celtype en zaaien dichtheid. De hoeveelheid vereist een nauwkeurige telling ongeveer 75 pi. </li></ol> 2. Running Monsters <ol><li> Zet de Moxi Z op door op de knop en het beginscherm wordt weergegeven. </li><li> Druk op de lade naar beneden en plaats een cassette in de Moxi Z. De Pipetteer 75μL Sample ... het scherm wordt weergegeven. </li><li> Pipetteer een 75 ul monster in de vulopening van de cassette (blauwe ovaallabel 1 of 2, afhankelijk van welk uiteinde van de cassette is geplaatst in het instrument). Deze zijn disposable cassettes die kunnen worden gebruikt 2 tests. Opmerking: Plaats de pipetpunt direct in de laden goed bij ~ 45 ° hoek, zodat de tip wordt gevangen onder de voorste rand van de put. Bij afgifte, is het belangrijk dat het vacuüm niet &quot;vooruit&quot; van de afgifte van de vloeistof als kan leiden luchtbellen de cassette te voeren. Het wordt aanbevolen om een ​​kleine kraal (de grootte van binnenkomst goed) van vloeibare vorm over het wel en hebben tijdens het afgeven. </li><li> Voor het tellen van de meeste cellen van zoogdieren, waar dan ook raak het scherm aan te beginnen. Voor het tellen van zeer kleine deeltjes (4 tot 8 micrometer gemiddelde diameter voor Type M en 3-8 micrometer gemiddelde diameter voor type S), kan de Moxi Z worden uitgevoerd in Small Particle Mode. Opmerking: de cassettes wordt in de zwarte balk boven het scherm. In deze stand Moxi Z stelt de diameter schaal 2 tot 10 urn als standaard en voert de telling uzingen geoptimaliseerde parameters voor de detectie van kleine cellen. Druk op de TOUCH HIER Small Particle Mode knop (zwart vierkant) om de test te starten en uit te voeren in deze modus. </li><li> De Moxi Z begint de test en het aantal cellen resultaten volledig zal zijn in ongeveer 8 seconden (type M cassette) of 15 seconden (Type S cassette). </li><li> De Curve Montage en MVI-berekeningen begint automatisch en vereisen slechts een paar extra seconden. Wanneer een geschikte fit is gevonden, worden de resultaten dan automatisch op het scherm. </li><li> Om Poortsignalen de standaard overname mode te maken, drukt u op de Curve Fit graaf om te schakelen naar Poortsignalen modus. </li><li> Op dit punt de cassette kan worden verwijderd uit het apparaat. </li></ol> 3. Het beheer van gegevens <ol><li> Als Automodus scaling is uitgeschakeld, worden de resultaten in eerste instantie weergegeven voor een curve fit rekenen op een diameter schaal van 2-34 micrometer (Type M cassette) of 2-26 μm (Type S cassette). Als Automode schaal is dan de Moxi Z de horizontale as (x-as) automatisch aanpassen aan de gamma die het dichtst bij de breedte van de curve-fit populatie tegelijkertijd alle curve-fit worden weergegeven. </li><li> Als Automodus scaling is uitgeschakeld, om handmatig de resultaten weer te geven met een hogere resolutie, raakt u het 2-26 micrometer pictogram (type M) of de 2-18 micrometer icoon (Type S). Opmerking: De cassette type wordt aangegeven in het blauwe vak in de linkerbovenhoek van het scherm. Dit wordt aanbevolen als tellen kleinere cellen of deeltjes zowel de curve-fitting mogelijkheden als de gebruiker in staat om visueel onderscheid nuances van de gegevens te verbeteren. </li><li> Bij het verhogen van de horizontale resolutie, zal de schaal knop dynamisch aan te passen om te fietsen tussen de beschikbare x-as schaal bereiken: 2-34, 2-26, 2-18, en 2-10 um voor de Type M cassette, of 2 -26, 2-18 en 2-10 urn voor de cassette type S. Deze functie is alleen beschikbaar onmiddellijk na een celgetal. </li><li> Count informatie (cellen / ml) voor de curve-fit gemonteerd of gated regio wordt weergegeven in een zwarte doos onder de linkerkant van het histogram. De gemiddelde celgrootte informatie wordt weergegeven in de zwarte doos onder de rechterkant van het histogram. </li><li> Het MVI-waarde wordt weergegeven een blauw vak in de rechterbovenhoek van het histogram. Als de test is uitgevoerd in kleine deeltjes-modus, is de MVI niet van toepassing en zal worden weergegeven als &quot;MVI = SPM&quot;. Ook als de concentratie van cellen buiten het MVI werkbereik, een boodschap van &quot;MVI = Out of Range&quot; wordt weergegeven. </li><li> Om de huidige histogram op te slaan, raakt u de OK icoon. Dit bespaart de gegevens met een naam van &quot;Test XXX&quot; waarbij XXX de desbetreffende test nummer. </li><li> Om handmatig de poort van de histogram, raakt aan de Curve Fit telresultaten knop drukt. Dit maakt Poortsignalen de standaard overname-modus. Schuif vervolgens elke blauwe gating marker om de poorten te stellen of tik op ee links en rechts pijltjes (deze verschijnen op het aanraken van de blauwe gating marker) voor fijn hek aanpassingen Alleen de cellen tussen de markers worden geteld. Het histogram verticale schaal wordt automatisch geschaald op basis van de curve-fit bevolking amplitude. Om deze verticale schaal aan te passen, veegt u het scherm omhoog of omlaag in het histogram regio. </li><li> Raak het Gated graaf resultaten om de display terug te keren naar curve fit-modus en de curve fit-modus de standaard overname mode te maken. </li><li> Druk vervolgens op de OK icoon om de resultaten op te slaan en naar het startscherm terug te keren. Om de resultaten te verwijderen, drukt u op het pictogram Verwijderen op elk gewenst moment definitief te verwijderen van de resultaten van de test. </li></ol> 4. Analyse van Eerder Verworven gegevens <ol><li> Om een opgeslagen toets te openen, drukt u op de Histogram icoon op het beginscherm. </li><li> Pictogrammen voor maximaal negen opgeslagen histogrammen wordt weergegeven op het scherm.Druk op de juiste pictogram voor de test van belang of druk op de Page Up of Page Down pictogrammen om meer testresultaten te bekijken. </li><li> Elk histogram zal worden geopend in een van beide de Curve Fit graaf-modus of Gesloten graaf-modus, afhankelijk van hoe het is opgeslagen. In een gesloten Graaf modus kunt gating markers worden geplaatst zoals gewenst door te schuiven elke blauwe gating marker onafhankelijk van elkaar. Auto Gate door het aanraken van de gewenste piek. Tik op om te schakelen tussen de gated graaf en Curve Fit graaf modi. </li><li> Druk op de Zoom en Unzoom pictogrammen om de verticale schaal van het histogram aan te passen. De verticale schaal kan ook worden veranderd door verticaal een vinger op het scherm omhoog (te verhogen) of omlaag (te verlagen). </li><li> Druk op de Delete icoon om definitief te verwijderen van de resultaten van de test. </li><li> Druk op de Done-pictogram omsluit de testresultaten en terug te keren naar het beginscherm. (Opmerking: ingezoomd zicht worden niet opgeslagen.) </li></ol> 5. Gegevens overzetten naar een pc <ol><li> De gegevens kunnen worden overgebracht naar een PC met behulp van de Orflo Moxichart applicatie of via een USB-overdracht door het inpluggen van de Moxi Z USB-kabel aan een PC of Mac. Voor de Bluetooth-overdracht (MoxiChart), eerst vast te stellen van het toestel Bluetooth-ID door te drukken op het Bluetooth-pictogram in het beginscherm van de Moxi Z-eenheid. </li><li> Op de computer, opent u de MoxiChart applicatie en klik op Bluetooth-pictogram in de rechter bovenhoek. Kies vervolgens het apparaat dat overeenkomt met de Bluetooth-ID van de Moxi Z en selecteer een doelmap voor