Name: Een handig en algemene uitdrukking platform voor de productie van de uitgescheiden eiwitten uit menselijke cellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-31T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 9 s
Description: Leer een tijd- en kostenefficiënte methode voor de expressie van uitgescheiden eiwitten met HEK 293T-cellen. Dit protocol maakt schaalbare productie van recombinante eiwitten in hun native conformatie mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door een Ontario HIV Treatment Network Research Operating Grant (ROG-G645) en Canadese Institutes of Health Research New Investigator Award (MSH-113554) om JEL, en de Universiteit van Toronto beurzen naar HA, FCA, en JDC. De auteurs willen graag Marnie Fusco, Dafna Abelson en dr. Erica Ollmann Saphire danken aan het Scripps Research Institute (La Jolla, CA) voor het leveren van cellen, ebolavirus GP expressievector en algemeen advies.

<ol><li>Celik, E., Calik, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+recombinant+proteins+by+yeast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Adv%22%5BJournal%5D)">Production of recombinant proteins by yeast cells.</a> Biotechnol. Adv. , (2011).</li>
<li>Yokoyama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+expression+systems+for+structural+genomics+and+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">Protein expression systems for structural genomics and proteomics.</a> Curr. Opin. Chem. Biol. 7, 39-43 (2003).</li>
<li>Nettleship, J. E., Assenberg, R., Diprose, J. M., Rahman-Huq, N., Owens, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+production+of+proteins+in+insect+and+mammalian+cells+for+structural+biology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Struct.+Biol%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the production of proteins in insect and mammalian cells for structural biology.</a> J. Struct. Biol. 172, 55-65 (2010).</li>
<li>Carlson, E. D., Gan, R., Hodgman, C. E., Jewett, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+protein+synthesis%3A+Applications+come+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Adv%22%5BJournal%5D)">Cell-free protein synthesis: Applications come of age.</a> Biotechnol. Adv. , (2011).</li>
<li>Lee, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+the+Ebola+virus+glycoprotein+bound+to+an+antibody+from+a+human+survivor%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structure of the Ebola virus glycoprotein bound to an antibody from a human survivor.</a> Nature. 454, 177-182 (2008).</li>
<li>Bowden, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+of+Nipah+and+Hendra+virus+attachment+to+their+cell-surface+receptor+ephrin-B2%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Struct.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Structural basis of Nipah and Hendra virus attachment to their cell-surface receptor ephrin-B2.</a> Nat. Struct. Mol. Biol. 15, 567-572 (2008).</li>
<li>Evans, M. J., Hartman, S. L., Wolff, D. W., Rollins, S. A., Squinto, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+expression+of+an+anti-human+C5+chimeric+Fab+utilizing+a+vector+that+replicates+in+COS+and+293+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Rapid expression of an anti-human C5 chimeric Fab utilizing a vector that replicates in COS and 293 cells.</a> J. Immunol. Methods. 184, 123-138 (1995).</li>
<li>Ye, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-level+protein+expression+in+scalable+CHO+transient+transfection%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">High-level protein expression in scalable CHO transient transfection.</a> Biotechnol. Bioeng. 103, 542-551 (2009).</li>
<li>Wurm, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+recombinant+protein+therapeutics+in+cultivated+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Production of recombinant protein therapeutics in cultivated mammalian cells.</a> Nat Biotechnol. 22, 1393-1398 (2004).</li>
