Name: Modeling Colitis geassocieerde kanker met Azoxymethaan (AOM) en dextransulfaat natrium (DSS) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 37 s
Description: Leer een protocol voor colitis-geassocieerde kanker in muizen met azoxymethaan en dextransulfaat natrium. Deze methode genereert betrouwbaar tumoren met morfologische en moleculaire overeenkomsten met humane kanker.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd deels gefinancierd door DK089016 en L30 RR030244 (MAC), CA153036 (AS) en P30-DK52574 (aan de Washington University Maag Lever Darm Onderzoek Core). AIT was een Howard Hughes Medical Institute Medical Research Training Fellow.

1. Colitis-geassocieerde kanker Inductie <ol><li> Braaklegging kooien van geslacht en leeftijd gematchte 6-8 weken oude muizen om te worden gebruikt voor experimentele en controlegroepen. Muizen kunnen individueel worden gelabeld met staart markeringen of oor clips. </li><li> Op dag 0, record basislijn gewichten en elke muis intraperitoneaal (IP) met 10 mg / kg van AOM werkoplossing (1 mg / ml in isotonische zoutoplossing verdund van 10 mg / ml voorraadoplossing in dH2O bewaard bij -20 ° C) injecteer . Gebaseerd op ervaring, kan deze dosis worden aangepast tussen 7-14 mg / kg en / of het begin van het experiment herhaald. </li></ol> Let op: AOM is een vluchtig genotoxisch agens en moeten zorgvuldig behandeld worden volgens de begeleidende MSDS. Verdunningen bereid in een chemische kap, op ijs, en weggegooid na instelling specifieke protocollen. <ol start="3"><li> Een 2,5% (2,5 g/100 ml) DSS oplossing in gedestilleerd water en passeren door een 0,22 urn celluloseacetaat fIlter door vacuüm. Deze dosis kan worden aangepast tussen 1-3,5%, afhankelijk van muizenstam en milieu. Na bereiding DSS oplossing gekoeld bewaard tot 1 week. </li><li> Op dag 7, de levering DSS oplossing voor muizen als hun drinkwater. Ongeveer 250 ml / kooi nodig telkens nieuwe DSS wordt maximaal 5 muizen / kooi, maar deze zijn slechts schattingen en afhankelijk van het type water flessen gebruikt in een dierenverblijf. </li><li> Een continue aanvoer van DSS gedurende zeven dagen verschaffen mogen DSS oplossing vervangen in schone flessen driemaal (elke 2-3 dagen) tijdens deze periode. Sommige onderzoekers meten de hoeveelheid DSS vóór geconsumeerd vervangen door nieuwe oplossing als maat voor blootstelling. </li><li> Op dag 14, schakelt kooien terug naar standaard drinkwater voor twee weken. </li><li> Herhaal stappen (1,4) - (1,6) op dagen 28 en 49 een tweede en derde cyclus van DSS verschaffen. Een DSS &quot;cyclus&quot; bestaat uit een week van DSS in het drinkwatergevolgd door 2 weken regelmatig (geautoclaveerd) water. </li></ol> 2. Klinische Beoordeling Colitis en tumorprogressie <ol><li> Muizen worden afgewogen / geobserveerd 2-3 keer per week. Procent gewichtsverlies opzichte van de basislijn wordt gebruikt als een surrogaat maat voor de ernst colitis. Regelmatige evaluaties van rectale bloedingen, diarree, of een prolaps vertonen kan worden gemaakt, afhankelijk van experimentele doelen en gerapporteerd overeenkomstig diverse scoringssystemen. 9, 10 </li><li> Een gewichtsverlies van 10% samen met 2-3 dagen diarree en rectaal bloeden te verwachten in de week na een volledige cyclus van DSS (dagelijkse observatie kan nuttig zijn tijdens deze onmiddellijk na DSS periode). </li></ol> Het is mogelijk dat sommige muizen niet vorderen; muizen verlies groter dan 20% van hun gewicht minder kans om te overleven en kunnen vroege euthanasie vereisen. Een enkele IP injectie van 0,5 - 1,0 ml zoutoplossing in een dergelijke muizen kan een nuttig ondersteunend maatregel richting van een correctie flui<html> d volume verloren als gevolg van diarree. 3. Murine Endoscopie (optioneel) <ol><li> Endoscopie na de tweede of derde cyclus van DSS kan worden uitgevoerd om tumorgroei in vivo te bevestigen vóór offeren. De AOM / DSS model is betrouwbaar in producerende tumoren, deze stap ligt doorgaans niet nodig. Slechts enkele muizen geëvalueerd moet met deze methode, omdat het de mogelijkheid om muis tumoren verstoren 11. </li><li> Verdoof de muis met inhalatie-of injecteerbare sedatie. </li><li> Na muis is verdoofd, zet de muis op een vlakke plaat met tape aan de staart en borst. </li><li> Advance de muizen-endoscoop in de muis rectum zachtjes met zoutoplossing op te blazen en irrigeren om intraluminale uitzicht te verbeteren en te verwijderen fecale inhoud. (Merk op dat endoscopie ook kunnen worden uitgevoerd met lucht inblazing als alternatief voor zout en deze techniek kan bieden verbeterde visualisatie van de tumor. 