Name: Genomic Transformatie van de Picoeukaryote Ostreococcus Tauri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 45 s
Description: Leer genetische transformatie van de mariene alga Ostreococcus tauri door elektroporatie. Deze methode maakt stabiele transgene lijnen voor onderzoek naar plantbiologie en celnetwerken mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

SynthSys een Centre for Integrative Systems Biology gefinancierd door BBSRC en EPSRC award D019621. EU FP6 Network of Excellence &#39;Marine Genomics &quot;subsidie ​​aan Fyb heeft gefinancierd ontwikkeling van genetische transformatie methoden.

1. Voorbereiding van algen Materiaal <ol><li> Ostreococcus cellen worden gekweekt in kunstmatig zeewater (ASW). Zeezouten (typisch ongeveer 40 g per liter) worden opgelost in gedeïoniseerd water tot een saliniteit van 30 ppt, zoals gemeten met een saliniteit meter. Aanrijkingsmedium 11,12, zware metalen elementen en vitaminen worden toegevoegd zoals beschreven in tabellen 1-3. De media is dan filter-gesteriliseerd door een 0,22 pm filter. </li><li> Voor het onderhoud, de cellen van Ostreococcus stam OTTH95 zijn sub-gekweekt aseptisch in een verdunning van 1/100 in zoet ASW om de 7 dagen en geteeld onder constant licht in een groei van de plant incubator uitgerust met Moonlight Blue filter. De lichtintensiteit moet ongeveer 20 mol m -2 s -1 zijn en temperatuur wordt op 20 ° C. Cellen niet nodig constant roeren, maar geschud om de 2 tot 3 dagen aggregatie te voorkomen. </li><li> Voor elke transformatie worden 50 ml cellen vereist bij de celnsity 20-30 x 10 6 ml-1, dat moet 5-7 dagen worden bereikt na sub-kweken. Geschatte celdichtheid axeny kan worden bepaald met behulp van flow cytometrie of een hemocytometer op minimaal x40 vergroting. </li></ol> 2. Elektroporatie <ol><li> Bereid DNA voor de transformatie. Per transformatie wordt 5 ug zuivere gelineariseerde plasmide DNA vereist bij een concentratie van 1 pg / pl in steriel gedeïoniseerd water. Om dit DNA te verkrijgen, de auteurs raden het gebruik van een Qiagen midi prep-kit, maar ook andere methoden kan even goed werken. Digest het product met een enzym dat snijdt in de ruggengraat van de gebruikte vector, maar niet in de transgene of selectie gen. Verder te zuiveren en te concentreren de resulterende lineaire DNA door ethanol precipitatie, en mengen van het product in de juiste hoeveelheid hoogwaardige steriel gedeïoniseerd water. </li><li> Bereid microcentrifugebuizen met 5 ug DNA voor elke transformatie. Een control zonder DNA nodig voor elke cellijn worden getransformeerd. Houd deze buizen op ijs, met een 2 mm elektroporatie cuvet voor elke transformatie. </li><li> Bereid 2,2 ml van resuspentie buffer per transformatie. Los Sorbitol een 1 M oplossing in DDH 2 O toevoegen 0,1% pluronisch zuur F68 en filter-steriliseren. </li><li> Voeg pluronisch zuur F68 tot een eindconcentratie van 0,1% van de cellen en hun pellet gedurende 10 minuten bij 8000x g bij 10 ° C in een 50 ml buis konische bodem. Onmiddellijk resuspendeer de cellen in 1 ml buffer resuspensie door en neer te pipetteren, en over te dragen aan een microfugebuis. Spin down gedurende 10 minuten bij 8000 xg bij 10 ° C en snel te werken, herhaalt u deze wasstap nog een keer. </li><li> Met een snee tip, resuspendeer elke laatste pellet in 40 pi van resuspensie buffer. Voeg 40 ul van de geresuspendeerde cellen aan elke buis van gelineariseerde DNA op het ijs, voorzichtig mengen en over te dragen aan de elektroporatie cuvette. </li><li> Plaats de cuvet in de electroporatie machine. Wijzig de instellingen tot 6 kV cm -1, 600 Ω, en 25 uF. Electroporate de cellen. </li><li> Incubeer de electoporated cellen in de cuvetten bij kamertemperatuur gedurende 10 minuten en gebruikt die tijd de weefselkweekflessen bereiden. Label ze en voeg 30 ml vers ASW aan elk. Neem 1 ml uit elke kolf en voorzichtig toe te voegen aan de betreffende kuvet. Incubeer gedurende 2 minuten en verwijder voorzichtig de ASW, nu met het bolletje van cellen en voorzichtig en langzaam direct pipet in de ASW in de cultuur kolf. </li><li> Cellen meestal nog een globule. Zorg ervoor dat u schudden of de geaggregeerde cellen verstoren op dit moment. Laat de cellen in de incubator te herstellen gedurende 1-2 uur, daarna mengen door schudden van de kolven. Op dit moment moet de cellen vrij te resuspenderen en geen klonten zichtbaar moeten zijn. Laat de culturen om &#39;s nachts terug in de incubator. </li></ol> 3. Opname van cellen op platen in Semi-vast medium <ol><li&gt; De volgende dag autoclaaf een oplossing van 2,1% laag smeltpunt agarose in DDH 2 O in een fles met een roerstaaf. Houd gesmolten bij 65-90 ° C in een grotere bekerglas met water op een verwarmingsinrichting magneetroerder. Voor elke transformatie bereiden 8 petrischalen (55 mm diameter) en 8 x 15 ml; elk met 9 ml ASW plus de gewenste selectie. Bij gebruik van Nourseothricin of G418, gebruik dan 2 mg / ml. </li><li> Verzamel de getransformeerde cellen uit de incubator. Het werken in een steriele flowhood, 1 ml kokend LMP agarose de 9 ml in een van de buizen. Sluit de buis, en meng door. Voeg vervolgens 0,5 ml van een vers getransformeerde cellen, snel door elkaar en giet het in de plaat. Herhaal dit proces met de resterende 7 buizen en ga verder met de volgende transformatie kolf. </li><li> Laat de platen te openen in de stroom kap voor een uur, voor de agarose op te zetten. Sluit vervolgens de borden en zet ze tot grote vierkante Petri-schalen, en een capaciteit van 4 borden elk. Sluit de vierkante borden with Parafilm. Merk op dat de platen niet volledig vastgesteld, en daardoor de gel is zeer kwetsbaar. Zorg ervoor dat u niet om de gel te breken bij het hanteren van de platen. Plaats alle vierkante borden in de incubator. </li></ol> 4. Selectie van getransformeerde kolonies <ol><li> Kolonies moeten verschijnen na 10 tot 21 dagen op de transformatie platen, maar niet op de mock getransformeerd platen. Op te halen kolonies een 200 ul pipet te gebruiken met cut-off tips. Selecteer gewoon gratis kolonies en zuigen het groene kolonie. Zorg ervoor dat u alle cellen van