Name: Experimentele Endocarditis Model van Methicilline Resistente Staphylococcus aureus (MRSA) in Rat (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-04T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: Leer een experimenteel endocarditis model opzetten bij ratten met methicilline-resistente Staphylococcus aureus via katheterimplantatie en staartaderinjectie. Deze methode ondersteunt onderzoek naar infectiemechanismen en therapieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de US National Institutes of Health [subsidie ​​R01AI-39108 aan ASB] en de American Heart Association [subsidies SDG 0630219N en AID 09GRNT2180065 te YQX].

1. Voorbereiden van de MRSA-stammen voor Infectie <ol><li> Inoculeer een entoog met bacterie MRSA cultuur van een voorraad buis bij -80 ° C tot een schaap bloed trypticasesoja-agar (TSA) plaat (zie tabel van specifieke reagentia en apparatuur), en incuberen bij 37 ° C voor de overnachting. </li><li> Controleer de zuiverheid van de cultuur op het bloed agar plaat (vergelijkbaar kolonie fenotypes) om ervoor te zorgen is er geen besmetting. </li><li> Kies een kolonie van de schapen bloed TSA plaat en inoculeren de kolonie in 5 ml trypticasesoja bouillon (TSB) in een 15 ml snap-buisje. </li><li> Incuberen bij 37 ° C geroerd onder schudden bij 200 rpm. </li></ol> 2. Voorbereiding operatie Katheters Snijd polyethyleen buis (PE10;. Becton Dickinson, bestelnr 427401) tot 10 cm lengte, en smelt het ene uiteinde door te drukken op de punt met een steriele pincet. Het doel van de sluiting een uiteinde van de katheter om bloedingen vermijden tijdens katheterisatie. 3. Pre-surgery Voorbereiding en Anesthesie <ol><li> Plaats Sprague-Dawley ratten (Harlan, Indianapolis, Ind vrouw, 250-300 gram) in een kamer met isofluorane-zuurstof-gasmengsel (50%: 50%) tot de verdoving van kracht wordt (bijvoorbeeld de spieren ontspannen zijn en de pedalen zijn afwezig ) en handhaven dieren in een verdoofde staat tijdens de operatie met het gasmengsel. </li><li> Maak de nek van kin tot net onder het borstbeen met Betadine en 70% ethanol. </li></ol> 4. Chirurgische procedure <ol><li> Gebruik steriele techniek in de operatie. Maak een insnijding (1-1,5 cm) verticaal door alleen de huid laag van de nek boven het borstbeen. </li><li> Met behulp van stompe dissectie, scheid de fascia aan de rechter halsslagader met behulp van 2 paar gebogen getande tang bloot te leggen. </li><li> Trek de slagader op uit de nek holte, en plaats twee 10 cm lengte van de zijden hechtdraad in de slagader en uit de slagader te binden aan het blootgesteld cephalica einde, plaats een clip op de artery om bloedingen te voorkomen. </li><li> Maak een klein gaatje in de bovenkant van de slagader met behulp van een katheter introducer (Becton Dickinson, bestelnr. 406999), een katheter met een pincet door het gat in de slagader, verwijdert u de clip en duw de katheter naar het hart tot u weerstand wordt voldaan. </li><li> Bind de losse hechting rond het caudale einde van de slagader en zet de katheter op zijn plaats met de zijden hechtdraad wanneer de katheter op zijn plaats wordt bepaald door: i) de lengte van de katheter ingebracht (4-5 cm), ii) de weerstand tegen verdere vooruitgang en iii) het pulseren van de katheter met de hartslag. Laat de katheter voor de rest van het experiment. </li><li> Snijd overtollig hechtingen en katheter eindigt, en zorg ervoor dat er geen bloeding van de katheter. Stop de losse uiteinden onder de huid van de nek en sluit de huid met de huid clips. </li><li> Zet de rat in de kooi op een warme plaats totdat hersteld van de narcose, en zorgen voor voedsel en water. Controleer regelmatig de rat tijdens enna herstel van de anesthesie. </li><li> Deze operatie is een &quot;Categorie E&quot;-procedure. De procedures geproduceerd pijn is niet verlicht door pijnstillers, omdat MRSA-infecties bij leed van de dieren. </li></ol> 5. MRSA-infectie <ol><li> Infectie kan worden uitgevoerd tussen 1 en 7 dagen na de operatie, maar houd consistent zijn in experimenten. </li><li> Schoon rattenstaart met 70% ethanol, en injecteer 0,5 ml MRSA op een gewenste cellen (10 april-10 juni cfu / dier de S. aureus stammen). Met 27 G 1/2 inch naald intraveneus de staartader Let : MRSA-cultuur behoort tot bioveiligheid niveau 2 (BSL2) en heeft een matige mogelijke gevaar voor het personeel en het milieu. </li><li> Houd de druk op de site tot hemostase optreedt alvorens terug te keren de rat naar de kooi. </li></ol> 6. Offer Ratten en cultuur doelweefsels <ol><li> Offer ratten door ip injectie van natrium-pentobarbital (200 mg/ Kg) na 1-6 dagen na infectie. </li><li> Plaats de rat op haar rug en veeg de borst met 70% ethanol. </li><li> Maak een V-vormige incisie in de borst onder het borstbeen, en snijd het kraakbeen van de ribben aan elke kant van het borstbeen naar het hart bloot te leggen. </li><li> Trek het hart zachtjes omhoog en clip door het hart weefsel in de buurt van de aorta en ontleden tot het hart vrij te maken. </li><li> Plaats het hart op een steriele petrischaal met 4x4 inch gaas naar binnen, maken een snede door de linker ventrikel binnenwand en open de linkszijdige kamer. </li><li> Controleer visueel voor de plaatsing van de katheter. Onderzoek en verwijder vegetaties van de klep met een schaar en tang. </li><li> Weeg en homogeniseren van de vegetaties, en maak seriële verdunningen met PBS voor kwantitatieve cultuur. </li></ol> 7. Representatieve resultaten Direct na het inbrengen van de katheter in de slagader en naar beneden te duwen de katheter ongeveer 4-5 cm in de richting van het hart, zal een weerstand zijn experienced. Indien geen weerstand wordt gedetecteerd, kan de katheter niet goed zijn opgenomen in linkerkant van de hartkamer, die de plaatsing van de katheter beïnvloeden. Een juiste katheter eerder gepubliceerd 9 is getoond in figuur 1. Een deel van MRSA-infectie monsters moeten kwantitatieve gekweekte de zorg ervoor dat de exacte levensvatbare bacteriële telling voor de infectie en de zuiverheid van de infectie monster. Bovendien moet de organismen zich uit vegetaties dezelfde zijn als die van het entmateriaal. Tabel 1 geeft een voorbeeld van virulentie van een S. aureus stam in de rat endocarditis model dat werd eerder gepubliceerd 9. Alle dieren uitgedaagd met inocula van 10 5 en 10 6 kve en offerde tussen de 3 tot 6 dagen na infecties ontwikkeld endocardits met hoge S. aureus dichtheden in cardiale vegetaties en nieren en milt ( <strong&gt; tabel 1). Ratten met steriele klep cultures worden beschouwd geïnfecteerde. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/3863/3863fig1.jpg" /> Figuur 1. Catheter is een juiste plaats (linkerkant van hartkamer) en talrijke vegetaties zichtbaar in de aortaklep 9. <table border="1"><tbody><tr><td> Inoculum (aantal Animas) </td><td colspan="3"> De gemiddelde log 10 CFU / g weefsel ± SD een in: </td></tr><tr><td></td><td> Vegetatie </td><td> Nier </td><td> Milt </td></tr><tr><td> 10 6 CFU / dier (9) </td><td> 10,36 ± 0,85 </td><td> 7,30 ± 0,64 </td><td> 6,70 ± 0,57 </td></tr><tr><td> 10 5 CFU / dier (8) </td><td> 9,93 ± 0,53 </td><td> 7,14 ± 0,53 </td><td> 6,44 ± 0,63</td></tr><tr><td> 10 4 CFU / dier (7) </td><td> 3,46 ± 0,50 * </td><td> 1,81 ± 0,74 * </td><td> 1,58 ± 0,59 * </td></tr></tbody></table> een SD, standaarddeviatie. p &lt;0,001 met betrekking tot 10 5 of 10 6 CFU-uitgedaagd dieren. Tabel 1. S. aureus dichtheid in het hart vegetaties met verschillende inocula in de rat endocarditis model 9.

