Name: Ovariëctomie en 17β-estradiol Vervanging bij ratten en muizen: een visuele demonstratie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-07T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: Leer ovariëctomie en 17β-estradiol vervanging bij ratten en muizen via silastic capsules of orale Nutella toediening. Deze methode biedt stabiele hormoonspiegels voor endocrinologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De studie werd gefinancierd door de Universiteit van Linköping en de County Council van Östergötland.

1. Ovariëctomie via de Dorsale Route <ol><li> Verdoven dier, bijvoorbeeld met 1,5% isofluraan (4% inductie) in een zuurstof / lachgas 30% / 70% mengsel. Plaats het dier in buikligging op een verwarmingsplaat verbonden met een rectale thermometer. Het is belangrijk om een ​​dunne laag isolatie tussen de dieren en de plaat en dat de thermometer terugmeldingssysteem houdt de lichaamstemperatuur binnen 37 ± 0,5 ° C. Breng gel voor oogbescherming en beheren van 5 mg Rimadyl / kg lichaamsgewicht verdund in een zoutoplossing subcutaan aan de laterale aspect van de nek van het dier voor postoperatieve pijnbestrijding. </li><li> Cephally Shave een 4 * 4 cm (3 * 3 cm voor muizen) gebied van het bekken. Grondig het geschoren gebied met bijvoorbeeld Jodopax voordat die het dier met een 4 * 4 cm opening operatie vel. </li><li> Maak een 2-3 cm middellijn incisie en bot ontleden de huid van de onderliggende fascia. Een cm lateraal van de middellijn, maak een andere incisie through de fascia. Botweg zijdelings ontleden onder deze fascia zo oppervlakkig als mogelijk tot het bereiken van de buikholte. </li><li> Behulp van een pincet, pak het vetweefsel, dat de eierstok schouwen in de buikholte en trek het voorzichtig uit. Identificeer de eierstok en ligeren de baarmoeder horens en schepen 0.5-1 cm proximaal van deze structuur. Snijd de eierstok en geligeerde vetweefsel en zet de resterende weefsel terug in de buikholte. Maak nog een incisie in de contralaterale fascia en herhaal de procedure. </li><li> Sluit de wonden, bij voorkeur met behulp van een monofilament hechtdraad, en wakker laten we het dier van anesthesie. Plaats het dier in een verwarmde kooi (25-27 ° C) gedurende tenminste 2 uren na de operatie. De dieren moeten afzonderlijk worden de eerste dagen na de operatie gehuisvest. Het is cruciaal dat de kooi regelmatig wordt gereinigd / vervangen tijdens de fase van herstel. Vierentwintig uur na de operatie, subcutaan injecteren de dieren met een andere 5 mg Rimadyl / kg lichaamsgewicht verdund inzoutoplossing. </li></ol> 2. Subcutane toediening van 17β-estradiol door Silastic Capsules <ol><li> Meng de gewenste hoeveelheid 17β-oestradiol in sesamolie. Voor de fysiologische concentraties bij ratten en muizen, raden wij aan 180 pg / ml en 18-36 ng / ml. Placebo capsules zijn gevuld met pure sesamolie. </li><li> Knip 3 cm (2 cm voor muizen) een lengte van silastic buizen en 5 mm (3 mm voor muizen) lengtes van houten stokken applicator voor het aansluiten. Met behulp van een tang, knijp een houten plug in de silastic capsule voor het injecteren van de 17β-estradiol/sesame olie oplossing voor de gehele lengte te vullen. Voorzichtig de dop op de silastic capsule in het open einde met een andere houten plug (de stekkers worden verondersteld om permanent te verblijven in de capsule). Incubeer de capsules in de resterende 17β-estradiol-oplossing &#39;s nachts voor implantatie. </li><li> Implantatie van de capsule kan worden uitgevoerd tijdens de anesthesie gebruikt bij ovariëctomie bij ratten. Voor mice wordt echter een 14-daags herstelperiode na ovariectomie raden om het risico van de capsule ketel door het fragiele huid te voorkomen. </li><li> Na chirurgische preparaten in 1,1 of na het sluiten van de ovariectomie insnijding scheren en wassen een 2 * 2 cm oppervlakte op de dorsale zijde van de hals van het dier. Maak een 1 cm incisie en botweg caudolaterally ontleden een subcutane pocket, met veel ruimte voor de capsule. Veeg de silastic capsule (dat tot nu-punt is geïncubeerd 17β-oestradiol oplossing) en voorzichtig te installeren door de snede, die vervolgens wordt gesloten door een hechtdraad. Het is cruciaal om ervoor te zorgen dat de capsule stammen huid zo min mogelijk, met name in de directe omgeving van de wond. Van productie van capsules de implantatie, is het belangrijk dat besmetting wordt voorkomen. </li></ol> 3. Perorale toediening van 17β-estradiol via de Nut-ijs Nutella <ol><li> Grondig te