Name: Rat mesenterium uittreding: een model voor het onderzoeken van de Cellular Dynamics betrokken bij het Angiogenese (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 29 s
Description: Leer een eenvoudig rattenmesenterium-uitstulpmodel voor angiogeneseonderzoek met immunohistochemische kleuring en microscopische kwantificatie van microvasculaire netwerkgroei op enkelcelniveau.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door de Raad van Regenten van de staat Louisiana LEQSF (2009-12)-RD-A-19 (PI: WL Murfee) en de Tulane Hypertensie en Nier Center of Excellence gefinancierd door NIH-subsidie ​​P20RR017659-08 (PI : L. Gabriel Navar).

1. Chirurgische Procedure Set-Up Notes <ol><li> Voorafgaand aan de operatie steriliseren chirurgisch materiaal en instrumenten. Diensten gebruikt voor steriele chirurgische procedure voor elke rat omvatten een gordijn worden aangelegd als een steriel oppervlak voor de plaatsing van instrumenten, een laken met een voorgesneden gat 0,5 cm x 1,5 in het midden geplaatst boven de rat en gaas. De voorgesneden gat in het laken zal zich aanpassen aan de incisie gemaakt op de rat. Instrumenten voor de operatie behoren een standaard schaar gebruiken om hechtmateriaal snijden, twee tang en een fijne naald houder voor het hanteren en grijpen van het hechtmateriaal en een scalpel een mes. Wij hebben de gemeenschappelijke instrumenten gebruikt door ons laboratorium in de tabel van specifieke chirurgische materialen en gereedschappen. Echter, de uiteindelijke keuze van gereedschap hangt af van experimentator voorkeuren. </li><li> Bereid de operatie ruimte. Plaats een 100 ml 0,9% steriele zoutoplossing zak onder een verwarmingselement dat de zoutoplossing dat in contact komt wet het mesenterium weefsel verwarmen tot ongeveer 37 ° C. Als alternatief voor zout kunt u Ringer&#39;s oplossing of een andere fysiologische buffer. Indeling gesteriliseerde chirurgische instrumenten en voorraden aan een steriel laken voor een gemakkelijke toegang tijdens de uittreding procedure. Ook moet u steriel wattenstaafje applicators en de juiste 3 soorten hechtingen (4-0, 5-0 en 7-0). Zorgt ervoor dat pakketten worden zo vooraf geopend dat de materialen kan worden benaderd met een steriele behandeling. Tenslotte desinfecteren pre-gemodificeerde kunststof fase door onderdompelen in 100% ethanol gedurende minstens 5 minuten. De fase is een 100 mm Petrischaal met een elliptische gat in het midden (figuur 1). Een Dremel kan worden gebruikt in eerste instantie te maken en zo nodig te verbreden het gat. Nadat het gat is gemaakt, zijn de randen van de uitsparing plastic glad gemaakt met schuurpapier verschillende graansoorten. De fase wordt vervolgens gewassen en tenslotte een inert klei (gekocht bij een handwerk slaan) SILICop lijm wordt toegevoegd aan de rand van de opening in om een ​​verhoogd, glad oppervlak. Voorafgaand aan contact met het weefsel, het stadium moet voldoende zijn gespoeld met steriele zoutoplossing. </li><li> Voor dit model van angiogenese, Wij gebruiken meestal de volwassen mannelijke Wistar ratten (350 ± 25 g). Andere ratten stammen en leeftijden kan worden gebruikt. In ons laboratorium ratten zijn verdoofd via een intramusculaire injectie met ketamine (80 mg / kg lichaamsgewicht), xylazine (8 mg / kg lichaamsgewicht), en atropine (0,08 mg / kg lichaamsgewicht). Na ongeveer 5 minuten, wordt het effect van de anesthesie bevestigd en de rat buikhuid wordt geschoren. </li></ol> 2. Rat mesenterium uittreding Model <ol><li> Plaats de verdoofde rat op zijn rug op een verwarmingselement om de lichaamstemperatuur te handhaven. Aseptische technieken worden gebruikt tijdens de chirurgische ingreep. Draag steriele handschoenen en staan ​​niet toe dat instrumenten en leveringen aan niet-steriele andere oppervlakken dan de rat weefsels contact op te nemen. </li><li> Maak buikstreek met afwisselende doekjes using van de steriel gaasje gedrenkt in 70% isopropyl en jodium. </li><li> Met behulp van de scalpel, maak een klein (ongeveer 0,75 inch) longitudinale incisie langs de huid en vervolgens de linea alba ongeveer 1 cm onder het borstbeen. </li><li> Leg de voorgesneden laken over de buik gedeelte, zodat de opening uitgelijnd met de incisie. </li><li> Voorzichtig brengen druk aan rond de incisie. Dit zal gewoonlijk leiden tot blootstelling van de dunne darm genoeg is om gemakkelijk te worden geïdentificeerd. </li><li> Met behulp van de katoen tip applicators, trek een deel van de dunne darm en zoek het ileum. Aangezien het mesenterium wordt getrokken moet voorzichtig worden aangelegd in de kunststof fase (figuur 2). </li><li> Identificeer 6-8 gevasculariseerd mesenteriale ramen. Een mesenteriale venster wordt gedefinieerd als de dunne doorzichtige membraan tussen de arterie / ader paren toevoeren van de dunne darm (figuur 2). </li><li> Noteer de begintijd van uittreding. Laat de mesentery sectie exteriorized gedurende 20 minuten. In de uittreding periode een steriele injectiespuit (5 ml) om het zout intermitterend vullen in een petrischaal aan dat het weefsel is ondergedompeld en niet uitdroogt. </li><li> Tijdens de 20-minuten belichtingstijd, markeer de twee centraal gelegen mesenteriale ramen met steriele 7-0 hechtdraad. De merktekens worden gemaakt in het vet omgeving van de darm. </li><li> Zet de exteriorized regio van het mesenterium naar de buikholte. </li><li> Sluit de buikspier met 5-0 monofilament hechtdraad in onderbroken patroon. </li><li> Sluit de huid met 4-0 monofilament hechtdraad in onderbroken patroon. </li><li> Veeg de gehecht gebied met afwisselende vochtige doekjes via het steriel gaasje gedrenkt in 70% isopropoyl en jodium. </li><li> Verspreid het oog glijmiddel op beide ogen van de rat. Het doel van smeren oog het drogen van de cornea voorkomen tijdens operatie en herstel. De toepassing van oog smeermiddel dient te worden toegepastvoor het begin van de chirurgische