Name: Fenotypische en functionele karakterisering van endotheliale Colony Forming Cellen uit menselijk navelstrengbloed (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 46 s
Description: Leer endotheliale colony forming cellen (ECFCs) isoleren uit menselijk navelstrengbloed voor regeneratieve geneeskunde. Deze methode karakteriseert klonale proliferatiepotentieel en vaatvorming in vivo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dr Yoder is consultant voor EndGenitor Technologies, Inc en lid van de raad van Rimedion Technologies, Inc

<ol><li>Carmeliet, P., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+and+clinical+applications+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms and clinical applications of angiogenesis.</a> Nature. 473, 298-307 (2011).</li>
<li>Asahara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+putative+progenitor+endothelial+cells+for+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis.</a> Science. 275, 964-967 (1997).</li>
<li>Urbich, C., Dimmeler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+progenitor+cells%3A+characterization+and+role+in+vascular+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Endothelial progenitor cells: characterization and role in vascular biology.</a> Circ. Res. 95, 343-353 (2004).</li>
<li>Critser, P. J., Voytik-Harbin, S. L., Yoder, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolating+and+defining+cells+to+engineer+human+blood+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Prolif%22%5BJournal%5D)">Isolating and defining cells to engineer human blood vessels.</a> Cell. Prolif. 44, 15-21 (2011).</li>
<li>Matthias, M., David, N., Josef, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+bench+to+bedside%3A+what+physicians+need+to+know+about+endothelial+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">From bench to bedside: what physicians need to know about endothelial progenitor cells.</a> Am. J. Med. 124, 489-4897 (2011).</li>
<li>Ingram, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vessel+wall-derived+endothelial+cells+rapidly+proliferate+because+they+contain+a+complete+hierarchy+of+endothelial+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Vessel wall-derived endothelial cells rapidly proliferate because they contain a complete hierarchy of endothelial progenitor cells.</a> Blood. 105, 2783-276 (2005).</li>
<li>Ingram, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+novel+hierarchy+of+endothelial+progenitor+cells+using+human+peripheral+and+umbilical+cord+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Identification of a novel hierarchy of endothelial progenitor cells using human peripheral and umbilical cord blood.</a> Blood. 104, 2752-2760 (2004).</li>
<li>Yoder, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redefining+endothelial+progenitor+cells+via+clonal+analysis+and+hematopoietic+stem%2Fprogenitor+cell+principals%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Redefining endothelial progenitor cells via clonal analysis and hematopoietic stem/progenitor cell principals.</a> Blood. 109, 1801-1809 (2007).</li>
<li>Reinisch, A., Strunk, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Animal+Serum+Free+Expansion+of+Human+Umbilical+Cord+Derived+Mesenchymal+Stromal+Cells+%28MSCs%29+and+Endothelial+Colony+Forming+Progenitor+Cells+%28ECFCs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs.</a> J. Vis. Exp. (32), e1525(2009).</li>
<li>Au, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+in+vivo+potential+of+endothelial+progenitor+cells+from+human+umbilical+cord+blood+and+adult+peripheral+blood+to+form+functional+long-lasting+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Differential in vivo potential of endothelial progenitor cells from human umbilical cord blood and adult peripheral blood to form functional long-lasting vessels.</a> Blood. 111, 1302-135 (2008).</li>
<li>Critser, P. J., Kreger, S. T., Voytik-Harbin, S. L., Yoder, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+matrix+physical+properties+modulate+endothelial+colony+forming+cell-derived+vessels+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Collagen matrix physical properties modulate endothelial colony forming cell-derived vessels in vivo.</a> Microvasc. Res. 80, 23-30 (2010).</li>
<li>Melero-Martin, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+robust+and+functional+vascular+networks+in+vivo+with+human+adult+and+cord+blood-derived+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Engineering robust and functional vascular networks in vivo with human adult and cord blood-derived progenitor cells.</a> Circ. Res. 103, 194-202 (2008).</li>
<li>Melero-Martin, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+vasculogenic+potential+of+human+blood-derived+endothelial+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">In vivo vasculogenic potential of human blood-derived endothelial progenitor cells.</a> Blood. 109, 4761-4768 (2007).</li>
<li>Hofmann, N. A., Reinisch, A., Strunk, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Large+Scale+Expansion+of+Adult+Human+Endothelial+Colony+Forming+Progenitor+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells.</a> J. Vis. Exp. (32), e1524(2009).</li>
