Name: Electroantennographic Bioassay als een screeningsinstrument voor Host Plant Vluchtige stoffen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 43 s
Description: Leer hoe je plantenvluchtige stoffen snel screent met elektroantennografie bij Amyelois transitella. Deze methode identificeert bioactieve componenten en mengsels voor gedragsstudies en plaagbeheer.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit onderzoek werd uitgevoerd onder USDA-ARS CRIS Project 5325 tot 42,000-037-00D en met de resultaten van CRADA 58-3K95-7-1198 en TFCA 58-5325-8-419. De auteurs dankbaar erkennen Suterra voor de gave van de (Z, Z) -11,13-hexadecadienal, B. Higbee voor productieve discussies, en J. Baker voor technische ondersteuning.

1. Voorbereiding van vluchtige stoffen gedetecteerd van de waardplant voor de EAG Screening <ol><li> Na een passend identificatie en authenticatie van alle vluchtige stoffen via GC-MS, uit te voeren EAG bladerdeeg analyse van elk beschikbare volatiel. Eerste screening kan een laag herhaalde aantal antennaal reacties (N = 3-5) voor elk geslacht zijn om een indicatie van de relatieve chemoreceptivity bereiken in een korte tijd (Tabel 1). </li><li> Een oplossing van elk vluchtige op 5 mg / ml concentratie in pentaan. Goed af, en het monster de koelkast tot ze klaar zijn voor direct gebruik (bijvoorbeeld acetofenon, dichtheid = 1,03 g / mL, volume = (0,005 g/1.03 g / mL) × 1000 = 4,85 ul van acetofenon in een 1,0 ml maatkolf en vul aan tot 1,0 ml met pentaan). </li><li> Vlak voor EAG analyse verwijderd flacon met 5 mg / ml concentratie van vluchtige te testen en laat kamertemperatuur. Ondertussen bestempelen het juiste aantal Pasteurpipetten aancorreleren met elkaar vluchtig te testen, en wikkel een klein stukje parafilm (ca. 15 × 15 mm) over de top van de pipet. Voor de eerste screening 10 stimulus pipetten (N = 4 voor mannelijke en vrouwelijke) zijn in het geval van slecht bereiden of andere onvoorziene obstakel. </li><li> Met behulp van een pincet voorzichtig de bioassay schijf vouw in de helft om de plaatsing te vergemakkelijken in de pipet, dan gedeeltelijk plaats de gevouwen schijf in het brede uiteinde van de pipet, zodat ca. 2-3 mm van de schijf zijn blootgesteld. Lijn de gelabeld en klaargestoomd pipetten in een rack houder. </li><li> Met behulp van een pipet of een spuit, laden 10 pi (50 ug) van vluchtige oplossing op elke schijf en laat 2 minuten duren voordat volledig inbrengen van schijven in de pipet. Eenmaal geladen onmiddellijk afdichten het einde van de pipet met parafilm (ca. 15 x 30 mm). De hoeveelheid vluchtige stimulus te laden en opgeblazen wordt waarschijnlijk variëren insecten soorten. </li><li> Naar aanleiding van het hetzelfde protocol hierboven voor te bereiden controlesomvatten in elke analyse. Voor de negatieve controle belasting 10 pi van slechts pentaan op elke schijf, wacht 2 minuten, te laden in de gemerkte pipet, en afdichting. Voor de positieve controle, plaats 10 pi (50 ug) op de schijf, wacht 2 minuten, belasting in de gemerkte pipet, en afdichting met parafilm. </li><li> De levensvatbaarheid van de insect antennaal prep hoogstwaarschijnlijk variëren soorten, maar wij hebben gevonden dat Amyelois transitella antennes typisch en consequente blijven&gt; 30 minuten na excisie met de beschreven protocol. Deze tijd zal in het algemeen kan voor maximaal tot 4-10 vluchtige te evalueren monsters. Tabel 2 geeft een voorbeeld van tijden en sequenties. </li></ol> 2. Voorbereiding van Insect Antennes voor EAG Bioassay <ol><li> De focus van dit experiment is EAG analyse, dus de veronderstelling dat elke onderzoeker toegang zullen hebben tot de juiste gehouden insecten hebben. </li><li> Voor dit experiment zullen we het bestuderen van 3-4 dagen old, gedekt mannelijke en vrouwelijke motten. Individuele motten worden overgebracht in een kleine, deksels, plastic container de dag van de analyse. Direct voorafgaand aan de bioassay, is de mot te testen head-first omgezet in een holding apparaat (dat wil zeggen, gemaakt van diverse kunststof pipetpunten) en beveiligd van achteren. Manipulatie van het insect kunnen worden bekeken onder een low-power stereo-microscoop om te excisie te vergemakkelijken. </li><li> Antennes worden gepest met behulp van een draad-tip tool. De vork houder, met een kleine film van de elektrode gel, wordt geplaatst in de nabijheid van voor een snelle overdracht van antennes. De eerste