Name: Orthotope dunne darm bij ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 16 s
Description: Leer orthotopische dunne darmtransplantatie bij ratten voor onderzoek naar immunologische en inflammatoire processen. Deze methode biedt inzicht in transplantatiebiologie en verbetert klinische uitkomsten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Donor Operatie <ol><li> De donor rat moet worden gehouden vasten gedurende 24 uur (vrije toegang tot water / glucose-oplossing). </li><li> Om Isofluraan inhalatie-anesthesie te induceren, te beginnen met 2% op standaard verstuiver, en vervolgens te verminderen tot 1% na het uitvoeren van laparotomie. Voer een teen knijpen om sedatie te controleren. </li><li> Scheer de buik en reinig met de huid prep 3 keer (Kodan). Voer vervolgens een mediane incisie na subcutane toediening van de pijnstiller. </li><li> Nadat het transplantaat is verpakt in zoutoplossing geweekte gaas, scheiden de fysiologische verklevingen tussen de alvleesklier en het colon ascendens voorzichtig met een Q-tip (onder de chirurgische microscoop met 6x vergroting). </li><li> Ligeren en verdeel de Bauhin &amp; rechts &amp; midden koliek vaartuigen die gebruik maken 7-0 zijde. Na het colon ascendens is verspreid naar de rechterkant van de superieure mesenteriale vene (SMV), kan de Bauhin, rechts en midden koliek schepen worden geïdentificeerd voor ligatie en delen met behulp van 7-0 banden. </li><li> Omhoog schuiven de maag, zodat de gehele SMV wordt rechtgetrokken en blootgesteld. Gebruik een Mosquito-klem voor het terugtrekken. De klem is in handen van plasticine massa in vorm gestrooid als dat nodig is. </li><li> Ligeren en verdeel de pancreatico-duodenale aders uit de SMV. Alle kleine pancreatico-duodenale aders afkomstig van de SMV zorgvuldig worden geïdentificeerd, geligeerd met 7-0 zijde en verdeeld voor het alvleesklierweefsel kan worden verwijderd uit het transplantaat. </li><li> Ligeren en verdeel de verliezen bindweefsel inclusief alle lymphatics tussen de SMV en de abdominale aorta. Met het transplantaat nog steeds aan de rechterkant van de buik, de verliezen bindweefsel inclusief alle lymphatics tussen de SMV en de abdominale aorta toegankelijk is. Dit bindweefsel wordt geligeerd met 7-0 zijde en verdeeld over postoperatieve lymphorrhea van de intestinale graft te voorkomen. </li><li> Ligeren en verdeel de rechter nierslagader. Na het bindweefsel bestaat, de rechter nierslagader wordt accessible en geligeerd en verdeeld met 7-0 zijde. </li><li> Systemisch heparinise de rat met behulp van 200 eenheden heparine iv via de penis ader. </li><li> Ligeren van het marginale slagaders en verdeel de dunne darm bij de duodeno-jejunale knooppunt en het terminale ileum. </li><li> De aorta proximaal geligeerd aan de oorsprong van de SMA. De poortader wordt doorsneden aan de samenvloeiing met de milt ader. Dan is de graft wordt geoogst met zijn vasculaire pedikel bestaande uit de SMA met een aorta-segment. </li></ol> 2. Backtable Procedure <ol><li> Perfuseren het transplantaat met 3 ml van University of Wisconsin-oplossing (UW) bij 4 ° C via de aorta leiding en spoel het darmkanaal van de jejunal uiteinde met 30 ml Uro-Nebacetin N oplossing bij 4 ° C (lumen irrigatie is verplicht) . </li></ol> Direct na het extraheren van de graft, wordt de aorta leiding voor perfusie met 3 ml gekoelde UW-oplossing. Hiervoor is een 20 G iv catheter opeen 10 ml spuit gebruikt. De perfusaat moet in acht worden genomen vrij stromen uit de verdeelde poortader. Voor de intestinale irrigatie met Nebacetin is een 50 ml spuit gebruikt. <ol start="2"><li> Bewaar het transplantaat in UW oplossing bij 4 ° C gedurende de bereiding van de ontvanger. </li></ol> 3. Ontvanger Operatie <ol><li> De ontvanger rat moet worden gehouden vasten gedurende 24 uur (vrije toegang tot water / glucose-oplossing). </li><li> Om Isofluraan inhalatie-anesthesie te induceren, te beginnen met 2% op standaard verstuiver, en vervolgens te verminderen tot 1% na het uitvoeren van laparotomie. Voer een teen knijpen om sedatie te controleren. </li><li> Scheer de buik en reinig met de huid prep 3 keer (Kodan). Voer vervolgens een mediane incisie na subcutane toediening van Carprofen 5 mg / kg sc voor intraoperatieve analgesie. </li><li> Wikkel de ontvanger darm in een isotone zoutoplossing gedrenkte gaas en plaats het op de borst van de ontvanger. </li><li> Botweg Open het retroperitoneum met