Name: Snelle Point-of-Care test van Enoxaparine anticoagulans werkzaamheid in volbloed (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: Leer een snelle point-of-care test voor enoxaparine anticoagulantia in volbloed met behulp van heparinase. Deze methode meet stollings tijden en helpt clinici bij het beoordelen van antistollings therapie voor veilige medische ingrepen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De onderzoeken werden uitgevoerd uitsluitend met steun van afdelings-en institutionele middelen. De coagulatie apparatuur (Hemochron 801) werd geleend zonder de verplichting van de fabrikant. De test cartridges werden gekocht bij hun retail kosten. De inleidende figuur in de video werd gewijzigd van Sanderink, et al.. 12 De tweede figuur in de video (heparinase spijsvertering tijdsverloop) werd overgenomen met toestemming van Inchiosa et al. 1.

1. Heparinase Reconstitutie <ol><li> Gevriesdroogd heparinase I is commercieel verkregen (Siemens, Newark Delaware, DadeHepzyme REF B4240-10) in flesjes van 1 mg van het gezuiverde eiwit. Het eiwit wordt opgelost in 0,25 ml zoutoplossing (0,9% NaCl). </li></ol> 2. Verzameling van bloedmonsters <ol><li> Twee bloedmonsters getrokken door vacuum in natriumcitraat (0,3 ml 0.109M; 3,2%) gebufferde Vacutainer buizen (Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ); de buizen zowel pre-behandeld met een bekende concentratie van enoxaparine; het bloedvolume dat getekend is 2,7 ml. Het totale gehalte is dan 3,0 ml. </li></ol> 3. Heparinase Spijsvertering <ol><li> De volledige inhoud van de heparinase injectieflacon kan worden opgezogen in een injectiespuit (ongeveer 0,2 ml, 80% van de flacon, 0,8 ug eiwit), wordt overgedragen op een Vacutainer buis 0,2 ml zoutoplossing (0,9% NaCl) toegevoegd de tweede buis, die als baseline staat voor eliminatie van de enoxaparine effect. </li><li> Beide Vacutainer buizen worden in de putjes van de thermostaat Hemochron inrichting gedurende 5 min. (De geschiktheid van een 5 min spijsvertering tijd met heparinase werd opgericht in onze eerder gepubliceerde werk. 1) </li></ol> 4. Stolling Assays <ol><li> Aan het einde van de heparinase incubatie wordt 2,0 ml bloed naar de assay cartridge. In het geval van de MAA buis is voorgevuld met 0,1 ml 250 mM CaCl2 om coagulatie te leiden. De commerciële aPTT assay cartridge (A104) is ontworpen om stolling te leiden in bloed dat is getrokken in Vacutainer buizen die natriumcitraat als anticoagulant. </li><li> De Hemochron apparaat signaleert de voltooiing van de bloedstolling en behoudt de stollingstijd in seconden. Het verschil in stollingstijden tussen heparinase behandelde monster als het basislijnmonster, gedeeld door de stolling time voor de basislijn monster, levert het percentage daling als gevolg van de eliminatie van enoxaparine. Zoals hieronder besproken, hebben sterke lineaire correlatie verkregen voor de relatie tussen percentage afname in stollingstijd en de concentratie van enoxaparine in verrijkte monsters van bloed, en de correlatie met enoxaparine gemeten concentraties van de chromgenic bepaling van anti-Xa activiteit. Anti-Xa assays van enoxaparine concentratie werden uitgevoerd met een commerciële kit voor een tweetraps chromogene assay (BIOPHEN, Aniara, Mason, OH). </li></ol>