naburige kolonies op te nemen. </li><li> Breng de cellen 2 ml vloeibaar medium bevatten de selectie, in een 24 wells plaat. Bij gebruik Nourseothricin gebruikt 1,75 mg / ml. Meng door en neer te pipetteren. Kies 24-50 kolonies per transformatie. Sluit de platen met parafilm en transfer naar de incubator. </li><li> Na een week overdracht 100 pi van elk putje 2 ml verse ASW met selectie in een 24 wells plaat en groeien op een additionaliteitsdebatl 7 dagen. Overlevende cellijnen worden gebruikt voor verdere studies. Stabiele integratie in het genoom en insertie nummer moet worden geanalyseerd met PCR en Southern blot. Genomisch DNA kan worden verkregen voor deze doeleinden gebruik van een down-schaal standaardmethode voor het planten DNA-extractie. </li></ol> 5. Representatieve resultaten Cellen verdeeld honderdste een dichtheid van 25 miljoen cellen per milliliter na het kweken gedurende 7 dagen. Elektroporatie van cellen met de gewenste instellingen resulteerde in een tijdconstante tussen 10 en 14 milliseconden. Wanneer cellen worden overgebracht naar medium in kweekflessen moet een bolletje cellen vormen. Bij het licht geschud na een uur, moeten de cellen goed kunnen mengen. Opneming van 1 ml getransformeerde cellen in 0,2% agar LMP moet resulteren in een consistente maar halfvaste gel. Kolonies moeten verschijnen na 10 tot 21 dagen. Wanneer transformerende 5 ug gelineariseerde DNA met de bovenstaande protocol 50-100 kolonies per transformatieplaat werden meestal verwacht, ten opzichte van niets op de negatieve controle platen. Ongeveer 80% van kolonies werden opgepikt positief geselecteerd resistentie in een vloeibaar medium en werden gebruikt voor verdere studies. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Eindconcentratie </td><td> Stock oplossing </td><td> Volume voor 1 liter </td></tr><tr><td> NaNO 3 </td><td> 8,83 x 10 -4 M </td><td> 75 g / L dH 2 O </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> NH4CI </td><td> 3,63 x 10 -5 M </td><td> 2,68 g / L dH 2 O </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> β-glycerofosfaat </td><td> 1 x 10 ~ 5 M </td><td> 2,16 g / L dH 2 O </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> H 2 3 SeO </td><td> 1 x 10 ~ 8 M </td><td> 1,29 mg / L dH 2 O </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> Tris-base (pH 7,2) </td><td> 1 x 10 -3 M </td><td> 121,1 g / L dH 2 O </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> K trace oplossing van het metaal </td><td></td><td> Tabel 2 </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> f / 2 vitamine oplossing </td><td></td><td> Tabel 3 </td><td> 0,5 ml </td></tr></tbody></table> Tabel 1. Medium bestanddelen voor de groei van O. tauri 11, 12. maken tot een totaal volume van 1 liter kunstmatig zeewater een saliniteit van 30 ppt, en voeg de hierboven beschreven onderdelen van voorraadoplossingen aangegeven. Filter-steriliseren op de middellange en gebruik binnen een week. Voorraden van alle verbindingen met uitzondering van de vitamine oplossing wordt samengevoegd tot 6 ml van deze oplossing toegevoegd per liter medium. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Eindconcentratie </td><td> Stock oplossing </td><td> Hoeveelheid voor 1 liter </td></tr><tr><td> Na 2 </sub&gt; EDTA • 2H 2 O </td><td> 1 x 10 -4 M </td><td></td><td> 41,6 g </td></tr><tr><td> FeCl 3 • 6H 2 O </td><td> 1 x 10 ~ 5 M </td><td></td><td> 3,15 g </td></tr><tr><td> Na 2 MoO 4 • 2H 2 O </td><td> 1 x 10 ~ 8 M </td><td> 6,3 g / L dH 2 O </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> ZnSO 4 • 7H 2 O </td><td> 1 x 10 9 M </td><td> 22,0 g / L dH 2 O </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> CoCl 2 • 6H 2 O </td><td> 1 x 10 9 M </td><td> 10,0 g / L dH 2 O </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> MnCl2 • 4H 2 O </td><td> 1 x 10 ~ 8 M </td><td> 180,0 g / L dH 2 O </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> CuSO 4 • 5H 2 O </td><td> 1 x 10 ~ 8 M </td><td> 9,8 g / L dH <sub&gt; 2 O </td><td> 1 ml </td></tr></tbody></table> Tabel 2. Trace oplossing van het metaal 11,12. Vul aan tot een totaal van 1 liter, in dH 2 O, en warmte op te lossen. Aliquot de oplossing en bevriezen voor opslag. Final concentraties hebben betrekking op het uiteindelijke medium, niet het spoor oplossing van het metaal. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Eindconcentratie </td><td> Stock oplossing </td><td> Hoeveelheid voor 1 liter </td></tr><tr><td> Vitamine B 12 </td><td> 1 x 10 10 M </td><td> 1 g / L dH 2 O </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> Biotine </td><td> 1 x 10 9 M </td><td> 0,1 g / L dH 2 O </td><td> 10 mL </td></tr><tr><td> Thiamine • HCl </td><td> 1 x 10 -7 M </td><td></td><td> 200 mg </td></tr></tbody></table> Tabel 3. f / 2vitamine oplossing 11. aan tot een totaal van 1 liter in dH 2 O, filter-steriliseren, hoeveelheid en vries. Eindconcentraties betrekking op het uiteindelijke medium, niet de vitamine oplossing. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/4074/4074fig1.jpg" /> Figuur 1. Grafisch overzicht van de transformatie procedure. Schematische weergave van de procedure om genetisch Ostreococcus Tauri te transformeren door middel van elektroporatie. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/4074/4074fig2.jpg" /> Figuur 2. Cultuur groei. Cellen zijn sub-gekweekt aseptisch in een verdunning van 1/100 in zoet ASW om de 7 dagen en geteeld onder constant licht in een groei van de plant incubator uitgerust met Moonlight Blue filter. De lichtintensiteit gelijk zou zijn aan 20 umol m -2 s -1 en temperatuur op 20 ° C cellen niet constant roeren vereisen, maar ishaken om de 2 of 3 dagen om aggregatie te voorkomen. <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/4074/4074fig3.jpg" /> Figuur 3. Colony formatie op 0,2% LMP agarose. Transfer 4 borden een groot plein petrischaal en afdichting met parafilm (links boven). Wanneer kolonies zijn gevormd, selecteert u gewoon gratis (bij voorkeur conisch gevormde) kolonies (rechtsboven) en zuigen ze uit de plaat met een P200 pipet. Er mogen geen kolonies op de negatieve controle (rechtsonder).