Q-tips, en bloot de abdominaal aorta en inferior vena cava net onder de renale bloedvaten tot op het niveau van de iliacale vaten eventueel ook microscissors. Ligeren van het kleine lumbale wervelkolom en tribuaries van de aorta en vena cava met behulp van 7-0 zijde tot bloedverlies te voorkomen. (Om dit te doen, moet u de chirurgische microscoop zoom tot 16x.) </li><li> Cross-klem de aorta en de IVC onder de linker renale bloedvaten proximaal en boven de iliacale bifurcatie distaal met microvaatje clips. Slechts een klem proximaal en distaal gebruikte gelijktijdig spannen beide schepen. Incise beide schepen voren met behulp van een microknife en wassen resterende bloed. </li><li> Maak een end-to-side anastomose tussen het transplantaat aorta segment en de ontvanger infrarenale aorta met behulp van een continu 10-0 Prolene hechtdraad .. Eerst wordt het transplantaat geplaatst op de de rechterkant van de buik (de kop van de rat geplaatst op 12 uur) de achterwand steken van de arteriële anastomose en vastbinden van de onderste verblijf hechtdraad voeren. Then wordt het transplantaat overgedragen aan de linkerkant van de buik (de kop van de rat geplaatst op 9 uur) bloot te leggen en hechten de voorwand van de anastomose. </li><li> Een end-to-side anastomose tussen het transplantaat poortader en de ontvanger IVC wordt eveneens uitgevoerd door het uitvoeren van hechtingen met behulp van 10-0 Prolene. De rat blijven liggen zijdelings (head in 9 uur), wordt het transplantaat geplaatst aan de linkerzijde van de buik en een onderste verblijf hechtdraad geplaatst. De anastomose wordt gestart met de achterwand van binnen het vat. Nadat de onderste verblijf hechtdraad is verbonden, kan de voorwand steken worden uitgevoerd buiten. </li><li> Verwijder de distale klemmen, gevolgd door de bovenste klemmen. Elke anastomose bloeding onder controle is door middel van directe druk met behulp van Q-tips. De ent moet worden gecontroleerd voor gelijke en snelle reperfusie. </li><li> Resectie van de gehele ontvanger dunne darm na ligatie van de mesenteriale vaten. Ontvangers ondergaan subtotaal enterectomy, met behoud van 2-3 cm van proximal jejunum en 1 cm van het distale ileum. </li><li> Herstel enterische continuïteit door proximale (jejuno-jejunostomie) en distale (ileo-ileostoma) end-to intestinale anastomosen met behulp van een onderbroken one-layer hechtdraad met 6-0 Monocryl beëindigen. Ongeveer 16 hechtingen nodig zijn anastomosen voltooien. </li><li> Spoel de buikholte met een fysiologische zoutoplossing tot er schoon. Dien 2 ml normale zoutoplossing intraperitoneaal voor vloeistofvervanging. Sluit vervolgens de buik met behulp van een continue hechting met 3-0 Vicryl voor de spierlaag en een continue huid hechtdraad. </li><li> In de postoperatieve periode de ratten worden gehouden vasten (met toegang tot water en glucoseoplossing) nog 24 uur opnieuw gestart op standaard rattenvoer en water ad libitum. Analgesie met carprofen dient te worden toegediend gedurende 3 dagen (zie dosering hieronder). </li></ol>

<ol><li>Abu-Elmagd, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Five+Hundred+Intestinal+and+Multivisceral+Transplantations+at+a+Single+Center%3A+Major+Advances+With+New+Challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Five Hundred Intestinal and Multivisceral Transplantations at a Single Center: Major Advances With New Challenges.</a> Ann. Surg. 250 (4), 567-56 (2009).</li>
<li>Berney, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portal+versus+systemic+drainage+of+small+bowel+allografts%3A+comparative+assessment+of+survival%2C+function%2C+rejection%2C+and+bacterial+translocation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Surg%22%5BJournal%5D)">Portal versus systemic drainage of small bowel allografts: comparative assessment of survival, function, rejection, and bacterial translocation.</a> J. Am. Coll. Surg. 195 (6), 804(2002).</li>
<li>Fishbein, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Intestinal transplantation.</a> N. Engl. J. Med. 361 (10), 998(2009).</li>
<li>Hernandez, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+portal+venous+outflow+better+than+systemic+venous+outflow+in+small+bowel+transplantation%3F+Experimental+study+in+syngeneic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pediatr.+Surg%22%5BJournal%5D)">Is portal venous outflow better than systemic venous outflow in small bowel transplantation? Experimental study in syngeneic rats.</a> J. Pediatr. Surg. 40 (2), 336(2005).</li>