<li>Lee, J. E., Fusco, M. H., Hessell, A. J., Burton, D. R., Saphire, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+and+tactics+used+in+determining+the+structure+of+trimeric%2C+prefusion+Ebola+virus+GP%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cryst%22%5BJournal%5D)">Techniques and tactics used in determining the structure of trimeric, prefusion Ebola virus GP.</a> Acta Cryst. 65, 1162-1180 (2009).</li>
<li>Aricescu, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eukaryotic+expression%3A+developments+for+structural+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Crystallogr.+D+Biol.+Crystallogr%22%5BJournal%5D)">Eukaryotic expression: developments for structural proteomics.</a> Acta. Crystallogr. D Biol. Crystallogr. 62, 1114-1124 (2006).</li>
<li>Aricescu, A. R., Lu, W., Jones, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+time-+and+cost-efficient+system+for+high-level+protein+production+in+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Crystallogr.+D+Biol.+Crystallogr%22%5BJournal%5D)">A time- and cost-efficient system for high-level protein production in mammalian cells.</a> Acta. Crystallogr. D Biol. Crystallogr. D62, 1243-1250 (2006).</li>
<li>Chang, V. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycoprotein+structural+genomics%3A+solving+the+glycosylation+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Structure%22%5BJournal%5D)">Glycoprotein structural genomics: solving the glycosylation problem.</a> Structure. 15, 267-273 (2007).</li>
<li>Lee, J. E., Fusco, M. H., Saphire, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+platform+for+screening+expression+and+crystallization+of+glycoproteins+produced+in+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">An efficient platform for screening expression and crystallization of glycoproteins produced in human cells.</a> Nature Protocols. 4, 592-604 (2009).</li>
<li>Nettleship, J. E., Rahman-Huq, N., Owens, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+production+of+glycoproteins+by+transient+expression+in+Mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">The production of glycoproteins by transient expression in Mammalian cells.</a> Methods Mol. Biol. 498, 245-263 (2009).</li>
<li>Neil, S. J., Zang, T., Bieniasz, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetherin+inhibits+retrovirus+release+and+is+antagonized+by+HIV-1+Vpu%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Tetherin inhibits retrovirus release and is antagonized by HIV-1 Vpu.</a> Nature. 451, 425-430 (2008).</li>
<li>Nakamura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterodimerization+of+the+IL-2+receptor+beta-+and+gamma-chain+cytoplasmic+domains+is+required+for+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Heterodimerization of the IL-2 receptor beta- and gamma-chain cytoplasmic domains is required for signalling.</a> Nature. 369, 330-333 (1994).</li>
<li>Wang, X., Rickert, M., Garcia, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+the+quaternary+complex+of+interleukin-2+with+its+alpha%2C+beta%2C+and+gammac+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Structure of the quaternary complex of interleukin-2 with its alpha, beta, and gammac receptors.</a> Science. 310, 1159-1163 (2005).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De 10 lagen celfabrieken een effectieve vat voor de productie van milligram hoeveelheden eiwit. Een belangrijk voordeel van de cel fabriek op andere traditionele vaartuigen zoals rolflessen, schudkolven of spinner kolven, is dat niet nodig de aanschaf van extra laboratoriumapparatuur. Een standaard CO 2 incubator (~ 6,0 cu. Ft) zal gemakkelijk geschikt voor vier 10-layer cel als fabriek (afb. 2). Bovendien vereisen deze vaartuigen minder arbeid en ruimte dan schotels of rolflessen van cellen ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Alkalische fosfatase (BVIE / NBT) vloeibare substraatoplossing </td><td> Sigma </td><td> B6404 </td><td></td></tr><tr><td> Antibiotica / Antimycoticum, 100X </td><td> Invitrogen </td><td> 15240062 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-HA