<ol><li>Petti, C. A., Fowler, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staphylococcus+aureus+bacteremia+and+endocarditis%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiol.+Clin%22%5BJournal%5D)">Staphylococcus aureus bacteremia and endocarditis.</a> Cardiol. Clin. 21, 219-233 (2003).</li>
<li>Bashore, T. M., Cabell, C., Fowler, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+infective+endocarditis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Probl.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Update on infective endocarditis.</a> Curr. Probl. Cardiol. 31, 274-352 (2006).</li>
<li>Fowler, V. G. Jr, Justice, A., Moore, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+factors+for+hematogenous+complications+of+intravascular+catheter-associated+Staphylococcus+aureus+bacteremia%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Risk factors for hematogenous complications of intravascular catheter-associated Staphylococcus aureus bacteremia.</a> Clin. Infect. Dis. 17, 313-320 (1993).</li>
<li>Wisplinghoff, H., Bischoff, T., Tallent, S. M., Seifert, H., Wenzel, R. P., Edmond, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nosocomial+bloodstream+infections+in+US+hospitals%3A+analysis+of+24%2C179+cases+from+a+prospective+nationwide+surveillance+study%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Nosocomial bloodstream infections in US hospitals: analysis of 24,179 cases from a prospective nationwide surveillance study.</a> Clin. Infect. Dis. 39, 309-317 (2004).</li>
<li>Hoen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Special+issues+in+the+management+of+infective+endocarditis+caused+by+gram-positive+cocci%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Dis.+Clin.+North+Am%22%5BJournal%5D)">Special issues in the management of infective endocarditis caused by gram-positive cocci.</a> Infect Dis. Clin. North Am. 16, 437-452 (2002).</li>
<li>Moise, P. A., Hershberger, E., Amodio-Groton, M. I., Lamp, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+clinical+outcomes+when+utilizing+high-dose+%28%3E+or+%3D8+mg%2Fkg%29+daptomycin+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Safety and clinical outcomes when utilizing high-dose (> or =8 mg/kg) daptomycin therapy.</a> Ann. Pharmacother. 43, 1211-1219 (2009).</li>
<li>Sakoulas, G., Brown, J., Lamp, K. C., Friedrich, L. V., Lindfield, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+outcomes+of+patients+receiving+daptomycin+for+the+treatment+of+Staphylococcus+aureus+infections+and+assessment+of+clinical+factors+for+daptomycin+failure%3A+a+retrospective+cohort+study+utilizing+the+Cubicin+Outcomes+Registry+and+Experience%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Ther%22%5BJournal%5D)">Clinical outcomes of patients receiving daptomycin for the treatment of Staphylococcus aureus infections and assessment of clinical factors for daptomycin failure: a retrospective cohort study utilizing the Cubicin Outcomes Registry and Experience.</a> Clin. Ther. 31, 1936-1945 (2009).</li>
<li>Xiong, Y. Q., Willard, J., Kadurugamuwa, J. L., Yu, J., Francis, K. P., Bayer, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+in+vivo+bioluminescent+imaging+for+evaluating+the+efficacy+of+antibiotics+in+a+rat+Staphylococcus+aureus+endocarditis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob.+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Real-time in vivo bioluminescent imaging for evaluating the efficacy of antibiotics in a rat Staphylococcus aureus endocarditis model.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 49, 380-387 (2005).</li>
<li>Peerschke, E. I., Bayer, A. S., Ghebrehiwet, B., Xiong, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((gC1qR%2Fp33+blockade+reduces+Staphylococcus+aureus+colonization+of+target+tissues+in+an+animal+model+of+infective+endocarditis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">gC1qR/p33 blockade reduces Staphylococcus aureus colonization of target tissues in an animal model of infective endocarditis.</a> Infect. Immun. 74, 4418-4423 (2006).</li>
<li>Ganesh, V. K., Rivera, J. J., Smeds, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+structural+model+of+the+Staphylococcus+aureus+ClfA-fibrinogen+interaction+opens+new+avenues+for+the+design+of+anti-staphylococcal+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">A structural model of the Staphylococcus aureus ClfA-fibrinogen interaction opens new avenues for the design of anti-staphylococcal therapeutics.</a> PLoS Pathog. 4, e1000226(2008).</li>
<li>Boles, B. R., Horswill, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staphylococcal+biofilm+disassembly%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Staphylococcal biofilm disassembly.</a> Trends Microbiol. , (2011).</li>
<li>Tseng, C. W., Sanchez-Martinez, M., Arruda, A., Liu, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+Infection+of+Methicillin+Resistant+Staphylococcus+Aureus+%28MRSA%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous Infection of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus (MRSA).</a> J. Vis. Exp. (48), e2528(2011).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De rat endocarditis een belangrijke en gekarakteriseerd diermodel voor in vivo studies bij de Pathogenese en antimicrobiële middelen bij de behandeling van bacteriële infecties 9-11. Daarnaast, rat endocarditis model is een samenstelling van acute en sub-acute infecties, en nauw bootst de menselijke tegenhanger en menselijke inheemse klep endocarditis. Bovendien, vergezeld van een in de woning katheter, het vertegenwoordigt een klassiek biofilm-geassocieerde infectie, een veel voorkomende en lastige ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Blood agar plaat, 5% schapen bloed in trypticasesoja-agar (TSA) </td><td> Hardy Diagnostics </td><td> A10BX </td><td></td></tr><tr><td> Trypticasesoja bouillon (TSB) </td><td> Becton Dickinson </td><td> 211825 </td><td></td></tr><tr><td> Shaking incubator </td><td> LABNET </td><td> I5311-DS </td><td></td></tr><tr><td> Polyethyleen buizen </td><td> Becton Dickinson </td><td> 427401 </td><td></td></tr><tr><td> Catheter introducer </td><td> Becton Dickinson </td><td> 6999 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Isofluorance </td><td> Westerse Medische Suppy, Inc </td><td> 2147 </td><td> Volg de veiligheid en de behandeling informatie </td></tr><tr><td> Chirurgische instrumenten </td><td> Fine Science Tools en Biomedisch Onderzoek Instruments, Inc </td><td></td><td> Vind de instrumenten van de twee bedrijven voor uw behoeften </td></tr></tbody></table>