antennestructuur is uitgesneden met behulp van micro schaar en op de vork, zodat de basis van de antenne op de niet-rode deel van de vork (de onverschillig aardelektrode). Een timer voor 10 minuten is gestart en de tweede antenne uitgesneden en naast de eerste antenne met beide bases aan dezelfde zijde van de vork. </li><li> Alternatief kan de antennes worden gelaten in de beveiligde holding tube, uitgesneden, vervolgens voorzichtig uit tussen de buis en het insect met behulp van een draad-tip tool met een schar van gel op het einde. </li><li> Antennes worden gecontroleerd of de basis en tip ondergedompeld in elektrode gel en geen luchtbellen in de gel. De uiteinden / tips kunnen worden bijgesneden tot volledige blootstelling aan de elektrode-gel te garanderen. Er moet voor worden gezorgd dat de rest van elke antenne is bedekt met gel, waardoor wordt gewaarborgd maximale antennaal oppervlak wordt blootgesteld aan het bladerdeeg. </li><li> De geprepareerde vork wordt vervolgens ingebracht in de probe voorversterker en bewaard onder een constante stroom van bevochtigde lucht bij 200 ml / min voor de resterende tijd van de 10 minuten wachttijd. De accijnzen tijd en EAG initiatie tijden worden genoteerd (tabel 2) en 30 seconden voorafgaand aan de eerste stimulus bladerdeeg, de pipet met de positieve controle wordt ontsloten en geplaatst in de houder, die is aangepast aan lucht / puff stroom geleiden 2-3 mm uit het voorbereid antennes. </li><li> Na elke expertiserimentele worden de test motten gedood in een droog ijs en correct aangebracht. </li><li> Vrouw motten worden ontleed om de paring te controleren. Samenwonende mannen worden geacht te zijn gedekt. </li></ol> 3. EAG Protocol voor de afzonderlijke onderdelen <ol><li> Antennaal antwoorden worden opgenomen via de AutoSpike software die bij de Syntech EAG instrument. De configuratie in de AutoSpike tabblad Eigenschappen voor het kanaal met de EAG sonde is ingesteld op een sample rate van 106,7, NO om deze te corrigeren en een filter van 0-42 Hz. Voor het filter tabblad, de EAG filter is en of het low-cut-off is ingesteld op 0,1 Hz. </li><li> Stimulus trekjes zijn 1-2 seconden duren. Een timer in te stellen gedurende 1 minuut wordt gestart na elke inhalatie. </li><li> De volgende test vluchtige pipet wordt ontsloten en geplaatst in de houder. De volgorde van de test vluchtige stoffen, gerandomiseerd tussen loopt om ervoor te zorgen geen test verbindingen consequent een andere test vluchtige volgen, wordt dan gevolgd (bijv. tabel 2) zorgvuldig allowing 1 minuut tussen trekjes. </li><li> Om het gemak van het lezen van EAG partijen te vergemakkelijken, worden delen van heersers die op het computerscherm en het basisniveau aan de top van de neerwaartse afbuiging signaal wordt gemeten in mm en is ingelogd op een fiche (dat wil zeggen, voor de 5 mV instelling, 33 mm = 2,5 mV). De software heeft de mogelijkheid van het afspelen van de opgeslagen opnames voor toekomstige analyse. Omzetting van mm ofwel mV of mV amplitude wordt uitgevoerd in latere data-analyse. </li><li> Na de laatste positieve controle puff (bv, record # 12) wordt toegediend, de antennes worden verwijderd, is de vork gereinigd met een ethanol-verzadigde af te vegen en laten drogen voordat u verder gebruik. </li><li> Om de doorvoer van testen te verhogen, kan de excisie van de volgende set van antennes worden gestart door een tweede laboratorium personeel van ongeveer 10 minuten voor het einde van het huidige experiment - na de vierde bladerdeeg, de tweede test vluchtige van het huidige experiment, volgens tabel 2. Hierdoor kunnen for het begin van het volgende experiment onmiddellijk na de huidige experiment uiteinden. </li><li> Groter aantal herhalingen (op verschillende antennes) kan worden uitgevoerd op verbindingen van belang verdere statistische validatie voorzien. </li></ol> 4. Een voorbeeld van EAG Analyse van Blends of andere matrices (tabel 3) <ol><li> Vervolgens worden de verhoudingen en delen van twee tertiaire mengsels (3-component mengsels) berekend om een voorbeeld van het combineren vluchtige opwekken hoge EAG reacties (Tabel 4) voorzien. De berekeningen zijn voor een aantal fundamentele verhoudingen, een 1:1:1 molaire verhouding van α-humuleen: 2-undecanone: 2-fenylethanol en vervolgens te vergelijken met een tweede mengverhouding van 01:02:04. </li><li> Met behulp van soortgelijke protocollen eerder beschreven, de mengsels worden