<ol><li>Inchiosa, M. A. J. r, Pothula, S., Kubal, K., Sanchala, V. T., Navarro, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+development+of+a+point-of-care+assay+of+enoxaparin+anticoagulant+activity+in+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Thromb.+Thrombolysis%22%5BJournal%5D)">Toward development of a point-of-care assay of enoxaparin anticoagulant activity in whole blood.</a> J. Thromb. Thrombolysis. 32, 47-53 (2011).</li>
<li>Despotis, G. J., Filos, K. S., Levine, V., Alsoufiev, A., Spitznagel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aprotinin+prolongs+activated+and+nonactivated+whole+blood+clotting+time+and+potentiates+the+effect+of+heparin+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth.+Analg%22%5BJournal%5D)">Aprotinin prolongs activated and nonactivated whole blood clotting time and potentiates the effect of heparin in vitro.</a> Anesth. Analg. 82, 1126-1131 (1996).</li>
<li>Pothula, S., Inchiosa, M. A. Jr, Sanchala, V. T., Sarabu, M., Inchiosa, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+effect+of+protamine+excess+on+blood+coagulation+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">In vitro effect of protamine excess on blood coagulation assays.</a> Anesth Analg. 96, SCA39(2010).</li>
<li>Inchiosa, M. Jr, Pothula, S., Sanchala, V., Kubal, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+low+plasma+levels+of+low+molecular+weight+heparin%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Detection of low plasma levels of low molecular weight heparin.</a> Anesth Analg. 102, SCA10(2010).</li>
<li>Gogarten, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+new+antithrombotic+drugs+on+regional+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Anaesthesiol%22%5BJournal%5D)">The influence of new antithrombotic drugs on regional anesthesia.</a> Curr. Opin. Anaesthesiol. 19, 545-550 (2006).</li>
<li>Gouin-Thibault, I., Pautas, E., Siguret, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+profile+of+different+low-molecular+weight+heparins+used+at+therapeutic+dose%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Saf%22%5BJournal%5D)">Safety profile of different low-molecular weight heparins used at therapeutic dose.</a> Drug Saf. 28, 333-349 (2005).</li>
<li>Bazinet, A., Almanric, K., Brunet, C., Turcotte, I., Martineau, J., Caron, S., Blais, N., Lalonde, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dosage+of+enoxaparin+among+obese+and+renal+impairment+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb.+Res%22%5BJournal%5D)">Dosage of enoxaparin among obese and renal impairment patients.</a> Thromb. Res. 116, 41-50 (2005).</li>
<li>El Rouby, S., Cohen, M., Gonzales, A., Hoppensteadt, D., Lee, T., Zucker, M. L., Khalid, K., LaDuca, F. M., Fareed, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+a+HEMOCHRON+JR.+HEMONOXTM+point+of+care+test+in+monitoring+the+anticoagulant+effect+of+enoxaparin+during+interventional+coronary+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Thromb.+Thrombolysis%22%5BJournal%5D)">The use of a HEMOCHRON JR. HEMONOXTM point of care test in monitoring the anticoagulant effect of enoxaparin during interventional coronary procedures.</a> J. Thromb. Thrombolysis. 21, 137-145 (2006).</li>
<li>Yang, V. C., Bernstein, H., Cooney, C. L., Kadam, J. C., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+the+anticoagulant+activities+of+the+low+molecular+weight+heparin+fractions+and+fragments+with+flavobacterial+heparinase%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Removal of the anticoagulant activities of the low molecular weight heparin fractions and fragments with flavobacterial heparinase.</a> Thromb Res. 44, 599-610 (1986).</li>
<li>Maddineni, J., Walenga, J. M., Jeske, W. P., Hoppensteadt, D. A., Fareed, J., Wahi, R., Bick, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Product+individuality+of+commercially+available+low-molecular-weight+heparins+and+their+generic+versions%3A+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Applied+Thrombosis%2FHemostasis%22%5BJournal%5D)">Product individuality of commercially available low-molecular-weight heparins and their generic versions: therapeutic implications.</a> Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 12, 267-276 (2006).</li>
<li>Wijnhoven, T. J., van de Westerlo, E. M., Smits, N. C., Lensen, J. F., Rops, A. L., vander Vlag, J., Berden, J. H., vanden Heuvel, L. P., van Kuppevelt, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+anticoagulant+heparinoids+by+immunoprofiling%5BTitle%5D)+AND+%22Glycoconj.+J%22%5BJournal%5D)">Characterization of anticoagulant heparinoids by immunoprofiling.</a> Glycoconj. J. 25, 177-185 (2008).</li>
<li>Sanderink, G. -J. C. M., Guimart, C. G., Ozoux, M. -L., Jariwala, N. U., Shukla, U. A., Boutouyrie, B. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+and+pharmacodynamics+of+the+prophylactic+dose+of+enoxaparin+once+daily+over+4+days+in+patients+with+renal+impairment%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb.+Res%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics and pharmacodynamics of the prophylactic dose of enoxaparin once daily over 4 days in patients with renal impairment.</a> Thromb. Res. 105, 225-231 (2002).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Deze test van enoxaparine werkzaamheid kan dienen als een belangrijke optie voor de relatieve veiligheid van het uitvoeren van een invasieve procedure die een verzorger risico op bloedingen of de ontwikkeling van een hematoom is vast te stellen. Dit zou met name belangrijk wanneer een epidurale injectie wordt overwogen. De meerderheid van de richtlijnen bevelen een wachttijd van 12 uur tussen injectie van enoxaparine en inleiding van een invasieve procedure 5 Nierinsufficiëntie, obesitas en zwangerschap kunnen de dosering eisen van enoxaparine beïnvloeden 6,7 Omdat de test kan worden voltooid binnen een 10.. - min periode, kan het ook gebruikt worden in een kliniek of arts het kantoor, waar het zou informatie over de geschiktheid van antistolling bij patiënten die op een risico van ontwikkeling van veneuze trombo-embolie te bieden. Onmiddellijke aanpassing van de dosering kan worden ingesteld, als dat nodig is. De enoxaparine concentratie in plasma kan worden gemeten door een chromogene eenssay van de mate van remming van de stollingsfactor Xa. Echter, dit alleen geeft de concentratie, die niet specifiek zijn anticoagulans werkzaamheid, die op grote schaal varieert tussen de individuele patiënten. 6 tot 8 Onze studies werden uitgevoerd alleen met enoxaparine. Het kan echter worden verwacht dat de assay kan worden toegepast op elk LMWH dat wordt afgebroken door heparinase I. Deze reeds bekend is het geval voor dalteparine, nadroparine en tinzaparin zijn. 9-11 We hebben de test met betrekking tot de kenmerken van de Hemochron stollingstijd instrument. Het instrument is relatief goedkoop, ook, de wegwerp bloedafnamebuisjes, heparinase ampul, en test patronen te voltooien een analyse voor een patiënt is ongeveer 15 dollar. Zo zou men kunnen verwachten dat geschikt om anticoagulant status controleren in verschillende klinische instellingen.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Hepzyme </td><td> Siemens </td><td> B4240 </td><td> heparinase I </td></tr><tr><td> &quot;MAA&quot; cartridge </td><td> Technidyne </td><td> FTK-ACT </td><td> gewijzigd door verwijdering kaolien </td></tr><tr><td> aPTT cartridge </td><td> Technidyne </td><td> A104 </td><td></td></tr></tbody></table>