ingreep. Indien nodig, voordat opnieuw toe te passen eye smeermiddel wel terugbetaling van de rat om zijn kooi voor herstel. </li></ol> 3. Tissue Oogst en fixatie <ol><li> Op de dag van belang na de stimulatie, verdoven en euthanaseren van de rat. In ons laboratorium ratten zijn verdoofd via een intramusculaire injectie met ketamine (80 mg / kg lichaamsgewicht), xylazine (8 mg / kg lichaamsgewicht), en atropine (0,8 mg / kg lichaamsgewicht) en vervolgens gedood door intracardiale injectie van beuthanasia. Beuthanasia een natriumpentobarbital / fenytoïne oplossing kan worden gebruikt voor snelle en pijnloos euthanasie. Per rat ons laboratorium injecteert meestal 0,1 tot 0,2 ml. </li><li> Heropen de buikholte en verwijder voorzichtig de dunne darm en zoek de twee gemarkeerde ramen. </li><li> Knip elk van de exteriorized mesenteriale vensters met behulp van een tang en micro-schaar. Inclusief een grens van vet per venster is voordelig voor later weefsel verspreiden op objectglaasjes. Onmiddellijk, Dompel elk venster in PBS. Bij het snijden, probeer te voorkomen dat het doorsnijden van slagader / ader paren in het vet grens van de ramen om potentiële bloed vulling van de vensters te minimaliseren. Ook een minimum te beperken dwars door de darm die resulteert in darminhoud de ramen contact op te nemen. </li><li> Gebruik een tang om weefsels te verspreiden op de positief geladen objectglaasjes. Twee weefsels kan worden gemonteerd per dia. </li><li> Laat het weefsel gedeeltelijk drogen en met behulp van een scalpel verwijdert het teveel aan vet. </li><li> Weefsels zijn nu klaar om te worden vastgesteld. Typische fixatie methoden kunnen worden gebruikt. In ons laboratorium men gewoonlijk vast de glaasjes in methanol (-20 ° C) gedurende 30 minuten. Succesvolle etikettering is ook uitgevoerd met de niet vastgelegde weefsels. Fixatie methodes zou kunnen is afhankelijk van uw voorkeur antilichaam. </li></ol> 4. Tissue immunokleuring <ol><li> Weefsels kunnen nu algemeen worden voorzien volgens de instructies per antilichaam voor immunohistochemie. Gezien onze interesse in het identificeren van de rollenvan vasculaire pericyten tijdens angiogenese, ons laboratorium labelt vaak voor endotheliale en perivasculaire cellen 10, 12, 13. Nuttig labels aan endotheelcellen te identificeren aan de hiërarchie van de microvasculaire netwerken zijn een anti-PECAM antilichaam of BSI-lectine. Perivasculaire cel markers gebruikt in dit weefsel zijn NG2, desmine, SM-α actine, PDFGRβ, en klasse III β-tubuline. Hieronder, in paragraaf 3.3, hebben we vermeld protocollen voor kleur-en tl-PECAM immunokleuring protocollen. </li><li> Vóór de eerste primaire antilichaam incubatie glijbanen vacuum gedroogd om overmaat bufferoplossing te verwijderen. Ook zijn weefsels in eerste instantie aangegeven met een wax pen tot een ongecontroleerde stroom van antilichaam-oplossingen te voorkomen dat uit de buurt van het weefsel. Tenslotte worden alle stappen labelen gevolgd door wasstappen. Voor het wassen van stappen, worden dia&#39;s geplaatst in vlekken potten. De bufferoplossing wordt uitgewisseld 3 keer wassen van de duur. </li><li> Endotheelcellen antilichaam etiketteringsprocedures: &lt;p class = &quot;jove_step&quot;&gt; PECAM colorimetrisch Lableing <ol><li> Primaire antilichaam incubatie: Drip ongeveer 100-200 ml primaire antilichaam-oplossing (1:200 muis monoklonaal antilichaam gebiotinyleerd CD31 antilichaam verdund in buffer (0,1% Saponine in PBS + 2% BSA)) op de top aan elk weefsel, zorg ervoor dat het hele weefsel is bedekt met antilichaam oplossing. Incubatie gedurende 1 uur bij kamertemperatuur. </li><li> Was weefsels met PBS +0,1% saponine gedurende 30 minuten. </li><li> Secundair antilichaam incubatie: Drip secundair antilichaam-oplossing (VECTASTAIN Elite ABC oplossing van Vector Laboratories, een streptavidine-peroxidase tweede antilichaam-oplossing) op de top van de weefsels. Incuberen bij kamertemperatuur gedurende 1 uur. </li><li> Was weefsels met PBS +0,1% saponine gedurende 30 minuten. </li><li> Incubeer weefsels met Vector Nova Rode gedurende 15 minuten. Dan stijgen weefsels met water. </li><li> Mount dia&#39;s: Dip dia&#39;s in 95% ethanol 10 keer. Dompel dia&#39;s in 100% ethanol voor 2 minuten. Dompel de glaasjes in nog eens 100% ethanol, zodatlutie voor 2 minuten. Dan dompelen dia&#39;s in opeenvolgende 100% xyleen oplossingen voor elk 2 minuten. Laten drogen en weefsels bedekken met een dunne laag VectaMount en een dekglaasje. </li></ol> PECAM fluorescentielabelling <ol><li> Primaire antilichaam incubatie: Drip ongeveer 100-200 ml primaire antilichaam-oplossing (1:200 muis monoklonaal antilichaam gebiotinyleerd CD31 antilichaam verdund in buffer (0,1% Saponine in PBS + 2% BSA)) op de top aan elk weefsel, zorg ervoor dat het hele weefsel is bedekt met antilichaam oplossing. Incubatie gedurende 1 uur bij kamertemperatuur. </li><li> Was weefsels met PBS +0,1% saponine gedurende 30 minuten. </li><li> Secundair antilichaam incubatie. Druppel secundair antilichaam oplossing ((1:100 Streptavidine-CY3 verdund in antilichaam (0,1% saponine in PBS + 2% BSA)) op weefsels incuberen bij kamertemperatuur gedurende 1 uur. </li><li> Was weefsels met PBS +0,1% saponine gedurende 30 minuten. </li><li> Mount dia&#39;s: Drip 50:50 PBS met glycerol op de top van de weefsels. Dekkenmet dekglas. Gebruik vervolgens nagellak om de kloof tussen dekglas en schuif af te sluiten. </li></ol></li></ol> 5. Representatieve resultaten Representatieve beelden rat mesenterium weefsels immunohistochemisch gemerkte PECAM weergegeven in figuur 3. PECAM etikettering identificeert alle types schepen langs de hiërarchie van de verbouwing microvasculaire netwerken en kan worden gebruikt om de angiogene statistieken op specifieke tijdstippen na stimulatie te kwantificeren. PECAM etikettering kunnen ook voor de bepaling van de arteriolen versus venulen. Het