ontbinden 17β-estradiol in sesamolie, en dan meng de sesamolie met de Nutella. We raden aan elke dagelijkse portie 28 ug 17β-estradiol, 5 ui sesamolie en 1 g Nutella per kilogram lichaamsgewicht voor ratten en 1,12 microgram 17β-estradiol, 0,312 ul sesamolie en 60 mg Nutella voor elke 30-g muis bevat. Placebo moer-ijs is op dezelfde manier bereid maar dan zonder de 17β-estradiol. </li><li> Train de dieren om hormoon-vrije moer-ijs te eten vijf dagen voorafgaand aan het experiment. De eerste drie dagen van de opleiding, moeten de ratten optimaal worden getraind in groepen (ongeveer 0,5 g Nutella tot 2-5 dieren), in hun eigen kooien. Op de vierde en vijfde dag van de opleiding, worden de dieren in aparte kooien voor het ontvangen van de dagelijkse portie van de experimentele situatie lijken. </li><li> Tijdens het experiment worden de dieren in afzonderlijke kooien om voeding gelegenheid, waarna de Nutella gedeelte wordt gevoerd op kleine keramische tegels. Indien training is uitgevoerd als hierboven our ervaring is dat meer dan 95% van de ratten en muizen de moer-ijs te accepteren, en een keer volledig gewend, de meeste van de dieren eten het binnen enkele seconden. </li></ol> 4. Representatieve resultaten Fysiologisch serum 17β-estradiol concentraties, die de huidige methoden richten zich voort te planten, zijn ongeveer 5 tot 140 pg / ml voor ratten en 5-35 pg / ml voor muizen 4,6. De subcutane silastic capsules volgens de instructies hierboven bij toediening aan 300 g vrouwelijke Sprague-Dawley ratten, produceren langzaam afneemt 17β-oestradiol serum van ongeveer 40 pg / ml dag 2 tot 10 pg / ml dag 35. Echter, direct na de toediening, kan een serumconcentratie piek rond de 1000 pg / ml worden verwacht, vallen op de fysiologische bereik binnen 8 uur (Figuur 1A) 4,5. De silastic capsules voor muizen hierboven beschreven met 36 ug 17β-estradiol/mL, indien toegediend aan 25 g vrouwelijke C57BL / 6 muizen, maken serum concentrations die langzaam afnemen van ongeveer 90 pg / ml dag 2 tot 25 pg / ml dag 35. Dit wordt waarschijnlijk voorafgegaan door een vergelijkbare piek zoals in de ratten, hoewel dit niet onderzocht (figuur 1B) 6. De perorale Nutella methode met de doseringen hierboven beschreven toegediend aan 300 g vrouwelijke Sprague-Dawley ratten, maakt fysiologische niveaus van 17β-oestradiol met dagelijkse fluctuaties van 10-70 pg / ml (Figuur 2A) 4. Voor muizen met de bovenstaande dosering dagelijkse schommelen tussen ongeveer 20 en 120 pg / ml (Figuur 2B) 6. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/4013/4013fig1.jpg" /> <st<html> . rong&gt; Figuur 1 gestileerde grafieken presenteren 17β-oestradiol concentraties in ratten (A, n = 10 tijdstippen tot 24 uur, n = 15 later tijdstippen) 4,5 en muizen (B, n = 10) 6 na capsule implantatie. De silastic capsules produceren een korte eerste piek van serum concentraties tot 1000 pg / ml, maar daling binnen enkele uren tot minder dan 100 pg / ml. Voor de komende 4-5 weken, de capsules opleveren stabiel, hoewel gestaag af, serum concentraties. De gearceerde gebieden komen overeen met fysiologische 17β-estradiol serum concentraties in intacte vrouwelijke ratten en muizen respectievelijk. Ook al niet visueel aangetoond in de grafieken is er inter-individuele variabiliteit in de 17β-estradiol concentraties, waardoor variatiecoëfficiënten 27 tot 183% bij ratten en van 28 tot 115% in muizen met de silastic capsule methode (zeer lage gemiddelde concentraties vaak het genereren van hoge coëfficiënten van variatie). iles/ftp_upload/4013/4013fig2.jpg &quot;/&gt; Figuur 2 presenteert gestileerde grafieken 17β-oestradiol concentraties in ratten (A, n = 15). 4 en muizen (B, n = 10) 6 als gevolg van dagelijkse toediening hormoon in Nutella. De perorale Nutella-methode maakt de dagelijkse pieken, maar lang niet zo hoog als die door subcutane of intraveneuze methoden. Dit simuleert de farmacokinetiek van menselijke hormoon en de perorale behandeling kan doorgaan zolang als nodig, zelfs indien het voorbeeld slechts een eerste 96 uur presenteren. De gearceerde gebieden komen overeen met fysiologische 17β-estradiol serum concentraties in intacte vrouwelijke ratten en muizen respectievelijk. Hoewel visueel niet aangetoond in de grafieken is er inter-individuele variabiliteit in de 17β-estradiol concentraties, waardoor variatiecoëfficiënten 40 tot 132% bij ratten en van 13 tot 219% in muizen met de Nutella-methode (zeer lage gemiddelde concentraties genereren vaak hogeVariatiecoëfficiënten).