affiniteitsmatrix, kloon 3F10 </td><td> Roche </td><td> 1815016 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-HA muizen mAb, kloon 16B12 </td><td> Covance </td><td> MMS-101P </td><td></td></tr><tr><td> Celkweekkolf, T75 cm 2 weefselkweek behandeld </td><td> Corning </td><td> 430641 </td><td></td></tr><tr><td> Celkweekkolf, T225 cm 2 weefselkweek behandeld </td><td> Corning </td><td> 431082 </td><td></td></tr><tr><td>Cell kweekplaten ,6-en weefselkweek behandeld </td><td> Corning </td><td> 3516 </td><td></td></tr><tr><td> De cel als fabriek, 10-laag CellStack </td><td> Corning </td><td> 3312 </td><td></td></tr><tr><td> Centramate Omega 5K Cassette </td><td> Lijkkleed </td><td> OS005C12 </td><td></td></tr><tr><td> Centramate Omega 30K Cassette </td><td> Lijkkleed </td><td> OS030C12 </td><td></td></tr><tr><td> Chromatografie glazen kolom, 1.0x10 cm </td><td> Kontes </td><td> 4204001010 </td><td></td></tr><tr><td> Ciprofloxacine </td><td> Sigma </td><td> 17850 </td><td></td></tr><tr><td> CO 2 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco&#39;s gemodificeerd Eagle&#39;s medium (DMEM) </td><td> Sigma </td><td> D5796 </td><td></td></tr><tr><td> Foetaal runderserum (FBS), warmte geïnactiveerd </td><td> Invitrogen </td><td> 12484-028 </td><td></td></tr><tr><td> FuGENE HD transfectiereagens </td><td> Promega </td><td> 4709691001 </td><td></td></tr><tr><td> GeneJuice transfectiereagens </td><td> EMD / Merck </td><td> 70967-6 </td><td></td></tr><tr><td> Glycine </td><td> Sigma </td><td> G8898 </td><td></td></tr><tr><td> Geit anti-muis IgG F (ab &#39;) 2 alkaline </td><td> Thermo Scientific </td><td> 31324 </td><td></td></tr><tr><td> fosfatase-geconjugeerd antilichaam </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Hemagglutinine (HA) peptide, 100 mg </td><td> Genscript </td><td> Synthese op maat </td><td></td></tr><tr><td> (Volgorde: YPYDVPDYA; 95% zuiverheid) </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> HEK 293T-cellen </td><td> ATCC </td><td> CRL-11268 </td><td></td></tr><tr><td> Household bleekmiddel (4% w / v natriumhypochloriet) </td><td> diverse merken zijn </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Immobilon-P membraan PVDF </td><td> Millipore </td><td> IPVH07850 </td><td></td></tr><tr><td> Miniprep plasmide zuiveringssamenstel, Purelink Quick </td><td> Invitrogen </td><td> K2100-11 </td><td></td></tr><tr><td> MaxiPrep plasmide zuivering kit, Purelink HiPure </td><td> Invitrogen </td><td> K2100-07 </td><td></td></tr><tr><td> NaN 3 </td><td> Sigma </td><td> S8032 </td><td></td></tr><tr><td> pDISPLAY expressievector </td><td> Invitrogen </td><td> V660-20 </td><td></td></tr><tr><td> Penicilline / streptomycine (pen / strep), 100X </td><td> Invitrogen </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS), steriele 1X </td><td> Sigma </td><td> D8537 </td><td></td></tr><tr><td> Polyethyleenimine (PEI), lineaire 25 kDa </td><td> Polyscience </td><td> 23966 </td><td></td></tr><tr><td> Magere melk droog poeder </td><td> Anjer </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Stericup-GP PES vacuümfiltratie-eenheid, </td><td> Millipore </td><td> SCGPU05RE </td><td></td></tr><tr><td> 0,22 pm, 500 ml </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Trypaan blauw </td><td> Invitrogen </td><td> 15250061 </td><td></td></tr><tr><td> Trypsine-EDTA, 0,05% (w / v) </td><td> Invitrogen </td><td> 25300-054 </td><td></td></tr><tr><td> Tween-20 </td><td> Sigma </td><td> P7949 </td><td></td></tr><tr><td> Valproïnezuur </td><td> Sigma </td><td> P4543 </td><td></td></tr><tr><td> Centramate tangentiële stroomsysteem </td><td> Lijkkleed </td><td></td><td></td></tr><tr><td> CO 2 bevochtigde incubator, standaard 6,0 cu. ft </td><td> diverse merken zijn </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Elektroforese en overdrachteenheid </td><td> diverse merken zijn </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Incubator, 37 ° C </td><td> diverse merken zijn </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