voeden arteriolen doorgaans vertonen kleinere diameters en langwerpige endotheelcellen morfologie in vergelijking met gepaarde venulen (figuur 4). Haarvaten en capillaire spruiten kunnen worden geïdentificeerd op basis van hun schip diameter en relatieve positie in een netwerk. Typische kenmerken van remodeling netwerken zijn onder andere verhoogde capillaire kiemen, vaatdichtheid, gevasculariseerde gebied en venular tortuosheid. Kwantificering van verschillende angiogene metrics identificeert het tijdsverloop van de groei van het netwerk (figuur 5). Capillair ontspruit uit reeds bestaande schepen, pieken tussen dag 3 en dag 5 en keert terug naar de ongestimuleerde niveau op dag 10. Deze tijdelijke verhoging van de kiemen wordt gevolgd door stijgingen van de vasculaire dichtheid en gevasculariseerd gebied. Als bewijs voor de verbouwing van grotere schepen in dit model, het aantal arteriole en venule segmenten verhoogt ook over de tijd natuurlijk. In ons laboratorium is dit model is gebruikt om cellulaire fenotypische veranderingen op specifieke tijdstip te identificeren tijdens deze verbouwing proces 10, 11. Bijvoorbeeld, klasse III β-tubuline identificeert pericyten langs angiogene schepen (figuur 6). In ongestimuleerde weefsels, klasse III β-tubuline expressie is zenuw specifiek. In tegenstelling, tijdens de piek van capillaire kiemen, is klasse III β-tubuline uitgedrukt door perivasculaire cellen. Dit typeresultaat belicht de toepassing van deze eenvoudige en robuuste angiogene model nieuwe celtypen bij het angiogene te identificeren. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/3954/3954fig1.jpg" /> Figuur 1. Beelden van de plastic podium pre-en post-modificatie. De pre-gemodificeerde fase is 100 mm petrischaal. Wijzigingen zijn onder andere een elliptische gat gesneden in het centrum en de daarop volgende toevoeging van klei of siliconen lijm aan de rand van het gat voor de oprichting van een verhoogde, glad oppervlak. Dit oppervlak zorgt voor een innerlijke grens die superfusie van de exteriorized mesenteriale ramen vergemakkelijkt. Schaalstaaf is 1 cm. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/3954/3954fig2.jpg" /> Figuur 2. Afbeelding van exteriorized mesenteriale regio. Mesenteriale ramen worden gedefinieerd als de dunne doorschijnende membranen tussen de slagader / ader paren het voeden van de dunne darm. Tijdens de uittredingduur, wordt de mesenteriale regio aangelegd en ondergedompeld in een zoutoplossing in een aangepaste petrischaal. Inert gele klei heeft een glad oppervlak voor het mesenterium worden getrokken door de voorgesneden gat. Schaalstaaf is 1 cm. <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/3954/3954fig3.jpg" /> Figuur 3. Afbeeldingen slechts ter illustratie van de mesenteriale microvasculaire netwerken ongestimuleerde weefsels en weefsels op 3 en 10 dagen na de uittreding van het mesenterium. PECAM etikettering gewezen op de hiërarchie van microvasculaire netwerken, met inbegrip, arteriolen (A), venulen (V) en haarvaten (C). Bericht stimulatie, microvasculaire netwerken die worden vermeld een toename van de capillaire kiemen (pijlpunten) en vaatdichtheid. Schaal bar is 100 micrometer. <img alt="Figuur 4" src="/files/ftp_upload/3954/3954fig4.jpg" /> Figuur 4. Afbeeldingen slechts ter illustratie van de arteriole / venule paren binnen de volwassen rat mesenteriale microvasculaire netwerks. In beide beelden kan slagaders (A) worden onderscheiden van venules (V) op een kleinere diameter en relatief langwerpige endotheelcellen morfologie. Schaal bars zijn 20 urn. <img alt="Figuur 5" src="/files/ftp_upload/3954/3954fig5.jpg" /> Figuur 5. Vertegenwoordiger kwantificering van angiogene statistieken over het tijdsverloop van microvasculaire groei na mesenterium uittreding. A) Vasculaire oppervlakte per weefsel gebied. B) Aantal capillaire spruiten per vasculaire gebied. C) Totale vasculaire lengte per vasculaire gebied. * Staat voor significant verschil in vergelijking met niet gestimuleerde groep. Statistische vergelijkingen werden gemaakt met behulp van een One-Way ANOVA gevolgd door test Dunn&#39;s. (P &lt;0,05). VN vertegenwoordigt ongestimuleerde. <img alt="Figuur 6" src="/files/ftp_upload/3954/3954fig6.jpg" /> Figuur 6. Vertegenwoordiger fluorescerende beelden van de mesenteriale microvasculaire netwerken ongestimuleerde weefsels en weefsels op 3 en 10dagen na de uittreding van het mesenterium. Immunofluorescentie PECAM etikettering (rood) geeft endotheelcellen, en klasse III β-tubuline etikettering (groen) geeft zenuwen (pijlpunten) en perivasculaire cellen (pijlen). Perivasculaire cellen tijdelijk upregulate klasse III β-tubuline tijdens capillaire kiemen. In ongestimuleerde microvasculaire netwerken, klasse III β-tubuline is zenuw specifiek en niet te identificeren perivasculaire cellen. 3 dagen na stimulatie, klasse III β-tubuline labelt positief perivasculaire cellen langs de haarvaten. Per dag 10, klasse III β-tubuline expressie patroon begint om terug te keren naar de ongestimuleerde scenario. Schaal bar is 50 urn. <img alt="Figuur 7" src="/files/ftp_upload/3954/3954fig7.jpg" /> Figuur 7. Afbeeldingen ondersteuning van de haalbaarheid van het bijhouden van gelabelde lokaal aangebrachte cellen tijdens microvasculaire groei van het netwerk gestimuleerd door het mesenterium uittreding. De cellen werden superfused meer dan mesenteric ramen tijdens de 20 minuten uittreding periode. 1 dag na de operatie, DII gelabelde cellen (rood) werden waargenomen in de dame brandvlak met PECAM positieve haarvaten (groen). A, B) Voorbeelden van DII gelabelde beenmergcellen exposeren rond en langwerpig morfologie. In sommige gevallen (pijlen) cellen werden verlengd langs microvaatjes. C) Voorbeeld van een cluster van DII gelabelde mesenchymale stamcellen in de buurt van de top van een capillair spruit (pijl). Schaal staven 50 pm (A) en 20 pm (B, C).