de geüploade bestanden. </li><li> Moxichart automatisch de overdracht van alle bestanden naar de opgegeven map via de Bluetooth-verbinding. </li><li> Bestanden die via Bluetooth (MoxiChart) of USB kan worden geopend en analydirect zed met de MoxiChart aanvraag, of, omdat ze zijn opgemaakt. csv-bestanden, kunnen ze direct worden geopend in Microsoft Excel of andere programma&#39;s voor gegevensanalyse naar bijkomend / custom analyse. </li></ol> 6. Representatieve resultaten Om de precisie en nauwkeurigheid van de Moxi Z te beoordelen, tellingen van HEK-293 cellen, HeLa-cellen, CHO-K1, Gist, Jurkat E6-1-cellen, PC12 cellen, en precisie-gekalibreerd kraal suspensies met concentraties variërend van 0-500,000 cellen / ml (type M cassette) en 0-2-2.5e 6 cellen / ml (Type S cassette) werden geteld en vergeleken met een Coulter Z2 en Moxi Z. Alle zoogdiercellen werden verkregen van de American Type Culture Collection (ATCC) en gekweekt zoals eerder beschreven 7-11. In het kort werden cellen gekweekt in suspensie in 75 mm2 weefselkweekflessen met kern media RPMI 1640 (Jurkat E6-1, PC12), MEM (HEK-293, HeLa-cellen) of F12K (CHO-K1) cellen. Alle media werd aangevuld met10% foetaal runderserum en 100 U penicillin/100 pg streptomycine. Kolven werden gehandhaafd in een incubator bij 37 ° C met 5% CO2. Cellen werden elke 3 dagen. Gistcellen (X5, C. albicans, Vin 13) werden geschonken en gebruikt onmiddellijk als voorzien. Uitgangsmonster concentraties ~ 500.000 cellen / ml voor type M cassette gegevens ~ 2 2.5e 6 cellen / ml voor de cassette type S werden vastgesteld met de Coulter Z2. Na de theoretische concentraties werden voorbereid door middel van seriële verdunningen met fysiologische buffers (Isoton II of Balanced Salt Hank&#39;s oplossing). Elke concentratie werden gemeten door monsters identiek beide systemen uitgezet tegen elkaar. Zoals blijkt uit fig. 2, er een sterke lineaire correlatie (type M r 2&gt; 0,9886, Type S r 2&gt; 0,9781) tussen de tellingen voor alle monsters. De concentraties werden ook vergeleken met de verwachte / theoretische celconcentraties met zowel de Moxi Z en de Z2 ( <strong&gt; Figuur 3) en nogmaals aangetoond sterke lineaire correlaties (Type M r 2&gt; 0,9758, Type S r 2&gt; 0,9774). Om de precisie te beoordelen, werden HEK-293 en HeLa-cel-tellingen uitgevoerd met behulp van de Coulter Z2, Moxi Z, en een hemocytometer. De gemiddelde variatiecoëfficiënt (CV, n = 19) van het bloedbeeld het gebruik van de Moxi Z (Type M cassette), Coulter Z2 en een hemocytometer werden berekend met CV&#39;s gemeten van 5 afzonderlijke tellingen in de 200,000-300,000 cellen / ml bereik. De kleine gemiddelde CV (figuur 4) van de Moxi Z is vergelijkbaar met die van de Z2 en is representatief voor de hoge mate van precisie alleen haalbaar is met Coulter op basis van het tellen van technologieën. Dimensionering precisie van de Moxi Z instrument werd naast geëvalueerd door het meten van de gekochte, precisie gekalibreerd polystyreen bolletjes. Gemiddelde deeltjesgrootte metingen (n = 5) van Moxi Z werd uitgezet tegen de fabrikant gerapporteerd afmetingen. Zoals in Figuur 5, de Moxi Z metingen consistent afgestemd de fabrikant waarden met een hoge lineaire correlatie (R2 = 0,9989). Naast omvang en aantal gegevens, Moxi Z biedt een reagens-vrije, algemene beoordeling van de zoogdiercelculturen gezondheid, met het gemelde Moxi Levensvatbaarheid Index (MVI) waarde. Deze index wordt gegenereerd van een verhouding van het aantal cellen in de populatie van belang met betrekking tot het totale deeltjesvormige telt. Om de MVI meetmogelijkheden te tonen, werden MVI lezingen (Type M cassette) in vergelijking met standaard handleiding en flowcytometrische levend / dode meettechnieken. Populaties van dode (&lt;10% haalbaar) HEK-293 en HeLa cellen werden gecreëerd door overnacht incubatie van het levende cellen in een voedingsmedium vrij, natriumfluoride verdunningsmiddel (Isoton II, Beckman) bij 37 ° C. Gecontroleerde theoretische levensvatbaarheid niveaus werden bereid door het mengen van ratiometrically bekende concentraties van levende en dode cellen. Resulting oplossingen werden geanalyseerd voor de levensvatbaarheid van het niveau in twee exemplaren, met zowel hemocytometer telt en flowcytometer metingen. Hemocytometer metingen werden uitgevoerd bij een traditionele 50/50 mengsel van 0,1% Trypan blauwe oplossing en cellen. Flowcytometrie metingen zijn verricht met behulp van een Guava PCA cytometer (Merck) met de Viacount reagens en de door de fabrikant opgegeven protocol (Merck). Zoals getoond in figuur 6, de Pearson correlatiecoëfficiënt waarden (r2) &quot;van de lineaire passing van de MVI gegevens analoge hemocytometer levensvatbaarheid percentages&quot; HEK cellen en HeLa cellen werden r 2 = 0,9937 en r2 = 0,9728, respectievelijk. Deze resultaten tonen aan dat deze aanpak kunst gezondheid informatie geeft over een breed scala aan levensvatbaarheid van de cellen die gunstig vergelijken met de levende / dode metingen verkregen met behulp van een flowcytometer of hemocytometer. Tabellen en figuren (Van Dittami et al., 2011.) 15: Figuur 1. Dunne-film Coulter Tellen: Elektrische stroom wordt door de Cel Sensing Zone van de dunne-film cassette. Als cellen stromen enkel bestand door middel van de CSZ, worden de tijdelijke toename van de spanning gemeten door de Moxi Z. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/3842/3842fig2.jpg" /> Figuur 2. Moxi Z tellingen vergelijkbaar Coulter Z2 telt. Identieke graven cel kraal suspensies werden geteld met behulp zowel Coulter Z2 en Moxi Z. Gemiddeld aantal waarden (n = 3-4) van de Moxi Z tellingen werden uitgezet ten opzichte van de Coulter overeenkomstige Z2 telt en R2 waarden van de lineaire fit bepaald. A) Type M cassette - concentratiegebied van 0 - 500.000 cellen / ml. B) Type S cassette - concentratiegebied van 0 - 2-2.5e 6 / ml.Error balken geven ± 1 standaarddeviatie. Figuur 3. Moxi Z concentratiemetingen vs theoretische cel concentraties. A) Type M cassette - Theoretische waarde van de concentratie werden bereid uit seriële verdunningen van een eerste 500.000 cellen / ml monster B) Type S cassette -. Theoretische waarde van de concentratie werden bereid uit seriële verdunningen van een eerste 2 - 2.5e 6 cellen / ml monster. Foutbalken geven ± 1 standaarddeviatie. <img alt="Figuur 4" src="/files/ftp_upload/3842/3842fig4.jpg" /> Figuur 4. Variatiecoëfficiënt voor de Coulter Z2, Moxi Z (Type M cassette), en hemocytometer. De gemiddelde variatiecoëfficiënt (CV, n = 19) van de HEK-293 en HeLa-cel-tellingen voor elke benadering werden berekend met cv&#39;s gemeten van 5 afzonderlijke tellingen van HEK-293 en HeLa cellen in de 200.000 - 300.000 cellen / ml bereik. Foutbalken geven ± 1 standaarddeviatie. Figuur 5. Precisie van de deeltjesgrootte metingen met behulp van Moxi Moxi Z-Z gemeten kraal grootte (Type M cassette) vs fabrikant gemeld kraal grootte. Foutbalken geven ± 1 standaarddeviatie. <img alt="Figuur 6" src="/files/ftp_upload/3842/3842fig6.jpg" /> Figuur 6. Cultuur Health Assessment met behulp van MVI - Vergelijking van de MVI-metingen (Type M cassette) en Guava PCA Viacount levensvatbaarheid versus visuele, trypanblauw gekleurd levensvatbaarheid telt met behulp van een hemocytometer.