<li>Monchik, G. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+small+bowel+in+the+rat%3A+technical+and+immunological+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Transplantation of small bowel in the rat: technical and immunological considerations.</a> Surgery. 70 (5), 693(1971).</li>
<li>Murase, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graft-versus-host+disease+after+brown+Norway-to-Lewis+and+Lewis-to-Brown+Norway+rat+intestinal+transplantation+under+FK506%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Graft-versus-host disease after brown Norway-to-Lewis and Lewis-to-Brown Norway rat intestinal transplantation under FK506.</a> Transplantation. 55 (1), 1(1993).</li>
<li>Murase, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulation+of+intestinal+transplant+with+allograft+irradiation+and+simultaneous+donor+bone+marrow+infusion%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Immunomodulation of intestinal transplant with allograft irradiation and simultaneous donor bone marrow infusion.</a> Transplant Proc. 31 (1-2), 565(1999).</li>
<li>Pech, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perioperative+infliximab+application+ameliorates+acute+rejection+associated+inflammation+after+intestinal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Perioperative infliximab application ameliorates acute rejection associated inflammation after intestinal transplantation.</a> Am. J. Transplant. 10 (11), 2431(2010).</li>
<li>Schaefer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resident+macrophages+are+involved+in+intestinal+transplantation-associated+inflammation+and+motoric+dysfunction+of+the+graft+muscularis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Resident macrophages are involved in intestinal transplantation-associated inflammation and motoric dysfunction of the graft muscularis.</a> Am J Transplant. 7 (5), 1062(2007).</li>
<li>Schaefer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+and+impact+of+organ+harvesting+and+ischemia-reperfusion+injury+within+the+graft+muscularis+in+rat+small+bowel+transplantation.+Transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Proc%22%5BJournal%5D)">Mechanism and impact of organ harvesting and ischemia-reperfusion injury within the graft muscularis in rat small bowel transplantation. Transplant.</a> Proc. 38 (6), 1821(2006).</li>
<li>Schaefer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+rejection+and+the+muscularis+propria+after+intestinal+transplantation%3A+the+alloresponse%2C+inflammation%2C+and+smooth+muscle+function%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Acute rejection and the muscularis propria after intestinal transplantation: the alloresponse, inflammation, and smooth muscle function.</a> Transplantation. 85 (10), 1465(2008).</li>
<li>Xue, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+experience+of+refined+3-cuff+technique+for+orthotopic+small-bowel+transplantation+in+rat%3A+a+report+of+270+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Surgical experience of refined 3-cuff technique for orthotopic small-bowel transplantation in rat: a report of 270 cases.</a> Am. J. Surg. 198 (1), 110(2009).</li>
<li>Zhang, X. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+techniques+in+rat+heterotopic+small+bowel+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant.+Proc%22%5BJournal%5D)">Simplified techniques in rat heterotopic small bowel transplantation.</a> Transplant. Proc. 38 (6), 1840(2006).</li>
<li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+establishment+of+a+new+en+bloc+combined+liver-small+bowel+transplantation+model+in+rats.+Transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Proc%22%5BJournal%5D)">The establishment of a new en bloc combined liver-small bowel transplantation model in rats. Transplant.</a> Proc. 39 (1), 278(2007).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Terwijl intestinale transplantatie modellen in ratten zijn beschreven zo vroeg in de 1970ies 5 meeste van de onlangs in dienst modellen te betrekken heterotope darmtransplantatie met behulp van verschillende technieken 13. Terwijl de heterotope procedures in het algemeen het voordeel gemakkelijker microchirurgische technieken en betere toegankelijkheid van het transplantaat voor de beoordeling, heterotope darmtransplantatie heeft het grote nadeel dat ze niet rekening houdend met de verschillende in...