bereid en gelabeld Pasteurpipetten worden geladen samen met de nodige positieve en negatieve controles. </li><li> De vluchtige monsters worden opgeblazen tussen mannelijke en vrouwelijke antennes en de antwoorden worden gemeten en geregistreerdeen fiche (Tabel 3). </li></ol> 5. Representatieve resultaten Voor vrouwelijke navel orangeworm de volgende instellingen gebruikt: 2 seconden soezen, 10 seconden opname tijd, 10 tweede venster, en 5 mV schaal. Een negatieve uitslag is de typische reactie, maar de absolute waarde wordt opgenomen (bijvoorbeeld -3.400 mV doorbuiging wordt als 3400 mV). Een relatief zwakke reactie van de voorbereiding op de positieve controle wordt weggegooid. Figuur 1 geeft een grafische weergave van een slechte reactie op de positieve controle door de navel orangeworm. Bijvoorbeeld een slechte controleresultaat, de gemiddelde vrouwelijke antennaal reactie acetofenon typisch ca.. 2600 mV (figuur 2), wanneer de prep slechts een reactie van ca. gaf. 1.300 mV zou worden weggegooid en moet een ander paar antennes klaargestoomd. Ook de gemiddelde mannelijke reactie (Z, Z) -11,13-hexadecadienal was typically 3000 mV, dus geen antwoord minder dan 1.500 mV werd meestal weggegooid. De positieve controle aan het begin en einde van elk experiment biedt tevens informatie over de toestand van de antennes. Een vuistregel volgen we voor een snelle screening is als de antennaal reactie op de bladerdeeg van de nacontrole (record # 12, tabel 2) is ofwel minder dan 75% van de 1 e bladerdeeg van de pre-control (record # 1 Tabel 2) of minder dan de 2 bladerdeeg van de pre-control (opnemen # 2, tabel 2) dan het experiment wordt niet gebruikt in de data-analyse vanwege mogelijke aantasting van de prep (figuur 3). Een voorbeeld van de eerste regel van de duim zou record # 1 zijn = 2.730 mV en opnemen # 12 = 1680 mV, en de tweede regel van de duim als record # 2 = 2350 mV en opnemen # 12 = 1680 mV, In elk van deze gevallen , zou de prep en experiment de resultaten worden weggegooid. Eenrepresentatief voorbeeld van het corrigeren van de EAG reactie waarden zoals gemeten aan de positieve controle zou zijn als volgt. <table border="1"><tbody><tr><td> Run # </td><td> EAG (mV) </td><td> Run # 2 </td><td> EAG (mV) </td><td> Run # 3 </td><td> EAG (mV) </td></tr><tr><td> (+) Ctrl </td><td> 2800 </td><td> (+) Ctrl </td><td> 2420 </td><td> (+) Ctrl </td><td> 3030 </td></tr><tr><td> Cmpnd A </td><td> 3000 </td><td> Cmpnd A </td><td> 2500 </td><td> Cmpnd A </td><td> 3440 </td></tr><tr><td> (-) Ctrl </td><td> 530 </td><td> (-) Ctrl </td><td> 755 </td><td> (-) Ctrl </td><td> 910 </td></tr><tr><td> Cmpnd B </td><td> 2400 </td><td> Cmpnd B </td><td> 2000 </td><td> Cmpnd B </td><td> 2560 </td></tr><tr><td> (+) Ctrl </td><td> 2770 </td><td> (+) Ctrl </td><td> 2400 </td><td> (+) Ctrl </td><td> 3020 </td></tr></tbody></table> De waarden boven een N = 3 experiment wordt de negatieve controle reactie afgetrokken elke waarde in elk experiment onder de aanname de negatieve controle is de basislijn antennaal reactie op de mechanische bladerdeeg en restant oplosmiddel. <table border="1"><tbody><tr><td> Run # 1 </td><td> EAG (mV) </td><td> Run # 2 </td><td> EAG (mV) </td><td> Run # 3 </td><td> EAG (mV) </td></tr><tr><td> (+) Ctrl </td><td> 2270 </td><td> (+) Ctrl </td><td> 1665 </td><td> (+) Ctrl </td><td> 2120 </td></tr><tr><td> Cmpnd A </td><td> 2470 </td><td> Cmpnd A </td><td> 1745 </td><td> Cmpnd A </td><td> 2530 </td></tr><tr><td> (-) Ctrl </td><td> 0 </td><td> (-) Ctrl </td><td> 0 </td><td> (-) Ctrl </td><td> 0 </td></tr><tr><td> Cmpnd B</td><td> 1870 </td><td> Cmpnd B </td><td> 1245 </td><td> Cmpnd B </td><td> 1650 </td></tr><tr><td> (+) Ctrl </td><td> 2240 </td><td> (+) Ctrl </td><td> 1645 </td><td> (+) Ctrl </td><td> 2110 </td></tr></tbody></table> De positieve controle voor elk experiment zou dan worden gemiddeld en gecorrigeerd tot 1.000 mV, wijzend op de ratio voor correctie tot 1000 mV. Een data-sheet (bijv. Excel) kunnen gemakkelijk worden gemanipuleerd om de antwoorden om te zetten in bruikbare gegevens. <table border="1"><tbody><tr><td> Run # 1 </td><td> Gem (mV) </td><td> Run # 2 </td><td> Gem (mV) </td><td> Run # 3 </td><td> Gem (mV) </td></tr><tr><td> (+) Ctrl </td><td> 2255 </td><td> (+) Ctrl </td><td> 1655 </td><td> (+) Ctrl </td><td> 2115 </td></tr><tr><td> (+) Ctrl bn. </td><td> 1000 (0.443) </td><td> (+) Ctrl bn. </td><td> 1000 (0.604) </td><td> (+) Ctrl