snelle point-of-care test van enoxaparine anticoagulans werkzaamheid in volbloed

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

Er is behoefte aan een klinische test om de mate waarin een patiënt bloed effectief wordt geanticoaguleerd de laag moleculair gewicht heparine (LMWH), enoxaparine bepalen. Er zijn ook dringend klinische situaties waarin het belangrijk als deze snel kunnen worden bepaald. Deze test is ontworpen om dit te bereiken. We alleen getest menselijke bloedmonsters die werden gespiked met bekende concentraties enoxaparine. Het essentiële kenmerk van de onderhavige assay is het kwantificeren van de werkzaamheid van enoxaparine in bloed van een patiënt monster degraderen inactiviteit compleet met heparinase. Twee bloedmonsters werden bij Vacutainer buizen (Becton-Dickenson, Franklin Lakes, NJ) die zijn verrijkt met enoxaparine; een monster werd geknipt met heparinase gedurende 5 min bij 37 ° C en het andere monster van de patiënt weergegeven basislijn anticoagulanteerd status. Het percentage kortere stollingstijd in de heparinase-behandelde monster, in vergelijking met de baseline staat, leverde de anticoagulerende bijdrage van enoxaparine. We gebruikten de draagbare batterijen Hemochron 801 Inrichting voor het meten van stollingstijden (International Corp Technidyne, Edison, NJ). De inrichting heeft 2 thermostaat (37 ° C) assay waterputten. We de assays uitgevoerd in twee soorten assay cartridges die bij de fabrikant van het instrument. Een cartridge werd gemodificeerd om de gevoeligheid te verhogen. We verwijderden het kaolien de FTK-ACT cartridge door uitgebreid spoelen met gedestilleerd water, waardoor alleen het glas van de buis, en misschien de detectie magneet als activatoren. We noemden dit ons minimaal geactiveerd assay (MAA). Het gebruik van een minimaal geactiveerde assay is bestudeerd door ons en anderen. 2-4 De tweede patroon dat werd onderzocht was geactiveerde partiële tromboplastinetijd (aPTT) assay (A104). Dit werd gebruikt als geleverd door de fabrikant. De thermostaat putten van het instrument were zowel voor de heparinase spijsvertering en stollingstesten. De test kan worden uitgevoerd binnen 10 minuten. De MAA test ingrijpende wijzigingen in de stollingstijd toonde na heparinase vertering van enoxaparine over een typisch klinisch concentratiebereik. Bij 0,2 anti-Xa IE enoxaparine per ml bloed monster, heparinase spijsvertering veroorzaakt een daling van gemiddeld 9,8% (20,4 sec) in stollingstijd; bij 1,0 IE per ml enoxaparine was er een daling van 41,4% (148,8 sec). Dit rapport presenteert alleen de experimentele toepassing van de test; zijn waarde in een klinische setting moet nog worden vastgesteld.

