Name: Doe-het-zelf-Inrichting voor Herstel van gecryopreserveerde monsters per ongeluk laat vallen in cryogene opslagtanks (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: Leer een kosteneffectief cryotolerant apparaat bouwen voor het veilig en snel ophalen van monsters uit vloeibare stikstof Dewar-tanks. Deze methode behoudt de integriteit van cryopreserveerde samples en is geschikt voor gebruik door één operator.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

DIY cryogene ophalen van het apparaat had getest in de loop van de projecten &quot;Modeling bacteriële eiwitten prenylatie in eukaryote cellen met behulp van bio-informatica en moleculaire aanpak&quot; wordt gesponsord door Mary Louise Andrews Award for Cancer Research programma, Virginia Academie van Wetenschappen, &quot;fysiologische betekenis van RNA bewerken in Plasma Dendritische cellen &quot;gesponsord door The Thomas F. Jeffress en Kate Miller Jeffress Memorial Trust en staat Contract 16.740.11.0364 (Ministerie van Wetenschap en Onderwijs, Rusland). We willen Beth Eom bedanken voor hulp bij het RNA integriteit experiment.

1. Vergadering van Cryotolerant Inrichting voor ophalen van Cryoboxes <ol><li> Met tangen, recht uit een zijde van drie zijden sterk band (figuur 1A) om een L-vormige sterk-tie in figuur 1B. Opmerking: De afmetingen van sterke-tie kan worden gekozen afhankelijk van de diameter van de hals van Dewar . </li><li> Zet twee van zulke sterke banden met een sterke-band T-band (figuur 2) met behulp van Crown bout moer, ring en schroef aan om de Cryoscoop basis vormen zoals getoond in figuur 3 (AB). Opmerking: Twee sterke banden worden gebruikt voor het ophalen van maken 5 ½ inch x 5 ½ inch cryoboxes. </li><li> Met behulp van een schuimspaan uit de plaat (figuur 4), breng de sleuven op de sterke-band T-band met de sleuven aan de ene kant van de sleuf plaat en elkaar vast de twee met behulp van Hillman moer en bouten (figuur 5). Opmerking: Als de gleuf plaat en sterke band&#39;s niet meemij met voorgeboorde gaten, dan moet u hebben gaten geboord met behulp van hardmetalen boor. </li><li> Buig het andere uiteinde van de spleetplaat met behulp van een tang zoals weergegeven in figuur 6. (Deze stap is optioneel). </li><li> Wikkel de handgreep met schuim beter begrijpen de toestel als in vloeibare stikstof in figuur 6. (Optioneel) Opmerking: Verwijder voor het schuim autoclaveren. </li></ol> 2. Vergadering van Cryotolerant Inrichting voor ophalen van Cryovials De Cryotolerant DIY ophalen apparaat kan ook worden aangepast voor het ophalen van cryovials. Hierbij vervanging van vlakke bodem met een roestvrij stalen zeef zoals gewijzigd voor scheppen van flesjes van vloeibare stikstof (Figuur 7). <ol><li> Draai de kroon moeren en bouten bevestigen van de sterke-band T band aan de gleuf plaat. </li><li> Voordat u de roestvrij stalen zeef om de gleuf plaat, buigt de hals vande zeef met de hulp van een tang te oriënteren de basis onder een hoek van een pollepel (figuur 8) Opmerking lijken: Als de filter wordt geleverd met een lip, tang gebruiken om de lip bukken, dit zal moeilijk te manoeuvreren is met het apparaat gemakkelijker te maken.. </li><li> Lijn het gat op de handgreep van de zeef, samen met de gaten in de gleuf plaat en de zeef met behulp van Hillman moeren en bouten zoals aangegeven in figuur 8 Opmerking veilig te stellen:. Als de zeef wordt niet geleverd met voorgeboorde gaten, moet u te regelen om gaten geboord