<ol><li>Strom, J. O., Theodorsson, A., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dose-related+neuroprotective+versus+neurodamaging+effects+of+estrogens+in+rat+cerebral+ischemia%3A+a+systematic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Dose-related neuroprotective versus neurodamaging effects of estrogens in rat cerebral ischemia: a systematic analysis.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 29, 1359-1372 (2009).</li>
<li>Strom, J. O., Theodorsson, E., Holm, L., Theodorsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+methods+for+administering+17beta-estradiol+to+ovariectomized+rats+result+in+opposite+effects+on+ischemic+brain+damage%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Different methods for administering 17beta-estradiol to ovariectomized rats result in opposite effects on ischemic brain damage.</a> BMC Neurosci. 11, 1471-2202 (2010).</li>
<li>Strom, J. O., Theodorsson, A., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormesis+and+Female+Sex+Hormones%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceuticals%22%5BJournal%5D)">Hormesis and Female Sex Hormones.</a> Pharmaceuticals. 4, 15(2011).</li>
<li>Isaksson, I. M., Theodorsson, A., Theodorsson, E., Strom, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+17beta-estradiol+administration+to+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+journal+of+clinical+and+laboratory+investigation%22%5BJournal%5D)">Methods for 17beta-estradiol administration to rats.</a> Scandinavian journal of clinical and laboratory investigation. , (2011).</li>
<li>Strom, J. O., Theodorsson, E., Theodorsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Order+of+magnitude+differences+between+methods+for+maintaining+physiological+17beta-oestradiol+concentrations+in+ovariectomized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Scand.+J.+Clin.+Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Order of magnitude differences between methods for maintaining physiological 17beta-oestradiol concentrations in ovariectomized rats.</a> Scand. J. Clin. Lab Invest. 68, 814-822 (2008).</li>
<li>Ingberg, E., Theodorsson, A., Theodorsson, E., Strom, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+long-term+17beta-estradiol+administration+to+mice%5BTitle%5D)+AND+%22General+and+comparative+endocrinology%22%5BJournal%5D)">Methods for long-term 17beta-estradiol administration to mice.</a> General and comparative endocrinology. , (2011).</li>
<li>Kalliokoski, O., Jacobsen, K. R., Hau, J., Abelson, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+concentrations+of+buprenorphine+after+oral+and+parenteral+administration+in+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+J%22%5BJournal%5D)">Serum concentrations of buprenorphine after oral and parenteral administration in male mice.</a> Vet. J. 187, 251-254 (2011).</li>
<li>Simpkins, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogens+may+reduce+mortality+and+ischemic+damage+caused+by+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+female+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Estrogens may reduce mortality and ischemic damage caused by middle cerebral artery occlusion in the female rat.</a> J. Neurosurg. 87, 724-730 (1997).</li>
<li>Wise, P. M., Dubal, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estradiol+protects+against+ischemic+brain+injury+in+middle-aged+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Estradiol protects against ischemic brain injury in middle-aged rats.</a> Biol. Reprod. 63, 982-985 (2000).</li>
<li>Saleh, T. M., Cribb, A. E., Connell, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen-induced+recovery+of+autonomic+function+after+middle+cerebral+artery+occlusion+in+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Estrogen-induced recovery of autonomic function after middle cerebral artery occlusion in male rats.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 281, 1531-1539 (2001).</li>