<ol><li>Carmeliet, P., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+cancer+and+other+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in cancer and other diseases.</a> Nature. 407, 249-257 (2000).</li>
<li>le Noble, F. A., Stassen, F. R., Hacking, W. J., Struijker Boudier, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+and+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hypertens%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis and hypertension.</a> J. Hypertens. 16, 1563-1572 (1998).</li>
<li>Peirce, S. M., Skalak, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+remodeling%3A+a+complex+continuum+spanning+angiogenesis+to+arteriogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Microvascular remodeling: a complex continuum spanning angiogenesis to arteriogenesis.</a> Microcirculation. 10, 99-111 (2003).</li>
<li>Anderson, C. R., Ponce, A. M., Price, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+identification+of+an+extracellular+matrix+scaffold+that+microguides+capillary+sprouting+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Histochem.+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical identification of an extracellular matrix scaffold that microguides capillary sprouting in vivo.</a> J. Histochem. Cytochem. 52, 1063-1072 (2004).</li>
<li>Ponce, A. M., Price, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenic+stimulus+determines+the+positioning+of+pericytes+within+capillary+sprouts+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Angiogenic stimulus determines the positioning of pericytes within capillary sprouts in vivo.</a> Microvasc. Res. 65, 45-48 (2003).</li>
<li>Franzen, L., Ghassemifar, R., Malcherek, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+mast+cell+activation+improves+connective+tissue+repair+in+the+perforated+rat+mesentery%5BTitle%5D)+AND+%22Agents+Actions%22%5BJournal%5D)">Experimental mast cell activation improves connective tissue repair in the perforated rat mesentery.</a> Agents Actions. 33, 371-377 (1991).</li>
<li>Anderson, C. R., Hastings, N. E., Blackman, B. R., Price, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capillary+sprout+endothelial+cells+exhibit+a+CD36+low+phenotype%3A+regulation+by+shear+stress+and+vascular+endothelial+growth+factor-induced+mechanism+for+attenuating+anti-proliferative+thrombospondin-1+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Capillary sprout endothelial cells exhibit a CD36 low phenotype: regulation by shear stress and vascular endothelial growth factor-induced mechanism for attenuating anti-proliferative thrombospondin-1 signaling.</a> Am. J. Pathol. 173, 1220-1228 (2008).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+models+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo models of angiogenesis.</a> J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).</li>
<li>Norrby, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+Mesentery+Angiogenesis+Assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Rat Mesentery Angiogenesis Assay.</a> J. Vis. Exp. (52), e3078(2011).</li>
<li>Murfee, W. L., Rehorn, M. R., Peirce, S. M., Skalak, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perivascular+cells+along+venules+upregulate+NG2+expression+during+microvascular+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Perivascular cells along venules upregulate NG2 expression during microvascular remodeling.</a> Microcirculation. 13, 261-273 (2006).</li>
<li>Stapor, C. P., Murfee, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+class+III+%CE%B2-tubulin+as+a+marker+of+angiogenic+perivascular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">Identification of class III β-tubulin as a marker of angiogenic perivascular cells.</a> Microvascular Research. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Yang, M., Aragon, M., Murfee, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+Mesenteric+Microvascular+Networks+from+Spontaneously+Hypertensive+Versus+Normotensive+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in Mesenteric Microvascular Networks from Spontaneously Hypertensive Versus Normotensive Rats.</a> Microcirculation. , (2011).</li>
<li>Robichaux, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic%2FBlood+endothelial+cell+connections+at+the+capillary+level+in+adult+rat+mesentery%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec.+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Lymphatic/Blood endothelial cell connections at the capillary level in adult rat mesentery.</a> Anat. Rec. (Hoboken). 293, 1629-1638 (2010).</li>
<li>Amos, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFATS+collection%3A+The+role+of+human+adipose-derived+stromal+cells+in+inflammatory+microvascular+remodeling+and+evidence+of+a+perivascular+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">IFATS collection: The role of human adipose-derived stromal cells in inflammatory microvascular remodeling and evidence of a perivascular phenotype.</a> Stem Cells. 26, 2682-2690 (2008).</li>
</ol>