met hardmetalen boor te hebben. </li></ol> 3. Ophalen Cryoboxes en Cryovials Van Dewar <ol><li> Om te beginnen, op cryogene handschoenen en verwijder 1 of 2 vriezer rekken van de Dewar om ruimte voor manoeuvreren mogelijk te maken. </li><li> Voorzichtig schrapen over de bodem van de Dewar met de rechtopstaande Cryotolerant DIY ophalen van het apparaat uitgerust met een sterke-band T band basis (figuur 5) en het verzamelen van de doos Fallen de bodem van de tank Dewar. Opmerking: vloeibare stikstof kookt onmiddellijk bij contact met een warme object omhullen object isolerende stikstofgas (Leidenfrost effect). Om het apparaat afkoelen voordat u aan het ophalen van de monsters, langzaam onder te dompelen het apparaat in de Dewar en laat vloeibare stikstof om het apparaat voldoende afkoelen voordat u verder gaat met de bovenstaande stap. </li><li> Rechtop Trek het apparaat langs de wanden van de Dewar aan de Vriesvak schep van de tank. </li><li> Pak de doos afkomstig uit de onderzijde van de Dewar. </li><li> Voor het ophalen van cryovials voorzichtig schrapen de bodem van de Dewar met de cryoscoop voorzien van een filter (Figuur 9). </li><li> Net als bij cryobox ophalen, rechtop trekt het apparaat en pak de flesjes verzameld in de zeef. </li></ol> 4. Representatieve resultaten Een groot probleem van genexpressie studies is dat de kwaliteit van RNA afhankelijk van de opslagomstandighedenvoor ingevroren weefselmonsters en geëxtraheerd RNA 4. Figuur 10 toont het effect van het monster handling integriteit van totaal RNA. Totaal RNA van hetzelfde weefsel bron (menselijke vet) werd onderworpen aan verschillende monsters behandeling. Voorafgaand aan experiment, intacte totaal RNA preparaat toont duidelijk 28S en 18S rRNA banden met de 28S rRNA band ongeveer twee keer zo intens als de 18S rRNA band (Figuur 10, baan 1). Deze 2:1 verhouding (28S: 18S) is een indicatie dat het RNA intact is, terwijl het gedeeltelijk afgebroken RNA verschijnt als een uitstrijkje, of de 28S: 18S intensiteit verhouding vertrekt vanaf 2:01 5. Lanes 3-4 toont RNA monsters met een degradatie. Deze RNA-monsters werden onderworpen aan herhaalde gedeeltelijke ontdooien door korte-termijn opvragingen uit de Dewar (methode A), waardoor het modelleren van lange termijn opslag met periodieke decanteren als gevolg van de noodzaak van het ophalen van de gevallen flesjes en doosjes (figuur 10, Lane 3-4 ). Echter monster opgeslagen in Dewar onderhoudenmet doe apparaat (methode B), en dus geen gedeeltelijke ontdooien bevatten intact RNA (Figuur 10, laan 2). <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig1.jpg" /> Figuur 1. A) De basis bestaat uit twee 3-zijdige sterke band van de getoonde afmetingen. Elke sterk-tie bevat een grote pre-gat (volle pijl) en meerdere kleinere gaten (pijltje) aan elke kant. Dit biedt een optie om bevestiging met noten en bouten. Ook de kleinere openingen kunnen snelle afvoer van vloeibare stikstof gedurende monster ophalen. B) een zijde van elk van de sterke-tie wordt gestrekt met behulp van een tang om L-vormige sterk-tie. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig2.jpg" /> Figuur 2. Strong-band T-band wordt gebruikt om elkaar vast de sterke-schappen. Net als een sterke-tie, T-band heeft een grote pre-gat (volle pijl) en twee kleinere gaten (small pijl) op elke hoek. Dit maakt het beveiligen sterke banden langs de lengte van de T - band met behulp van moeren en bouten. Het maakt het ook mogelijk bevestiging van T-band aan de gleuf plaat. <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig3.jpg" /> Figuur 3. A) Elk sterke band bevestigd is aan een hoek van T-band, langs zijn lengte met behulp van kroon bout bouten, moeren en ringen. B) Twee sterke banden zijn naast aan elkaar bevestigd om 5 ½ inch x 5 ½ te halen binnen cryoboxes. Voor kleinere cryoboxes zoals 2 inch x 2 inch, kan een sterk-tie rechtstreeks bevestigd aan de spleetplaat zonder T-band. <img alt="Figuur 4" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig4.jpg" /> Figuur 4. Sleuf vlakke plaat wordt gebruikt als handvat. Lengte van de spleetplaat afhankelijk van de diepte van de Dewar. In dit geval werd 4 voet spleetplaat gebruikt. De dikte van spleetplaat is van cruciaal belang isinds dunne sleuf platen (&lt;14 meters) maken het apparaat ondeugdelijk bij het ophalen van monsters van vloeibare stikstof gevuld Dewar. <img alt="Figuur 5" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig5.jpg" /> Figuur 5. Vlakke bodem bestaande uit sterk banden en T band wordt bevestigd aan een uiteinde van de spleetplaat. Hoe groter het gat aan de resterende hoek van T band op een lijn met de sleuf op de vlakke plaat en bevestigd met behulp van zeskant bout en moer. Dit apparaat kan nu gebruikt worden om cryoboxes van Dewar te halen. <img alt="Figuur 6" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig6.jpg" /> Figuur 6. Een uiteinde van de sleuven vlakke plaat is gebogen met een tang en bedekt met schuim betere grip vooral diepe Dewars, zoals in dit geval. <img alt="Figuur 7" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig7.jpg" /> Figuur 7. Zeef met gaas en roestvrij stalen handgreepwordt gebruikt om cryovials van Dewar te halen. Indien de handgreep niet voorzien van een sleuf, boren met carbide bit nodig voor het boren van een gat. <img alt="Figuur 8" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig8.jpg" /> Figuur 8. Om het ophalen van cryovials te vergemakkelijken, wordt zeef gebogen langs de hals met een tang aan pollepel vormige zeef te krijgen. Als filter is voorzien lip zoals in dit geval kan worden tang te buigen. Dit zorgt ervoor zeef wordt niet gevangen in de Dewar. <img alt="Figuur 9" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig9.jpg" /> Figuur 9. Zeef wordt bevestigd aan de langwerpige vlakke plaat aan een einde met zeskantige moer en bout. <img alt="Figuur 10" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig10.jpg" /> Figuur 10. Voorbeeld integriteit van totaal RNA onderworpen aan verschillende voorwaarden behandelen van het monster. Om na te gaan hoe RNA kwaliteit wordt beïnvloed door behandelen van het monster cOORWAARDEN werd een reeks RNA monsters van dezelfde bron onderworpen aan twee methoden handelingen. Methode A bestond uit de opslag van RNA in Dewar onderworpen aan monster opvragingen gebruik van doe-apparaat, dus geen gedeeltelijke ontdooien. Methode B bestond uit opslag van RNA in Dewar onderworpen aan herhaalde gedeeltelijke ontdooien door korte-termijn opvragingen uit de Dewar, waardoor het modelleren van lange termijn opslag met periodieke decanteren voor het ophalen van gevallen monsters. Totaal RNA integriteit werd vervolgens geanalyseerd door gelelektroforese. Lane1: Voorbeeld voor de opslag in Dewar, Laan 2: Voorbeeld van Dewar onderworpen aan ophalen door Methode A; Lane 3, 4: Voorbeeld van Dewar onderworpen aan het ophalen van methode B, M: 100 bp ladder.