<ol><li>Fernyhough, M. E., Helterline, D. L., Vierck, J. L., Hill, R. A., Dodson, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coulter+counter+use+in+the+enumeration+of+muscle+and+fat+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Cell.+Sci%22%5BJournal%5D)">Coulter counter use in the enumeration of muscle and fat stem cells.</a> Methods. Cell. Sci. 25, 221-225 (2003).</li>
<li>Blades, A. N., Flavell, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observations+on+the+use+of+the+Coulter+model+D+electronic+cell+counter+in+clinical+haematology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Observations on the use of the Coulter model D electronic cell counter in clinical haematology.</a> J. Clin. Pathol. 16, 158-163 (1963).</li>
<li>Morris, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Particle+Size+Analysis+of+Beer+Solids+using+a+Coulter+Counter%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Inst.+Brew%22%5BJournal%5D)">Particle Size Analysis of Beer Solids using a Coulter Counter.</a> J. Inst. Brew. 90, 162-166 (1984).</li>
<li>Marth, E. H. Electronic Somatic Cell Counting Procedure. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarth%2C+EH+%22Standard+Methods+for+the+Examination+of+Dairy+Products%22">Standard Methods for the Examination of Dairy Products</a>. , Amer. Publ. Health Assoc., Inc. 134-140 (1978).</li>
<li>Parks, L. R., Jurbergs, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Number+and+size+distribution+of+particles+in+cellulosic+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Polym.+Sci%22%5BJournal%5D)">Number and size distribution of particles in cellulosic solutions.</a> J. Appl. Polym. Sci. 11, 193-199 (1960).</li>
<li>Davis, R. E., Green, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automatic+platelet+counting+with+the+Couler+particle+counter%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Automatic platelet counting with the Couler particle counter.</a> J. Clin. Pathol. 20, 777-779 (1967).</li>
<li>Dittami, G. D., Rabbitt, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrically+evoking+and+electrochemically+resolving+quantal+release+on+a+microchip%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Electrically evoking and electrochemically resolving quantal release on a microchip.</a> Lab on a Chip. 10, 30-35 (2010).</li>
<li>Nahreini, P., Hanson, A., Prasad, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-yield+production+of+recombinant+antibody+fragments+in+HEK-293+cells+using+sodium+butyrate%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechiques%22%5BJournal%5D)">High-yield production of recombinant antibody fragments in HEK-293 cells using sodium butyrate.</a> BioTechiques. 34, 968-972 (2003).</li>
<li>Escuyer, V., Collier, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anthrax+Protective+Antigen+Interacts+with+a+Specific+Receptor+on+the+surface+of+CHO-K1+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Anthrax Protective Antigen Interacts with a Specific Receptor on the surface of CHO-K1 Cells.</a> Infection and Immunity. 59, 3381-3386 (1991).</li>
<li>Isaacs, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Borrelia+bugdorferi+bind+to+epithelial+cell+proteoglycans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Borrelia bugdorferi bind to epithelial cell proteoglycans.</a> J. Clin. Invest. 93, 809-819 (1994).</li>
<li>Saito, Y., Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+selenoprotein+P+as+a+selenium+supply+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Characterization of selenoprotein P as a selenium supply protein.</a> Eur. J. Biochem. 269, 5746-5751 (2002).</li>
<li>Kataoka, S., Tsuruo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physician+Education%3A+Apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncologist%22%5BJournal%5D)">Physician Education: Apoptosis.</a> Oncologist. 1, 399-401 (1996).</li>
<li>Liegler, T. J., Hyun, W., Yen, T. S., Stites, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+quantification+of+live%2C+apoptotic%2C+and+necrotic+human+peripheral+lymphocytes+by+single-laser+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Diagn.+Lab+Immunol%22%5BJournal%5D)">Detection and quantification of live, apoptotic, and necrotic human peripheral lymphocytes by single-laser flow cytometry.</a> Clin. Diagn. Lab Immunol. 2, 369-376 (1995).</li>
<li>Sheridan, J. W., Bishop, C. J., Simmons, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biophysical+and+morphological+correlates+of+kinetic+change+and+death+in+a+starved+human+melanoma+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Sci%22%5BJournal%5D)">Biophysical and morphological correlates of kinetic change and death in a starved human melanoma cell line.</a> J. Cell. Sci. 49, 119-137 (1981).</li>
<li>Dittami, G. M., Rabbitt, R. D., Ayliffe, H. E. ORFLO Moxi Z: Revolutionizing electronic cell count accuracy and cell viability estimates through curve fitting. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDittami%2C+GM+%22Life+Science+Magazine%2C+VWR+International%22">Life Science Magazine, VWR International</a>. , Forthcoming (2011).</li>
</ol>