Figuur 1 toont de resultaten voor het verband tussen het percentage afname in klontertijd na verwijdering van enoxaparine met heparinase voor een reeks spiked concentraties enoxaparine (0,2, 0,4 en 1,0 anti-Xa IE per ml). Resultaten worden gepresenteerd voor zowel de MAA en aPTT assay cartridges. De gemeten concentraties enoxaparine van chromogene assay van anti-Xa-activiteit zijn ook opgenomen in de abscis van elk perceel. Figuur 2 toont grafieken van dezelfde gegevens als percentage afname in klontertijd vs chromogene mate van anti-Xa activiteit. Sterke lineaire correlatie met hoge statistische significantie werd voor alle vier relaties. <img src="/files/ftp_upload/3852/3852fig1.jpg" alt="Figuur 1" /> Figuur 1. Point-of care bepalingen van enoxaparine contribution om stolling tijden van spiked volbloed gebaseerd op het percentage verandering (verkorting) van de stollingstijd na incubatie met heparinase. De spiked enoxaparine concentraties toegevoegd aan bloed en de gemeten anti-Xa plasmaconcentraties (gemiddelde ± SE, tussen haakjes) worden in de abscis van elke grafiek. Alle procentuele veranderingen in stollingstijden worden gepresenteerd als gemiddelden en SE, en het gemiddelde verkorting van de stollingstijd in seconden. Gegevens van dezelfde patiënt zijn verbonden door stippellijnen. De gegevens voor de vier patiënten geïdentificeerd met sterretjes in plot A (MAA resultaten) zijn dezelfde als in de vier patiënten B plot (aPTT assays). Alle resultaten vormen afzonderlijke analyses. De Pearson correlatiecoëfficiënten waren r = 0,869 (p = 1,9 x 10 -5) en r = 0,916 (p = 2,8 x 10 -5) voor de relaties met de MAA en aPTTassay, respectievelijk. Overgenomen met toestemming van Inchiosa et al. 1. . Figuur 2 De resultaten voor de procentuele verandering in stollingstijden in de point-of-care assays getoond in figuren 1A en B als functie van de plasma anti-factor Xa concentraties A, MAA resultaten;. B, aPTT assays. Alle resultaten zijn uit een stollingstijd assays en enkelvoudige metingen van anti-factor Xa concentraties. De Pearson correlatiecoëfficiënten waren r = 0,910 (p = 2,5 x 10 -6) en r = 0,922 (p = 2,0 x 10 -5) voor de relaties met de MAA en aPTT-test, respectievelijk overgenomen met toestemming van Inchiosa et al. 1.

Demonstratie van een snelle kwantitatieve analyse van de remming van bloedstolling door de laag moleculair gewicht heparine, enoxaparine. De bijdrage van enoxaparine wordt beoordeeld door het verwijderen van de invloed door digestie met heparinase. Een vollediger beschrijving van de assay wordt beschreven in onze gepubliceerde papier.<sup&gt; 1</sup&gt; De test moet nog klinische bevestiging.

Snelle Point-of-Care test van Enoxaparine anticoagulans werkzaamheid in volbloed

Er is behoefte aan een klinische assay om vast te stellen in welke mate het bloed van een patiënt effectief is anticoagulerend behandeld met de ...