<ol><li>Kittel, P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKittel%2C+P+%22Advances+in+Cryogenic+Engineering%22">Advances in Cryogenic Engineering</a>. , Springer. 41(1996).</li>
<li>Edeskuty, F. J., Walter, F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEdeskuty%2C+FJ+%22Stewart+Safety+in+the+handling+of+cryogenic+fluids%22">Stewart Safety in the handling of cryogenic fluids</a>. , Plenum Press. New York. (1996).</li>
<li>Council, N. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCouncil%2C+NR+%22Prudent+Practices+in+the+Laboratory%3A+Handling+and+Management+of+Chemical+Hazards%22">Prudent Practices in the Laboratory: Handling and Management of Chemical Hazards</a>. , National Academies Press. (2011).</li>
<li>Muyal, J., Muyal, V., Kaistha, B., Seifart, C., Fehrenbach, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+comparison+of+RNA+extraction+techniques+from+frozen+and+fresh+lung+tissues%3A+checkpoint+towards+gene+expression+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Systematic comparison of RNA extraction techniques from frozen and fresh lung tissues: checkpoint towards gene expression studies.</a> Diagnostic Pathology. 4, 9(2009).</li>
<li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+cloning%3A+a+laboratory+manual%22">Molecular cloning: a laboratory manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2001).</li>
<li>Holland, N. T., Smith, M. T., Eskenazi, B., Bastaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+sample+collection+and+processing+for+molecular+epidemiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Mutation+Research%2FReviews+in+Mutation+Research%22%5BJournal%5D)">Biological sample collection and processing for molecular epidemiological studies.</a> Mutation Research/Reviews in Mutation Research. 543, 217-234 (2003).</li>
<li>Lynch, P. T. CELL, TISSUE AND ORGAN CULTURE | Storage and Cryopreservation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLynch%2C+PT+%22Encyclopedia+of+Rose+Science%22">Encyclopedia of Rose Science</a>. , 106-111 (2003).</li>
<li>Crawford, R. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCrawford%2C+RJ+%22Plastics+Engineering%22">Plastics Engineering</a>. , Elsevier Butterworth-Heinemann. (1998).</li>
<li>Gorenc, B., Tinyou, R., Syam, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGorenc%2C+B+%22Steel+designers%27+handbook%22">Steel designers' handbook</a>. , University of New South Wales Press. (1996).</li>
<li>Harper, C. A., Petrie, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plastics+materials+and+processes%3A+a+concise+encyclopedia%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley-Interscience%22%5BJournal%5D)">Plastics materials and processes: a concise encyclopedia.</a> Wiley-Interscience. , (2003).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Een van de meest voorkomende methoden van het ophalen van cryoboxes en cryovials van de bodem van de Dewar tank is om vloeibare stikstof decanteren in een vrije container en trek de monsters die nog in de kolf of drijvend in de afgegoten vloeibare stikstof. Dit is echter een onveilige die cryogene brandwonden of stikken door langdurige blootstelling aan vloeibare stikstof dampen 2. Andere veel voorkomende manier van het ophalen van gevallen cryovials betreft het gebruik van cryovial tang 3. Echter,...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Hillman Group Plated Slotted Flat 1-3/8 x 4 meter, 14 Gauge </td><td> Lokale Hardware winkel </td><td> N / A </td><td> 1 eenheid nodig </td></tr><tr><td> Crown Bolt roestvrij staal # 6 - 32 x 3/8 inch Oval hoofd Phillips Drive Machineschroef </td><td> Lokale Hardware winkel </td><td> Model # 42281 </td><td> Vereist 4 eenheden </td></tr><tr><td> Crown Bolt 3/8 inch x 1-1/2 inch verzinkt staal Fender Sluitringen </td><td> Lokale Hardware winkel </td><td> Model # 20122 </td><td> Vereist 4 eenheden </td></tr><tr><td> Crown Bolt verzinkt # 8-32 Machineschroef Nut </td><td> Lokale Hardware winkel </td><td> Model # 18512 </td><td> Vereist 4 eenheden </td></tr><tr><td> Simpson Strong-Tie BC40Z 4 In.x4 inch Half Base </td><td> Lokale Hardwarewinkelen </td><td> Model # BC40Z </td><td> Vereist 2 eenheden </td></tr><tr><td> Simpson Strong-Tie 6 inch x 6 inch T Strap </td><td> Lokale Hardware winkel </td><td> Model # 66T </td><td> 1 eenheid nodig </td></tr><tr><td> Oneida 6 &quot;mesh zeef </td><td> Kruidenier </td><td> Model # 7859W </td><td> 1 eenheid nodig </td></tr><tr><td> De Hillman Group Gegalvaniseerd Hex Nuts 3/8-16 </td><td> Lokale Hardware winkel </td><td> Model #: 810509 </td><td> Vereist 6 eenheden </td></tr><tr><td> De Hillman Group Gegalvaniseerd zeskantbouten 3/8- 16 </td><td> Lokale Hardware winkel </td><td></td><td> Vereist 4 eenheden </td></tr><tr><td> Schuim voor isolatie </td><td> Lokale Hardware winkel </td><td></td><td> 1 eenheid nodig </td></tr><tr><td> Schroef Driver </td><td> Lokale Hardware winkel </td><td></td><td> 1 eenheid nodig </td></tr><tr><td> Tang </td><td> Lokale Hardware winkel </td><td></td><td> 1 eenheid nodig </td></tr></tbody></table>