bn. </td><td> 1000 (0.473) </td></tr></tbody></table> Vermenigvuldigen met de correctie verhouding in elk experiment de waarden voor verbinding A en verbinding B worden vervolgens aangepast. <table border="1"><tbody><tr><td> Run # 1 </td><td> Adj. EAG (mV) </td><td> Run # 2 </td><td> Adj. EAG (mV) </td><td> Run # 3 </td><td> Adj. EAG (mV) </td></tr><tr><td> Cmpnd A </td><td> 1094 </td><td> Cmpnd A </td><td> 1054 </td><td> Cmpnd A </td><td> 1197 </td></tr><tr><td> Cmpnd B </td><td> 828 </td><td> Cmpnd B </td><td> 752 </td><td> Cmpnd B </td><td> 780 </td></tr></tbody></table> De gemiddelden (middel) voor elke verbinding worden dan bepaald met andere statistische gegevens en EAG reacties voor de geteste verbindingen kunnen dan geëvalueerdvoor de kandidatuur voor verder onderzoek. <table border="1"><tbody><tr><td> Samenstelling </td><td> EAG (mV) </td><td> Nee loopt, N = </td></tr><tr><td> Een </td><td> 1115 </td><td> 3 </td></tr><tr><td> B </td><td> 787 </td><td> 3 </td></tr></tbody></table><img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/3931/3931fig1.jpg" /> Figuur 1. Vertegenwoordiger EAG voor mannelijke antennaal respons (1180 mV) op de pre-control (1 ste positieve controle bladerdeeg), dat zou te wijten aan slechte antennaal reactie worden verwijderd na het waarborgen van de antennes hebben goed contact met de gel. Blauwe balken in de onderste vensters vertegenwoordigen de twee seconden bladerdeeg van vluchtige. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3931/3931fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere afbeelding te bekijken</a> . <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/3931/3931fig2.jpg" /> <s<html> Trong&gt; Figuur 2. vertegenwoordiger EAG voor de vrouwelijke antennaal reactie (3.400 mV) op de 1 ste bladerdeeg pre-control die zouden worden geacht. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3931/3931fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere afbeelding te bekijken</a> . <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/3931/3931fig3.jpg" /> Figuur 3. Vertegenwoordiger EAG voor de vrouwelijke antennaal respons (1680 mV) om de nacontrole (laatste positieve controle voor elk experiment) die zou worden beschouwd als arm, en suggestief van antennes afbraak (&lt;75% van de 1 e pre-control of &lt; 2e bladerdeeg waarde van pre-controle). Voor dit voorbeeld de 1 ste pre-control puff was 2.730 mV en 2 e pre-control puff was 2350 mV. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3931/3931fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere afbeelding te bekijken</a> . <html> dflinebreak &quot;&gt; <img alt="Figuur 4" src="/files/ftp_upload/3931/3931fig4.jpg" /> Figuur 4. Vertegenwoordiger EAG voor de vrouwelijke antennaal reactie (3.800 mV) om de trekje van een kandidaat-vluchtige mix en de daarop volgende metingen van de maximale initiële doorbuiging (3.800 mV), het begin van de helling in het bladerdeeg duur (0,3 s/1.2 mV = 0,25 s / mV), en de helling voor de resterende duur van bladerdeeg (1,6 s/1.9 mV = 0,84 s / mV). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3931/3931fig4large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere afbeelding te bekijken</a> . <img alt="Figuur 5" src="/files/ftp_upload/3931/3931fig5.jpg" /> Figuur 5. Kleine gewijzigd vat met daarin een sample matrix en de bijbehorende vluchtige stoffen moeten worden opgeblazen in A. transitella antennes. ad/3931/3931table1.jpg &quot;/&gt; Tabel 1. In situ vluchtige emissie Nonpareil amandelen (2007) en EAG respons bepaald door een andere, minder gevoelig configuratie in de Autospike programma. <img alt="Tabel 2" src="/files/ftp_upload/3931/3931table2.jpg" /> Tabel 2. Voorbeeld van een vorm voor het opnemen mannelijke en vrouwelijke antennaal reacties op afzonderlijke vluchtige componenten. <img alt="Tabel 3" src="/files/ftp_upload/3931/3931table3.jpg" /> Tabel 3. Voorbeeld van een formulier voor het opnemen van mannelijke en vrouwelijke antennaal reacties op vluchtige mengsels en / of boeketten. <img alt="Tabel 4" src="/files/ftp_upload/3931/3931table4.jpg" /> Tabel 4. Voorbeelden van de bereiding van 10 ml 5 mg / ml oplossing voor twee verschillende verhoudingen van mengsels. <img alt="Tabel 5" src="/files/ftp_upload/3931/3931table5.jpg" /> Tabel 5. Voorbeeld van een formulier voor het opnemen van twee opeenvolgende pufjes van enkele vluchtige componenten in mannelijke en vrouwelijke antennes.