experimentele endocarditis model van methicilline resistente<em&gt; staphylococcus aureus</em&gt; (mrsa) in rat

Experimental Endocarditis Model of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in Rat

Endovasculaire infecties, waaronder endocarditis, zijn levensbedreigende besmettelijke syndromen 1-3. Staphylococcus aureus is de meest voorkomende wereldwijde oorzaak van dergelijke syndromen met onaanvaardbaar hoge morbiditeit en mortaliteit zelfs met geschikt antibioticum behandelingen 4-6. De toename van infecties veroorzaakt door meticilline-resistente S. aureus (MRSA), de hoge tarieven van vancomycine klinische behandeling storingen en groeiende problemen van linezolid en daptomycine weerstand hebben alle verdere gecompliceerde de behandeling van patiënten met dergelijke infecties, en leidde tot hoge kosten van de gezondheidszorg 7, 8. Daarnaast moet worden benadrukt dat de meeste recente studies met een behandeling met antibiotica uitkomsten zijn gebaseerd op klinische settings, en dus misschien wel worden beïnvloed door gastheer factoren variërend van patiënt-to-patiënt. Daarom is een relevant diermodel endovasculaire infectie waarbij gastheerfactoren geven gelijke dieren per dier iscruciaal microbiële pathogenese, en de effectiviteit van nieuwe antimicrobiële agentia te onderzoeken. Endocarditis in de rat is een gevestigde experimenteel diermodel dat nauw benadert de menselijke inheemse klep endocarditis. Dit model is gebruikt om de rol van bepaalde staphylococcen virulentiefactoren en de werkzaamheid van antibiotica behandelingen op Staphylococcus endocarditis te onderzoeken. In dit rapport beschrijven we de experimentele endocarditis model als gevolg van MRSA die kunnen worden gebruikt om bacteriële pathogenese en de respons op behandeling met antibiotica te onderzoeken.

Experimentele rat endocarditis model veroorzaakt door meticilline-resistente<em&gt; S. aureus</em&gt;.