Ter introductie verwijzen we hier naar gepubliceerd werk over het verloop van de plasmaspiegels van het laagmoleculaire heparine Enoxaparine bij menselijke proefpersonen. We demonstreren vandaag onze resultaten met een snelle point-of-care assay voor laagmoleculair heparine. In dit geval is de betreffende stof Enoxaparine.De resultaten op deze dia tonen de plasmaconcentratie bij patiënten die het geneesmiddel chronisch één keer per dag hebben ontvangen, 40 milligram per dag, en het tijdsverloop na de laatste toediening tot aan de verdere klaring; men kan zien dat er ongeveer vier uur na toediening een piekconcentratie van 0,4 internationale eenheden per ML wordt bereikt, en dat dit niveau binnen het therapeutische bereik van het geneesmiddel ligt. Een punt van bijzondere belangstelling is echter ook hoeveel er nog aanwezig is 12 uur na toediening, omdat er een klinisch geaccepteerde richtlijn is die stelt dat men ten minste 12 uur moet wachten na de toediening van laagmoleculaire heparine, in dit geval Enoxaparine, voordat een bijzonder invasieve procedure wordt uitgevoerd die een risico op bloedingen met zich mee kan brengen. Voor ons is het van belang dat er op dat moment nog een duidelijk detecteerbare hoeveelheid aanwezig is, en daar hebben we ons in enkele van onze studies op gericht, zoals we zullen aantonen.Ook wordt in dit werk door de verzender et al. gepresenteerd dat personen met een nierinsufficiëntie aanzienlijk hogere spiegels van het geneesmiddel vertonen gedurende het tijdsverloop, en we zien dat de richtlijn van 12 uur mogelijk zeer ontoereikend is in het geval van een patiënt met een nierinsufficiëntie, of zoals bekend bij een zwangere vrouw of bij obese patiënten. Graag stel ik de onderzoekers voor die betrokken zijn geweest bij dit project aan het New York Medical College. Mijn naam is Mario Osa.Ik ben professor farmacologie hier. Ik ben dr. Surya Patula, associate professor Klinische Anesthesiologie aan het New York Medical College. Mijn naam is Keshar Kal.Ik ben een derdejaars medicant. Dit is het apparaat dat we gebruiken voor deze assays. Het apparaat is geproduceerd door de Omicron Corporation.Het apparaat kan zowel op het net als op batterijen worden gebruikt, waardoor het in die zin echt geschikt is voor point-of-care diagnostiek. Het toestel beschikt over twee thermostaatgestuurde compartimenten; deze gebruiken we voor de pre-incubatie van de monsters ter voorbereiding op de eigenlijke analyse, evenals voor de stollingsanalyse zelf. Een belangrijk kenmerk van de analyse is het gebruik van een zeer gezuiverde, commercieel verkrijgbare preparatie van heparinase.Wij hebben dit aangekocht bij de Siemens corporation. Het wordt geleverd in een zeer stabiele vorm en is gemakkelijk oplosbaar in saline of elke andere waterige oplossing. Het gebruik van heparine ACE is in onze aanpak bijzonder waardevol, omdat het ons in staat stelt om de baseline stollingswaarde van de patiënt te bepalen.In afwezigheid van enige invloed van heparine, is ACE in staat om laagmoleculaire heparine en niet-gefractioneerde heparine volledig af te breken, maar onze specifieke interesse gaat hier uit naar laagmoleculaire heparine om deze tot inactiviteit af te breken en een waarde voor de stollingstijd te verkrijgen in afwezigheid van enige invloed van heparine. Wat we hier illustreren is het verloop van de afbraak van laagmoleculaire heparine, in dit geval Enoxaparine, door heparinase. De gegevens zijn uitgezet als een percentage van de basale stollingstijd, zodat we hier zien dat Enoxaparine is toegevoegd bij één anti 10.A internationale eenheden per ML veroorzaken ongeveer een verlenging van 50% van de bloedstollingsduur. Vervolgens zien we, na variërende incubatieperiodes met heparinase bij 37 °C, de tijd die nodig is voor het herstel van de basisstollingsduur. Met andere woorden: de