Gregory M. Dittami en HE Ayliffe zijn medewerkers van Orflo Technologies, het bedrijf dat ontworpen, produceert en verkoopt de Moxi Z. Richard D. Rabbitt biedt in deeltijd, betaald consulting expertise aan Orflo Technologies. Productie en gratis toegang tot dit artikel wordt gesponsord door Orflo Technologies.

De onderliggende uitvoering van de Coulter aanpak kan zeer deterministisch van de algehele nauwkeurigheid van de metingen. Een kritische gebied is de correctie van de ruwe-cel-tellingen voor &quot;toeval events&quot; waar twee of meer cellen tegelijk door het diafragma en worden gemeten als een elektrische gebeurtenis. &quot;Toeval gebeurtenissen&quot; bijdragen tot fouten die varieert afhankelijk van een aantal factoren, waaronder celgrootte en mate van bundeling (Davis et al. 1967) 6. Hierdoor kan de vereiste toeval correctie voor elk monster niet worden voorspeld zeer verschillende tussen cellen / deeltje typen en ook verschillende culturen identieke celtypen. Gevestigde theorie, verankerd in de eerste publicaties Coulter, omvat de toepassing van een logaritmische aanpassing van de ruwe tellingen gebaseerd op het aantal waargenomen en aan een empirisch bepaalde, deeltjes-specifieke correctiefactor z. Hoewel nauwkeurige tellingen kan worden bereikt met tzijn correctie-algoritme wordt beperkt de praktische toepassing vanwege de grote variaties in z waarden tussen celtypes en de overeenkomstige moeilijk nauwkeurig te voorspellen zijn waarde. Hier de &quot;echte&quot; cellen die de Moxi Z curve fitting in combinatie met het samenvallen correctie-algoritme de Moxi Z corrigeert voor dynamisch toeval de werkelijke concentratie te bereiken. In vergelijking met de resultaten verkregen met hoogwaardige Coulter Z2 de Moxi Z geproduceerd vergelijkbare aantallen in een concentratie van 0 - 500.000 cellen / ml (type M cassette) en 3000 - 2 2.5e 6 cellen / ml (Type S cassette) . Bovendien is de Moxi Z bereikt deze telling nauwkeurigheid een soortgelijke lage variatiecoëfficiënt in counts en nauwkeurigheid in deeltjesgrootte die kenmerkend is voor de gouden standaard Coulter-techniek celtellingen. Bovendien is de hier gepresenteerde gegevens blijkt dat de Moxi Z kan waardevolle informatieten aanzien van de algehele gezondheid van de celculturen. De Moxi Z maakt gebruik van de curve fitting aanpak met een eigen software algoritme om deze cultuur van medische controle te bepalen. Morfologische veranderingen in verband met celdood, zoals blebbing, breken en volumetrische vervalsing (Kataoka en Tsuruo 1996 Liegler et al. 1995, Sheridan et al. 1981) 12-14, maken het mogelijk de Moxi-Z impedimetrische verschillen onderscheiden leven populaties en dode cellen / puin populaties. De MVI wordt gegenereerd door analyse van de cultuur / deeltjesgrootteverdeling de relatieve bijdragen van de deeltjes vuil, gekrompen necrotische cellen en de curve uitgerust celpopulatie van interesse. De MVI waarde geeft daardoor een populatie index of ratiometrische maat voor de monodisperse populatie telt ten opzichte van de totale deeltjes populatie profiel. Deze waarde is dan algoritmisch-aangepast op basis van bevolkingsstatistieken en empirische waarnemingen. Because de MVI kijkt naar andere parameters dan de traditionele benaderingen vlekken, is het niet te verwachten dat deze technieken spiegel, maar in plaats daarvan is een waardevol alternatief blik in de gezondheid van een cel cultuur, met name met betrekking tot het puin en microbiële verontreinigingen. Kortom, de Moxi-Z celgetalmeter is een ultra klein tafelmodel instrument dat een nauwkeurige en reproduceerbare testen van het aantal cellen, celgrootte, en de gezondheid van de cellen met behulp van de Coulter Principe en curve-fitting software-algoritmen in combinatie met een gepatenteerde dunne-film-sensor-technologie biedt . Met type M cassette is kan het tellen van deeltjes varieert 4-25 micron (dynamisch bereik van 2-34 micron) in 8 seconden. Met cassette het type S is kan het tellen van deeltjes varieert van 3 - 20 micron in diameter (dynamisch bereik van 2-26 micron) in 15 seconden. Bovendien is de Moxi-Z voert Keuringen zonder gebruik van de reagentia. Het is veel minder arbeidsintensief intensive en subjectieve dan handmatig tellen. In vergelijking met standaard Coulter tellen, de Moxi sneller aanmerkelijk kleiner, levert informatie, aanzienlijk minder onderhoud gemakkelijker te gebruiken, en een fractie van de kosten.