<li>Bingham, D., Macrae, I. M., Carswell, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detrimental+effects+of+17beta-oestradiol+after+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Detrimental effects of 17beta-oestradiol after permanent middle cerebral artery occlusion.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 25, 414-420 (2005).</li>
<li>Carswell, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+17beta-estradiol+upon+stroke+damage+in+stroke+prone+and+normotensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Differential effects of 17beta-estradiol upon stroke damage in stroke prone and normotensive rats.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 24, 298-304 (2004).</li>
<li>Yong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((17beta-estradiol+potentiates+ischemia-reperfusion+injury+in+diabetic+ovariectomized+female+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">17beta-estradiol potentiates ischemia-reperfusion injury in diabetic ovariectomized female rats.</a> Brain Res. 1054, 192-199 (2005).</li>
<li>Theodorsson, A., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estradiol+increases+brain+lesions+in+the+cortex+and+lateral+striatum+after+transient+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+rats%3A+no+effect+of+ischemia+on+galanin+in+the+stroke+area+but+decreased+levels+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Estradiol increases brain lesions in the cortex and lateral striatum after transient occlusion of the middle cerebral artery in rats: no effect of ischemia on galanin in the stroke area but decreased levels in the hippocampus.</a> Peptides. 26, 2257-2264 (2005).</li>
<li>Levin-Allerhand, J. A., Sokol, K., Smith, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safe+and+effective+method+for+chronic+17beta-estradiol+administration+to+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Contemp.+Top+Lab+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Safe and effective method for chronic 17beta-estradiol administration to mice.</a> Contemp. Top Lab Anim. Sci. 42, 33-35 (2003).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De administratie modi hierboven gepresenteerd hebben in eerdere studies bleek superieur aan commerciële slow-release tabletten en injecties op het gebied van het produceren van fysiologisch serum concentraties van 17β-estradiol. Terwijl de slow-release pellets te produceren zeer hoog en langdurig serumconcentratie pieken, de injecties veroorzaken extreme, dagelijks hormoonschommelingen en vereisen herhaalde stressvolle omgang met de dieren 4-6. Het belang van het kiezen van een adequate administratie modi wor...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Rimadyl, 50 mg / ml </td><td> Pfizer </td><td> 462986 </td><td> Postoperatieve pijnbestrijding na ovariëctomie. </td></tr><tr><td> Lubrithal ooggel </td><td> Leo Laboratories </td><td></td><td> Bescherming van de ogen tijdens de operatie. </td></tr><tr><td> Jodopax dierenarts </td><td> Pharmaxim </td><td></td><td> Chirurgie desinfectie. </td></tr><tr><td> Vicryl 4-0 hechtingen </td><td> Johnson &amp; Johnson </td><td></td><td> Wound hechtdraad en eierstok ligatie. </td></tr><tr><td> 17β-oestradiol,&gt; 98% </td><td> Sigma </td><td> E8875-1G </td><td> In sesamolie voor silastic capsules en Nutella. </td></tr><tr><td> Sesamolie </td><td> Sigma </td><td> S3547-1L </td><td> Het oplossen van de 17β-estradiol. </td></tr><tr><td> Silastic buizen, ID / OD: 1.575/3.175 mm </td><td> Dow Corning </td><td> 508-008 </td><td> Productie van silastic capsules. </td></tr><tr><td> Houten applicator-stick </td><td> Selefatrade </td><td> 12-0783 </td><td> Aftopping van de silastic capsules. </td></tr><tr><td> Nutella </td><td> Ferrero </td><td></td><td> Medium voor perorale 17β-estradiol. </td></tr></tbody></table>