een handig en algemene uitdrukking platform voor de productie van de uitgescheiden eiwitten uit menselijke cellen

A Convenient and General Expression Platform for the Production of Secreted Proteins from Human Cells

Recombinant eiwitexpressie in bacteriën, meestal E. coli, is de meest succesvolle strategie voor milligram hoeveelheid expressie van eiwitten. Echter prokaryotische gastheren vaak minder geschikt voor expressie van humane, virale of eukaryotische eiwitten door toxiciteit van buitenlandse macromolecuul, verschillen in de eiwitvouwing machine, of door het ontbreken van bepaalde co-of post-translationele modificaties in bacteriën. Expression systemen op basis van gist (P. pastoris of S. cerevisiae) 1,2, baculovirus geïnfecteerde insecten (S. frugiperda of T. ni) cellen 3, en celvrije in vitro vertaalsystemen 2,4 zijn met succes gebruikt om de produceren zoogdiereiwitten. Intuïtief de beste overeenkomst is een warmbloedige gastheer gebruikt om de productie van recombinante eiwitten die de juiste post-translationele modificaties bevatten waarborgen. Een aantal zoogdierlijke cellijnen (humane embryonale Kidney (HEK) 293 zijn C V-1 cellen O rigin die de S V40 larget T-antigen (COS), Chinese Hamster Ovarium (CHO), en anderen) succes gebruikt om milligram hoeveelheden van een aantal humane eiwitten tot overexpressie 5-9. Echter de voordelen van zoogdiercellen vaak tegen hogere kosten vereist gespecialiseerde laboratoriumapparatuur lagere eiwitopbrengsten en lange tijd om stabiele cellijnen te ontwikkelen expressie. Het verhogen van de opbrengst en de productie van eiwitten sneller, terwijl de kosten laag zijn, zijn belangrijke factoren voor veel academische en commerciële laboratoria. We beschrijven hier een tijd-en kosten-efficiënte, tweedelige procedure voor de expressie van uitgescheiden menselijke eiwitten van vreemde HEK 293T-cellen. Dit systeem is geschikt voor het produceren microgram tot milligram hoeveelheden van functionele eiwitten voor structurele, biofysische en biochemische studies. Het eerste deel, meerdere constructen van het gen van belang te producerend in parallel en tijdelijk getransfecteerd in adherente HEK 293T-cellen in kleine schaal. De detectie en analyse van recombinant eiwit uitgescheiden in het celkweekmedium wordt door western blot analyse in de handel verkrijgbare antilichamen gericht tegen een vector gecodeerd eiwit zuivering tag. Vervolgens worden geschikt constructen voor grootschalige productie van eiwitten transient getransfecteerd met polyethyleenimine (PEI) in 10 laag celfabrieken. Eiwitten uitgescheiden in liter-volumes van geconditioneerd medium zijn geconcentreerd in hanteerbare hoeveelheden met behulp van tangentiële flow filtratie, gevolgd door zuivering door anti-HA-affiniteitschromatografie. Het nut van dit platform wordt bewezen door het vermogen om milligram hoeveelheden cytokines, cytokine receptor celoppervlakreceptoren, intrinsieke beperking factoren en virale glycoproteïnen drukken. Deze methode is ook met succes gebruikt in de bepaling van de structurele trimere ebolavirus glycoproteïne 5,10. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Kortom, dit platform biedt gebruiksgemak, snelheid en schaalbaarheid terwijl het maximaliseren van eiwitten kwaliteit en functionaliteit. Bovendien is er geen extra apparatuur, andere dan een standaard bevochtigde CO 2 incubator, vereist. Deze procedure kan snel worden uitgebreid systeem van grotere complexiteit, zoals co-expressie van eiwitcomplexen, antigenen en antistoffen productie van virusachtige deeltjes voor vaccins of productie van adenovirussen of lentivirussen voor transductie van moeilijk cellijnen.