<li>Lin, Y., Weisdorf, D. J., Solovey, A., Hebbel, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins+of+circulating+endothelial+cells+and+endothelial+outgrowth+from+blood%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Origins of circulating endothelial cells and endothelial outgrowth from blood.</a> J. Clin. Invest. 105, 71-77 (2000).</li>
<li>Witting, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+Large+Volume+Lentiviral+Vector+Production+Using+Flow+Electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene.+Ther%22%5BJournal%5D)">Efficient Large Volume Lentiviral Vector Production Using Flow Electroporation.</a> Hum. Gene. Ther. , (2011).</li>
<li>Yoon, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+neovascularization+by+mixed+transplantation+of+early+endothelial+progenitor+cells+and+late+outgrowth+endothelial+cells%3A+the+role+of+angiogenic+cytokines+and+matrix+metalloproteinases%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Synergistic neovascularization by mixed transplantation of early endothelial progenitor cells and late outgrowth endothelial cells: the role of angiogenic cytokines and matrix metalloproteinases.</a> Circulation. , 112-1618 (2005).</li>
<li>Dubois, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+progenitor+cell+populations+on+left+ventricular+remodeling+and+myocardial+neovascularization+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Differential effects of progenitor cell populations on left ventricular remodeling and myocardial neovascularization after myocardial infarction.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 55, 2232-2243 (2010).</li>
<li>Medina, R. J., O'Neill, C. L., Humphreys, M. W., Gardiner, T. A., Stitt, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outgrowth+endothelial+cells%3A+characterization+and+their+potential+for+reversing+ischemic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Outgrowth endothelial cells: characterization and their potential for reversing ischemic retinopathy.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 51, 5906-5913 (2010).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Fenotypische en functionele karakterisering van vermeende endotheliale voorlopercellen is belangrijk om de bonafide ECFCs die in staat zijn klonaal en serieel re-plating in cultuur te identificeren en aanleiding geven tot duurzaam en functioneel implanteerbare bloedvaten in vivo. Human navelstrengbloed is verrijkt met ECFCs en de concentratie van deze circulerende cellen neemt af met het ouder worden of ziekte 10. Recente studies suggereren dat ECFC kan een belangrijke rol in vasculaire repa...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> Heparine Natrium injectie, USP </td><td> APP Pharmaceuticals </td><td> 504031 </td></tr><tr><td> Ficoll-pague </td><td> Amersham Biosciences </td><td> 17-1440-03 </td></tr><tr><td> Mengen canule </td><td> Maersk Medical </td><td> 500.11.012 </td></tr><tr><td> EGM-2 </td><td> Lonza </td><td> CC-3162 </td></tr><tr><td> Gedefinieerd FBS </td><td> Hyclone </td><td> SH30070.03 </td></tr><tr><td> TrypLE express </td><td> Gibco </td><td> 12605 </td></tr><tr><td> Rat type I collageen </td><td> BD Biosciences </td><td> 354236 </td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> BD Biosciences </td><td> 356234 </td></tr><tr><td> FcR Block </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-059-901 </td></tr><tr><td> hCD31, FITC conjugated </td><td> BD Pharmingen </td><td> 555445 </td></tr><tr><td> hCD45, FITC-geconjugeerd </td><td> BD Pharmingen </td><td> 555482 </td></tr><tr><td> hCD14, FITC-geconjugeerd </td><td> BD Pharmingen </td><td> 555397 </td></tr><tr><td> hCD144, PE geconjugeerd </td><td> eBioscience </td><td> 12-1449-80 </td></tr><tr><td> hCD146, PE geconjugeerd </td><td> BD Pharmingen </td><td> 550315 </td></tr><tr><td> hCD105, PE geconjugeerd </td><td> Invitrogen </td><td> MHCD10504 </td></tr><tr><td> Mevrouw IgG 1, k antilichaam, FITC-geconjugeerd </td><td> BD Pharmingen </td><td> 555748 </td></tr><tr><td> Mevrouw IgG 1, k antilichaam, PE geconjugeerd </td><td> BD Pharmingen </td><td> 559320 </td></tr><tr><td> Mevrouw IgG 2a, k antilichaam, FITC-geconjugeerd </td><td> BD Pharmingen </td><td> 555573 </td></tr><tr><td> Anti-menselijke CD31 </td><td> Dako </td><td> kloon JC70 / A </td></tr><tr><td> Anti-mouse CD31 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 553370 </td></tr><tr><td> 0,22 pm vacuümfiltratie systeem </td><td> Millipore </td><td> SCGPU05RE </td></tr><tr><td> IJsazijn, 17.4N </td><td> Visser </td><td> A38-500 </td></tr><tr><td> Antibiotica-Antimycoticum </td><td> Invitrogen </td><td> 15240-062 </td></tr><tr><td> Foetaal runderserum (FBS) </td><td> Hyclone </td><td> SH30070.03 </td></tr><tr><td> IHC Zink Fixatief </td><td> BD Biosciences </td><td> 550523 </td></tr><tr><td> Sytox groene reagens </td><td> Invitrogen </td><td> S33025 </td></tr><tr><td> Klonen cilinders, steriel </td><td> Fisher Scientific </td><td> 07-907-10 </td></tr></tbody></table>