doe-het-zelf-inrichting voor herstel van gecryopreserveerde monsters per ongeluk laat vallen in cryogene opslagtanks

Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks 

Vloeibare stikstof is kleurloos, geurloos, extreem koud (-196 ° C) vloeistof onder druk gehouden. Het wordt algemeen gebruikt als een cryogene vloeistof voor langdurige opslag van biologische materialen zoals bloed, cellen en weefsels 1,2. De cryogene aard van vloeibare stikstof, terwijl het ideaal voor het monster het behoud, kan leiden tot snel invriezen van levende weefsels bij contact - bekend als &#39;cryogene brandwonden &quot;2, die kan leiden tot ernstige bevriezingsverschijnselen in de personen die nauw betrokken zijn bij de opslag en het ophalen van monsters van Dewars. Bovendien, zoals vloeibare stikstof verdampt vermindert de zuurstofconcentratie in de lucht kan veroorzaken asfyxie, vooral in afgesloten ruimten 2. In laboratoria, zijn biologische monsters vaak opgeslagen in cryovials of cryoboxes gestapeld in roestvrij stalen rekken binnen de Dewar tanks 1. Deze stellingen zijn voorzien van een lange as dozen wegglijdt uit de rekken en in de onderzijde vanDewars tijdens routine behandeling. Maar al te vaak, echter, dozen of flesjes met kostbare stalen slip uit en zinken naar de bodem van vloeibare stikstof gevulde tank. In dergelijke gevallen kan monsters moeizaam teruggevonden na overdracht van de vloeibare stikstof in een extra container of ontdoen. De dozen en flacons kunnen dan relatief veilig hersteld van geleegd Dewar. Echter, de cryogene aard van vloeibare stikstof en de uitbreiding tarief maakt gezonken monster ophalen gevaarlijk. Het wordt algemeen aanbevolen door Veiligheid Kantoren die monster ophalen nooit worden uitgevoerd door een enkele persoon. Een ander alternatief is om in de handel verkrijgbare koele grijpers, tangen te gebruiken te trekken uit de flesjes 3. Echter, beperkte zichtbaarheid in de donkere vloeistof gevulde Dewars vormt een belangrijke beperking in het gebruik ervan. In dit artikel beschrijven we de bouw van een Cryotolerant DIY vanginrichting, welk monster ophalen maakt van Dewar met cryogene vloeistoffen zowel veilig als eenND eenvoudig.

Hier presenteren we een goedkope, duurzame cryotolerant apparaat voor het monster opvragen uit Dewar tanks gevuld met vloeibare stikstof. Het gemak van de bouw en de modulaire opbouw van het apparaat maakt het proces van het monster ophalen van cryogene tanks veilig en gemakkelijk.

Doe-het-zelf-Inrichting voor Herstel van gecryopreserveerde monsters per ongeluk laat vallen in cryogene opslagtanks

Vloeibare stikstof is een kleurloze, geurloze, extreem koude (-196 °C) vloeistof die onder druk wordt bewaard. Het wordt algemeen gebruikt als cryogene vloeistof voor langdurige ...

Het doel van deze procedure is om het terugvinden van monsters in cryoboxen en cryovials uit duotanks gevuld met vloeibare stikstof te vergemakkelijken met behulp van een eenvoudig te construeren hulpmiddel. Dit wordt bereikt door eerst één of twee vriesrekken uit de tank te verwijderen om ruimte te creëren voor manoeuvreren en om het hulpmiddel verticaal in de tank te kunnen plaatsen. De tweede stap is om met het hulpmiddel voorzichtig langs de bodem van de tank te schrapen.Trek het apparaat vervolgens rechtop langs de wanden van de houder. Om de vriesbox uit het reservoir te scheppen, is de laatste stap om de box die van de bodem van de houder is opgehaald te pakken en de verwijderde vriesrekken terug te plaatsen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden zoals decanteren of het gebruik van een staaf met vloeibare stikstof is dat het een eenvoudig, veilig en snel alternatief biedt, waardoor de integriteit van de monsters behouden blijft en de procedure door één operator kan worden uitgevoerd. Om te beginnen met de assemblage van het cryotolerante apparaat, gebruik dan een tang om één zijde van een driezijdige kabelbinder recht te buigen om e

do-it-yourself-device-for-recovery-cryopreserved-samples-accidentally

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

In this video, we demonstrate an ultra-rapid cryo vitrification method for preserving biological samples. The method entails the use of a combination of cryoprotectants to protect the biological tissue from freezing damage by preventing intracellular ice crystal formation.

Vitrification-based Cryopreservation: An Ultra-rapid Cooling Technique to Preserve Biological Specimens at Very Low Temperatures for Long-term Storage

Dit protocol beschrijft een procedure voor spierweefsel bevriezen door ze rechtstreeks dompelen in vloeibare stikstof. Dit protocol wijst een nieuwe cryovial dat de "blanket effect" stikstofgas kan voorkomen bij vloeibare stikstof contact maakt met het weefseloppervlak van een monster.