Wij hebben niets te onthullen.

De uittreding model werd gemeld in 2006 en is een bewerking van eerdere mechanische schade rat mesenterium modellen van angiogenese 4-7 en verkrijgt u hetzelfde resultaat dat de gevestigde ip injectie modellen die gebruik maken van de rat mesenterium 9. De 20 minuten uittreding tijd werd experimenteel bepaald om een ​​robuuste angiogene reactie te produceren. Hoewel deze periode kan worden gevarieerd, het wordt toch mogelijk voor de lokale toepassing van angiogene-remmers 4 voor mechanistische studies en directe toepassing van de exogene cellen voor cellijn studies. Haalbaarheid van de cel worden opgenomen in verbouwing mesenteriale weefsel wordt ondersteund door voorbereidend onderzoek in ons laboratorium met behulp van gelabelde beenmerg cellen en mesenchymale stamcellen (Figuur 7), en door het succes van onderzoek naar het lot van de menselijke vet-afgeleide stromale cellen injectie ip 14 . In ons laboratorium hebben we gebruik gemaakt van deze model pericyte phen te identificerenotypic veranderingen in het tijdsverloop van de angiogene respons 10 en om de angiogene potentiële beoordelen tijdens pathologische omstandigheden, zoals hoge bloeddruk 12. De angiogene respons en cel fenotype veranderingen die gepaard gaan met dit model kan ook worden waargenomen in andere rat mesenteriale angiogene modellen, waaronder chronische hypoxie blootstelling 10, 11. Een beperking van de uittreding model is dat de exacte gang mechanismen van angiogenese onbekend zijn. Uittreding van het mesenterium is gekoppeld aan mestcel degranulatie en verhoogde histamine niveaus 6, maar verder onderzoek is nodig om meer inzicht te krijgen. De angiogene stimulans is ongetwijfeld multifactoriële, het produceren van een robuuste remodeling reactie over de hiërarchie van een microvasculaire netwerk. Terwijl de onbekende mechanismen blijven een belangrijke kritiek op dit model, de reproduceerbaarheid en eenvoud maken het aantrekkelijk voor het identificeren van cellulaire dynamiek INVOLved in de inherent complexe capillaire kiemen proces. De reproduceerbaarheid van het model wordt ondersteund door een vergelijkbare angiogene statistieken over het tijdsverloop van microvasculaire groei van het netwerk over meerdere ratten stammen (mannelijke Wistar en vrouwelijke Sprague-Dawley) in eerder gepubliceerde studies in ons laboratorium 10, 12. Aangezien de meerderheid van de volwassen rat mesenteriale weefsels zijn gevasculariseerd, het model maakt het ook mogelijk om meerdere weefsels worden onderzocht per dier. Helaas is dit model is uiteraard van toepassing op genetische muismodellen als muis mesenteriale ramen hebben minder inheemse vascularisatie en, in onze ervaring, vaak ontbreekt waarneembaar vertakking netwerken. Toekomstige toepassingen zijn onder meer het onderzoek van het schip functionaliteit tijdens angiogenese met behulp van intra-vitale microscopie op specifieke tijdstippen en het onderzoek van gerelateerde cellulaire dynamiek die betrokken zijn bij lymfangiogenese en neurogenese. Hoewel de omvang van de inheemse vascularisatie per mesenteriale raam lijkt te zijn roughly evenredig met de leeftijd, hebben we waargenomen vertakking microvasculaire netwerken in mannelijke Wistar ratten zo jong als 4-5 weken oud zijn. Deze waarnemingen suggereren dat de uittreding model ook kan worden toegepast op de angiogene verschillen tussen de leeftijden te vergelijken.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogus nummer </td><td> Aanvullende opmerkingen </td></tr><tr><td> Draperen </td><td> Cardinal Health </td><td> 4012 </td><td> 12 &quot;x12&quot; Bio-Shield Regelmatig Sterilisatie Wraps </td></tr><tr><td> Noyes Micro Schaar </td><td> Roboz Chirurgisch instrument </td><td> RS-5677 </td><td> Noyes Micro ontleden Spring Schaar; Recht, Sharp-Blunt Points; 13mm Cutting Edge; 0.25mm Tip Breedte, 4 1/2 &quot;Totale lengte </td></tr><tr><td> Graefe tang </td><td> Roboz Chirurgisch instrument </td><td> RS-5135 </td><td> Micro ontleden tang, Getande, lichte bocht, 0.8mm Tip Breedte; 4 &quot;Lengte </td></tr><tr><td> Graefe tang </td><td> Roboz Chirurgisch instrument </td><td> RS-5130 </td><td> Micro ontleden tang, Getande, Hetero, 0.8mm Tip Breedte; 4 &quot;Lengte </td></tr&gt; <tr><td> 4-0 hechtingen </td><td> ETHICON </td><td> 699G </td><td> (1,5 metrisch) Ethilon Nylon Suture Black Monofilament </td></tr><tr><td> 5-0 hechtingen </td><td> ETHICON </td><td> 8556 </td><td> (1,0 metrisch) PROLENE Polyprolene Suture Blue Monofilament </td></tr><tr><td> 7-0 hechtingen </td><td> ETHICON </td><td> 1647G </td><td> (0,5 metrisch) Ethilon Nylon Suture Black Monofilament </td></tr><tr><td> Castroviejo Micro naaldhouder </td><td> Fine Science Tools </td><td> 12060-02 </td><td> Tip Breedte: 0,6 mm Inspanlengte: 5mm Lengte: 9cm Rechte tip </td></tr><tr><td> Castroviejo naaldhouder </td><td> Fine Science Tools </td><td> 12565-14 </td><td> Tip Vorm: Rechte Tip Breedte: 1,5 mm Spannen Lengte: 10mm Schaar: Geen Lock: Ja Lengte: 14cm Getande: Ja </td></tr><tr><td> Scalpel Handle </td><td> Roboz Chirurgisch instrument </td><td> RS-9843 </td><td> Scalpel Handle, # 3, Solid, 4 &quot;Lengte </td></tr><tr><td> Steriele chirurgische Blade </td><td> Cincinnati Chirurgische </td><td> 0110 </td><td> Roestvrij staal; Size 10 </td></tr><tr><td> Petrischaal </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-757-13 </td><td> Schuine Ridge, Slippable </td></tr></tbody></table> Tabel van specifieke chirurgische materialen en gereedschappen. <table border="1"><tbody><tr><td> Naam </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogus nummer </td><td> Aanvullende opmerkingen </td></tr><tr><td> Beuthanasia </td><td> Schering-Plough Animal Health Corp Unie (bestellen bij MWI Veterinary Supply) </td><td> MWI #: 011168 </td><td> Werkzame stof: per 100 ml, 390 mg pentobarbital-natrium, 50 mg fenytoïne natrium </td></tr><tr><td> Ketamine </td><td> Fort Dodge Animal Health (bestellen bij MWI Veterinary Supply) </td><td> MWI #: 000680 </td><td> Kateset 100 mg / ml </td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> LLOYD. Inc (Bestellen bij MWI Veterinary Supply) </td><td> MWI #: 009307 </td><td> Anased 100 mg / ml </td></tr><tr><td> Zoutoplossing </td><td> Hospira Inc </td><td> 94 tot 217-JT </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> SIGMA </td><td> 011M8207 </td><td></td></tr><tr><td> Saponin </td><td> Sigma </td><td> BCBB4080 </td><td></td></tr><tr><td> PECAM (CD31) </td><td> BD Pharmingen </td><td> 553371 </td><td></td></tr><tr><td> Streptavidine-CY3 </td><td> Jackson ImmunoResearch </td><td> 016-160-084 </td><td></td></tr><tr><td> BSA </td><td> Jackson ImmunoResearch </td><td> 096555 </td><td></td></tr><tr><td> VECTASTAIN Elite ABC </td><td> Vector Laboratories </td><td> PK-6100 </td><td></td></tr><tr><td> Vector Nova Red </td><td> Vector Laboratories </td><td> SK-4800 </td><td></td></tr><tr><td> VectaMount </td><td> Vector Laboratories </td><td> H-500 </td><td></td></tr></tbody></table> Tabel van specifieke reagentia

rat mesenterium uittreding: een model voor het onderzoeken van de cellular dynamics betrokken bij het angiogenese