12) </li></ol>e &quot;&gt; 4. Mouse Offer en Colon Harvesting <ol><li> Op dag 70, moet elke AOM / DSS behandeld muis herbergen meerdere dikke darm tumoren en klaar te zijn voor de beoordeling. Deze datum kan worden uitgesteld weken tot maanden, indien grotere tumoren gewenst zijn. (Van de nota, kan muizen met verzakte ernstige rectale moeten vroeg worden gedood, om extra pijn te vermijden dieren per institutionele Dier Experimenten Commissies.) </li><li> Voorafgaand aan necropsie verricht, individueel euthanaseren muizen met isofluraan en cervicale dislocatie (of een andere institutioneel-goedgekeurde methode). Eindgewicht en andere metingen kunnen op dit moment. </li><li> Leg de muis met de ventrale zijde blootgesteld op een snijplank. Bedek de buik met 70% ethanol om haren voorkomen van besmetting van de abdominale inhoud tijdens extractie van het colon. </li><li> Gebruik een tang om de middellijn van de buik grijpen en een kleine incisie aan het buikvlies bloot te maken. </li><li> Breid deze incisie aan elke kant van de buik langs de ribben Margin. </li><li> Knip het door de bekken, zodat de colon kan worden geoogst naar de anorectale knooppunt. Dit is belangrijk omdat DSS colitis letsel het grootst bij het distale rectum en dienovereenkomstig is het gebied van de grootste tumorontwikkeling. </li><li> Andere weefsels zoals mesenteriale lymfeklieren kunnen ook worden geoogst op dit moment. </li></ol> 5. Voorbereiden van de Colon voor Macroscopische Analyse <ol><li> Met een 18G naald gavage aan een 5 ml spuit, spoel de colon met ijskoude fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) zodat vloeistof verlaat de fysiologische richting. Als colon weefsel wordt gebruikt voor RNA of eiwit gebaseerde analyse kan koud worden gehouden door gebruik voorgekoeld werk trays. </li><li> Lengterichting Open de gespoelde dubbele punt langs de mesenterium en verf op de koude bak. Tumoren beter zichtbaar wanneer de dikke darm is geplaatst op een donker oppervlak. Als alternatief kan 1% Alcian blue kleurstof worden toegepast t markerenumors. Beoordeel tumor aantal en de grootte met een liniaal of digitale schuifmaat. </li><li> Kleine delen van tumor en aangrenzend normaal weefsel kunnen worden uitgesneden op dit punt voor verdere analyse door RNA, eiwit of immunohistochemische (IHC) methodes, zodat een deel van de resterende colon voor histologische beoordeling. </li></ol> Digitale fotografie van de bruto colon specimens onmiddellijk na stap 5.2 kan nuttig zijn voor nauwkeurige bepaling van tumorlast, vooral wanneer grote delen van de dubbele punten uitgesneden voor andere vormen van analyse zoals hierboven beschreven. Tumorlast (%) kan worden berekend als de tumor gebied / totale colon gebied met behulp van gratis software zoals ImageJ. 6. Voorbereiden van de Colon voor histologische beoordeling <ol><li> Breng 10% formaline de resterende colon op de koude bak via een spuit of vinger. Zodat het weefsel gedurende ten minste 30 sec vast op deze wijze vergemakkelijkt overdracht aan de fixatie bekken. Zorg ervoor dat resterende formaline is wiped uit voordat u het schilderen van een nieuw geopend dubbele punt op dezelfde lade. </li><li> Overdracht dubbele punten om een ​​bassin gevuld met 10% formaline en vastpinnen aan de randen. </li><li> Na 3 uur van fixatie, overdracht colons 70% ethanol. Dubbele punten kan worden bewaard in 70% ethanol voor onbepaalde tijd. </li><li> Drie longitudinale secties van de dikke darm (proximale, mid, distaal / rectum) kan worden gestabiliseerd in 2% agar en ingediend voor paraffine inbedding. Verzekeren dat de proximale en distale colon colon / rectum zijn georiënteerd op uniforme wijze voor elke muis. </li><li> Dysplasie, crypte schade en ontsteking worden beschreven en beoordeeld door een ervaren persoon volgens eerder gepubliceerde protocollen. 