<table border="1" ><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> ORFLO Diluent </td><td> ORFLO </td><td> MXA006 </td><td></td></tr><tr><td> Cassette Dispenser </td><td> ORFLO </td><td></td><td> Slaat tot 25 cassettes voor handige dispenser </td></tr><tr><td> USB-kabel </td><td> ORFLO </td><td></td><td> Verbindt instrument om PC / Mac of lichtnetadapter </td></tr><tr><td> Power Adapter (VS en de EU-modellen) </td><td> ORFLO </td><td></td><td> Sluit USB-kabel aan op een stopcontact </td></tr><tr><td> USB Flash Drive </td><td> ORFLO </td><td></td><td> Winkels Moxi Z software en gebruikershandleiding </td></tr><tr><td> Controle van de ijking Beads </td><td> ORFLO </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Elektronische Kalibratie Cassette </td><td> ORFLO </td><td></td><td> Elektronische cassette voor het verifiëren van het systeem goed werkt en kalibratie </td></tr></tbody></table>

bepaling van de zoogdieren bloedcellen, celgrootte en health met behulp van de moxi z mini geautomatiseerde cel counter

Determination of Mammalian Cell Counts, Cell Size and Cell Health Using the Moxi Z Mini Automated Cell Counter

Deeltjes en celtellingen wordt gebruikt voor diverse toepassingen, zoals routine celkweek, hematologische analyse en de industrie 1-5. Een kritische doorbraak in cel / deeltjestelling technieken was de ontwikkeling van de Coulter techniek Wallace Coulter dan 50 jaar geleden. De techniek houdt in de toepassing van een elektrisch veld over een microscopisch kleine opening en hydrodynamisch richten enkele deeltjes door de opening. De resulterende occlusie van de opening van de deeltjes levert een meetbare verandering in elektrische impedantie die direct en nauwkeurig worden gecorreleerd celgrootte / volume. De erkenning van de aanpak als de benchmark in cel / deeltjes te tellen komt voort uit de buitengewone precisie en nauwkeurigheid van de deeltjesgrootte en telt, in het bijzonder in vergelijking met handleiding en beeldvorming op basis technologieën (nauwkeurigheid in de orde van 98% voor Coulter tellers versus 75 - 80% voor manuele en visie-gebaseerde systemen). Dezekan worden toegeschreven aan het feit dat, in tegenstelling tot de beeldvorming benaderingen naar cel tellen, de Coulter Techniek een echte drie-dimensionale (3-D) het meten van cellen / deeltjes die aanzienlijk aantal storingen teruggebracht van puin en clustering maakt door het berekenen van nauwkeurige volumetrische informatie over de cellen / deeltjes. Algemeen is dit een middel voor het opsommen van de dimensionering en cellen in een nauwkeuriger, minder vervelend, minder tijdrovend en minder subjectieve wijze dan andere tel technieken 6. Ondanks de bekendheid van de Coulter techniek in cel tellen, is het wijdverbreide gebruik in de dagelijkse biologische studies zijn onbetaalbaar vanwege de kosten en de grootte van traditionele instrumenten. Hoewel een goedkopere Coulter gebaseerd instrument is geproduceerd, heeft beperkingen ten opzichte van de duurdere tegenhangers in de correctie &quot;toeval gebeurtenissen&quot; waarin twee of meer cellen door het diafragma en gelijktijdig gemeten. Another beperking met bestaande technologieën Coulter is het gebrek aan statistieken over de algemene gezondheid van de cel monsters. Bijgevolg moet aanvullende technieken vaak gebruikt in combinatie met Coulter tellen levensvatbaarheid van de cellen te bepalen. Dit strekt zich uit experimentele setup-tijd en kosten, omdat de traditionele methoden van de levensvatbaarheid beoordeling nodig cel kleuring en / of het gebruik van dure en zware apparatuur zoals een flowcytometer. De Moxi Z mini geautomatiseerde cel teller, hier beschreven, is een ultra-kleine tafelmodel instrument dat de nauwkeurigheid van de Coulter Principe combineert met een dunne-film-sensor-technologie in staat te stellen precieze maatvoering en het tellen van deeltjes, variërend 3 tot 25 micron, afhankelijk van de celtellingen de cassette gebruikt. De M type cassette kan worden deeltjes tellen van de gemiddelde diameter van 4-25 micron (dynamisch bereik 2-34 micron), het type S cassette kan worden deeltjes met en gemiddelde diameter van 3 tellen - 20 micron (dynamische range 2-26 micron). Aangezien het systeem een ​​volumetrische meetmethode de 4-25 micron overeen met een celvolume reeks van 34 - 8180 fL en 3 - 20 micron overeen met een cel volume-gebied van 14 tot 4200 fL, welke relevant is voor de niet-bolvormige deeltjes worden gemeten. Van zoogdieren celtellingen met de Moxi Z uitvoert, worden de cellen geteld eerst verdund met ORFLO of dergelijke verdunningsmiddel. Een cel tellen cassette is geplaatst in het instrument, en het monster is geladen in de haven van de cassette. Duizenden cellen worden getrokken, enkele bestand via een &quot;Cell Sensing Zone&quot; (CSZ) in de dunnefilm membraan over 8-15 seconden. Na de run het instrument gebruikt eigen curve-fitting in combinatie met een eigen software algoritme toeval geval correctie voorzien met een evaluatie van de algemene gezondheid cultuur door bepaling van de verhouding van het aantal cellen in de populatie van belang het aantal deeltjes. Het totale aantal deeltjes Met inbegripe gekrompen en afgebroken dode cellen, evenals andere vuil en verontreinigingen. De resultaten zijn weergegeven in histogram formaat met een automatische curvefit met poorten die handmatig kan worden bijgesteld te worden. Uiteindelijk is de Moxi Z kan tellen met een precisie en nauwkeurigheid te vergelijken met een Coulter Z2, de huidige gouden standaard, terwijl ze bijkomend kunst gezondheid informatie. Verder realiseert deze resultaten in minder tijd, met een kleinere footprint, met aanzienlijk eenvoudiger bediening en onderhoud, en tegen een fractie van de kosten van vergelijkbare technologieën.