<ol><li>Derelle, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+analysis+of+the+smallest+free-living+eukaryote+Ostreococcus+tauri+unveils+many+unique+features%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Genome analysis of the smallest free-living eukaryote Ostreococcus tauri unveils many unique features.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 11647-11652 (2006).</li>
<li>Henderson, G. P., Gan, L., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3-D+ultrastructure+of+O.+tauri%3A+electron+cryotomography+of+an+entire+eukaryotic+cell%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">3-D ultrastructure of O. tauri: electron cryotomography of an entire eukaryotic cell.</a> PLoS One. 2, e749(2007).</li>
<li>O'Neill, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+rhythms+persist+without+transcription+in+a+eukaryote%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Circadian rhythms persist without transcription in a eukaryote.</a> Nature. 469, 554-558 (2011).</li>
<li>van Ooijen, G., Dixon, L. E., Troein, C., Millar, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteasome+function+is+required+for+biological+timing+throughout+the+twenty-four+hour+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Proteasome function is required for biological timing throughout the twenty-four hour cycle.</a> Curr. Biol. 21, 869-875 (2011).</li>
<li>Troein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+light+inputs+to+a+simple+clock+circuit+allow+complex+biological+rhythms%5BTitle%5D)+AND+%22Plant.+J%22%5BJournal%5D)">Multiple light inputs to a simple clock circuit allow complex biological rhythms.</a> Plant. J. 66, 375-385 (2011).</li>
<li>Corellou, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clocks+in+the+green+lineage%3A+comparative+functional+analysis+of+the+circadian+architecture+of+the+picoeukaryote+ostreococcus%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Clocks in the green lineage: comparative functional analysis of the circadian architecture of the picoeukaryote ostreococcus.</a> Plant Cell. 21, 3436-3449 (2009).</li>
<li>O'Neill, J. S., Reddy, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+clocks+in+human+red+blood+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Circadian clocks in human red blood cells.</a> Nature. 469, 498-503 (2011).</li>
<li>Monnier, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orchestrated+transcription+of+biological+processes+in+the+marine+picoeukaryote+Ostreococcus+exposed+to+light%2Fdark+cycles%5BTitle%5D)+AND+%22B.M.C.+Genomics%22%5BJournal%5D)">Orchestrated transcription of biological processes in the marine picoeukaryote Ostreococcus exposed to light/dark cycles.</a> B.M.C. Genomics. 11, 192(2010).</li>
<li>Le Bihan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shotgun+proteomic+analysis+of+the+unicellular+alga+Ostreococcus+tauri%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Shotgun proteomic analysis of the unicellular alga Ostreococcus tauri.</a> J. Proteomics. 74, 2060-2070 (2011).</li>
<li>Expression of polypeptides from the nuclear genome of Ostreococcus sp. US application patent. , 201001174050 (2010).</li>
<li>Guillard, R. R. L., Ryther, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+of+marine+planktonic+diatoms.+I.+Cyclotella+nana+Hustedt%2C+and+Detonula+confervacea+%28cleve%29+Gran%5BTitle%5D)+AND+%22Can.+J.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Studies of marine planktonic diatoms. I. Cyclotella nana Hustedt, and Detonula confervacea (cleve) Gran.</a> Can. J. Microbiol. 8, 229-239 (1962).</li>
<li>Keller, M. D., Selvin, R. C., Claus, W., Guillard, R. R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Media+for+the+culture+of+oceanic+ultraphytoplankton%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phycol%22%5BJournal%5D)">Media for the culture of oceanic ultraphytoplankton.</a> J. Phycol. 23, 633-638 (1987).</li>
<li>Djouani-Tari, elB. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phosphate-regulated+promoter+for+fine-tuned+and+reversible+overexpression+in+Ostreococcus%3A+Application+to+circadian+clock+functional+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A phosphate-regulated promoter for fine-tuned and reversible overexpression in Ostreococcus: Application to circadian clock functional analysis.</a> PLoS One. 6, e28471(2011).</li>
<li>Moulager, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+light+signals+by+the+retinoblastoma+pathway+in+the+control+of+S+phase+entry+in+the+picophytoplanktonic+cell+Ostreococcus%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS.+Genet%22%5BJournal%5D)">Integration of light signals by the retinoblastoma pathway in the control of S phase entry in the picophytoplanktonic cell Ostreococcus.</a> PLoS. Genet. 6, e1000957(2010).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Cellulaire staat en cultuur axeny is van cruciaal belang voor de transformatie procedure. Hoewel cellen worden meestal onderhouden in cycli van 12 uur licht en werden 12 uur donker, efficiëntie van de omzetting in cellen gekweekt onder deze omstandigheden onvoldoende blijken te zijn. Tijdens de herhaalde pellets / resuspensie stappen moeten cellen altijd gemakkelijk mengen. Als cellen aggregaat, of een slijm-achtige substantie aanwezig is, is het beter om de procedure opnieuw te beginnen vanaf het begin. Meestal kan ~ 50 kolonies worden verwacht op elke transformatie plaat, ten opzichte van niets op de negatieve controle plaat. Bij lage efficiëntie van de omzetting dient teeltomstandigheden worden gevarieerd om cellen in de optimale stand. Variabelen die transformatie efficiëntie beïnvloeden, zijn onder de omgevingstemperatuur in het laboratorium (moet in de buurt van 20 ° C zijn) en de behandeling snelheid (Procedure van pelleteren cellen [2,3] naar herstel [2,7] moet ~ 1 uur duren). Het is ook belangrijk dat oplossingen eenre gemaakt vers voor elke transformatie. Voor opname in platen, de concentratie van LMP agarose essentieel. Ostreococcus cellen groeien niet in hoge concentraties agarose, en diffunderen in lage concentraties. Drie transformatievectoren voor Ostreococcus zijn eerder gepubliceerd 6, en nog veel meer vectoren zullen naar verwachting worden gegenereerd en binnenkort gepubliceerd. De bestaande vector Pot-Luc 6 maakt het gebruik van een promotor naar keuze in combinatie met een C-terminale vuurvlieg luciferase-tag waardoor een snellere transgene lijn selectie plus handelbaar expressie patronen, terwijl de Potox vector 6 draagt ​​de sterke induceerbare 13 promotor uit de Ostreococcus hoge affiniteit fosfaat Transporteur (HAPT) gen voor overexpressie van het gen van belang. De Potox-Luc vector afgeleid van Potox, die een extra luciferase marker kan worden gebruikt voor indirecte selectie van lijnen overexpressie <sup&gt; 14. Succesvolle selectie markers op deze vectoren zijn Nourseothricin en G148. Echter Ostreococcus cellen zeer goed bestand tegen verschillende antibiotica en de concentraties van verbindingen die nodig zijn voor selectie van transgene Ostreococcus cellen hoger dan bij conventionele modelsysteem (2 mg / ml). Hoewel de werkwijze weergegeven inefficiënt het grote aantal cellen en plasmide DNA nodig voor deze werkwijze vormt geen significante hindernis. Een grotere beperking is dat elke opgewekte lijn die bestand is tegen de selecteerbare marker dient te worden geanalyseerd om te controleren of de gehele constructie is geïntegreerd in de DNA. Wij hebben opgemerkt voorbeelden waarin succesvolle expressie van de selecteerbare marker niet overeen met het inbrengen van het genproduct van interesse, dat wil zeggen gedeeltelijke integratie optreden. Blijkbaar willekeurige integratie in het genoom betekent ook dat er geen beperking van de insteekopening deze methode en methoden bebaseerd op homologe recombinatie worden momenteel ontwikkeld. Echter, de hier beschreven methode is, naar ons beste weten, momenteel de enige gekenmerkt methode om genetisch gemodificeerde Ostreococcus cellen te genereren. Als Ostreococcus Tauri is pas sinds kort gebruikt als experimenteel model organisme, de meeste methoden het werken met deze cellen voor verandering vatbaar is en verfijnd worden door de groeiende betrokken onderzoeksgemeenschap. Dit protocol is bedoeld om mensen te helpen werk te starten met Ostreococcus, maar op geen enkele wijze beweert te beschrijven alles wat er te weten valt over genomische transformatie van deze microalga. De auteurs vertrouwen dat lezers in staat zijn om dit protocol aan te passen aan hun eigen behoeften als kleine verschillen in de incubators (licht of kwaliteit) en andere parameters zal bestaan ​​en waarschijnlijk geoptimaliseerd moeten worden in ieder afzonderlijk laboratorium naar de gezonde culturen die nodig zijn voor deze te verkrijgen protocol. Na het beheersen van de technieken die hier beschreven,vectoren kunnen worden geconstrueerd luminescerende, fluorescent of andere gelabeld fusie lijnen onder besturing van een aantal promotoren genereren. Deze spannende roman experimenteel platform zal nuttig zijn om te onderzoeken hoe ingewikkelde biochemische problemen worden opgelost in een eukaryoot van verminderde complexiteit, waarbij farmacologische benaderingen zeer vergemakkelijkt worden 3.