<ol><li>Bruce, T. J. A., Wadhams, L. J., Woodcock, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insect+host+location%3A+a+volatile+situation%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Plant+Sci%22%5BJournal%5D)">Insect host location: a volatile situation.</a> Trends in Plant Sci. 10, 1360-1385 (2005).</li>
<li>Unsicker, S. B., Kunert, G., Gershenzon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+perfumes%3A+the+role+of+vegetative+volatiles+in+plant+defense+against+herbivores%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Plant+Biol%22%5BJournal%5D)">Protective perfumes: the role of vegetative volatiles in plant defense against herbivores.</a> Curr. Opin. Plant Biol. 12, 479-485 (2009).</li>
<li>Norin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Semiochemicals+for+insect+pest+management%5BTitle%5D)+AND+%22Pure+Appl.+Chem%22%5BJournal%5D)">Semiochemicals for insect pest management.</a> Pure Appl. Chem. 79, 2129-2136 (2007).</li>
<li>Beck, J. J., Merrill, G. B., Higbee, B. S., Light, D. M., Gee, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+seasonal+study+of+the+volatile+production+of+almonds+%28Prunus+dulcis%29+var.+%27nonpareil%27+and+relationship+to+navel+orangeworm%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Agric.+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">In situ seasonal study of the volatile production of almonds (Prunus dulcis) var. 'nonpareil' and relationship to navel orangeworm.</a> J. Agric. Food Chem. 57, 3749-3753 (2009).</li>
<li>Beck, J. J., Higbee, B. S., Gee, W. S., Dragull, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ambient+orchard+volatiles+from+California+almonds%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochem.+Lett%22%5BJournal%5D)">Ambient orchard volatiles from California almonds.</a> Phytochem. Lett. 4, 199-202 (2011).</li>
<li>Coffelt, J. A., Vick, K. W., Sonnet, P. E., Doolittle, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+identification%2C+and+synthesis+of+a+female+sex+pheromone+of+the+navel+orangeworm%2C+Amyelois+transitella+%28Lepidoptera%3A+Pyralidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Isolation identification, and synthesis of a female sex pheromone of the navel orangeworm, Amyelois transitella (Lepidoptera: Pyralidae).</a> J. Chem. Ecol. 5, 955-933 (1979).</li>
<li>Leal, W. S., Parra-Pedrazzoli, A. L., Kaissling, K. -E., Morgan, T. I., Zalom, F. G., Pesak, D. J., Dundulis, E. A., Burks, C. S., Higbee, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unusual+pheromone+chemistry+in+the+navel+orangeworm%3A+novel+sex+attractants+and+a+behavioral+antagonist%5BTitle%5D)+AND+%22Naturwissenschaften%22%5BJournal%5D)">Unusual pheromone chemistry in the navel orangeworm: novel sex attractants and a behavioral antagonist.</a> Naturwissenschaften. 92, 139-146 (2005).</li>
<li>Kanno, H., Kuenen, L. P. S., Klingler, K. A., Millar, J. G., Carde, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attractiveness+of+a+four-component+pheromone+blend+to+male+navel+orangeworm+moths%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Attractiveness of a four-component pheromone blend to male navel orangeworm moths.</a> J. Chem. Ecol. 36, 584-591 (2010).</li>
<li>Takacs, S., Gries, G., Gries, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Semiochemical-mediated+location+of+host+habitat+by+Apanteles+carpatus+%28Say%29+%28Hymenoptera%3A+Braconidae%29%2C+a+parasitoid+of+cloths+moth+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Semiochemical-mediated location of host habitat by Apanteles carpatus (Say) (Hymenoptera: Braconidae), a parasitoid of cloths moth larvae.</a> J. Chem. Ecol. 23, 459-472 (1997).</li>
<li>Karimifar, N., Gries, R., Khaskin, G., Gries, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((General+food+semiochemicals+attract+omnivorous+German+cockroaches%2C+Blattella+germanica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Agric.+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">General food semiochemicals attract omnivorous German cockroaches, Blattella germanica.</a> J. Agric. Food Chem. 59, 1330-1337 (2011).</li>
<li>Molyneux, R. J., Schieberle, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compound+identification%3A+a+Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Agric.+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Compound identification: a Journal of Agricultural and Food Chemistry perspective.</a> J. Agric. Food Chem. 55, 4625-4629 (2007).</li>
<li>Marion-Poll, F., Thiery, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+EAG+responses+to+host-plant+volatiles+delivered+by+a+gas+chromatograph%5BTitle%5D)+AND+%22Entomol.+Exp.+Appl%22%5BJournal%5D)">Dynamics of EAG responses to host-plant volatiles delivered by a gas chromatograph.</a> Entomol. Exp. Appl. 80, 120-123 (1996).</li>
<li>Beck, J. J., Higbee, B. S., Merrill, G. B., Roitman, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+volatile+emissions+from+undamaged+and+mechanically+damaged+almonds%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Sci.+Food+Agric%22%5BJournal%5D)">Comparison of volatile emissions from undamaged and mechanically damaged almonds.</a> J. Sci. Food Agric. 88, 1363-1368 (2008).</li>
<li>Lucas, P., Renou, M., Tellier, F., Hammoud, A., Audemard, H., Descoins, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiology+and+field+activity+of+halogenated+analogs+of+%28E%2CE%29-8-10-dodecadien-1-ol%2C+the+main+pheromone+component+in+codling+moth+%28Cydia+pomonella+L.%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Electrophysiology and field activity of halogenated analogs of (E,E)-8-10-dodecadien-1-ol, the main pheromone component in codling moth (Cydia pomonella L.).</a> J. Chem. Ecol. 20, 489-503 (1994).</li>
<li>Rodriguez-Saona, C., Poland, T. M., Miller, J. R., Stelinski, L. L., Grant, G. G., de Groot, P., Buchan, L., MacDonald, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+electrophysiological+responses+of+the+emerald+ash+borer%2C+Agrilus+planipennis%2C+to+induced+volatiles+of+Manchurian+ash%2C+Fraxinus+mandshurica%5BTitle%5D)+AND+%22Chemoecology%22%5BJournal%5D)">Behavioral and electrophysiological responses of the emerald ash borer, Agrilus planipennis, to induced volatiles of Manchurian ash, Fraxinus mandshurica.</a> Chemoecology. 16, 75-86 (2006).</li>
<li>Burks, C. S., Brandl, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+abundance+of+navel+orangeworm+%28Leipidoptera%3A+Pyralidae%29+in+figs+and+effect+of+peripheral+aerosol+dispensers+on+sexual+communication%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Sci%22%5BJournal%5D)">Seasonal abundance of navel orangeworm (Leipidoptera: Pyralidae) in figs and effect of peripheral aerosol dispensers on sexual communication.</a> J. Insect Sci. 4, 1-8 (2004).</li>
</ol>