10, 13-15 Muizen kunnen voorafgaand aan dag 70 opgeofferd wanneer de onderzoeker geïnteresseerd is in de beginfase van dysplastische events. </li></ol> 7. Representatieve resultaten De AOM / DSS model beschreven kan de onderzoeker betrouwbaar colon tumoren in muizen te genereren.Tumorgroei in dit model wordt rechtstreeks beïnvloed door de bijbehorende ontstekingsproces. Colitis ernst moeten klinisch worden gecontroleerd aan de hand van het gewichtsverlies en de aanwezigheid van diarree / hematochezia (figuur 2). Deze tekenen van ziekte-activiteit neiging om te beginnen op dag 5 van de DSS-cyclus en vier of meer dagen na DSS verwijderd. In zeldzame gevallen kan muizen met een grote rectale tumor last te ontwikkelen rectale prolaps. Na de tweede of derde DSS cyclus diarree kan worden hardnekkig. Typisch tumoren aanwezig en herkenbaar murine colonoscopie voor de derde cyclus van DSS (figuur 3). Extra tijd en een derde tijdens DSS resulteert in grotere tumoren op de oogst (figuur 4). Gebruik van een plaatselijk Alcian blue vlek kan worden gebruikt om tumoren (figuur 5) te markeren. Foto&#39;s van colontumoren helpt bij het genereren tumormetingen die kunnen worden gebruikt om kwantitatief vergelijken tumor productie en omvangtussen experimentele groepen (Figuur 6). Gefixeerde en in paraffine ingebedde monsters colon kunnen dan geëvalueerd voor histologie of met behulp van immunohistochemische kleuring (Figuur 7 en 8). <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig1.jpg" alt="Figuur 1" /> Figuur 1. Schema van de AOM en DSS administratie. AOM (10 mg / kg) geïnjecteerd op dag 0. Aan het begin van de tweede week (dag 7) wordt 2,5% DSS oplossing toegediend aan muizen in hun drinkwater. Zeven dagen na DSS wordt gevolgd door twee weken geautoclaveerd water. Twee extra cycli van DSS worden toegediend vóór offeren. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig2.jpg" alt="Figuur 2" /> Figuur 2. Gewicht muis opzichte van de uitgangswaarde bij AOM en DSS administratie. Merk op dat in de week elke DSS-cyclus volgen, muizen los<html> e 5-10% van hun lichaamsgewicht. Gewichtsverlies in dit experiment een surrogaat marker voor colitis ernst. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig3.jpg" alt="Figuur 3" /> Figuur 3. Zicht op tumoren in het distale colon via murine endoscopie op dag 50 van AOM / DSS behandeling. Let op de multiple polypoid massa belemmeren het lumen van het distale colon (b, c) in vergelijking met de normale colon (a). <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig4.jpg" alt="Figuur 4" /> Figuur 4. Lengterichting geopend muis colon illustreert bruto ontstaan ​​van tumoren. Neem dan het tumorlast in het distale colon / rectum (linker bovenste afbeelding) en de karakteristieke rugated textuur van de proximale colon (rechtsboven beeld) met weinig tumorgroei. Een close-up van het distale colon laat talrijke tumoren van verschillende afmetingen (zie hieronder). ove_content &quot;fo: keep-together.within-page =&quot; always &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig5.jpg" alt="Figuur 5" /> Figuur 5. Tumoren benadrukt door toepassing van Alcian blauwe vlek. Merk op hoe de kleurstof de normale textuur van de dikke darm en de grenzen van elk tumor benadrukt. Dergelijke vlekken kan behulpzaam zijn bij de precieze meting van de tumor gebieden door vorst of digitale meting. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig6.jpg" alt="Figuur 6" /> Figuur 6. Representatieve verdeling van het gemiddelde aantal tumoren per muis behandeld met AOM / DSS. Let op de meeste tumoren zich bevinden in de distale colon en &lt;2 mm. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig7.jpg" alt="Figuur 8" /> Figuur 7. Paraffine ingebedde langsliggers colon in cassette (boven) eend op schuifsysteem H &amp; E vlek (onder). Merk op dat resterende Alcian blauwe vlek niet interfereert met H &amp; E kleuring. Een grote tumor wordt omcirkeld op de dia (omcirkeld). De benamingen &quot;distale&quot;, &quot;midden&quot; en &quot;proximaal&quot; worden door de gehele colon snijden in tweederde van de blindedarm en de anus. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig8.jpg" alt="Figuur 8" /> Figuur 8. Representatieve histologie van een tumor gevolg van AOM / DSS-toediening in de distale colon. H &amp; E, BrdU en β-catenine gekleurde coupes bij 50X (bovenste paneel) en 400X (onderste paneel) tonen respectievelijk dysplastische veranderingen Soortgelijke menselijke adenocarcinomen van het colon.