<table border="1"><tbody><tr><td colspan="4"> Medium bestanddelen </td></tr><tr><td> Chemisch </td><td colspan="2" > Catalogusnummer </td><td> Leverancier </td></tr><tr><td> Instant Ocean Marine Salt </td><td colspan="3"> van <a href="http://amazon.co.uk" target="_blank">amazon.co.uk</a> of <a href="http://rocketaquatics.co.uk" target="_blank">rocketaquatics.co.uk</a> </td></tr><tr><td> NaNO 3 </td><td colspan="2"> S5506-250G </td><td> Sigma </td></tr><tr><td> NH4CI </td><td colspan="2"> A9434-500G </td><td> Sigma </td></tr><tr><td> Glycerol 2-fosfaat dinatriumzout hydrateren </td><td colspan="2"> G9422-100G </td><td> Sigma </td></tr><tr><td> H 2 3 SeO </td><td colspan="2"> 84920-250G </td><td> Sigma </td></tr><tr><td> Ultra zuiver tris </td><td colspan="2"> 15504-020 </td><td> Invitrogen </td></tr><tr><td> Na 2 EDTA • 2H 2 O </td><td colspan="2"> BPE120-500G </td><td> Fisher Scientific </td></tr><tr><td> FeCl 3 • 6H 2 O </td><td colspan="2"> 157740 </td><td> Sigma </td></tr><tr><td> Na 2 MoO 4 • 2H 2 O </td><td colspan="2"> 31439-100G-R </td><td> Sigma </td></tr><tr><td> ZnSO 4 • 7H 2 O </td><td colspan="2"> Z0251 </td><td> Sigma </td></tr><tr><td> CoCl 2 • 6H 2 O </td><td colspan="2"> 31277 </td><td> Sigma </td></tr><tr><td> MnCl2 • 4H 2 O </td><td colspan="2"> 203734-5G </td><td> Sigma </td></tr><tr><td> CuSO 4 • 5H 2 O </td><td colspan="2"> C8027 </td><td> Sigma </td></tr><tr><td> Vitamine B 12 (cyanocobalamine) </td><td colspan="2"> V2876 </td><td> Sigma </td></tr><tr><td> Biotine </td><td colspan="2"> 47868 </td><td> Sigma </td></tr><tr><td> Thiamine • HCl </td><td colspan="2"> T4625 </td><td> Sigma </td></tr><tr><td> Ampicilline </td><td colspan="2"> A9518-25G </td><td> Sigma </td></tr><tr><td> Neomycine </td><td colspan="2"> N6386 </td><td> Sigma </td></tr><tr><td> Kanamycine </td><td colspan="2"> K4000 </td><td> Sigma </td></tr><tr><td colspan="4"> Verbruiksartikelen voor het kweken van </td></tr><tr><td colspan="2"> Item </td><td> Catalogusnummer </td><td> Leverancier </td></tr><tr><td colspan="2"> Tissue Culture Flask T25 suspensieculturen ontlucht te worden met Gieten Channel </td><td> 83.1810.502 </td><td> Starstedt </td></tr><tr><td colspan="2"> Tissue Culture Flask T75 suspensieculturen ontlucht te worden met Gieten Channel </td><td> 83.1813.502 </td><td> Starstedt </td></tr><tr><td colspan="2"> Tissue Culture Flask T175 suspensieculturen ontlucht te worden met Gieten Channel </td><td> 83.1812.502 </td><td> Starstedt </td></tr><tr><td colspan="2"> TPP Fles top filters, 1L, compleet </td><td> 99950T </td><td> Helena bio- </td></tr><tr><td colspan="2"> TPP Fles top filters, 500 ml, </td><td> 99500T </td><td> Helena bio- </td></tr><tr><td colspan="2"> TPP Fles top filters, 250ml, </td><td> 99250T </td><td> Helena bio- </td></tr><tr><td colspan="2"> TPP Fles top filters, 150ml, </td><td> 99150T </td><td> Helena bio- </td></tr><tr><td colspan="2"> Zoutgehalte Meter voor Marine Aquarium </td><td> DSG-10 </td><td> Daeyoon </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td colspan="3" > Chemische producten voor de transformatie </td></tr><tr><td> Chemisch </td><td> Catalogusaantal </td><td> Leverancier </td></tr><tr><td> D-sorbitol </td><td> S6021-1KG </td><td> Sigma </td></tr><tr><td> Pluronic F-68 oplossing </td><td> P5556-100ML </td><td> Sigma </td></tr><tr><td> ClonNat </td><td> 51000 </td><td> Werner </td></tr><tr><td> Laag smeltpunt agarose </td><td> 16520-050 </td><td> Invitrogen </td></tr><tr><td colspan="3"> Verbruiksartikelen voor transformatie </td></tr><tr><td> Item </td><td> Catalogusnummer </td><td> Leverancier </td></tr><tr><td> Tissue Culture Flask T25 suspensieculturen ontlucht te worden met Gieten Channel </td><td> 83.1810.502 </td><td> Starstedt </td></tr><tr><td> Tissue Culture Flask T75 suspensieculturen ontlucht te worden met Gieten Channel </td><td> 83.1813.502 </td><td> Starstedt </td></tr><tr><td> Tissue Culture Flask T175 Suspension Cultures ontlucht te worden met Gieten Channel </td><td> 83.1812.502 </td><td> Starstedt </td></tr><tr><td> Greiner centrifugebuizen 50ml </td><td> 227261 </td><td> GBO </td></tr><tr><td> Gene Puiser / MicroPulser cuvetten, 0,2 cm afstand, 50 </td><td> 165-2086 </td><td> Bio-Rad </td></tr><tr><td> Petrischaal ronde PS 3 VENTS H14.2 Φ55 </td><td> 391-0895 </td><td> VWR International </td></tr><tr><td> Petrischaal vierkant met vier openingen polystyreen steriele door bestraling duidelijke 120mm </td><td> FB51788 </td><td> Fisher Scientific </td></tr><tr><td> Moonlight Blue lichtfilter </td><td> 183 </td><td> Lee Verlichting </td></tr></tbody></table>