fenotypische en functionele karakterisering van endotheliale colony forming cellen uit menselijk navelstrengbloed

Phenotypic and Functional Characterization of Endothelial Colony Forming Cells Derived from Human Umbilical Cord Blood

Sinds zeer lange tijd uitzicht op de vorming van nieuwe bloedvaten via angiogenese, vasculogenese en arteriogenese zijn onlangs beoordeeld 1. De aanwezigheid van circulerende endotheliale voorlopercellen (EPC&#39;s) werden voor het eerst geïdentificeerd in volwassen menselijke perifeer bloed door Asahara et al.. In 1997 2 het instellen van een infusie van nieuwe hypothesen en strategieën voor vasculaire regeneratie en reparatie. EPC&#39;s zijn zeldzaam, maar de normale componenten van het circulerende bloedvolume dat huis naar sites van bloedvatvorming of vasculaire remodellering, en grotendeels te vergemakkelijken of postnatale vasculogenese, angiogenese, of arteriogenese via paracriene stimulatie van de bestaande vaatwand afgeleide cellen 3. Er is geen specifieke marker om een EPC te identificeren is geïdentificeerd, en op dit moment de staat van het veld is om te begrijpen dat een groot aantal soorten cellen, waaronder proangiogenic hematopoietische stamcellen en progenitorcellen, circulerende angiogene cellen, Tie2 + monocyten, myeloïde progenitor cells, tumor geassocieerde macrofagen en M2 geactiveerde macrofagen deel stimuleren angiogene proces verscheidene preklinische diermodelsystemen en bij mensen in talrijke ziektetoestanden 4, 5. Endotheliale kolonievormende cellen (ECFCs) zijn zeldzaam circulerende levensvatbare endotheliale cellen kenmerkt zich door robuuste klonale proliferatie potentieel, secundaire en tertiaire kolonievormende mogelijkheid op opnieuw platen, en het vermogen om intrinsieke vormen in vivo schepen bij de transplantatie in immunodeficiënte muizen 6-8. Terwijl ECFCs zijn met succes geïsoleerd uit het perifere bloed van gezonde volwassen personen, navelstrengbloed (CB) van gezonde pasgeboren baby&#39;s, en de vaatwand van een groot aantal menselijke arteriële en veneuze vaten 6-9, CB bezit de hoogste frequentie van ECFCs 7 dat scherm de meest robuuste klonale proliferatieve potentieel en de vorm duurzaam en functioneel bloedvaten in vivo 8, 10-13. Hoewel de afleiding vanECFC volwassen perifeer bloed is ingediend 14, 15, hier de methoden voor het afleiden beschrijven klonen expansie en in vitro als in vivo karakterisering van ECFCs van het menselijk umbilical CB.