<ol><li>Ekbom, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ulcerative+colitis+and+colorectal+cancer.+A+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Ulcerative colitis and colorectal cancer. A population-based study.</a> N. Engl. J. Med. 323, 1228-1233 (1990).</li>
<li>Terzic, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+colon+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Inflammation and colon cancer.</a> Gastroenterology. 138, 2101-2114 (2010).</li>
<li>Ullman, T. A., Itzkowitz, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+inflammation+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Intestinal inflammation and cancer.</a> Gastroenterology. 140, 1807-1816 (2011).</li>
<li>Okayasu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysplasia+and+carcinoma+development+in+a+repeated+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gastroenterol.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Dysplasia and carcinoma development in a repeated dextran sulfate sodium-induced colitis model.</a> J. Gastroenterol. Hepatol. 17, 1078-1083 (2002).</li>
<li>Kanneganti, M., Mino-Kenudson, M., Mizoguchi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+colitis-associated+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Animal models of colitis-associated carcinogenesis.</a> J. Biomed. Biotechnol. 342637, (2011).</li>
<li>Neufert, C., Becker, C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+inducible+mouse+model+of+colon+carcinogenesis+for+the+analysis+of+sporadic+and+inflammation-driven+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">An inducible mouse model of colon carcinogenesis for the analysis of sporadic and inflammation-driven tumor progression.</a> Nat. Protoc. 2, 1998-2004 (2007).</li>
<li>Tanaka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+inflammation-related+mouse+colon+carcinogenesis+model+induced+by+azoxymethane+and+dextran+sodium+sulfate%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">A novel inflammation-related mouse colon carcinogenesis model induced by azoxymethane and dextran sodium sulfate.</a> Cancer Sci. 94, 965-973 (2003).</li>
<li>De Robertis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+AOM%2FDSS+murine+model+for+the+study+of+colon+carcinogenesis%3A+From+pathways+to+diagnosis+and+therapy+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Carcinog%22%5BJournal%5D)">The AOM/DSS murine model for the study of colon carcinogenesis: From pathways to diagnosis and therapy studies.</a> J. Carcinog. 10, 9(2011).</li>
<li>Wirtz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nat. Protoc. 2, 541-546 (2007).</li>
<li>Cooper, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinicopathologic+study+of+dextran+sulfate+sodium+experimental+murine+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Clinicopathologic study of dextran sulfate sodium experimental murine colitis.</a> Lab Invest. 69, 238-249 (1993).</li>
<li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+colonoscopy+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat. Protoc. 1, 2900-2904 (2006).</li>
<li>Becker, C., Fantini, M. C., Wirtz, S., Nikolaev, A., Kiesslich, R., Lehr, H. A., Galle, P. R., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+colitis+and+colon+cancer+development+in+mice+using+high+resolution+chromoendoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of colitis and colon cancer development in mice using high resolution chromoendoscopy.</a> Gut. 54, 950-954 (2005).</li>
<li>Shaker, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epimorphin+deletion+protects+mice+from+inflammation-induced+colon+carcinogenesis+and+alters+stem+cell+niche+myofibroblast+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Epimorphin deletion protects mice from inflammation-induced colon carcinogenesis and alters stem cell niche myofibroblast secretion.</a> J. Clin. Invest. 120, 2081-2093 (2010).</li>
<li>Boivin, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+mouse+models+of+intestinal+cancer%3A+consensus+report+and+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Pathology of mouse models of intestinal cancer: consensus report and recommendations.</a> Gastroenterology. 124, 762-777 (2003).</li>
<li>Cooper, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysplasia+and+cancer+in+the+dextran+sulfate+sodium+mouse+colitis+model.+Relevance+to+colitis-associated+neoplasia+in+the+human%3A+a+study+of+histopathology%2C+B-catenin+and+p53+expression+and+the+role+of+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Dysplasia and cancer in the dextran sulfate sodium mouse colitis model. Relevance to colitis-associated neoplasia in the human: a study of histopathology, B-catenin and p53 expression and the role of inflammation.</a> Carcinogenesis. 21, 757-768 (2000).</li>
<li>Yoshida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+forkhead+box+M1+transcription+factor+contributes+to+the+development+and+growth+of+mouse+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">The forkhead box M1 transcription factor contributes to the development and growth of mouse colorectal cancer.</a> Gastroenterology. 132, 1420-1431 (2007).</li>
<li>Suzuki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain+differences+in+the+susceptibility+to+azoxymethane+and+dextran+sodium+sulfate-induced+colon+carcinogenesis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Strain differences in the susceptibility to azoxymethane and dextran sodium sulfate-induced colon carcinogenesis in mice.</a> Carcinogenesis. 27, 162-169 (2006).</li>