genomic transformatie van de picoeukaryote<em&gt; ostreococcus tauri</em

Genomic Transformation of the Picoeukaryote Ostreococcus tauri

Veel voorkomende problemen belemmeren een snelle vooruitgang in de Plant Sciences zijn cellulair, weefsel en hele organisme complexiteit, en met name het hoge niveau van genomische redundantie die simpele genetica in hogere planten. De nieuwe modelorganisme Ostreococcus tauri de kleinste vrijlevende eukaryote tot dusver bekend, en heeft een sterk verminderde genoomgrootte en cellulaire complexiteit 1,2, blijkt uit de aanwezigheid van slechts een van de organellen (mitochondrion, chloroplast, Golgi stack) per cel en een genoom dat alleen ~ 8000 genen. Bovendien is de combinatie van unicellularity gemakkelijk cultuur een platform vatbaar chemische biologie benaderingen. Onlangs heeft Ostreococcus met succes gebruikt om fundamentele mechanismen ten grondslag liggen aan circadiane tijdwaarneming 3-6 te bestuderen. De resultaten van dit model organisme zijn niet alleen gevolgen voor planten wetenschap, maar ook zoogdieren biologie 7. Dit voorbeeld maakt hoe snel experimenten in eeneenvoudige eukaryoot van de groene lijn kan versnellen onderzoek in meer complexe organismen door het genereren van toetsbare hypothesen met behulp van methoden technisch mogelijk alleen in de achtergrond van de verminderde complexiteit. Kennis van een genoom en de mogelijkheid om genen te passen essentiële elementen zijn in een model soort. Genomic 1, transcriptoom 8 en 9 Proteoom informatie voor deze soort is vrij beschikbaar, terwijl de eerder gemelde 6,10 methoden om genetisch te transformeren Ostreococcus is bekend dat ze enkele laboratoria overal ter wereld. In dit artikel, de proefmethoden genetisch transformeren deze nieuwe modelorganisme overexpressie construeren door middel van elektroporatie worden beschreven in detail, alsmede de wijze van toevoeging van getransformeerde cellen bij lage percentage agarose om selectie van getransformeerde lijnen afkomstig van een een getransformeerde cel. Na de succesvolle toepassing van Ostreococcus naar circadiane onderzoek kan groeiende belangstelling voor Ostreococcus worden verwacht van diverse onderzoeksgebieden binnen en buiten Plant Sciences, met inbegrip van biotechnologische gebieden. Onderzoekers van een breed scala aan biologische en medische wetenschappen die werken aan geconserveerde biochemische pathways kunnen overwegen bezighouden met onderzoek in Ostreococcus, vrij van de genomische en organismaal de complexiteit van groter model soorten.

Dit artikel beschrijft genetische transformatie van de eencellige mariene algen<em&gt; Ostreococcus Tauri</em&gt; Door elektroporatie. Dit eukaryote organisme is een effectief model platform voor hogere planten, het bezitten van veel minder genomische en cellulaire complexiteit en zijn gemakkelijk vatbaar is voor zowel de celkweek en chemische biologie.

Genomic Transformatie van de Picoeukaryote<em&gt; Ostreococcus Tauri</em

Veelvoorkomende problemen die een snelle vooruitgang in de plantwetenschappen belemmeren, omvatten de complexiteit op cellulair, weefsel- en organisme-niveau, en in het bijzonder het hoge niveau van genomische ...