volledige degradatie van Enoxaparine tot inactiviteit.Wat betreft het antistollende effect zien we dit al na anderhalf minuut. Er is in feite sprake van een 100% herstel van de baseline stollingstijd. Na inspectie van dit tijdverloop hebben we besloten om vijf minuten incubatie te gebruiken als onze standaard pre-incubatie van het bloed vóór de meting van de stollingstijd.De assaybuisjes voor deze point-of-care-analyse zijn licht gewijzigd ten opzichte van de manier waarop we ze van de fabrikant ontvangen. Deze buisjes bevatten oorspronkelijk de activator kaolien, die aanwezig is voor de meting van de geactiveerde stollingstijd. We hebben vastgesteld dat wanneer we de buis zonder de activator gebruiken, de gevoeligheid aanzienlijk toeneemt.We hebben dit onze minimaal geactiveerde assay genoemd, omdat we menen dat de enige mogelijke bron van activatie nu het glasoppervlak van de buis en mogelijk de magneet zou zijn. De magneet is het essentiële onderdeel van de geautomatiseerde assay. Deze buizen draaien in de buishouders; wanneer de magneet wordt ingesloten door een stolsel met een dichtheid die resulteert in het verlies van beweging, wordt dit gedetecteerd en signaleert dit de voltooiing van de stolling.We hebben de assay ook bestudeerd met behulp van de omicron-geactiveerde partial thrombo Platin time-cartridge. De assay wordt op identieke wijze uitgevoerd. In dit systeem is sprake van een iets sterkere activatie.Onze eerste stap is het reconstitueren van de lelie-heparinase zoals we deze in het flesje ontvangen. We voegen 0,25 ml zoutoplossing toe aan het flesje en wachten vervolgens ongeveer 20 seconden tot volledige oplossing. Daarna zuigen we de gehele inhoud van het flesje op in een tuberculinespuit, waarbij we in deze volgende stap gewoonlijk ongeveer 0,2 ml terugwinnen.Toevoegingen voor de pre-incubatie worden toegevoegd aan vers afgenomen bloedmonsters die enoxaparine bevatten in vacutainers van drie ml. De eerste toevoeging is de heparinase, die op dit moment wordt gemengd. Vervolgens wordt 0,2 ml saline toegevoegd aan de buis met enoxaparine maar zonder heparinase voor een vergelijkbaar totaal volume.We gebruiken de ingebouwde timer van het instrument om de 300 seconden af te tellen. Dit komt overeen met vijf minuten pre-incubatie. De vacuümbuizen worden verwijderd zodra de pre-incubatie is voltooid.De laatste stap is het overbrengen van twee ml van de vooraf geïncubeerde monsters naar onze minimaal geactiveerde assaybuisjes. Deze buisjes zijn vooraf gevuld met honderd microliters 0,25 molair calciumchloride om de stolling te initiëren. Dit eerste buisje is het buisje dat vooraf met heparinase is geïncubeerd.Het tweede monster is datgene dat enoxaparine bevat maar geen heparinasen. De timers geven de verstreken tijd aan sinds de toevoeging van calciumchloride, en we kunnen nu zien dat het eerste monster voltooid is. Dat is het bovenste flaconnetje, waarbij 200 seconden nodig waren voor de voltooiing van de stolling.Het monster dat geen heparinase bevatte, vertoont een langere stollingstijd en is nu voltooid. Dit is een simulatie van ons typische resultaat met bloed gespike met 0,4 internationale eenheden Enoxaparine per ml. Dat komt neer op een verkorting van de stollingstijd van ongeveer 45 seconden bij deze concentratie enoxaparine, of een afname van 18% in de stollingstijd.Zoals te zien is, is de stollingdetectie geautomatiseerd en worden de tijden op het instrument bewaard totdat de inspectie is voltooid. We moeten vermelden dat we deze assay daadwerkelijk hebben getest bij een concentratie zo laag als 0,1 internationale eenheden Enoxaparine per ml. Zoals we in de inleiding hebben opgemerkt, is dit de concentratie die aanwezig kan zijn 12 uur na een typische therapeutische dosis Enoxaparine.We waren ook bij deze concentratie in staat om betrouwbaar te detecteren.