<li>Mahler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am. J. Physiol. 274, 544-551 (1998).</li>
<li>Nambiar, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+analysis+of+azoxymethane+induced+colon+tumors+in+inbred+mice+commonly+used+as+transgenic%2Fknockout+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Preliminary analysis of azoxymethane induced colon tumors in inbred mice commonly used as transgenic/knockout progenitors.</a> Int. J. Oncol. 22, 145-150 (2003).</li>
<li>Tanaka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colorectal+carcinogenesis%3A+Review+of+human+and+experimental+animal+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Carcinog%22%5BJournal%5D)">Colorectal carcinogenesis: Review of human and experimental animal studies.</a> J Carcinog. 8, (2009).</li>
<li>Ciorba, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+IDO-1+by+immunostimulatory+DNA+limits+severity+of+experimental+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Induction of IDO-1 by immunostimulatory DNA limits severity of experimental colitis.</a> J. Immunol. 184, 3907-3916 (2010).</li>
<li>Kerr, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dextran+sodium+sulfate+inhibition+of+real-time+polymerase+chain+reaction+amplification%3A+A+poly-A+purification+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm.+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Dextran sodium sulfate inhibition of real-time polymerase chain reaction amplification: A poly-A purification solution.</a> Inflamm. Bowel Dis. 18, 344-348 (2012).</li>
<li>Tang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((is+required+for+resection-induced+changes+in+apoptosis%2C+proliferation%2C+and+members+of+the+extrinsic+cell+death+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">is required for resection-induced changes in apoptosis, proliferation, and members of the extrinsic cell death pathways.</a> Gastroenterology. 126, 220-230 (2004).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Behandeling van muizen met AOM en DSS snel en doeltreffend modellen humane colitis-geassocieerde kanker. Hypothesen betreffende erfelijke factoren die colitis-geassocieerde kankers kunnen gemakkelijk worden bestudeerd met genetisch gemanipuleerde muizen. 13, 16 Ook het effect van farmacologische targets in colitis-geassocieerde kanker kan worden bestudeerd door gebruik wild-type muizen. Hoewel dit model wordt zeer gewaardeerd door degenen die geïnteresseerd zijn in de studie van d...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> C57BL/6J-muizen </td><td> Jackson Laboratory </td><td> 000664 </td><td></td></tr><tr><td> Azoxymethaan (AOM) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A5486-100MG </td><td> Stockoplossing: verdund tot 10 mg / ml in gedestilleerd water worden bewaard bij -20 ° C van 0,5 - 1 ml aliquots. Werken: verdun voorraad tot 1 mg / ml in een isotone (0,9%) zoutoplossing </td></tr><tr><td> Dextransulfaat natrium (DSS) </td><td> Tdb Consultancy </td><td> DB001 </td><td> MW 40 kDa (36-50 kDa uit andere bronnen zijn aanvaardbaar dezelfde partij moeten worden gebruikt voor een experiment) 6 </td></tr><tr><td> Coloviewminiendoscopic systeem </td><td> Karl Storz </td><td> Meervoudig </td><td> Zie Becker et al.. Voor gedetailleerde uitleg van apparatuur en installatie. 11 </td></tr><tr><td> TPP Snelle FilterMax 500 ml fles-Filter, 0,22 pm PES </td><td> Midwest Scientific </td><td> TP99500 </td><td> Elke standaard weefselkweek filter aanvaardbaar </td></tr><tr><td> Ethyl Alcohol 200 Proof ASC / USP </td><td> Farmaco-AAPER (of andere) </td><td> 11ACS200 </td><td> Verdun tot 70% in gedestilleerd water </td></tr><tr><td> Isofluraan, USP </td><td> Butler Animal Health Supply </td><td> 4029405 </td><td> Plaats de muis in glazen pot met een gaasje of een klein doek gedrenkt in anesthesie </td></tr><tr><td> 18G Rechte Gavage Naald </td><td> Braintree Scientific </td><td> N-008 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) </td><td> SigmaAldrich </td><td> P5493 </td><td> Verdun tot 1X (0,01 M) in gedestilleerd water </td></tr><tr><td> Koude Tray (Tissue Tek II Cold Plate) </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9491941 </td><td> Bewaren bij -20 ° C </td></tr><tr><td> ImageJ Software </td><td> NIH (gratis download) </td><td></td><td> <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/ij/</a> </td></tr><tr><td> Formaldehyde (37%) </td><td> Fisher Scientific </td><td> F79-500 </td><td> Verdun tot 10% in PBS </td></tr><tr><td> BD Bacto Agar </td><td> Fisher Scientific </td><td> DF0140-01-0 </td><td> Gebruik kookplaat tot 2%-oplossing te creëren in gedestilleerd water </td></tr><tr><td> Miltex Eye Dressing tang </td><td> MedPlus Inc </td><td> 18 tot 780 </td><td></td></tr><tr><td> Miltex Eye Schaar </td><td> MedPlus Inc </td><td> 18-1.430 </td> &lt;td&gt; Gebogen punten schade aan dikke darm te voorkomen tijdens het openen. </td></tr><tr><td> Alcian Blue 8GX (poeder) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A5268 </td><td> Voeg 1 g poeder in 100 ml 3% azijnzuur (3 ml ijsazijn + 97 ml gedestilleerd water) </td></tr><tr><td> 1 ml tuberculine spuit met aangehechte 26 G x 3/8 in intradermale conische naald </td><td> BD </td><td> 305946 </td><td> Voor injectie van AOM </td></tr></tbody></table>