Het algemene doel van deze procedure is het genereren en selecteren van stabiele trenchgenische lijnen van het nieuwe modelorganisme, Austria Occus Tori, een mariene pico-eukaryote algensoort. Dit wordt bereikt door eerst celpellets te genereren uit 50 milliliters dichte ALG-cultuur per transformatie. De tweede stap is het mengen van de cellen met gelineariseerd DNA, gevolgd door het uitvoeren van de electroporatie.Nadat de getransformeerde cellen zijn verdund in vers medium en een nacht zijn geïncubeerd, voegt u 0,2% laag-smeltende agarose en een selectiemiddel toe, en giet u het mengsel in kleine Petrischalen. De laatste stap is het selecteren van de resulterende kolonies die zijn gegroeid na twee tot drie weken incubatie in constant blauw licht. Uiteindelijk worden selectie in vloeibaar medium en daaropvolgende moleculaire analyses, zoals PCR en southern blot, gebruikt om de succesvolle integratie van het construct in het genoom van de gegenereerde transgene lijnen aan te tonen.Het belangrijkste voordeel van het gebruik van dit organisme ten opzichte van bestaande modelorganismen zoals Arabidopsis is de aanzienlijke vermindering van de genomische complexiteit, waardoor regulatoire netwerken bestudeerd kunnen worden in een achtergrond met vrijwel geen genetische redundantie. Hoewel we in mijn laboratorium osteo occus hebben gebruikt om de circadiane klok van planten te bestuderen, kan het worden ingezet voor het onderzoek naar veel andere complexe cellulaire netwerken. De implicaties van deze techniek reiken dus veel verder dan het domein van de plantbiologie.Een visuele demonstratie van deze methode is cruciaal, omdat hoewel de individuele stappen vrij eenvoudig lijken, de juiste behandeling van de cellen en een efficiënte workflow essentieel zijn voor het verkrijgen van een goed resultaat. Delen van deze procedure worden gedemonstreerd door Culin Kish, een research assistent vanuit een laboratorium. Austria Occus-cellen worden gekweekt in kunstmatig zeewater of een SW; om een SW te bereiden, los je 40 gram per liter op.Zeezouten in gedeïoniseerd water tot een gemeten saliniteit van 30 delen per duizend of PPT. Voeg met behulp van een saliniteitsmeter verrijking, sporenelementen voor het medium en vitaminen toe, en filter vervolgens grofcellen van Austria cocus stam O TT H 95 in een SW onder constant licht door een 0,22 micron filter voor sterilisatie. In een plantengroeikamer uitgerust met een maanlichtblauw filter moet de lichtintensiteit dicht bij 20 micromoles per meter square per second liggen en de temperatuur worden gehandhaafd op 20 °C; de cellen vereisen geen constante agitatie, maar worden elke twee tot drie dagen geschud om aggregatie te voorkomen.Voor het onderhoud worden de cellen aseptisch gesubcultiveerd met een verdunning van 1:100 in vers SW elke zeven dagen. Elke transformatie vereist 50 milliliters cellen met een celdichtheid van 20 tot 30 × 10⁶ cellen per milliliter. Deze dichtheid moet vijf tot zeven dagen na de subcultivatie zijn bereikt.De geschatte celdichtheid en asymmetrie kunnen worden bepaald met een hemocytometer bij een minimale vergroting van 40×, of bij voorkeur worden bepaald via flowcytometrie. Een voorbeeld van gezonde versus ongezonde culturen wordt hier getoond.Elk bioparametrisch diagram toont side scatter of SSC op de y-as tegenover rode fluorescentie per cel of FL drie op de x-as. FL drie staat voor chlorofylrode fluorescentie en SSC is indicatief voor de relatieve celgrootte. Gezonde cellen vallen binnen het Austria Occus-venster, terwijl stervende cellen of contaminerende bacteriën buiten dit venster vallen.Idealiter zou meer dan 99% van de cellen in het Austria Occus-venster moeten vallen. Voor een efficiënte genetische transformatie is voor elke transformatie vijf microgram zuiver gelineariseerd plasmide-DNA nodig, met een concentratie van één microgram per microliter. In steriel gedeïoniseerd water is het plasmide gelineariseerd door een enzym dat knipt in de backbone van de gebruikte vector, maar niet in het transgen of het selectiegen.Houd de microcentrifugebuis met DNA op ijs, samen met een electroporatiecuvet van twee millimeter voor elke transformatie. Voor elke te transformeren cellijn is een controle zonder DNA noodzakelijk. Breng voor elke transformatie 50 milliliters cellen over naar een kegelvormige buis, voeg 0,1%onic acid F 68 toe en centrifugeer 10 minuten bij 8 000 ×g bij 10 °C.Om de cellen te pelletteren, dient het supernatant onmiddellijk te worden weggegooid en één milliliter Resus suspensiebuffer aan de cellen te worden toegevoegd. Resuspendeer de cellen door herhaaldelijk te pipetteren, breng ze over naar een microcentrifugebuis en centrifugeer 10 minuten bij 8.000 ×g bij 10 °C. Was de cellen, terwijl u snel werkt, na de tweede