In de post-humane genomics-tijdperk, de beschikbaarheid van recombinante eiwitten in de moedertaal van conformaties is cruciaal voor structurele, functionele en therapeutisch onderzoek en ontwikkeling. Hier beschrijven we een test-en grootschalige eiwitexpressie systeem humane embryonale nier 293T cellen die kunnen worden gebruikt om een ​​verscheidenheid van recombinante eiwitten.

Een handig en algemene uitdrukking platform voor de productie van de uitgescheiden eiwitten uit menselijke cellen

Recombinante eiwitexpressie in bacteriën, doorgaans *E. coli*, is de meest succesvolle strategie geweest voor de expressie van eiwitten in milligramhoeveelheden.

In deze video beschrijven we een tijd- en kostenefficiënte procedure voor de expressie van gesecreteerde eiwitten uit HEC 2 9 3 T-cellen. In eerste instantie wordt een HEC 2 9 3 T-celcultuur met 40% confluentie voorbereid in een six-well plaat. Vervolgens wordt een transfectiemengsel gemaakt door GeneJuice en de testplasmiden te verdunnen in serumvrij medium.Het transfectiemengsel wordt op de cellen aangebracht, waarna deze worden geïncubeerd bij 37 °C om eiwitexpressie mogelijk te maken. De detectie van eiwit in het supernatant kan worden uitgevoerd via western blot. Zodra een geschikt construct is geïdentificeerd, kan de procedure worden opgeschaald met behulp van 10-laags cel-factories.Cellen worden getransfecteerd met behulp van PEI als transfectiereagens. Eiwitten kunnen uit de supernatants van de culturen worden gewonnen middels tangentiële stromingsfiltratie gevolgd door affiniteitschromatografie. Uiteindelijk maakt dit platform de expressie mogelijk van een breed scala aan macromoleculen in milligramhoeveelheden.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals baculovirus-gebaseerde expressie in insectencellen, is dat een groot aantal

a-convenient-general-expression-platform-for-production-secreted

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Een high-throughput, geautomatiseerd platform van de productie cellijn ontwikkeling voor de productie van therapeutische eiwitten is beschreven. Uitvoering van de BD FACS Aria Cell Sorter, heeft CloneSelect Imager en Tecan Freedom EVO liquid handling systeem gedemonstreerd aanzienlijk toegenomen verwerkingscapaciteit in cellijn ontwikkeling met verbeterde cellijn kwaliteit en een hoge reproduceerbaarheid.

Een High-throughput geautomatiseerd platform voor de ontwikkeling van Manufacturing Cell Protein Therapeutics Lines voor

Deze vijfdaagse protocol beschrijft alle stappen, apparatuur en aanvullende software voor het maken en uitvoeren van een efficiënte endogene Escherichia coli op basis TX-TL-cel-vrije expressie systeem vanaf nul. Met reagentia, het protocol duurt 8 uur of minder voor het inrichten van een reactie, verzamelen en verwerken van gegevens.

Protocollen voor implementatie van een Escherichia coli Op basis TX-TL Cell-Free Expression System for Synthetic Biology

Ontwikkelen biotinylatable fusie-eiwitten heeft veel potentiële toepassingen in diverse gebieden van onderzoek. Recombinant eiwit-engineering is een rechttoe rechtaan procedure die is kosteneffectief, het verstrekken van hoge opbrengsten van op maat gemaakte eiwitten.

Expressie, isolatie en zuivering van oplosbare en onoplosbare Biotinylated Eiwitten voor Nerve Tissue Regeneration

De expressie van recombinante eiwitten door zoogdiersystemen wordt een aantrekkelijke methode voor het produceren van eiwitcomplexen voor structurele biologie. Hier presenteren we een eenvoudig maar zeer efficiënt expressiesysteem dat gebruik maakt van in suspensie gekweekte zoogdiercellen om eiwitcomplexen te zuiveren voor structurele studies.