De auteur heeft een bestaande coöperatie onderzoeks-en ontwikkelings-overeenkomst met Paramount Farming Company, een bedrijf met banden met Suterra LLC.

Gebruik van electroantennogram opnamen een bioassay voor chemoreceptie reactie van een doel insect bepalen is tamelijk veel en diverse onderzoeken waarin EAG een detector voor effluent van een gaschromatogram (GC-EAD) kan worden gevonden in de literatuur. 9,10 De werkwijze aangetoond zal een snelle screening van equivalente hoeveelheden vluchtige componenten met hoog replicatie voor betrouwbare overdracht van de relatieve reactiviteit. Het AutoSpike programma in de Syntech software een goed programma voor scr...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Acetofenon </td><td> Alfa-Aesar </td><td> A12727 </td><td> Vrouw positieve controle </td></tr><tr><td> (Z, Z) -11,13-Hexadecadienal </td><td> Suterra </td><td></td><td> Man positieve controle </td></tr><tr><td> α-humuleen </td><td> Aldrich </td><td> 53675 </td><td> Sesquiterpene </td></tr><tr><td> 2 Undecanone </td><td> Aldrich </td><td> U1303 </td><td> Vetzuurderivaat </td></tr><tr><td> 2-fenylethanol </td><td> Aldrich </td><td> 77861 </td><td> BENZEBOIDE </td></tr><tr><td> Pentaan </td><td> EMD </td><td> PX0167-1 </td><td> Solvent </td></tr><tr><td> 4-kanaals acquisitie controller </td><td> Syntech </td><td> IkDAC-4 </td><td></td></tr><tr><td> EAG sonde, voorversterker </td><td> Syntech </td><td> Type PRG-2 </td><td></td></tr><tr><td> Antenne houder </td><td> Syntech </td><td> Voor PRG-2 </td><td> Fork elektrode </td></tr><tr><td> Stimulus-controller </td><td> Syntech </td><td> CS-55 </td><td> Luchtstroom en puffs </td></tr><tr><td> Spectra elektrodengel </td><td> Parker </td><td> 12-02 </td><td></td></tr><tr><td> Bioassay schijven </td><td> Whatman papier </td><td> 2017-006 </td><td> 6 mm </td></tr><tr><td> Pasteur pipetten </td><td> VWR </td><td> 14673-010 </td><td> 5 ¾ &quot;(14,6 cm) </td></tr><tr><td> Parafilm M </td><td> Bemis </td><td> PM-992 </td><td></td></tr></tbody></table>