ovariëctomie en 17β-estradiol vervanging bij ratten en muizen: een visuele demonstratie

Ovariectomy and 17&beta;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

Oestrogenen zijn een familie van vrouwelijke geslachtshormonen met een uitzonderlijk breed spectrum van effecten. Als ratten en muizen gebruikt oestrogeen onderzoek wordt dikwijls ovariectomie om de snel delende hormoonproductie ablatie, vervangen 17β-oestradiol exogeen. Er is echter geen consensus over hoe het hormoon te worden toegediend om fysiologische serumconcentraties verkrijgen. Dit is cruciaal omdat de 17β-estradiol niveau / administratie methode diep van invloed op de experimentele resultaten 1-3. We hebben in een reeks van studies kenmerkend was voor de verschillende vormen van 17β-estradiol administratie, het vinden van die onderhuidse silastic capsules en per-orale moer-ijs Nutella zijn superieur aan de handel verkrijgbaar slow-release pellets (geproduceerd door het bedrijf Innovatief Onderzoek van Amerika) en dagelijkse injecties op het gebied van het produceren van fysiologisch serum concentraties van 17β-estradiol 4-6. Onder de advantages van de moer-ijs-methode, die eerder is gebruikt voor buprenorfine bestuur 7, is dat wanneer gebruikt voor het oestrogeen administratie het lijkt op perorale hormoonvervangende therapie en is niet-invasief. De subcutane silastic capsules zijn handig en produceren de meest stabiele serumconcentraties. Deze video artikel bevat stap-voor-stap demonstraties van ovariëctomie en 17β-estradiol hormoon vervanging door silastic capsules en perorale Nutella bij ratten en muizen, gevolgd door een bespreking van belangrijke aspecten van de administratieve procedures.

Ovariectomie en daaropvolgende vervanging van 17β-oestradiol door silastic capsules en perorale Nutella worden aangetoond bij ratten en muizen.

Ovariëctomie en 17β-estradiol Vervanging bij ratten en muizen: een visuele demonstratie

Oestrogenen zijn een familie van vrouwelijke geslachtshormonen met een uitzonderlijk breed spectrum aan effecten. Wanneer ratten en muizen worden gebruikt in oestrogenonderzoek, zijn zij ...