centrifugatie nogmaals.Knip een P 200-tip af om elk pellet te resuspenderen in 40 µL Resus suspensiebuffer. Voeg 40 µL van de geresuspendeerde cellen toe aan elke buis met gelineariseerd DNA op ijs. Meng voorzichtig en breng over naar de electroporatiecuvet.Plaats de cuvet in het electroporatietoestel. Stel de instellingen in op 6 kV per cm, 600 Ω en 25 µs. Voer de electroporatie van de cellen uit.Incubeer de cellen in de cuvetten gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Label tijdens deze tijd de weefkweekflessen en voeg 30 milliliters verse a SW toe aan elke fles. Neem één milliliter a SW uit elke fles en voeg dit voorzichtig toe aan de corresponderende vete; incubeer gedurende twee minuten.Verwijder vervolgens voorzichtig het a SW waarin zich nu de glo van cellen bevindt en pipetteer dit langzaam en voorzichtig direct in het a SW. In de kweekfles blijven de cellen doorgaans in een grote Glo. Let erop dat u de geaggregeerde cellen op dit moment niet schudt of verstoort. Laat de cellen één tot twee uur herstellen in de incubator.Resuspendeer tenslotte de cellen door de kolf handmatig te schudden. Op dit punt zouden de cellen vrij moeten resuspenderen en mogen er geen klontjes zichtbaar zijn. Laat de culturen de nacht na de elektroporatie herstellen in de incubator; autoclaveer de volgende dag een oplossing van 2,1% low melting point haase in dubbel gedestilleerd water in een fles met een roerstaafje.Houd het gesmolten bij 65 tot 90 °C in een groter bekerglas met water op een magnetische roerder met verwarmingsplaat. Bereid voor elke transformatie acht Petri-schalen van 50 mm en acht buisjes van 50 ml voor, die elk 9 ml SW plus bevatten. De vereiste selectie.Haal de getransformeerde cellen uit de incubator. Het meest uitdagende deel van deze procedure is het inbedden van de getransformeerde cellen in agros-gels met een laag percentage, zonder de integriteit van de cellen aan te tasten door blootstelling aan te veel hitte. Daarom is het belangrijk om de volgende stappen van de procedure snel en efficiënt uit te voeren in een steriele flowkast.Voeg één milliliter bijna kokende low melting point agarose toe aan de negen milliliter SW. Sluit één van de buisjes en keer deze om om te mengen. Voeg vervolgens 0,5 milliliter vers getransformeerde cellen toe. Sluit het buisje snel en keer het om om te mengen, en giet vervolgens de inhoud in de Petri-schaal.Herhaal dit proces met de resterende zeven buisjes en ga vervolgens over naar de volgende transformatiekolf. Laat de schaaltjes een uur openstaan in de laminaire flowkast zodat de array kan stollen. Dek de schaaltjes daarna af en breng ze voorzichtig over naar grote vierkante Petrischalen waar each vier ronde schaaltjes in passen.Omdat de schaaltjes niet volledig waren gestold, is de gel zeer fragiel. Wees voorzichtig om de gel niet te breken bij het hanteren van de schaaltjes. Seal de vierkante schaaltjes met parafilm en plaats ze in de incubator.Zodra er kolonies verschijnen, gebruikt u een pipet van 200 µL met cutoff-tips. Om kolonies in een steriele zuurkast te plukken, selecteert u simpelweg vrije kolonies en zuigt u een groene kolonie op. Zorg ervoor dat er geen cellen van naburige kolonies worden meegenomen.Breng de cellen over naar twee milliliters vloeibaar medium dat de selectie bevat. Meng in een 24-wells plaat door herhaaldelijk op en neer te pipetteren. Nadat er 24 of 48 kolonies per transformatie zijn geselecteerd, worden de platen afgesloten met parafilm en overgebracht naar de incubator.Overdracht na een week van 100 µL uit elke well naar 2 mL vers SW met selectie. Laat deze in een 24-wells plaat nog zeven dagen groeien. De overlevende cellijnen kunnen vervolgens worden gebruikt voor verdere studies door transformatie met 5 µg gelinieard DNA.Met gebruik van dit protocol verschijnen er na twee tot drie weken 20 tot 60 kolonies per transformatieplaat. Ongeveer 80% van de geplukte kolonies werd positief geselecteerd op basis van antibioticaresistentie in vloeibaar medium en werd gebruikt in daaropvolgende studies na toepassing van deze procedure.Andere methoden zoals PCR of Southern blot kunnen vervolgens worden uitgevoerd om het aantal inserties en de locatie van het trench-gen na de ontwikkeling ervan te verifiëren. Deze techniek stelde onderzoekers in de velden van de circadiane klok en de celcyclus in staat om de complexe componenten en gedragingen van hun respectieve systemen te begrijpen in dit nieuwe modelorganisme, Austria Caucus. Tori. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u transgene Austria caucus-lijnen kunt genereren.

genomic-transformation-of-the-picoeukaryote-ostreococcus-tauri

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Het protocol beschrijft het gebruik van de eiwitexpressie methylotrofe...