Recombinante eiwitexpressie voor Structurele Biologie in HEK 293F Suspension cellen: een nieuwe en toegankelijke aanpak

We beschrijven hier een kosteneffectief granzyme-expressiesysteem met behulp van HEK293T-cellen dat hoge opbrengsten produceert van zuivere, volledig geglycoseerde en enzymatisch actieve protease.

Een hoge opbrengst en kosten-efficiënte Expression System van Human granzymen in zoogdiercellen

Dit is een snel, kosteneffectief protocol voor de productie van uitgescheiden, geglycoseerde zoogdier-eiwitten en daaropvolgende eenstapszuivering met voldoende opbrengsten van homogeen eiwit voor röntgenkristallografie en andere biofysische studies.

Efficiënte zoogdiercelexpressie en Single-step Zuivering van extracellulaire Glycoproteïnen voor kristallisatie

De productie op laboratoriumschaal van eukaryote eiwitten met passende post-translationele modificatie vormt een belangrijke barrière. Hier is een robuust protocol met snelle implementatie en doorlooptijd voor eiwitexpressie met behulp van een zoogdier-expressiesysteem. Dit systeem ondersteunt selectieve aminozuren, selectieve markering van eiwitten en kleine moleculaire modulatoren van glyconsamenstelling.

High Yield Expressie van recombinante humane eiwitten met de Transient Transfectie van HEK293 cellen in suspensie

Hier presenteren we de protocollen voor het gebruik van het insect cel en baculovirus eiwit expressie systeem voor de productie van grote hoeveelheden uitgescheiden eiwithoudende gewassen voor eiwit kristallisatie. Een vector baculovirus expressie is gewijzigd met GP67 of insect hemolin signaal peptide voor plant secretie eiwituitdrukking in insect cellen.

Wijzigen Baculovirus expressievectoren voor de productie van plantaardige eiwitten in Insect cellen uitgescheiden

Dit protocol detailleert de stappen, kosten, en apparatuur die nodig is voor het genereren van E. coli-op basis van cel extracten en uit te voeren in vitro eiwit synthese reacties binnen 4 dagen of minder. Om de invloed van de flexibele aard van dit platform voor brede toepassingen, bespreken we reactie voorwaarden die kunnen worden aangepast en geoptimaliseerd.

Escherichia coli-cel-Free eiwitsynthese gebaseerd: protocollen voor een robuuste, flexibele en toegankelijk platformtechnologie

Structurele en biochemische studies van menselijke membraantransporters vereisen milligramhoeveelheden stabiel, intact en homogeen eiwit. Hier beschrijven we schaalbare methoden om transporteurs van menselijke opgeloste stoffen te screenen, tot expressie te brengen en te zuiveren met behulp van codon-geoptimaliseerde genen.

High-Throughput expressie en zuivering van menselijke opgeloste stoffen voor structurele en biochemische studies

Dit protocol beschrijft het Cell-Free Protein Synthesis (CFPS)-systeem dat wordt gebruikt bij het bouwen van synthetische cellen. Het schetst de belangrijkste fasen met representatieve resultaten in verschillende microcompartimenten. Het protocol heeft tot doel best practices vast te stellen voor diverse laboratoria in de synthetische celgemeenschap, waardoor de vooruitgang in de ontwikkeling van synthetische cellen wordt bevorderd.

Celvrij eiwitsynthesesysteem voor het bouwen van synthetische cellen

Leer een tijd- en kostenefficiënte methode voor de expressie van uitgescheiden eiwitten met HEK 293T-cellen. Dit protocol maakt schaalbare productie van recombinante eiwitten in hun native conformatie mogelijk.

Een handig en algemene uitdrukking platform voor de productie van de uitgescheiden eiwitten uit menselijke cellen

Meer video's verkennen