Het algemene doel van deze procedure is om strikte controle te krijgen over de anderszins fluctuerende serum-oestrogeenconcentraties bij vrouwelijke ratten en muizen. Dit wordt bereikt door eerst de eierstokken via de dorsale route te verwijderen. Vervolgens worden cel-elastische capsules en een Nutella-mengsel bereid.Ten slotte wordt een capsule subcutaan ingebracht, of wordt het Nutella-mengsel oraal toegediend. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen via een radio-immunologisch assay, waaruit respectievelijk stabiele of fluctuerende serumconcentraties van 17 beta estradiol blijken voor de capsule- en Nutella-methoden. Het belangrijkste voordeel van deze technieken ten opzichte van bestaande methoden, zoals pellets voor vertraagde afgifte, is dat is aangetoond dat ze fysiologische concentraties van estradiol produceren gedurende langere perioden.Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen het oestrogeenonderzoek, zoals verschillen in effecten tussen toedieningswijzen, wortels en doses. Plaats het dier na anesthetisering in buikligging op een warmteplaat die is verbonden met een rectale thermometer. Dien IGEL en middelen voor postoperatieve verlichting subcutaan toe aan de laterale zijde van de nek van het dier.Dien vijf milligram per kilogram IL in saline toe, anterieur van de shaver van de crista iliaca, over een gebied van vier bij vier centimeter. Desinfecteer vervolgens het gebied met een antisepticum voordat het dier wordt afgedekt met een chirurgisch laken met een opening van vier bij vier centimeter. Maak een midline incisie van twee tot drie centimeter en ontleed de huid bot via de onderliggende fascia, één centimeter lateraal van de middellijn.Maak een nieuwe incisie door de fascia. Disseceer vervolgens zo oppervlakkig mogelijk bot via de zijkant onder deze fascia totdat de buikholte is bereikt. Pak met een pincet het vetweefsel dat de eierstok in de buikholte omringt en trek dit voorzichtig naar buiten.Identificeer de eierstok en ligeer de uterine hoorns en vaten op 0,5 tot één centimeter proximaal van deze structuur. Snijd de eierstok en het gelige vetweefsel uit en plaats het resterende weefsel terug in de buikholte.Maak een tweede incisie in het contralaterale fascia en verwijder de andere eierstok. Sluit de wonden, tenzij er direct 17 beta estradiol wordt toegediend. Laat het dier ontwaken uit de anesthesie.Plaats het dier na de operatie gedurende ten minste twee uur in een verwarmde kooi. Huisvest de rat de eerste dagen na de operatie apart. 24 uur na de operatie subcutaan.Injecteer de dieren met nog eens vijf milligram per kilogram IL om 17 bèta-estradiol via scholastische capsules toe te dienen. Meng de gewenste hoeveelheid grondig in sesamolie. Knip met een pincet stukjes scholastische slang van drie centimeter en houten applicatiestokjes van vijf millimeter om de capsules af te dichten.Druk één houten plug in de scholastische capsule voordat de 17 beta estradiol sesamolie-oplossing wordt geïnjecteerd. Om de volledige lengte te vullen, wordt het open uiteinde van de scholastische capsule voorzichtig afgesloten met een andere houten plug. Incubeer de capsules gedurende de nacht in de resterende 17 beta estradiol-oplossing vóór de implantatie.Scheren en desinfecteren na het sluiten van de ectomie-incisies een vierkant gebied van twee bij twee centimeter op de dorsale zijde van de nek van de rat. Maak een incisie van één centimeter en ontleed dit zijdelings en bot. Dissecteer een subcutane pocket en maak voldoende ruimte voor de capsule.Veeg de scholastische capsule schoon en breng deze voorzichtig via de incisie in. Sluit vervolgens de incisie met een hechting. Zorg ervoor dat de capsule de huid zo min mogelijk spant, met name rondom de wond.Om de nootcrème Nutella als medium voor de toediening van oestrogeen te gebruiken, dient 17 beta estradiol volledig te worden opgelost in sesamolie, waarna de sesamolie met de nootcrème wordt gemengd. Bereid vijf dagen vóór het experiment een placebo-nootcrème zonder 17 beta estradiol. Train de ratten op dag één tot en met drie om de hormoonvrije nootcrème te eten.Train de dieren op de vierde en vijfde dag in groepen. Voer hen gedurende de experimenten de notenroom in afzonderlijke kooien. Plaats de dieren in afzonderlijke kooien wanneer zij de fysiologische serum-notenroom worden gevoerd.De concentraties 17 bèta-estradiol, die de huidige methoden pogen te reproduceren, zijn ongeveer 5 tot 140 picogram per milliliter voor ratten en 5 tot 35 picogram per milliliter voor muizen. Zoals hier wordt getoond. Wanneer toegediend aan vrouwelijke Sprague-Dawley ratten van 300 gram.De subcutane elastische capsules produceren langzaam afnemende serumconcentraties van 17 bèta-estradiol, van ongeveer 40 picogram per milliliter op dag twee naar 10 picogram per milliliter op dag 35. Onmiddellijk na toediening kan echter een serumconcentratiepiek van ongeveer 1000 picogram per milliliter worden verwacht, die binnen acht uur daalt tot het fysiologische bereik wanneer de capsules werden toegediend aan vrouwelijke C 57 black six muizen van 25 gram.De serumconcentratie nam langzaam af van ongeveer 90 picograms per milliliter op dag twee naar 25 picograms per milliliter op dag 35 bij toediening via de notenroom aan 300 grams Sprague Dawley-ratten. Fysiologische spiegels van 17 beta estradiol fluctueerden dagelijks tussen 10 to 70 picograms per milliliter bij muizen.De 17 bèta-estradiolspiegels fluctueerden tussen 20 en 120 picograms per milliliter. Zodra de techniek onder de knie is, kan de ectomie en capsule-implantatie in 10 minuten worden uitgevoerd indien dit correct gebeurt. Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om strikt de hygiënerichtlijnen te volgen.

ovariectomy-17-estradiol-replacement-rats-mice-visual

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Twee oefening paradigma's werden getest op een nieuw ontwikkelde chemisch geïnduceerde menopauze muismodel om de impact van de menopauze op de inspanningscapaciteit en cardiale aanpassing uit te oefenen onderzoeken.