Een multi-hole Cryovial Voorkomt bevriezen Artefacten als spierweefsel direct worden ondergedompeld in vloeibare stikstof

We ontwikkelden een nieuwe techniek in elektronenmicroscopie, "flash-and-vries," dat de visualisatie van membraan dynamiek met ms temporele resolutie mogelijk maakt. Deze techniek combineert de optogenetic stimulatie van neuronen met hogedruk vriezen. Hier tonen we de procedures en een beschrijving van de protocollen in detail.

Flash-en-Freeze: een nieuwe techniek op Capture Membrane Dynamics met Electron Microscopy

Hier is een protocol voor celkweek op siliciumnitride membranen en Plunge-bevriezing voorafgaand aan röntgenfluorescentie Imaging met een Synchrotron cryogene X-Ray nanoprobe. Wanneer alleen kamertemperatuur nano-analyse wordt verstrekt, kunnen de bevroren monsters verder gevriesdroogd worden. Dit zijn cruciale stappen om informatie te verkrijgen over de intracellulaire Elemental Composition.

Celkweek op siliciumnitride membranen en Cryopreparation voor Synchrotron X-Ray fluorescentie nano-analyse

Dit protocol beschrijft de cryoAPEX-methode, waarbij een APEX2-gelabeld membraaneiwit kan worden gelokaliseerd door transmissieelektronenmicroscopie binnen een optimaal bewaarde celultrastructuur.

De CryoAPEX-methode voor elektronenmicroscopieanalyse van membraaneiwitlokalisatie binnen ultrastructureel bewaarde cellen

Dit protocol presenteert de werking en principes van cilindrische en planaire cryogene vloeistofstralen op micronschaal. Tot nu toe werd dit systeem gebruikt als een doelwit met een hoge herhalingsfrequentie in laser-plasma-experimenten. Verwachte multidisciplinaire toepassingen variëren van laboratoriumastrofysica tot materiaalkunde en uiteindelijk deeltjesversnellers van de volgende generatie.

Cryogene vloeistofstralen voor ontdekkingswetenschap met hoge herhalingssnelheid

Hier wordt een protocol gepresenteerd voor cryogene overdracht van bevroren monsters in de dynamische nucleaire polarisatie (DNP) magic angle spinning (MAS) nucleaire magnetische resonantie (NMR) sonde. Het protocol bevat aanwijzingen voor rotoropslag voorafgaand aan het experiment en aanwijzingen voor levensvatbaarheidsmetingen voor en na het experiment.

Cryogene monster laden in een magische hoek spinnen nucleaire magnetische resonantie spectrometer die cellulaire levensvatbaarheid behoudt

Dit protocol demonstreert hoe biologische cryo-geconserveerde monsters kunnen worden afgebeeld met behulp van cryo-gestructureerde verlichtingsmicroscopie. We demonstreren de methodologie door het cytoskelet van U2OS-cellen in beeld te brengen.

Cryo-gestructureerde verlichting Microscopische gegevensverzameling van cryogene geconserveerde cellen

Dit manuscript schetst de blot-and-plunge-methode om biologische monsters handmatig te bevriezen voor cryogene elektronenmicroscopie met één deeltje.

Handmatige Blot-and-Plunge Freezing van biologische monsters voor cryogene elektronenmicroscopie met één deeltje

Dit protocol beschrijft een semi-geautomatiseerde route om de efficiëntie en capaciteit van de verwerking en cryopreservatie van sperma van bedreigde koraalsoorten te verbeteren, met als doel de genetische diversiteit veilig te stellen en de inspanningen voor rifherstel te ondersteunen.

Een semi-geautomatiseerde workflow voor de cryopreservatie van koraalsperma ter ondersteuning van biobanking en aquacultuur

Leer een kosteneffectief cryotolerant apparaat bouwen voor het veilig en snel ophalen van monsters uit vloeibare stikstof Dewar-tanks. Deze methode behoudt de integriteit van cryopreserveerde samples en is geschikt voor gebruik door één operator.

Doe-het-zelf-Inrichting voor Herstel van gecryopreserveerde monsters per ongeluk laat vallen in cryogene opslagtanks

Meer video's verkennen