Endotheliale kolonievormende cellen (ECFCs) in omloop zijn endotheelcellen met robuuste klonale proliferatie potentieel dat intrinsieke weer te geven<em&gt; In vivo</em&gt; Vat het vormen van vermogen. Fenotypische en functionele karakterisering van uitgroei endotheliale cellen afkomstig van CB zijn belangrijk om te identificeren en te isoleren<em&gt; Bona fide</em&gt; ECFCs voor potentiële klinische toepassing bij het herstel van beschadigde weefsels.

Fenotypische en functionele karakterisering van endotheliale Colony Forming Cellen uit menselijk navelstrengbloed

Langdurige opvattingen over de vorming van nieuwe bloedvaten via angiogenese, vasculogenese en arteriogenese zijn onlangs herzien1. De aanwezigheid van ...

Het algemene doel van deze procedure is om uit te leggen hoe endotheliale kolonievormende cellen of e CFC's kunnen worden afgeleid uit humaan navelstrengbloed. Dit wordt bereikt door eerst mononucleaire cellen uit het navelstrengbloed uit te platen, om vervolgens kolonie-uitgroei van E CFC's te klonen en te expanderen. De tweede stap is om de cellen in vitro te karakteriseren met behulp van een nieuwe single-cell assay-techniek voor klonaal proliferatief potentieel.Ten slotte worden de cellen gekarakteriseerd in een in vivo vaatvormende assay door de productie en implantatie van gels met ECFC's in nud/nud-muizen. Uiteindelijk kan de in vivo vorming van de novo met bloed gevulde gastvaten worden geëvalueerd door middel van H&amp;E-kleuring van de cellulaire implantaten die ECFC's bevatten. Het belangrijkste voordeel van deze technieken ten opzichte van bestaande methoden is dat zij de bestudering van het proliferatievermogen van endotheelcellen op enkelcelniveau mogelijk maken.De implicaties van deze techniek kunnen worden uitgebreid naar het vinden van diagnostische en therapeutische instrumenten voor ziekten zoals perifeer arterieel vaatlijden of PAD, omdat deze techniek ons in staat

phenotypic-functional-characterization-endothelial-colony-forming

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Endotheliale kolonievormende progenitor cellen (ECFCs) zijn een veelbelovend instrument om vasculaire homeostase en reparatie te bestuderen.

Isolatie en grootschalige expansie van volwassen humane endotheelcellen kolonievormende Progenitor Cellen

Dit protocol beschrijft de isolatie en de daaropvolgende expansie van mesenchymale stromale cellen en endotheelcellen kolonievormende cellen zonder het gebruik van dierlijke serum op autologe paren te genereren voor experimentele transplantatie doeleinden.

Isolatie en dierlijk serum vrije expansie van de mens navelstreng Afgeleid Mesenchymale stromale cellen (MSC&#39;s) en Endotheliale Colony Forming progenitor cellen (ECFCs)

De kolonievormende cel (CFC) assay is een in vitro assay waarin hematopoietische voorlopercellen vormen kolonies in een semi-vast medium. Een combinatie van kolonie morfologie, celmorfologie en flowcytometrie worden gebruikt om het vermogen van de voorouders te laten groeien en differentiëren langs de verschillende hematopoietische lijnen te beoordelen.