Een methode om de impact van chemisch-geïnduceerde ovarieel falen op de inspanningscapaciteit en Cardiac Aanpassing studie bij muizen

Hier presenteren we een protocol voor live-imaging van fluorescently geëtiketteerde menselijke baarmoederslijmvlies fragmenten geënt in muizen. De methode kunt bestuderen van de gevolgen van de drugs van keuze voor endometriotic laesie grootte door middel van controle en kwantificering van de fluorescentie die wordt uitgestoten door de fluorescerende verslaggever op...

Noninvasive controle van de grootte van de laesie in een heteroloog muismodel van endometriose

Klinisch, oestrogeen deficiëntie bij menopauzale vrouwen kunnen verergeren de incidentie van lipide verstoring en atherosclerose. We vestigden een in vivo oestrogeen deficiëntie model door bilaterale ovariëctomie via een dubbele Dorsale-laterale incisie in apoE-/- muizen. Het muismodel is van toepassing voor het screenen van exogene oestrogeen behandelingen van cardiovasculaire disfunctie na de menopauze.

Een in vivo oestrogeen deficiëntie muis model voor het screenen van exogene oestrogeen behandelingen van cardiovasculaire disfunctie na de menopauze

In dit artikel wordt beschreven hoe u seksueel gedragstests uitvoeren bij mannelijke muizen.

Beoordeling van seksueel gedrag van mannelijke muizen

Dit protocol beschrijft de constructie van een goedkoop micro-injecttiesysteem, de stereotaxische implantatie in diepe hersenstructuren en de procedure voor getimede micro-injecties van tetrodotoxine bij wakkere en ongeremde ratten. Het doel is om de deelname van hypothalamische structuren aan de regulatie van de ovulatie te onthullen door hun neurale activiteit te remmen.

Ontrafeling van de rol van discrete gebieden van het rattenbrein in de regulatie van ovulatie door omkeerbare inactivatie door tetrodotoxine micro-injecteringen

Dit manuscript beschrijft een consistente manier om snel overleving uit te voeren knaagdierorchidtomieën en ovariëctomieën.

Muizen orchidectomie en ovariëctomie om de productie van geslachtshormonen te verminderen

Zwangerschapsvorming is een dynamisch proces met complexe embryo- en baarmoederkruisverwijzing. De precieze bijdragen van de maternale baarmoederomgeving aan deze processen blijven een actief onderzoeksgebied. Hier worden gedetailleerde protocollen verstrekt om te helpen bij het ontwerpen van in vivo diermodellen om deze onderzoeksvragen aan te pakken.

Methoden voor het bestuderen van baarmoederbijdragen aan zwangerschapsinstelling in een ovariectomiemodel

Hier wordt een protocol gepresenteerd om aan te tonen dat de Bazi Bushen-capsule (BZBS) de RANKL/OPG-signaleringsroute in het ovariëctomie-knaagdiermodel kan reguleren door middel van het oestrogeenachtige effect.

Oestrogeenachtig effect van Bazi Bushen-capsule bij ratten met ovariëctomie

Follikelstimulerend hormoon (FSH) in verschillende extragonadale weefsels en organen wordt in verband gebracht met de pathogenese van meerdere ziekten. Het ovariëctomische en met FSH behandelde muismodel (OVF) kan worden gebruikt om de extragonadale werking van FSH te onderzoeken.

Onderzoek naar onafhankelijke effecten van follikelstimulerend hormoon in vivo in een muismodel

Dit protocol introduceert een techniek voor het induceren van modellen met polycysteus ovariumsyndroom (PCOS) bij muizen door middel van gecontroleerde afgifte van letrozol met behulp van minipompen. Onder adequate verdoving werd de minipomp subcutaan geïmplanteerd en PCOS werd met succes geïnduceerd bij de muizen na een bepaalde periode van de afgifte van de minipomp.

Een aangepaste techniek voor het induceren van polycysteus ovariumsyndroom bij muizen

Leer ovariëctomie en 17β-estradiol vervanging bij ratten en muizen via silastic capsules of orale Nutella toediening. Deze methode biedt stabiele hormoonspiegels voor endocrinologisch onderzoek.

Ovariëctomie en 17β-estradiol Vervanging bij ratten en muizen: een visuele demonstratie

Meer video's verkennen