De Moxi Z miniatuur automatische celgetalmeter is een nieuw instrument dat de Coulter principe combineert met gepatenteerde dunne-film-sensor-technologie en een eigen software algoritme om dimensionering uit te voeren en het tellen van een breed scala grootte van de deeltjes en aan de algehele gezondheid van monodisperse te bepalen zoogdiercellen culturen. Dit protocol beschrijft het gebruik van dit instrument voor het tellen en de beoordeling van de gezondheid van de celculturen.

Bepaling van de zoogdieren bloedcellen, celgrootte en Health Met behulp van de Moxi Z Mini geautomatiseerde cel Counter

Deeltjes- en celtelling wordt gebruikt voor uiteenlopende toepassingen, waaronder routinematige celkweek, hematologische analyse en industriële controles1-5. Een ...

De Mxi Z Mini automatische celteller is een ultra-compact tafelinstrument dat zeer nauwkeurige tellingen van cellen en partikels uitvoert. Dit gebeurt door het gouden standaard TER-principe te combineren met een gepatenteerde dunne-film sensortechnologie. De cassettes die met de Mxi Z worden gebruikt, zijn precisie-microfluïdische sensoren om celtellingen te verkrijgen.Een cassette wordt aan de voorzijde van de unit geplaatst en 75 µL monster wordt in de monsterpoort geladen. Zodra de run start, worden cellen in een enkele rij door een celdetectiezone in het dunne filmmembraan van de cassette getrokken, waarbij duizenden cellen per monster worden geteld terwijl ze door de detectiezone bewegen. Het precieze volume van elke cel wordt bepaald door een impedantiemeting.Na acht seconden worden de celconcentratie, de gemiddelde celgrootte en de index voor de celgezondheid weergegeven, samen met een volledig histogram met een hoge resolutie van de gehele partikelpopulatie. De monstergegevens kunnen vervolgens worden geanalyseerd en opgeslagen op het instrument zelf, of worden overgedragen naar een Mac of PC via Bluetooth of USB. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van andere systemen, zoals hemocytometers of op beelden gebaseerde automatische celtellers, is dat deze veel betrouwbaarder is, met een nauwkeurigheid en precisie van meer dan 95% vergeleken met 75 tot 80% bij op beelden gebaseerde systemen.Bovendien meet het de celgrootte, is het veel sneller en is het niet subjectief. Hoewel deze methode ideaal is voor tellingen van een miljoen cellen, kan deze vanwege het brede dynamische bereik worden toegepast op een breed scala aan celcounting-applicaties.Dergelijke toepassingen omvatten tellingen van witte bloedcellen, rode bloedcellen, protozoa, algen en gisten. Begin dit experiment door een vers gedetacheerde suspensie van HEK 2 93-cellen te verdunnen in een medium met fysiologische geleidbaarheid, zoals all flow diluent of PBS, tot de juiste concentratie. Tritureer voorzichtig om celklontering te minimaliseren en zorg ervoor dat het apparaat is losgekoppeld van de stroomvoorziening.Zet vervolgens de mxi Z aan door op de aan/uit-knop te drukken, waarna het startscherm wordt weergegeven. De Mxi Z maakt gebruik van wegwerpcassettes van type M of S, wat precisie microfluïdische sensoren zijn. Elke cassette heeft twee laadpoorten, aangegeven door een blauwe ovaal en gelabeld met één of twee.Elke cassette kan voor twee tests worden gebruikt. Type M-cassettes hebben een werkbereik van 3000 tot 500.000 cellen per milliliter. Het bereik voor type S-cassettes is 3000 tot 2,5 miljoen cellen per milliliter.Druk het plateau naar beneden en voeg een cassette toe om de homogeniteit van het monster te waarborgen door deze langzaam enkele keren om te keren. Pipetteer vervolgens 75 µL monster. Plaats de pipetpunt stevig in de monsterpoort, waarbij de pipet in een hoek van 45 graden wordt gehouden, en breng het monster vervolgens in één vloeiende beweging aan in de poort, waarbij wordt gecontroleerd of de volledige hoeveelheid monster is gedoseerd.Raak het scherm aan in de aangegeven cirkel of waar dan ook, behalve in het vak voor de modus voor kleine deeltjes, om het tellen te starten. De mxi Z zal de test starten en de resultaten van de celtelling zijn binnen acht seconden voltooid. Bij de Type M cassette worden de resultaten automatisch weergegeven met een eigen algoritme voor curvefitting dat de enkelvoudige celpopulatie van belang fitte en ook het totaal aantal corrigeert voor coincidentie.Gebeurtenissen of events waarbij meerdere deeltjes of clusters gelijktijdig door de detectiezone van de cel passeren. Let op dat hoewel deze coincidence-events buiten het gebied van de curve-fit aan de rechterkant vallen, ze nog steeds zijn opgenomen in de totale tellingen. Zodra er een geschikte fit is gevonden, wordt een histogram met hoge resolutie van de gehele monsterpopulatie weergegeven, samen met de numerieke waarden voor de celconcentratie, de gemiddelde diameter en het gemiddelde volume.Daarnaast wordt een moxie populatie-index of MPI-waarde gegeven als indicator voor de algemene gezondheid van de cultuur. De tellingen uiterst links in het histogram zijn normaal en vertegenwoordigen de basisruisdrempel van het systeem, aangepast om de systeemgevoeligheid en mogelijke tellingen van monsterresidu te optimaliseren. Zodra de monsteranalyse is voltooid, verwijdert u de cassette uit de unit en selecteert u 'done' om op te slaan en terug te keren naar het startscherm.Een visuele indicator bevestigt dat het monster is geanalyseerd. Als er een tweede monster moet worden geanalyseerd, draai de cassette dan om en plaats deze in het apparaat. Na een analyse in de normale modus worden de resultaten weergegeven voor een curve fit-telling op een maatschaal van 4 tot 34 microns voor de type M-cassette of 3 tot 26 microns voor type S; om de x-as opnieuw te schalen naar 4 tot 26 microns, tikt u op het icoon voor herschaling.Druk opeenvolgend op het pictogram voor herschaling om de schaal van de x-as te wijzigen via de volgende schalen: 4 tot 18 micron, 4 tot 10 micron, en terug naar 4 tot 34 micron. Schakel indien gewenst terug naar de modus voor curvefitting. Het testnummer voor de huidige analyse wordt bovenaan het histogram in een groen kader weergegeven.De gegevens worden opgeslagen onder het testnummer. Raak het gating-icoon aan om de gating-modus te schakelen, waarmee handmatige gating van het histogram mogelijk is. Hierdoor wordt gating de standaard