Rat Mesentery Exteriorization: A Model for Investigating the Cellular Dynamics Involved in Angiogenesis

Microvacular groei van het netwerk en hermodellering zijn belangrijke aspecten van wondgenezing, ontsteking, diabetische retinopathie, de groei van tumoren en andere aandoeningen 1, 2. Groei van het netwerk wordt vaak toegeschreven aan angiogenese, gedefinieerd als de groei van nieuwe schepen van reeds bestaande schepen. Het angiogene proces wordt ook direct gekoppeld aan arteriogenese, gedefinieerd als de capillaire verwerving van een perivasculaire cel coating en vat de uitbreiding. Onnodig om te zeggen, angiogenese is complex en omvat meerdere spelers op cellulair en moleculair niveau 3. Het begrijpen van hoe een microvasculaire netwerk groeit vereist het identificeren van de ruimtelijke en temporele dynamiek langs de hiërarchie van een netwerk over het tijdsverloop van angiogenese. Deze informatie is van cruciaal belang voor de ontwikkeling van therapieën die gericht zijn op het manipuleren van schip groei. De uittreding model beschreven in dit artikel is een eenvoudige, reproduceerbare model voor stimulerenkening angiogenese in het mesenterium rat. Het werd aangepast van wondgenezing modellen in de rat mesenterium 4-7, en is een alternatief voor de angiogenese te stimuleren in het mesenterium via ip injecties van pro-angiogene middelen 8, 9. De uittreding model is aantrekkelijk omdat het vereist een minimale chirurgische ingreep en produceert dramatisch, reproduceerbare toename van de capillaire spruiten, vasculaire gebied en vasculaire dichtheid over een relatief korte tijd cursus in een weefsel dat zorgt voor de twee-dimensionale visualisatie van hele microvasculaire netwerken tot enkele celniveau. De gestimuleerde expansie is natuurlijk angiogene responsen in een fysiologische omgeving zonder tussenkomst van vreemde angiogene moleculen. Met behulp van immunohistochemische etikettering methoden, is dit model bewezen zeer nuttig in het identificeren van nieuwe cellulaire gebeurtenissen betrokken bij de angiogenese. Onderzoekers kunnen gemakkelijk correleren de angiogene statistieken in de tijd loop van de verbouwing met de tijd specific dynamiek, zoals cellulaire fenotypische veranderingen of cellulaire interacties 4, 5, 7, 10, 11.

Dit artikel beschrijft een eenvoudig model voor het stimuleren angiogenese in de rat mesenterium. Het model produceert dramatische toename in capillaire kiemen, vasculaire gebied en vasculaire dichtheid over een relatief korte tijd cursus in een weefsel die het mogelijk maakt en face visualisatie van hele microvasculaire netwerken tot in de enkele cel niveau.

Rat mesenterium uittreding: een model voor het onderzoeken van de Cellular Dynamics betrokken bij het Angiogenese

De groei en remodeling van het microvasculaire netwerk zijn kritische aspecten van wondgenezing, inflammatie, diabetische retinopathie, tumorgroei en andere ziekten ...