Expressie van recombinante eiwitten in het methylotrofe gist Pichia pastoris</em

Systematische, grootschalige synthetische genetische (gen-gen of epistase) interactie schermen kunnen worden gebruikt om genetische redundantie en route overspraak verkennen. Hier hebben we een high-throughput kwantitatieve synthetische genetische scala screening technologie te beschrijven, genoemd eSGA door ons ontwikkelde voor het ophelderen van epistatisch relaties en het verkennen van genetische interactie netwerken...

Het in kaart brengen Bacteriële Functionele Netwerken en Wegen in<em&gt; Escherichia Coli</em&gt; Gebruik van synthetische Genetische Arrays

Source: Stefan, A., et al., The Multifaceted Benefits of Protein Co-expression in Escherichia coli. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the procedure for transforming Escherichia coli with a plasmid carrying an antibiotic resistance gene, including cell preparation, electroporation, recovery, and selection of transformants.

Preparation and Transformation of Bacteria Using High-Voltage Electroporation

Enterobacter sp. YSU groeit in glucose minimale zouten medium. Auxotrofen worden gegenereerd door transformatie met een transposome die willekeurig plaatst zichzelf in het gastheergenoom. Mutanten worden gevonden door replica plating van complexe medium tot minimaal medium. Onderbroken genen worden geïdentificeerd door gen-rescue en sequencing.

Generatie Enterobacter Sp. YSU auxotrofen behulp Transposon Mutagenesis

Eiwit co-expressie is een krachtige alternatief voor de reconstitutie in vitro van eiwitcomplexen, en helpt bij het uitvoeren van biochemische en genetische tests in vivo. Hier rapporteren we over het gebruik van eiwit co-expressie in Escherichia coli om eiwitcomplexen te verkrijgen en om de mutatiefrequentie van cellen af te stemmen.

De veelzijdige voordelen van Protein Co-expressie in<em&gt; Escherichia coli</em

Biolistische transformatie een methode om stabiele integratie van DNA genereren in het genoom van de opportunistische pathogeen Cryptococcus neoformans via homologe recombinatie. We zullen biolistische transformatie van een construct, waarin het gen codeert acetaat kinase gefuseerd met de fluorescerende tag mCherry in C. neoformans is aangetoond.

Biolistische Transformatie van een TL Tagged Gene in de Opportunistische schimmelpathogeen<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

Hier voorgesteld is een enkelvoudige beschrijving van technieken die kunnen worden gebruikt voor het ontwikkelen, veranderen, beheren en testen heterologe eiwitexpressie van de probiotische gist Saccharomyces boulardii.

Transformatie van probiotische gist en hun herstel van gastro-intestinale Immune Tissues Na orale sondevoeding in Muizen

Synthetische biologie waardoor de engineering van eiwitten met ongekende eigenschappen met behulp van het co-translational inbrengen van niet-canonieke aminozuren. Hier, presenteerden we hoe een spectraal rood-verschoven variant van een GFP-type fluorophore met roman fluorescentie spectroscopische eigenschappen, genoemd "goud" fluorescent proteïne (GdFP), wordt geproduceerd in E. coli via selectieve druk opneming (SPI).

Engineering 'Golden' fluorescentie door selectieve druk opneming van niet-canonieke aminozuren en eiwit analyse door massaspectrometrie en fluorescentie

Hier presenteren we protocollen voor het werken met Limosilactobacillus reuteri DSM20016, met details over groei, plasmidetransformatie, kolonie-PCR, fluorescerende reporter-eiwitmeting en beperkte plasmide mini-prep, evenals veelvoorkomende problemen en probleemoplossing. Deze protocollen maken het mogelijk om reportereiwitten in DSM20016 te meten, of bevestiging via kolonie-PCR als er geen reporter bij betrokken is.

Methoden voor elektroporatie en transformatie bevestiging in Limosilactobacillus reuteri DSM20016

In dit manuscript bieden we een uitgebreid protocol voor het beoordelen van de antibioticaoverleving voor Pseudomonas aeruginosa en Staphylococcus aureus, waarbij plasmiden worden getransformeerd in P. aeruginosa en S. aureus om reporterstammen te creëren en fenotypische varianten, zoals persisters, te visualiseren door time-lapse epifluorescentiemicroscopie.

Time-Lapse Epifluorescentiemicroscopie Beeldvorming van Pseudomonas aeruginosa en Staphylococcus aureus Heterogene fenotypes

Dit protocol maakt gebruik van een bioluminescente reporter, waardoor metingen van transcriptionele activiteit in Saccharomyces eubayanus mogelijk zijn om de overgang van glucose naar maltose te volgen, waardoor real-time analyse van metabole aanpassingen mogelijk is en stamoptimalisatie voor industriële fermentatie onder diverse omstandigheden wordt ondersteund.

In vivo Monitoring van transcriptionele activiteit tijdens metabole overgang met behulp van een bioluminescente reporter in gist

Leer genetische transformatie van de mariene alga Ostreococcus tauri door elektroporatie. Deze methode maakt stabiele transgene lijnen voor onderzoek naar plantbiologie en celnetwerken mogelijk.

Genomic Transformatie van de Picoeukaryote

Meer video's verkennen