acquisitiemodus. Gates kunnen worden gewijzigd door de linker- en rechterblauwe gating-markeringen te verschuiven of door een markering aan te raken en deze vervolgens stapsgewijs te verplaatsen met de pijltjestoetsen die verschijnen.De weergegeven tellingen en gemiddelde grootte-informatie worden uitsluitend berekend op basis van de deeltjes binnen het gating-bereik. Druk op het voltooid-pictogram om de resultaten op te slaan en terug te keren naar het startscherm. Om een opgeslagen test te openen, drukt u op het histogram-pictogram op het startscherm.Er worden telkens iconen voor maximaal negen opgeslagen histogrammen weergegeven; tik op page down of page up, of veeg omhoog of omlaag om te navigeren. Bekijk indien nodig meer testresultaten en selecteer het icoon van de gewenste test. Elk histogram wordt geopend in ofwel de curve-fit-modus of de gated-modus.Afhankelijk van de wijze van opslaan wordt linksboven op het scherm het gebruikte cassettetype voor de test aangegeven, M of S. Opgeslagen. Histogrammen kunnen worden gewisseld tussen de modi 'gating' en 'curve fit' om via 'auto gate' de gewenste piek aan te raken. Hiermee worden de optimale gating-posities voor de geselecteerde piek ingesteld.Dit is bijzonder nuttig bij situaties met meerdere pieken. Om een piek van belang aan te geven, drukt u op de zoom- en uitzoom-pijliconen om de telingschaal op de Y-as van het histogram aan te passen. De verticale schaal kan ook worden gewijzigd door met een vinger over de piek omhoog te vegen om deze te verkleinen of omlaag om deze te vergroten; druk op het terug-icoon om deze test te sluiten en terug te keren naar het startscherm.Gegevens kunnen naar een Mac of PC worden overgebracht met behulp van de moxie chart-applicatie. Druk hiervoor eerst op het Bluetooth-icoon op het startscherm van de Moxie Z-unit. De unit zal zijn Bluetooth-ID rapporteren; open vervolgens op de computer de moxie chart-applicatie en klik op het Bluetooth-icoon in de rechterbovenhoek.Kies vervolgens het apparaat dat overeenkomt met de Bluetooth-ID van de Z en selecteer naast Bluetooth de doelsmap voor de geüploade bestanden. Een andere manier om gegevens van de Mxi Z naar een computer over te dragen is door gebruik te maken van een USB-kabel en het apparaat te behandelen als een normaal USB-apparaat. Gegevensbestanden van een Mxi Z-unit die via USB is aangesloten, kunnen naar elke willekeurige map op de computer worden gekopieerd.Bestanden kunnen direct worden geopend en geanalyseerd met de Mxi Charles-applicatie of, omdat het CSV-bestanden zijn, kunnen ze direct worden geopend in Microsoft Excel of andere data-analyseprogramma's voor een eigen analyse om de telresultaten in de Mxi Z te vergelijken met de verkregen resultaten. Om identieke suspensies te tellen, werden precisiegekalibreerde beads en zoogdiercellen met beide methoden geteld. Er werden beads van vier verschillende groottes getest, variërend van 6 tot 15,6 microns in diameter, samen met verschillende cellijnen.Het gemiddelde van drie tot vier tellingen is uitgezet, zoals hier te zien is. De verkregen tellingen waren vrijwel identiek, wat aantoont dat de Moxie Z in staat is om nauwkeurige tellingen te verkrijgen over een breed scala aan grootten, om zo het bereik aan concentraties te demonstreren die nauwkeurig kunnen worden beoordeeld met de Mxi Z. Dezelfde beads en cellen werden serieel verdund vanaf een initiële concentratie van 500,000 cellen per milliliter voor de type M cassette of ongeveer 2,5 miljoen cellen per milliliter voor de type S. De theoretische celconcentraties werden vervolgens uitgezet tegen de verkregen tellingen, zoals hier getoond. De gemeten concentraties kwamen overeen met de theoretische celconcentraties, wat een nauwkeurige telling aantoont over het dynamische bereik van elke cassette: 3000 tot 500,000 cellen per milliliter voor de type M cassettes en 3000 tot 2,5 miljoen cellen per milliliter voor type S. Om de variabiliteit van de verkregen resultaten te onderzoeken, werden vijf afzonderlijke tellingen van HEK 293 en HELOC cellen in het bereik van 200,000 tot 300,000 cellen per milliliter uitgevoerd met een call to Z twee, Moxie Z en hemocytometer.Zoals in deze grafiek te zien is, was de gemiddelde variatiecoëfficiënt vergelijkbaar voor de Z two en de Mxi Z en aanzienlijk lager dan die van de hemocytometer, wat aangeeft dat de reproduceerbaarheid van de Mxi Z vergelijkbaar is met die van de Z two en superieur aan die van een hemocytometer. Om de precisie van de Mxi Z bij het bepalen van de deeltjesgrootte aan te tonen, werden gefabriceerde beads gemeten met de Mxi Z. Voor elke beadgrootte werden vijf metingen uitgevoerd, gemiddeld en uitgezet tegen de door de fabrikant gerapporteerde beadgrootte. De Mxi Z mat de beads conform de door de fabrikant gerapporteerde grootte.De R-kwadraatwaarde bedroeg 0,9989 om het vermogen van de mxi Z om de kweek te beoordelen aan te tonen. Metingen van de celgezondheidsindex werden geregistreerd met de Mxi Z voor identieke preparaties van dode celspikes, HEK- en hela-cellen, en vergeleken met de visuele trypaanblauw-uitsluitingsresultaten van hetzelfde monster (levensvatigheidspercentage van het hematoom) of met een Guava PCA flowcytometer voor vergelijkingsdoeleinden. De levensvatigheidsmetingen voor de monsters werden ook in de grafiek uitgezet, zoals hier te zien is.De berekende levensvatbaarheid voor zowel HGK- als LAR-cellen verkregen met de Mxi Z was vergelijkbaar met de levensvatbaarheidsmetingen verkregen via de trypaneenkluitingsmethode, met r²-waarden van respectievelijk 0,9937 en 0,9728. De verkregen gegevens zijn ook vergelijkbaar met die verkregen met guava PCA via de flowcytometer, met R²-waarden van 0,9724 voor de EK-cellen en 0,9585 voor de hela-cellen. Hoewel de cellgezondheidsindex in bepaalde gevallen kan overeenstemmen met standaardbenaderingen voor levensvatbaarheid, is het een geheel nieuwe en andere techniek voor gezondheidsbeoordeling en zal deze bijgevolg niet altijd identiek zijn aan de oudere technieken.Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht moeten hebben in hoe u eenvoudig informatie over de celgezondheid, celgrootte en het celgetal kunt verkrijgen. Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om ervoor te zorgen dat de celdichtheid binnen het juiste bereik ligt.

