Doe-het-zelf-Inrichting voor Herstel van gecryopreserveerde monsters per ongeluk laat vallen in cryogene opslagtanks

Het doel van deze procedure is om het ophalen van monsters in cryoboxen en cryo-vialen uit duotanks gevuld met vloeibare stikstof te vergemakkelijken met behulp van een eenvoudig te construeren apparaat. Dit wordt bereikt door eerst een of twee vriesrekjes uit de doer te verwijderen om ruimte te scheppen voor manoeuvreren en het apparaat verticaal in de doer te steken. De tweede stap is om voorzichtig langs de bodem van de doer te schrapen met het apparaat.

Trek vervolgens het apparaat rechtop langs de wanden van de doer om de vriesbox uit de tank te scheppen, de laatste stap is om de doos te pakken die van de bodem van de doer is opgehaald en de verwijderde vriesrekjes terug te plaatsen. Het grote voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden zoals decanteren, de baar vol met vloeibare stikstof, is dat het een eenvoudige, veilige en snelle alternatief biedt, die de integriteit van het monster behoudt en kan worden uitgevoerd door één operator. Om te beginnen met de assemblage van het cryotolerante apparaat, gebruikt u een tang om een ​​zijde van een drijsidige sterke band recht te trekken om een ​​LHA-sterke band te maken.

Zoals hier te zien is, kunnen de afmetingen van de sterke band worden gekozen afhankelijk van de diameter van de hals van de doer. Er moeten twee van dergelijke sterke banden worden gemaakt om het apparaat vijf en een half bij vijf en een half inch cryoboxen te laten ophalen. Bevestig deze met een sterke band TST-band met behulp van een kroonbout, borgmoer en schroef om de basis van de cryo-schep te vormen.

Het apparaat zou er nu uit moeten zien zoals hier te zien is. Gebruik nu een sleufplaat om de sleuven op de sterke band te sleuven met de sleuven aan het ene uiteinde van de sleufplaat. Bevestig de twee vervolgens met Hillman-moeren en bouten.

Boor gaten voor bevestiging als de sleufplaat en sterke banden geen voorgeboorde gaten hebben. Indien gewenst, kan een handvat worden gevormd door de andere kant van de sleufplaat te buigen en met schuim te omwikkelen. Om het apparaat beter te grijpen, zorg ervoor dat het schuim wordt verwijderd voorafgaand aan water cla.

Het cryotolerante DIY-opvangkapsel kan ook worden aangepast voor het ophalen van cryo-vialen. Dit houdt in dat de platte basis wordt vervangen door een roestvrijstalen zeef die is aangepast voor het scheppen van vials uit vloeistof. Om met de assemblage te beginnen, draait u eerst de kroonmoeren en -bouten los en bevestigt u de sterke band te strapp aan de sleufplaat.

Voordat u vervolgens de roestvrijstalen zeef aan de sleufplaat bevestigt, buigt u voorzichtig de hals van de zeef met behulp van een tang om de basis in een hoek te richten zodat deze op een pollepel lijkt. Als de gebruikte zeef een lip heeft, gebruikt u een tang om de lip naar beneden te buigen. Dit maakt het manoeuvreren met het apparaat gemakkelijker.

Lign de gat op de handgreep van de zeef samen met de gaten op de sleufplaat en bevestig de zeef met behulp van Hillman-moeren en bouten. Boor gaten als de zeef niet met voorgeboorde gaten wordt geleverd. Om cryoboxen uit een doer te beginnen ophalen, zorg ervoor dat u eerst cryogene handschoenen aantrekt.

Verwijder vervolgens een of twee vriesrekjes uit de doer om ruimte te scheppen voor manoeuvreren met het apparaat. Gebruik vervolgens het rechtopstaande cryotolerante DIY-opvangkapsel, uitgerust met de sterke band ttra-basis, om voorzichtig langs de bodem van de doer te schrapen en de doos te verzamelen, die in de bodem van de doer-tank valt. Trek vervolgens het apparaat rechtop langs de wanden van de doer om de vriesbox uit de tank te scheppen.

Merk op dat het apparaat verticaal moet worden gehouden en recht omhoog getrokken moet worden om te voorkomen dat de doos terug in de doer glijdt. Om cryo-vialen te verwijderen, gebruikt u de cryo-schep voorzien van een zeef om voorzichtig de bodem van de doer te schrapen, vergelijkbaar met het ophalen van cryoboxen, trekt u het apparaat rechtop en grijpt u de vials die in de zeef zijn verzameld. Een grote uitdaging bij genexpressiestudies is dat de kwaliteit van RNA afhankelijk is van de bewaarcondities voor zowel bevroren weefselmonsters als geëxtraheerd RNA.

Deze figuur toont het effect van monsterbehandeling op de integriteit van totaal RNA Totaal RNA uit dezelfde weefselbron werd vóór het experiment aan verschillende monsterbehandelingen onderworpen intact totaal, RNA-bereidheidssnelheid toont duidelijke 28 s en 18 s ribosomaal RNA-banden met de 28 s ribosomaal RNA-band, ongeveer twee keer zo intens als de 18 s ribosomaal RNA-band. Dit is een indicatie dat het RNA intact is. Banen drie en vier tonen monsters met significante degradatie als gevolg van herhaalde gedeeltelijke ontdooiing door opnames op korte termijn uit de doer, waardoor langetermijnopslag wordt gemodelleerd met periodiek decanteren vanwege de noodzaak van het ophalen van de gevallen vials op dozen.

Echter, monsters die in de doerservice worden bewaard met behulp van het DIY-apparaat en dus geen gedeeltelijke ontdooiing bevatten intact RNA in baan twee. Na het bekijken van deze video, zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u monsters uit de met vloeibare stikstof gevulde dvar kunt halen zonder deze te decanteren.