Experimentele Endocarditis Model van Methicilline Resistente<em&gt; Staphylococcus aureus</em&gt; (MRSA) in Rat

Endovasculaire infecties, waaronder endocarditis, zijn levensbedreigende infectieuze syndromen1-3. Staphylococcus aureus is wereldwijd de meest voorkomende oorzaak ...

Het algemene doel van deze procedure is om een experimenteel model voor infectieuze endocarditis bij ratten op te zetten. Dit wordt bereikt door eerst aureus te kweken en chirurgische katheters voor de infectie voor te bereiden. Vervolgens wordt het operatiegebied voorbereid en wordt het dier onder narcose gebracht.Zodra het dier is geanestheseerd, wordt een katheter via de rechter arteria carotis in de richting van het hart geplaatst. De laatste stap is het infecteren van de dieren met aureus via een injectie in de staartвена. Uiteindelijk worden de doelweefsels gedissecteerd en klaargemaakt voor kwantitatieve kweek.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals een snel endocarditismodel, is dat het rode endocarditismodel kan worden gebruikt met het in vivo beeldvormingssysteem Ivus. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen het vakgebied van de orale pathogenese, zoals virulentie en de effectiviteit van antimicrobiële middelen. Over het algemeen zullen personen die nieuw zijn met deze techniek moeite hebben, aangezien de chirurgische procedure uitdagend is.Inoculeer eerst een lus vol M SSA-cultuur vanuit een bevroren voorraad in een schapenbloed-tripcase. Incubeer de cultuur overnacht bij 37 °C op een soja-agarplaat nadat is vastgesteld dat er geen contaminatie aanwezig is. Selecteer één kolonie van de plaat en gebruik deze om vijf milliliter trypto-sojabouillon in een snap-cap buis van 15 milliliter te inoculeren.Incubeer het inoculum gedurende de nacht bij 37 °C in een schudincubator. Stel deze in op 200 RPM. Bereid eerst de katheters door polyethyleenslangen in stukken van 10 centimeter te snijden en de katheters gedurende 30 minuten te steriliseren in een cex-desinfectieoplossing.Smelt vervolgens één uiteinde van een gesteriliseerde buis door de punt met verhitte steriele pincetten samen te drukken om een katheter te maken die vanuit de rechter arteria carotis in de linker ventrikel zal lopen en het endocard zal beschadigen wanneer het hart slaat. Anestheseer daarna de rat door deze in een kamer te plaatsen met een mengsel van isofluraan en zuurstof in een verhouding van één-op-één tot het anestheticum is ingetreden. Bevestig de anesthesie door te controleren of de spieren ontspannen zijn en de pedaalreflexen ontbreken.Behoud een staat van anesthesie tijdens de operatie door gebruik te maken van een neusconus die is verbonden met het gasmengsel. Reinig het operatiegebied met Betadine en 70%ethanol met behulp van steriele technieken gedurende de gehele operatie. Plaats de rat in rugligging en maak een verticale incisie door de huidlaag van de nek boven het sternum middels botte dissectie.Scheid de fascia om de rechter arteria carotis bloot te leggen. De rechter arteria carotis bevindt zich net rechts van de middellijn boven de claviculae. Trek de arterie voorzichtig uit de halsvacuüm omhoog en plaats twee stukken zijden hechtmateriaal van 10 centimeter onder de arterie om deze aan het blootgelegde cefale uiteinde af te binden.Plaats vervolgens een clip op de slagader om bloedingen te voorkomen. Maak met een pincet een klein gaatje in de bovenkant van de slagader met behulp van een katheterintroducer. Voer het open uiteinde van de katheter door het gaatje in de slagader.Verwijder de klem en duw de katheter richting het hart. De