Het doel van het volgende experiment is om de ruimtelijke en temporele cellulaire dynamiek te identificeren die betrokken is bij angiogenese, gedefinieerd als de groei van nieuwe bloedvaten vanuit bestaande vaten. Gebruik een eenvoudig reproduceerbaar model om eerst angiogenese te stimuleren door het mesenterium van de rat kortstondig naar buiten te brengen en oogst mesenteriumweefsels op verschillende tijdstippen na stimulatie. Label vervolgens de weefselcoupes via immunolabeling.Gebruik bijvoorbeeld een endotheelcelmarker om de volledige remodellerende vasculatuur binnen een weefsel te visualiseren en creëer een essentiële tweedimensionale weergave van groeiende microvasculaire netwerken. Dit model is aantrekkelijk omdat het in een relatief kort tijdsbestek een dramatische toename in meerdere angiogene metrieken teweegbrengt. Het visualiseren van netwerken op enkelcelniveau en de correlatie van deze metrieken met multicellular labeling is uiterst nuttig gebleken bij het identificeren van nieuwe celtypen die betrokken zijn bij capillaire uitlopers.Deze methode zou kunnen helpen bij het beantwoorden van kernvragen over de cellulaire dynamiek die betrokken is bij de groei van het microvasculaire netwerk. Hiertoe behoort wanneer en waar specifieke cellen aanwezig zijn tijdens het proces van capillaire uitloop. De belangrijkste voordelen van deze methode zijn dat deze eenvoudig is, minimale chirurgische interventie vereist en een robuuste angiogene respons produceert over een relatief korte periode.Bovendien wordt er gebruikgemaakt van het rap-mesenterium, een weefsel dat observatie van een intact netwerk tot op het niveau van individuele cellen mogelijk maakt. Uit onze ervaring blijkt dat deze methode zeer eenvoudig aan te leren en daardoor reproduceerbaar is tussen verschillende onderzoekers bij het demonstreren van de procedure. Vandaag zal Peter Stapler, een promovendus in ons laboratorium, de operatie voorbereiden zoals gedetailleerd in de bijbehorende tekst.Na het scheren van de buikregio van de rat wordt de geanestheseerde rat op de rug op een warmtemat geplaatst om de lichaamstemperatuur op peil te houden. Reinig de buikregio door afwisselend te vegen met steriele gazen gedrenkt in 70% isopropylalcohol en jodium. Maak ongeveer 2,5 cm onder het borstbeen een kleine longitudinale incisie langs de huid en vervolgens de linea alba. Plaats het vooraf uitgesneden afdekdoek over het buikgedeelte, zodat de opening is uitgelijnd met de incisie. Oefen voorzichtig druk uit rond de incisie om de dunne darm bloot te leggen. Trek met wattenstaafjes voorzichtig een sectie van de dunne darm naar buiten, waarbij het mesenterium op het plastic plateau met steriele zoutoplossing wordt gelegd, en lokaliseer het ileum.Identificeer zes tot acht gevasculariseerde mesenteriale vensters, het dunne doorschijnende membraan tussen de arterie-vene-paren die de dunne darm voeden. Noteer het starttijdstip van de exteriorisatie en stel een timer in voor 20 minuten. Markeer de twee centraal gelegen mesenteriale vensters met een steriele 7-0 hechtdraad in het vetweefsel nabij de darm.Vul de zoutoplossing in de Petrischaal met tussenpozen bij met een steriele spuit van vijf milliliter om ervoor te zorgen dat het weefsel ondergedompeld en vochtig blijft. Plaats het mesenterium na de periode van exteriorisatie terug in de buikholte. Sluit de buikspieren met een onderbroken hechting met behulp van 5-0 monofilament hechtdraad.Sluit vervolgens de huid met 4-0 monofilaat hechtmateriaal in een onderbroken hechtpatroon, veeg het hechtgebied schoon met afwisselende vegen met steriel gaas gedrenkt in 70% isopropylalcohol en jodium om te verspreiden, breng smeergel aan op beide ogen van de rat en plaats deze terug in de kooi voor herstel. Anestheseer en euthanaseer de rat op de gewenste dag, na de stimulatie, volgens de institutionele richtlijnen. Open vervolgens de buikholte opnieuw en bedek het buikgebied met een stuk vershoudfolie. Trek nu voorzichtig de dunne darm naar buiten en lokaliseer de twee gemerkte vensters met behulp van een pincet en microschaar.Snijd elk van de geëxterioriseerde mesenteriale vensters uit, inclusief een rand van vet. Probeer te voorkomen dat er door arterie-vene-paren binnen de vetrand van de vensters wordt gesneden om een mogelijke bloedvulling van de vensters te minimaliseren. Minimaliseer daarnaast het doorsnijden van de darm om het vrijkomen van darmflora te voorkomen.Dompel elk venster onmiddellijk in PBS na het contact. Gebruik vervolgens een pincet om de weefsels te spreiden op positief geladen microscoopglas. Monteer twee weefsels per objectglas. Nadat de weefsels gedeeltelijk zijn opgedroogd, wordt het overtollige vet met een scalpelblad verwijderd.Fixeer de monsters gedurende 30 minuten in methanol bij -20 °C door ze in de vriezer te plaatsen. Droog de objectglazen in vacuüm om overtollige bufferoplossing te verwijderen. Omtrek daarnaast de weefsels met een waspen om te voorkomen dat antilichaamoplossingen ongecontroleerd wegvloeien van het weefsel.Druppel nu ongeveer 200 µL van de verdunde primaire antilichaamoplossing over het weefsel om het geheel te bedekken. Incubeer gedurende één uur bij kamertemperatuur en was de weefsels met PBS plus 0,1% sapin met drie bufferwisselingen. Voeg vervolgens de strep avidin peroxidase secundaire antilichaamoplossing toe en incubeer één uur bij kamertemperatuur; na drie wasbeurten worden de monsters 15 minuten geïncubeerd in Vector Nova Red.Spoel met water om de coupes op de objectglazen te monteren. Dompel de glazen 10 keer in 95% ethanol, gevolgd door opeenvolgende dehydratiestappen. Laat de objectglazen drogen, bedek de weefsels met een dunne laag medium en breng na vacuümdrogen en markeren de dekglasjes aan.De coupes. Bedek de weefselmonsters met de verdunde primaire antilichaamoplossing. Incubeer gedurende één uur bij kamertemperatuur.Was drie keer met PBS plus 0,1% saponine gedurende 10 minuten per wasbeurt. Voeg vervolgens het secundaire antilichaam toe en incubeer dit gedurende één uur. Voer wasbeurten uit in PBS plus 0,1% saponine, monteer de preparaten in PBS met glycerol en seal deze met nagellak.Hier beschrijven we in detail de aanpassing van een gangbare Petrischaal voor gebruik als chirurgische ondergrond. Gele boetseerklei werd gebruikt om een glad oppervlak te creëren zodat het mesenterium door het voorgeborene gat getrokken kon worden. Opnieuw worden de mesenteriale vensters, hier getoond op de ondergrond tijdens de periode van externalisatie, gedefinieerd als de dunne doorschijnende membranen tussen de arterie-vene-paren die de darm hier van voeding voorzien.PCAM-labeling identificeert alle vaattypen langs de hiërarchie van remodellerende microvasculaire netwerken op specifieke tijdstippen na externalisatie. Deze beelden kunnen worden gebruikt om angiogene metrieken te kwantificeren op specifieke tijdstippen na stimulatie.PCAM-labeling maakt het mogelijk om arteriën te onderscheiden van venen. Let op dat de toevoerende arteriën doorgaans kleinere diameters en een langgerekte morfologie van de endotheelcellen vertonen in vergelijking met de gepaarde venen. Typische kenmerken van remodelleringsnetwerken zijn het gevasculariseerde oppervlak, capillaire uitlopers en de vaatdichtheid.Kwantificering van deze verschillende angiogene parameters kenmerkt het verloop van de netwerkgroei. Capillaire uitloop uit bestaande vaten bereikt een piek tussen dag drie en dag vijf en keert tegen dag 10 terug naar het ongestimuleerde niveau. Deze voorbijgaande toename van de uitloop wordt in ons laboratorium gevolgd door een toename van het gevasculariseerde oppervlak en de vasculaire dichtheid.Dit modelsysteem is gebruikt om nieuwe cellulaire fenotypische veranderingen te identificeren op specifieke tijdspunten tijdens dit remodelleringsproces. De immunofluorescente PCA-labeling kleurt endotheelcellen rood, terwijl labeling voor klasse drie bèta-tubuline zenuwen en parasieten langs angiogene vaten groen kleurt. Opmerkelijk is dat de expressie van klasse drie bèta-tubuline in ongestimuleerde weefsels zenuwspecifiek is.In tegenstelling hiermee wordt tijdens de piek van de capillaire uitlopers class three bèta-tubuline tot expressie gebracht door perivasculaire cellen. Dit type resultaat benadrukt het nut van dit eenvoudige en robuuste angiogene model voor het identificeren van nieuwe celtypen die betrokken zijn bij het angiogene proces. Tegen dag 10 begint het expressiepatroon van class three bèta-tubuline terug te keren naar het ongestimuleerde scenario.Dit model zou potentieel ook gebruikt kunnen worden voor studies naar cellijnen. De haalbaarheid van celincorporatie in remodellerend mesenteriaal weefsel wordt ondersteund door deze preliminaire studies, waarin vooraf gelabelde beenmergcellen of mesenchymale stamcellen via superfusie over mesenteriale vensters werden aangebracht tijdens de 20 minuten durende exteriorisatieperiode. Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht hebben in hoe ons rat mesenterium-interiorisatiemodel kan worden gebruikt voor het onderzoeken van de cellulaire dynamiek die betrokken is bij de groei van microvasculaire netwerken.Deze eenvoudige techniek kan in ongeveer 45 minuten tot één uur worden uitgevoerd. Onthoud dat het cruciaal is om het mesenteriëum voorzichtig te behandelen en te voorkomen dat er vaten worden doorprikt na een chirurgische ingreep. Immunolabeling kan worden uitgevoerd om meerdere celtypen langs de bloedvaten te identificeren.U kunt ook labelen voor lymfevaten en zenuwen. Hierdoor kunnen we niet alleen de cellulaire fenotypische veranderingen onderzoeken die betrokken zijn bij angiogenese, maar ook de coördinatie tussen angiogenese, neurogenese en lymfangiogenese.