determination-mammalian-cell-counts-cell-size-cell-health-using-moxi

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

De Scepter Cell Counter is een handheld geautomatiseerd apparaat dat kan worden gebruikt om cellen te tellen, controleren cel diameter en volume, en worden gebruikt om de gezondheid en de kwaliteit van de cellulaire bevolking controleren van de ene cultuur naar de volgende.

Het bepalen van het aantal cellen tijdens de celdeling Cultuur met de Scepter Cell Counter

Dit artikel beschrijft de kwantificering van hemocytometer- en migratie/invasie-micrografieën via twee nieuwe open-source ImageJ-plugins Cell Concentration Calculator en migration assay Counter. Verder beschrijft het protocollen voor beeldverwerving en kalibratie en bespreekt het in detail de inputvereisten van de plugins.

Geautomatiseerde kwantificering en analyse van Cell Counting Procedures Met behulp van ImageJ Plugins

T-lymfocyt-mitogenese gaat gepaard met blastogene transformatie, waarna het celvolume groter wordt voordat celdeling plaatsvindt. Hier beschrijven we een methode om blastogenese in T-lymfocyten te kwantificeren met behulp van een geautomatiseerde celteller met de mogelijkheid om celdiameters te meten.

Rapid Kwantificering van Mitogen geïnduceerde blastogenesereactie in T-lymfocyten voor het vaststellen van Immuunmodulerende Drugs

Lens-vrije videomicroscopie ons in staat stelt om te controleren van celculturen direct in de incubator. Hier beschrijven we het volledige protocol gebruikt voor het verwerven en analyseren van een 2.7 dag lang verwerving van gekweekte HeLa cellen, wat leidt tot een dataset van 2.2 x 106 metingen van individuele cel morfologie en 10584 celcyclus tracks.

Lens-gratis videomicroscopie voor de dynamiek en de kwantitatieve analyse van aanhangend celkweek

Een foto-optisch in situ microscopie apparaat is ontwikkeld om de grootte van afzonderlijke cellen direct in de celsuspensie te bewaken. De real-time meting wordt uitgevoerd door de foto-optische steriliseerbare sonde te koppelen aan een geautomatiseerde beeldanalyse. Morfologische veranderingen verschijnen met afhankelijkheid van de groei toestand en de teeltomstandigheden.

In situ Microscopie voor real-time bepaling van eencellige morfologie in bioprocessen

De in-vitro-micronucleustest is een gevestigde methode voor het evalueren van genotoxiciteit en cytotoxiciteit, maar het scoren van de test met behulp van handmatige microscopie is moeizaam en lijdt onder subjectiviteit en variabiliteit tussen de scorer. Dit artikel beschrijft het protocol dat is ontwikkeld om een volledig geautomatiseerde versie van de test uit te voeren met behulp van multispectrale beeldvormings stroom cytometrie.

Een geautomatiseerde methode voor het uitvoeren van de in-vitro micronucleus assay met behulp van multispectrale beeldvormings stroom Cytometrie

Het is vaak noodzakelijk om te beoordelen van de potentiële cytotoxiciteit van een reeks van verbindingen op gekweekte cellen. Hier beschrijven we een strategie om betrouwbaar op te schermen voor giftige stoffen in een 96-well formaat.

Een strategie om verbindingen te identificeren die van invloed zijn op de celgroei en overleving in gekweekte zoogdiercellen bij een lage tot matige doorvoer

Hier beschrijven we de uitvoering en interpretatie van de resultaten van een in vitro mammosphere zelf vernieuwing kwantitatieve assay.

Kwantificering van zelf vernieuwing in Muriene Mammosphere culturen

Real-time cel metabole flux assay meet het zuurstofverbruik en de extracellulaire verzuringssnelheid, die overeenkomt met mitochondriale en glycolytische adenosinetrifosfaatproductie, met behulp van pH- en zuurstofsensoren. Het manuscript legt een methode uit om de energiestatus van osteoblasten en de karakterisering en interpretatie van de cellulaire bio-energetische status te begrijpen.

Real-time cell metabolic flux analyzer gebruiken om osteoblast bio-energetica te monitoren

De bepaling van kolonievormende eenheden (CFU) is de gouden standaardtechniek voor het kwantificeren van bacteriën, waaronder Mycobacterium tuberculosis, die weken nodig heeft om zichtbare kolonies te vormen. Hier beschrijven we een micro-CFU voor CFU-bepaling met verhoogde tijdsefficiëntie, lagere laboratoriumruimte en reagenskosten, en schaalbaarheid voor experimenten met gemiddelde en hoge doorvoer.

Microkolonievormende eenheidstest voor evaluatie van de werkzaamheid van vaccins tegen tuberculose

Leer hoe je de Moxi Z Mini gebruikt voor snelle celanalyse van zoogdiercellen met impedantiemeting en microfluidische technologie. Deze methode levert nauwkeurige resultaten in acht seconden.

Bepaling van de zoogdieren bloedcellen, celgrootte en Health Met behulp van de Moxi Z Mini geautomatiseerde cel Counter

Meer video's verkennen