modeling colitis geassocieerde kanker met azoxymethaan (aom) en dextransulfaat natrium (dss)

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS)

Personen met inflammatoire darmziekte (IBD) zoals ziekte van Crohn (CD) en colitis ulcerosa (UC) hebben een verhoogd risico op colorectale kanker (CRC) over gezonde individuen. Dit risico is evenredig met de duur en mate van de ziekte, met een cumulatieve incidentie zo hoog als 30% in personen met langdurige UC met wijdverspreide colon bij 1. Colonic dysplasie in IBD en colitis geassocieerde kanker (CAC) worden verondersteld te ontwikkelen als gevolg van herhaalde cycli van epitheelcel en herstel terwijl deze cellen baden in een chronische inflammatoire cytokine milieu. 2 Terwijl spontane colitis-geassocieerde kankers delen de eigenschap dat adenocarcinomen, wordt de sequentie van de onderliggende moleculaire gebeurtenissen verondersteld anders. 3 Dit onderscheid pleit de noodzaak van specifieke diermodellen voor CAC. Verschillende muismodellen momenteel bestaan ​​voor de studie van CAC. Dextraansulfaat Sodium (DSS), een middel met directe toxische effecten op het colonepitheel, worden toegediend in het drinkwater aan muizen in meerdere cycli een chronische inflammatie maken. Bij voldoende tijd, zullen sommige van deze muizen tumoren ontwikkelen. 4 tumor ontwikkeling versneld in dit model, indien toegediend in een pro-carcinogene setting. Deze omvatten muizen met genetische mutaties in tumorigenese pathways (APC, p53, MSH2), en muizen voorbehandeld met genotoxische agentia (azoxymethane [AOM], 1,2-dimethylhydrazine [DMH]). 5 De combinatie van DSS met AOM als een model voor colitis bijbehorende kanker heeft aan populariteit gewonnen voor zijn reproduceerbaarheid, potentie, lage prijs, en gebruiksgemak. Hoewel ze hebben een gedeelde mechanisme is AOM bevonden meer potent en stabiel in oplossing dan DMH. Terwijl tumorontwikkeling in andere modellen vereist in het algemeen enkele maanden muizen geïnjecteerd met AOM en vervolgens behandeld met DSS ontwikkelen adequate tumoren in eens slechts 7-10 weken. 6, 7 Tenslotte AOM en DSS kan worden toegediend aan muizen van elke genetische achtergrond (knock-out transgene, etc.) zonder kruisingen een specifieke tumorigene stam. Hier, demonstreren we een protocol voor ontsteking aangedreven colon tumorigenese in muizen met behulp van een enkele injectie van AOM gevolgd door drie zevendaagse cycli van DSS gedurende een periode van 10 weken. Dit model induceert tumoren met histologische en moleculaire veranderingen vertoont die voorkomt in de menselijke CAC en geeft een zeer waardevol model voor de studie van oncogenese en chemopreventie in deze ziekte. 8