katheter moet vier tot vijf centimeter in de slagader worden ingebracht totdat er weerstand wordt gevoeld, wat aangeeft dat deze correct is geplaatst; de katheter moet pulseren met de hartslag van de rat. Zodra de katheter op zijn plaats zit, wordt een losse hechting rond het uiteinde van de slagader geknoopt om de katheter te fixeren.Knip met een zijden hechtdraad de overtollige hechting en de uiteinden van de katheter af en stik de uiteinden vervolgens onder de huid van de nek. Sluit de huid met huidclips. Plaats de rat in een schone kooi en houd deze op een warme plaats tot het dier volledig is hersteld van de anesthesie.Zorg voor voedsel en water en controleer de rat regelmatig, zowel tijdens als na het herstel. De infectie kan tussen één en zeven dagen na de operatie worden uitgevoerd, maar de timing moet consistent blijven binnen experimenten. Maak de staart van de rat schoon met 70% ethanol en injecteer 0,5 milliliters van de MRSA-cultuur bij de gewenste cel.Injecteer in de staartвена. Gebruik een naald van 27 gauge en een halve inch en oefen druk uit op de injectieplaats totdat alle bloedingen zijn gestopt voordat de rat terug in de kooi wordt geplaatst. Veeg na het opofferen van de rat de borstkas af met 70%ethanol en maak vervolgens een V-vormige incisie in de borstkas onder het borstbeen.Snijd het kraakbeen van de ribben aan beide zijden van het borstbeen door. Om het hart bloot te leggen, trekt u het hart voorzichtig omhoog, knipt u door het weefsel dicht bij de aorta en disseceert u naar boven om het hart vrij te maken. Plaats het hart in een steriele petrischaal bekleed met gaas van tien bij tien centimeter, en maak vervolgens een insnede door de binnenwand van de linker ventrikel om de linkerkamer te openen.Controleer of de katheter correct is geplaatst en verwijder deze vervolgens. Onderzoek de klep en verwijder vegetaties met een schaar en pincet. Verwijder daarnaast de nieren en de milt; weeg en homogeniseer de weefsels en vegetaties en maak vervolgens seriële verdunningen in PBS voor kwantitatieve kweek.Hier wordt een correct geplaatste katheter getoond, zoals aangegeven door de meest linkse pijl. Deze loopt over de aortaklep en in de linkerhartkamer, en rond de aortaklappen zijn talrijke vegetaties zichtbaar, zoals aangegeven door de middelste en rechter pijl. Deze tabel geeft een voorbeeld van de virulentie van een ssus-stam in het ratmodel voor endocarditis.Alle dieren die waren geïnoculeerd met 10⁵ en 10⁶ CFU ontwikkelden endocarditis met hoge densiteiten van ssus in de cardiale vegetaties, evenals in de nieren en milt. Zodra deze chirurgische procedure onder de knie is, kan deze binnen 10 minuten worden uitgevoerd mits deze correct wordt uitgevoerd.Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te onthouden dat het dier gedurende de operatie in een beoordeelde toestand moet worden gehouden. Na deze procedure kunnen methoden zoals ivus worden uitgevoerd om aanvullende vragen te beantwoorden, zoals real-time monitoring van de effectiviteit van antimicrobiële middelen en de in vivo genexpressie na de ontwikkeling ervan. Deze techniek kan voor onderzoekers in het veld van stap orus en fictie de manier zijn om de pathogene virulentiefactoren bij endovasculaire infecties te onderzoeken.Na het bekijken van deze video heeft u een goed inzicht in het opzetten van een experimenteel endocarditismodel bij ratten. Vergeet niet dat werken met MRA uiterst gevaarlijk kan zijn en dat voorzorgsmaatregelen, zoals het dragen van een laboratoriumjas en handschoenen, moeten worden getroffen tijdens het uitvoeren van deze procedure.