electroantennographic bioassay als een screeningsinstrument voor host plant vluchtige stoffen

Electroantennographic Bioassay as a Screening Tool for Host Plant Volatiles

Plant vluchtige stoffen spelen een belangrijke rol in de plant-insect interacties. Plantenetende insecten gebruik van planten vluchtige stoffen, bekend als kairomonen, hun waardplant vinden. 1,2 Wanneer een waardplant is een belangrijke grondstof agronomische voeding aantasting door insecten kunnen toebrengen ernstige economische verliezen voor de telers. Bijgevolg kan kairomonen worden gebruikt als lokstof te lokken of te verwarren deze insecten, en dus bieden een milieuvriendelijk alternatief voor pesticiden voor insectenbestrijding. 3 Helaas planten kunnen een groot aantal vluchtige stoffen uit te stoten met verschillende samenstellingen en verhoudingen van de emissies afhankelijk van de fenologie van de goederen of de tijd van de dag. Hierdoor identificatie van biologisch actieve bestanddelen of mengsels van vluchtige componenten een moeizaam proces. Om u te helpen identificeren van de bioactieve componenten van de waardplant vluchtige emissie we gebruiken het laboratorium op basis van screening bioassay electroantennography (EAG). EAG is een doeltreffend instrument voor het evalueren en record elektrofysiologische reacties van de geur van een insect via hun antennaal receptoren. De EAG screening proces kan bijdragen tot het verminderen van het aantal vluchtige stoffen getest om veelbelovende bioactieve componenten te identificeren. Echter, EAG bioassays alleen informatie over de activering van receptoren. Het geeft geen informatie over het type insect het gedrag van de compound lokt; die zouden kunnen worden als een lokstof, insectenwerende middelen of een ander type van gedrags-respons. Vluchtige stoffen uitlokken van een significante reactie van EAG, ten opzichte van een geschikte positieve controle, worden meestal gemaakt op verder onderzoek van de gedragsreacties van het insect plaag. De experimentele opzet gepresenteerd behandelt in detail de methodologie gebruikt om amandel-based waardplant vluchtige stoffen 4,5 door meting van de elektrofysiologische antennaal reacties van een volwassen insect plaag navel orangeworm (Amyelois transitella) om afzonderlijke componenten en eenvoudige mengsels van componenten via EAG bioassay te screenen. De methode maakt gebruik van twee excised antennes geplaatst in een &quot;vork&quot; elektrode houder. Het protocol hier aangetoond presenteert een snelle, high-throughput gestandaardiseerde methode voor het screenen van vluchtige stoffen. Elke vluchtige is op een set, constante hoeveelheid met betrekking tot de prikkel niveau dus te standaardiseren en laat antennaal reacties op een aanwijzing van de relatieve chemoreceptivity. De negatieve controle helpt bij het elimineren van de elektrofysiologische reactie op zowel resterende oplosmiddel en mechanische kracht van het bladerdeeg. De positieve controle (in dit geval acetofenon) is een verbinding die heeft geleid tot een consistente reactie van mannelijke en vrouwelijke navel orangeworm (NOW) mot. Een extra feromoon norm consistente reactie levert en wordt gebruikt voor biotoetsen de mannelijke motten NOW is (Z, Z) -11,13-hexdecadienal een aldehyde component van de vrouwelijke geproduceerde sexferomoon. 6-8

Werkwijze snel scherm waardplant vluchtige door meting van de elektrofysiologische reactie van volwassen navel orangeworm (<em&gt; Amyelois transitella</em&gt;) Antennes aan enkele componenten en mengsels via electroantennographic analyse is aangetoond.

Electroantennographic Bioassay als een screeningsinstrument voor Host Plant Vluchtige stoffen

Plantaardige vluchtige stoffen spelen een belangrijke rol bij interacties tussen planten en insecten. Herbivore insecten gebruiken plantaardige vluchtige stoffen, bekend als kairomonen, om hun waardplant te lokaliseren ...

Het algemene doel van deze procedure is om snel een groot aantal vluchtige stoffen van waardplanten te screenen op potentiële biologische activiteit. Dit wordt bereikt door eerst de vluchtige stoffen van de betreffende waardplant te verzamelen en te analyseren via GCMS. Vervolgens worden de chemische componenten geïdentificeerd en geverifieerd.De derde stap is het screenen van de individuele componenten in voldoende herhalingen op bioactiviteit via electrografische analyse. De laatste stap is het formuleren en evalueren van mengsels van actieve componenten. Uiteindelijk kunnen de resultaten leiden tot een gereduceerde reeks componenten of een mengsel van componenten dat gereed is voor verder onderzoek in gedragsstudies met het betreffende insect.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals tijdrovende gedragsstudies, is dat snelle screening via elektrographische analyse het aantal verbindingen dat nodig is voor andere studies ter demonstratie van een procedure aanzienlijk vermindert. Is MR Wage een technicus voor mijn laboratorium? Zodra de relevante vluchtige stoffen zijn geïdentificeerd door gaschromatografie en massaspectrometrie, is he

electroantennographic-bioassay-as-screening-tool-for-host-plant

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Insect olfactorische systemen bieden unieke mogelijkheden voor het opnemen van geurstof-geïnduceerde responsen in de vorm van electroantennograms (EAG) en enkele sensillum opnames (SSR), die de antwoorden worden samengevat van alle geurstof receptor neuronen (ORNs) gelegen op de antenne en van die ondergebracht in afzonderlijke sensilla, respectievelijk.