Colony Forming Cell (CFC) test voor humane hematopoietische cellen

Dit protocol maakt de betrouwbare generatie en karakterisering van endotheliale cellen uit bloeduitgroei (BOEC's) mogelijk vanuit een klein volume volwassen perifeer bloed. BOEC's kunnen worden gebruikt als een surrogaat voor endotheelcellen van patiënten met vasculaire aandoeningen en als een substraat voor de generatie van geïnduceerde pluripotente stamcellen.

Generatie en cultuur van Blood uitgroei endotheelcellen van de humane perifere bloed

Hematopoietische stamcellen en progenitorcellen (HSPC) afgeleid van gespecialiseerde (hemogenic) endotheelcellen tijdens de ontwikkeling, maar weinig bekend over het proces waarbij sommige endotheelcellen specificeren bloedvormende worden. We tonen een stroom-cytometrie-gebaseerde methode waarmee gelijktijdige isolatie van hemogenic endotheelcellen en HSPC van muizen embryonale weefsels.

Isolatie van muizen embryonale Hemogenic endotheelcellen

Het doel van dit protocol is te isoleren van endotheliale voorlopercellen van bloed van de navelstreng. Enkele van de toepassingen zijn het gebruik van deze cellen als een biomarker voor het identificeren van patiënten met cardiovasculaire risico, behandeling van ischemische ziekten, en creëren weefsel-engineered vasculaire en hart ventiel construeert.

Isolatie van endotheliale voorlopercellen van menselijke navelstrengbloed

Hier presenteren we een protocol om precies te vormen hemogenic endoteel van menselijke pluripotente stamcellen in een feeder-en xeno-vrije voorwaarde. Deze methode zal hebben brede toepassingen in ziektemodel lering en screening voor therapeutische verbindingen.

Hemogenic endoteel differentiatie van menselijke pluripotente stamcellen in een voeder-en xeno-vrije gedefinieerde voorwaarde

Hier presenteren we een protocol voor immunophenotypic karakterisering en cytokine geïnduceerde differentiatie van snoer bloed afgeleide CD34+ hematopoietische stam en voorlopercellen tot de vier myeloïde lijn. De toepassingen van dit protocol omvatten onderzoeken naar het effect van myeloïde ziekte mutaties of kleine moleculen op myeloïde differentiatie van de CD34+ cellen.

Pan-myeloïde differentiatie van menselijk snoer bloed afgeleid CD34+ hematopoietische stam en voorlopercellen

Driedimensionaal co-Culture spheroid-systeem voor angiogenese is ontworpen om de fysiologische angiogenese na te bootsen. Co-Culture sferoïden worden gevormd door twee humane vasculaire celprecursoren, ecfcs en MSCS, en ingebed in collageen gel. Het nieuwe systeem is effectief voor het evalueren van angiogene modulatoren en verschaft relevantere informatie aan de in vivo studie.

Driedimensionaal angiogenese-assay systeem met co-Culture Spheroids gevormd door endotheliale kolonie vormende cellen en mesenchymale stamcellen

Hier wordt een eenvoudig protocol gepresenteerd voor de gerichte differentiatie van hemogene endotheelcellen van menselijke pluripotente stamcellen in ongeveer 1 week.

Gerichte differentiatie van hemogene endotheelcellen uit menselijke pluripotente stamcellen

The endothelium is a dynamic integrated structure that plays an important role in many physiological functions such as angiogenesis, hemostasis, ...

Karakterisering van bloeduitgroei endotheelcellen (BOEC) uit perifeer bloed van varkens

Leer endotheliale colony forming cellen (ECFCs) isoleren uit menselijk navelstrengbloed voor regeneratieve geneeskunde. Deze methode karakteriseert klonale proliferatiepotentieel en vaatvorming in vivo.

Fenotypische en functionele karakterisering van endotheliale Colony Forming Cellen uit menselijk navelstrengbloed

Meer video's verkennen