experimental-endocarditis-model-methicillin-resistant-staphylococcus

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

De rat model van acuut myocard infarct (AMI) is nuttig om het gevolg van een MI op cardiale pathofysiologische en fysiologische functie te bestuderen.

Acuut myocardinfarct in ratten

Een muismodel voor huid- en weke deleninfecties wordt gebruikt om de virulentiefunctie van methicilline-resistente Staphylococcus aureus (MRSA) en de immunologische respons van de gastheer te beoordelen. Hier presenteren wij een subcutaan infectiemodel voor huid- en weke deleninfecties.

Subcutane Infectie van Methicilline Resistente Staphylococcus Aureus (MRSA)

Streptococcus pneumoniae vormt discrete niet-purulente microscopische laesies in het hart. Beschreven wordt het protocol voor een muismodel van hartmicrolaesievorming. Er wordt instructie gegeven over microlaesievisualisatie met behulp van microscopie, onderscheid tussen vroege en late microlaesies en methoden om cardiale remodellering in harten van herstellende dieren te detecteren.

Visualisatie van<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Binnen Cardiac microverwondingen en Latere Cardiac Remodeling

Een aanpak wordt beschreven voor real-time detectie van de ingeboren immune reactie op het verwonden van cutane en Staphylococcus aureus -infectie van muizen. Door vergelijking LysM-EGFP muizen (die bezitten fluorescerende neutrofielen) met een LysM-EGFP gekruist immunodeficiëntie muis stam, we vooraf ons begrip van de infectie en de ontwikkeling van benaderingen ter bestrijding van de infectie.

Een muismodel te beoordelen ingeboren immuunreactie op Staphylococcus aureus -infectie

Het protocol beschrijft een nieuw in vivo muismodel van spinale implantaatinfectie waarbij een roestvrijstalen k-draadimplantaat is geïnfecteerd met bioluminescente Staphylococcus aureus Xen36. De bacteriële belasting wordt longitudinaal gemonitord met bioluminescente beeldvorming en bevestigd met kolonievormende eenheidstellingen na euthanasie.

In vivo muismodel van spinale implantaatinfectie

We beschrijven de creatie van een rat model van druk overbelasting geïnduceerde matige remodelleren en vroege systolische disfunctie waar signaal transductie trajecten die betrokken zijn bij de inleiding van het remodelleren proces worden geactiveerd. Dit diermodel zal helpen bij het identificeren van moleculaire doelen voor het toepassen van vroege therapeutische anti-remodelleren strategieën voor hartfalen.

Een Rat Model van Pressure Overload Geïnduceerde Matige Remodeling en Systolische disfunctie in tegenstelling tot Openlijke Systolische hartfalen

Hier presenteren we een reproduceerbaar intensive care unit-georiënteerd endotoxine model bij ratten.

Een reproduceerbaar intensive care-unit-georiënteerd endotoxinemodel bij ratten

Myocardiale ischemie-reperfusie model van rattenhart wordt verbeterd door gebruik te maken van een zelfgemaakt retractor, polyvinylchloride buis, en een unieke knoopmethode. Elektrocardiogram, trifenyltetrazoliumchloride en histologische kleuring en procentuele overlevingsanalyseresultaten toonden aan dat de verbeterde modelgroep hogere succes- en overlevingskansen heeft dan de reeds bestaande modelgroep.

Verbeterd knaagdiermodel van myocardiale ischemie en reperfusieletsel

Dit werk presenteert een diermodel van endotheliale-naar-mesenchymale overgangsgeïnduceerde fibrose, zoals te zien is bij aangeboren hartafwijkingen zoals kritieke aortastenose of hypoplastisch linkerhartsyndroom, wat gedetailleerde histologische weefselevaluatie, de identificatie van regulerende signaalroutes en het testen van behandelingsopties mogelijk maakt.

Een neonataal heterotopisch rattenharttransplantatiemodel voor de studie van endotheel-naar-mesenchymale overgang

Staphylococcus aureus (S. aureus) heeft het vermogen om zich door het lichaam te verspreiden en aanhoudende en terugkerende infecties te veroorzaken. Om deze processen beter te begrijpen, stelt deze studie een intracellulair infectiemodel op voor S. aureus. Dit model zal een cruciale basis vormen voor het onderzoeken van de mechanismen achter intracellulaire infecties.

Ontwikkeling en beoordeling van intracellulaire infectiemodellen voor Staphylococcus aureus

Het huidige protocol beschrijft een muismodel dat gebruik maakt van subcutane dorsale implantatie om implantaat-geassocieerde infecties te onderzoeken, waardoor uitgebreid onderzoek naar pathofysiologische mechanismen mogelijk wordt en de ontwikkeling van diagnostische criteria met gerichte therapeutische strategieën wordt ondersteund.

Diermodel van implantaat-geassocieerde infecties bij muizen

Leer een experimenteel endocarditis model opzetten bij ratten met methicilline-resistente Staphylococcus aureus via katheterimplantatie en staartaderinjectie. Deze methode ondersteunt onderzoek naar infectiemechanismen en therapieën.

Experimentele Endocarditis Model van Methicilline Resistente

Meer video's verkennen