rat-mesentery-exteriorization-model-for-investigating-cellular

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Normale volwassen gevasculariseerde weefsel van zoogdieren die fysiologische angiogenese en die mist nog niet is blootgesteld aan chirurgische ingreep wordt gebruikt om te bestuderen: (i) de instelling en ontwikkeling van angiogenese na intraperitoneale toediening van test-agenten, en (ii) wijziging van angiogenese na systemische toediening van geselecteerde test agenten.

Rat mesenterium Angiogenese Assay

De neonatale muizen netvlies biedt een goed gekarakteriseerd fysiologisch model van angiogenese, die onderzoeken van de rol van de verschillende genen of medicijnen die angiogenese moduleren in een...

Hele Mount immunofluorescentiekleuring van de Neonatale Mouse Retina naar Angiogenese Onderzoek<em&gt; In vivo</em

Het protocol beschrijft de corneale micropocket assay zoals ontwikkeld in muizen.

De Cornea micropocket Analyse: Een model van angiogenese in de muis Eye

We beschrijven een matrigel-plugtest om het angiogeen potentieel van een pool van factoren te illustreren die worden afgescheiden door kankercellen, met behulp van twee complementaire beeldvormingsmodaliteiten, echografie en endomicroscopie. De matrigel, een buitencelmatrix (ECM)-nabootsende gel, wordt gebruikt om de gastheer (muis) te introduceren met angiogeen factoren die worden afgescheiden naar het geconditioneerde medium...

Monitoring Functionaliteit en morfologie van vaatstelsel aangeworven door gesekreteerd door Snelgroeiende Tumor genererende cellen

Dit protocol beschrijft de intravital beeldvorming van transgene muizen uiting van cel-specifieke fluorescente markeringen. Intravital imaging biedt een niet-invasieve methode voor hoge resolutie waarnemingen in levende dieren met behulp van implanteerbare windows waardoor de microscopische visualisatie van de processen mogelijk is. Deze methode is vooral handig om longitudinale processen te bestuderen.

Intravital microscopie van Tumor-geassocieerde therapieën met behulp van geavanceerde dorsale huidplooien venster Chambers op transgene fluorescerende muizen

Angiogenese omvat interacties tussen meerdere cellen en systemen die onderzocht moeten worden in een fysiologisch relevante omgeving. Het doel van deze studie is om de capaciteit van het kweekmodel van de rat mesenterium te demonstreren om tijdsverloopvergelijkingen van intacte microvasculaire netwerken tijdens angiogenesis te maken.

Een<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Methode voor Time-lapse imaging van gekweekte Rat Mesenteriale microvasculaire Networks

Deze test maakt gebruik van embryonale stamcellen van muizen gedifferentieerd in embryoïde lichamen gekweekt in 3D-collageengel om de biologische processen te analyseren die kiemende angiogenese in vitro beheersen. De techniek kan worden toegepast voor het testen van medicijnen, het modelleren van ziekten en voor het bestuderen van specifieke genen in de context van deleties die embryonaal dodelijk zijn.

In vitro Driedimensionale kiemtest van angiogenese met behulp van embryonale stamcellen van muizen voor vaatziektemodellering en drugstests

Deze studie presenteert de tweedimensionale (2D) kraswondmigratietest en de driedimensionale (3D) sferoïde kiemtest, samen met hun respectievelijke stroomafwaartse analysemethoden, waaronder RNA-extractie en immunocytochemie, als geschikte tests om angiogenese in vitro te bestuderen.

Onderzoek naar angiogenese op functioneel en moleculair niveau door gebruik te maken van de Scratch Wound Migration Assay en de Spheroid Sprouting Assay

Ontkiemende angiogenese, fundamenteel voor ontwikkeling en ziekte, omvat complexe moleculaire en mechanische processen. We presenteren een veelzijdig 2.5D ex vivo model dat cellulaire ontspruiting uit de halsslagaders van varkens analyseert, waarbij stijfheidsafhankelijke angiogenese en verschillende leider-volgercelmechanica worden onthuld. Dit model helpt bij het bevorderen van strategieën voor weefselmanipulatie en benaderingen van kankertherapie.

2.5D-model voor ex vivo mechanische karakterisering van kiemende angiogenese in levend weefsel

Christopher CW Hughes beschrijft het nut van zijn cultuur systeem voor het bestuderen van angiogenese in vitro. Hij legt het belang van de fibroblasten dat een kritische, nog niet geïdentificeerde, oplosbare factor die het mogelijk maken endotheelcellen aan schepen in de cultuur vorm die tak, de juiste vorm lumen, en ondergaan anastomose afscheiden.

Christopher Hughes: Een in vitro model voor de Studie van angiogenese (Interview)

Leer een eenvoudig rattenmesenterium-uitstulpmodel voor angiogeneseonderzoek met immunohistochemische kleuring en microscopische kwantificatie van microvasculaire netwerkgroei op enkelcelniveau.

Rat mesenterium uittreding: een model voor het onderzoeken van de Cellular Dynamics betrokken bij het Angiogenese

Meer video's verkennen