We tonen een protocol waarbij toediening van het genotoxisch azoxymethaan (AOM), gevolgd door drie cycli van het pro-ontstekingsmiddel dextransulfaat natrium (DSS) snel en efficiënt genereert colon tumoren in muizen met morfologische en moleculaire overeenkomsten met die van menselijke colitis geassocieerde kanker.

Modeling Colitis geassocieerde kanker met Azoxymethaan (AOM) en dextransulfaat natrium (DSS)

Personen met inflammatoire darmziekten (IBD), zoals de ziekte van Crohn (CD) of colitis ulcerosa (UC), hebben een verhoogd risico op de ontwikkeling van colorectaal...

Op dag nul werden muizen geïnjecteerd met azoxymethaan of een OM in de volgende week. Hun drinkwater wordt vervangen door een oplossing die dextraansulfaatnatrium of DSS bevat. In week drie krijgen de muizen gedurende de volgende twee weken water.Deze DSS-watercyclus wordt nog twee keer herhaald. Na de tweede DSS-cyclus kunnen de muizen op tumoren worden gecontroleerd middels mirroring endoscopie.Na week 10 worden de muizen geofferd en worden de dikke darmen geoogst. De dikke darmen worden gespoeld en longitudinaal geopend. De dikke darmen worden beoordeeld op tumorgrootte en het aantal tumoren.Een longitudinale doorsnede van het colon in derden kan worden ingebed en ingediend voor histologische analyse. Met behulp van lichtmicroscopie kunnen tumoren worden geteld en geclassificeerd. Wij demonstreren een protocol waarin het genotoxische agens a OM wordt toegediend, gevolgd door drie cycli van het pro-inflammatoire agens.DSS induceert snel en consistent colontumoren bij muizen met morfologische en moleculaire gelijkenissen met tumoren die worden gezien bij menselijke colitis-geassocieerde kanker. Label de muizen individueel met staartmarkeringen of oorknippen op dag nul, noteer het

modeling-colitis-associated-cancer-with-azoxymethane-aom-dextran

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Dextransulfaat natrium (DSS) toegediend in het drinkwater is een gevestigde murine inflammatoire letsel model van acute colitis. Dit protocol beschrijft de methode voor DSS behandeling en de preparatie van de weefsels.