rapid-point-care-assay-enoxaparin-anticoagulant-efficacy-whole

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Deze studie beschrijft een nieuwe microplaat test die FV stollingsactiviteit tijdens fibrine stolselvorming in menselijk plasma die niet eerder gerapporteerd. De methode gebruikt een kinetische microplaatlezer de verandering in absorptie bij 405 nm meet continu in fibrine stolselvorming in menselijk plasma.

Meting van Factor V activiteit in humaan plasma met een Microplate coagulatietest

De volbloed cytotoxiciteit assay (WCA) is een cytotoxiciteit assay ontwikkeld door het opnemen van high-throughput cell technologie voor plaatsbepaling met fluorescentie microscopie en geautomatiseerde beeldverwerking. Hier beschrijven we hoe lymfoomcellen behandeld met een anti-CD20 antilichaam kan worden geanalyseerd real-time in humaan volbloed kwantitatieve cellulaire cytotoxiciteit analyse.

Real-time cytotoxiciteitsassays in humaan volbloed

We presenteren een in vitro model waarmee de studie en analyse van coagulatie in hele, niet-vertonen bloed. Antistolling in het systeem is afhankelijk van de natuurlijke anticoagulation effect van gezonde endotheliale cellen en endothelial cel activatie zal resulteren in de bloedstolling.

Beoordeling van de anticoagulatie en anti-inflammatoire eigenschappen van endotheliale cellen met behulp van 3D-celkweek en niet-vertonen volbloed

Hierbij presenteren wij een protocol om aan het bed de endotoxine activiteit van menselijke volbloed monsters te meten. De endotoxine activity assay is een eenvoudige test om te presteren en kan een nuttige biomarker zijn bij ernstig zieke patiënten met sepsis.

Endotoxine activiteit test voor de detectie van volbloed Endotoxemie bij ernstig zieke patiënten

We presenteren een in vitro vasculaire ziekte model om hele bloed interacties met patiënt-afgeleide endotheel te onderzoeken. Dit systeem maakt het mogelijk om tromboogene eigenschappen van primaire endotheelcellen onder verschillende omstandigheden te bestuderen. De methode is vooral geschikt om in situ tromboïgeniteit en antistollingstherapie te evalueren tijdens verschillende fasen van stolling.

In Vitro Microfluidic Disease Model to Study Whole Blood-Endothelial Interactions and Blood Clot Dynamics in Real-Time

Dit protocol onderzoekt het gebruik van extracellulair vesikel (EV)-rijk plasma als indicator van het stollingsvermogen van EV. EV-rijk plasma wordt verkregen door een proces van differentiële centrifugatie en daaropvolgende recalcificatie.

Bepaling van de procoagulerende activiteit van extracellulaire blaasjes (EV) met behulp van EV-geactiveerde stollingstijd (EV-ACT)

We presenteren een benchtop-protocol om trombose te induceren in ventriculaire hulpmiddelen (VAD) binnen een recirculerend testplatform. Deze methode dient om trombogene hotspots in het bloedstroompad te identificeren en kan helpen de tromboresistentie te verbeteren voorafgaand aan preklinische tests in diermodellen.

In vitro Trombosetest voor ventriculaire hulpmiddelen

Dit protocol beschrijft de Nijmegen Hemostasis Assay, die gelijktijdige, tijdsgebonden meting van trombine- en plasmingeneratie mogelijk maakt om een geïntegreerde beoordeling van stolling en fibrinolyse te bieden. De assay heeft als doel de karakterisering van het hemostatische evenwicht in onderzoek en klinische omgevingen te verbeteren, buiten het bereik van conventionele hemostatische tests.

De Nijmegen Hemostasis-assay: gelijktijdige fluorogene meting van trombine- en plasminegeneratie in één put

We schetsen een methodologie voor de verwerking van volbloed om een verscheidenheid aan componenten te verkrijgen voor verdere analyse. We hebben een gestroomlijnd protocol geoptimaliseerd dat snelle, hoogwaardige, gelijktijdige verwerking van volbloedmonsters in een niet-klinische omgeving mogelijk maakt.

Snelle Fractionering en isolatie van volbloed componenten in monsters verkregen van een communautair gevestigde instelling

Een protocol voor het meten van perifere bloedleukocyten met behulp van een POCT-kaartgebaseerde leukocytenanalysator wordt hier gepresenteerd. Dezelfde bloedmonsters werden getest door twee geautomatiseerde hematologieanalysatoren om de consistentie en nauwkeurigheid van de resultaten te evalueren. De resultaten toonden aan dat de geëvalueerde analyzer een goede correlatie had met het referentiesysteem.

Evaluatie van een Point-of-Care Testing Analyzer voor het meten van perifere bloed leukocyten

Leer een snelle point-of-care test voor enoxaparine anticoagulantia in volbloed met behulp van heparinase. Deze methode meet stollings tijden en helpt clinici bij het beoordelen van antistollings therapie voor veilige medische ingrepen.

Snelle Point-of-Care test van Enoxaparine anticoagulans werkzaamheid in volbloed

Meer video's verkennen