Elektrofysiologische metingen van een Moth olfactorisch systeem

Olfactorische signalen bemiddelen veel verschillende gedragingen in insecten, en zijn vaak complexe mengsels bestaat uit tientallen tot honderden vluchtige verbindingen. Met gaschromatografie met meerkanaals opname in het insect antennelid lobe beschrijven we een werkwijze voor de identificatie van bioactieve verbindingen.

Identificatie van Olfactorische Vluchtige stoffen met behulp van gaschromatografie-en meergezins-Recordings (GCMR) in de Insect antennaal Lobe

In this video, we demonstrate a screening assay to identify the efficacy of small-molecule nematicides against nematodes. Nematicides are considered effective if they cause a decrease in the number of mobile nematodes in the sample after exposure.

Small Molecule Nematicides Screening Assay: A Medium Throughput Method to Screen Potential Nematicides Against Ditylenchus dipsaci

Een verticale, T-doolhof olfactometer beschreven voor het testen van de gedragsreactie van geleedpotigen. De olfactometer kan de experimentator om keuzes te maken die door proefpersonen te meten wanneer het wordt blootgesteld aan twee potentiële geur velden. Zowel aantrekking tot en afstoting van geurstoffen kan worden gemeten met dit apparaat.

Verticale T-doolhof Keuze Test voor geleedpotigen Reactie op odoranten

We beschrijven een protocol voor het gebruik van insectantennes in de vorm van elektroantennogrammen (EAG's) op autonome robots. Ons experimentele ontwerp maakt stabiele opnames binnen een dag mogelijk en lost individuele geurvlakken op tot 10 Hz op. De efficiëntie van EAG-sensoren voor olfactorische zoekopdrachten wordt gedemonstreerd bij het besturen van een robot naar een geurbron.

Met behulp van Insect Electroantennogram Sensoren op autonome robots voor olfactorische zoekopdrachten

Met twee methodologie om genexpressie in grote smaak aanhangsels van Aedes aegypti, hebben we de set genen vermoedelijk onderliggende neuronale reacties op bitter en afstotende verbindingen geïdentificeerd, zoals bepaald door elektrofysiologische onderzoeken.

Fysiologische Recordings en RNA Sequencing van de Smaak Appendages van de Gele-koorts Mosquito Aedes aegypti

Foto-attractie bioassay arena's zijn gebruikt om te bepalen van de optimale lichte kleur(en) te maximaliseren insect attractie; bioassays en methoden zijn echter specifiek te richten op insecten gedrag en habitats. Aanpasbare apparatuur en wijzigingen worden uiteengezet voor nachtelijke of dagverloop en terrestrische of luchtfoto insecten.

Sleutelelementen van foto attractie Bioassay voor Insect Studies of controle programma 's

We beschrijven hier, de bouw en het gebruik van een windtunnel voor geur gedrags testen met insecten gemedieerde. De windtunnel ontwerp vergemakkelijkt de vrijlating van geur bronnen door verschillende methoden, met en zonder visuele stimuli. Windtunnel experimenten zijn belangrijke methoden te identificeren gedragsgestoorde actieve vluchtige stoffen.

Een windtunnel voor geur gemedieerde Insect gedrags Assays

Het huidige artikel beschrijft een stap-voor-stap protocol voor succesvolle en geluidsarme elektroantennogrammen in verschillende geslachten van muggen, waaronder zowel vrouwtjes als mannetjes.

Een stapsgewijze handleiding voor muggenelektroantennografie

Deze studie introduceert experimentele protocollen voor een bio-hybride geurdetectiedrone op basis van silkmoth-antennes. De werking van een experimenteel elektroantennogramapparaat met zijdemoth-antennes wordt gepresenteerd, naast de structuur van een bio-hybride drone die is ontworpen voor lokalisatie van geurbronnen met behulp van het spiraal-surge-algoritme.

Op elektroantennografie gebaseerde bio-hybride geurdetectiedrone met behulp van Silkmoth-antennes voor lokalisatie van geurbronnen

Dit protocol stelt methoden vast voor het extraheren en kwantificeren van reacties op het vluchtige seksferomoon in C. elegans, en biedt hulpmiddelen om chemische communicatie en navigatietraject te bestuderen.

Vluchtige seksferomoonextractie en chemo-aantrekkingstest bij Caenorhabditis elegans

Leer hoe je plantenvluchtige stoffen snel screent met elektroantennografie bij Amyelois transitella. Deze methode identificeert bioactieve componenten en mengsels voor gedragsstudies en plaagbeheer.

Electroantennographic Bioassay als een screeningsinstrument voor Host Plant Vluchtige stoffen

Meer video's verkennen