Murine Colitis Modeling met dextraansulfaat Natrium (DSS)

Experimentele modellen van inflammatoire darmziekte hebben ons de complexe aangeboren en adaptieve immuunrespons geassocieerd met pathogenese te onderzoeken. Met behulp van histologische scoring, kwantificering van pro-inflammatoire cytokines en myeloperoxidase activiteit, kan men beginnen met deze reacties gezien bij inflammatoire darmziekten te beoordelen.

Onderzoeken darmontsteking in DSS-geïnduceerde Model van IBD

This video describes the protocol for generating a patient-derived orthotopic xenograft colorectal cancer mouse model to study the progression of colorectal cancer cells in non-obese diabetic/severe combined immunodeficiency (NOD/SCID) mice. This murine model helps in understanding primary tumor growth and metastases pattern.

Generating PDOX Mouse Model of Colorectal Cancer: Studying Progression of Colorectal Cancer in a Murine Model

This video demonstrates a technique to generate a chemical-induced murine model of colitis — an inflammatory bowel disease. The mouse is allowed to consume a dextran sodium sulfate (DSS) solution for an adequate duration. Upon consumption, DSS damages the mucus and epithelial layer barrier in the colon, allowing gut microbes to enter the underlying tissue — where they are sensed by the resident immune cells to mediate an exaggerated immune response, resulting in inflammation.

A Technique to Generate a Murine Model of Dextran Sulfate Sodium-Induced Colitis

DNBS / TNBS colitis biedt een alternatieve en goedkope methode om de pathobiology van ontstekingsdarmziekte bestuderen. Het protocol besproken in dit document schetst de succesvolle toepassing van DNBS om colitis te induceren bij muizen en ratten en maakt het mogelijk om grondig te bestuderen host-mediated intestinale reacties.

DNBS / TNBS Colitis modellen: Inzicht geven Into Inflammatory Bowel Disease en effecten van vet in de voeding

We beschrijven methoden voor longitudinaal bewaken van de werkzaamheid van therapieën voor de behandeling van colonische pathologieën bij muizen met behulp van een star endoscoop. Dit protocol kan gemakkelijk worden gebruikt voor de karakterisering van de therapeutische respons van een individuele tumor in levende muizen en ook voor het monitoren van mogelijke ziekterecidieven.

Niet-invasieve evaluatie van de werkzaamheid van nieuwe therapieën voor Intestinale Pathologieën gebruik van een serieel Endoscopische Imaging van levende muizen

Het gepresenteerde protocol beschrijft een facile chirurgische verwijdering van de appendix (caecal patch) in een muis gevolgd door de inductie van inflammatoire darmziekte-geassocieerde colorectale kanker. Dit Murine appendectomie model maakt onderzoek mogelijk naar de biologische rol van de appendix in de pathogenese van menselijke gastro-intestinale aandoeningen.

Murine appendectomie model van chronische colitis geassocieerde colorectale kanker door precieze lokalisatie van caecal patch

Dit protocol biedt een muismodel van ulceratieve coloproctitis-geassocieerde colorectale kanker geïnduceerd door azomethaan in combinatie met dextraansulfaatnatrium. Het model werd gebruikt om de werkzaamheid van traditionele Chinese geneeswijzen bij de preventie en behandeling van colorectale kanker te evalueren.

Vaststelling van een coloproctitis-kankermodel bij muizen en evaluatie van het therapeutisch effect van de Chinese geneeskunde

Filamenteuze occlusie van het Midden-cerebrale slagader is een gemeenschappelijk model voor het bestuderen van ischemische beroerte in muizen.

Modellering Stroke in Muizen - midden cerebrale slagader occlusie met de gloeidraad Model

Modellen van de tumorcel invasie in drie-dimensionale extracellulaire matrix beter aansluiten bij...

Modeling and Imaging 3-Dimensionale Collectief Cell Invasion

Leer een protocol voor colitis-geassocieerde kanker in muizen met azoxymethaan en dextransulfaat natrium. Deze methode genereert betrouwbaar tumoren met morfologische en moleculaire overeenkomsten met humane kanker.

Modeling Colitis geassocieerde kanker met Azoxymethaan (AOM) en dextransulfaat natrium (DSS)

Meer video's verkennen