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Opmerkingen (optioneel) </td></tr><tr><td> University of Wisconsin (UW) oplossing (ViaSpan) </td><td> Bristol-Myers Squibb </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Uro-Nebacetin N oplossing </td><td> Nycomed </td><td> 6967855 </td><td></td></tr><tr><td> Ampicilline </td><td> Ratiopharm </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Carprofen (Rimadyl) </td><td> Pfizer </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Prolene 10-0 unresorbable hechtdraad </td><td> Ethicon </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Monocryl 6-0 resorbeerbare hechtdraad </td><td> Ethicon </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Vicryl 3-0 resorbeerbare hechtdraad </td><td> Ethicon </td><td></td><td></td></tr><tr><td> iv katheter G 20 1.1x33 mm </td><td> Braun </td><td></td><td></td></tr><tr><td> iv katheter G 22 0.9x25 mm </td><td> Braun </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Kodan Skin Prep </td><td> Schülke </td><td></td><td></td></tr><tr><td> NaCl 0,9% oplossing Infusion </td><td> Braun </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Gebogen pincet kleine </td><td> FineScienceTools </td><td> 11.009-13 </td><td></td></tr><tr><td> Micro pincet gebogen </td><td> AESCULAP </td><td> BD 333 </td><td></td></tr><tr><td> Micro pincet gebogen </td><td> AESCULAP </td><td> FD281R </td><td></td></tr><tr><td> Micro pincet recht 1 </td><td> WPI </td><td> 5 </td><td></td></tr><tr><td> Micro pincet recht 2 </td><td> WPI </td><td> 2 </td><td></td></tr><tr><td> Micro naaldhouder </td><td> WPI </td> &lt;td&gt; 14081 </td><td></td></tr><tr><td> Micro schaar </td><td> FineScienceTools </td><td> 15.006-09 </td><td></td></tr><tr><td> Micro scalpel </td><td> MANI </td><td> Oogheelkundige mes </td><td></td></tr><tr><td> Micro klemmen </td><td> AESCULAP </td><td> FB329R </td><td></td></tr></tbody></table>

orthotope dunne darm bij ratten

Orthotopic Small Bowel Transplantation in Rats

Dunne darm transplantatie is uitgegroeid tot een geaccepteerde klinische optie voor patiënten met een korte darm syndroom en het falen van parenterale voeding (onomkeerbare intestinale falen). In gespecialiseerde centra verbeterd operatieve en beheren van strategieën hebben geleid tot een uitstekende korte en middellange termijn de patiënt en transplantaatoverleving, terwijl het verstrekken van hoge kwaliteit van leven 1,3. In tegenstelling tot de meer gebruikelijke transplantatie van andere vaste organen (dwz hart, lever) veel onderliggende mechanismen van graft function en immunologische veranderingen veroorzaakt door intestinale transplantatie zijn niet geheel bekend 6,7. Episodes van acute afstoting, sepsis en chronische graft falen zijn de belangrijkste obstakels op zijn bijdrage aan minder gunstige lange termijn uitkomst en belemmeren een bredere inzet van de procedure ondanks een groeiend aantal patiënten op de startpagina van parenterale voeding, die zou mogelijk profiteren van een dergelijke transplantatie. De dunne darm bevateen groot aantal passagiers leukocyten gewoonlijk aangeduid als deel van de ingewanden geassocieerde lymfoïde systeem (GALT) dit deel uitmaakt van de oorzaak van de hoge immunogenity van de intestinale graft. De aanwezigheid en de nabijheid van vele commensalen en pathogenen in de darm worden de ernst van sepsis episodes eenmaal graft mucosale integriteit is aangetast (bijvoorbeeld afwijzing). Op het gebied van darm-en multi-transplantatie meer gegevens gegenereerd uit betrouwbare en haalbare diermodellen is onmisbaar. Het model hierin combineert zowel de betrouwbaarheid en haalbaarheid eenmaal vastgesteld op een gestandaardiseerde wijze en kunnen waardevolle inzichten geven in de onderliggende complexe moleculaire, cellulaire en functionele mechanismen die worden veroorzaakt door intestinale transplantatie. We hebben met succes gebruikt en verfijnd de beschreven procedure al meer dan 5 jaar in ons laboratorium 8-11. De Jove video-gebaseerd formaat is vooral handig om de complexe procedures te tonenprocedure en vermijden de eerste valkuilen voor groepen van plan om een ​​orthotope knaagdiermodel onderzoeken darmtransplantatie vast te stellen.

Normaal postoperatieve beloop De getransplanteerde dieren moeten snel te herstellen van de procedure van een warmtelamp voor ongeveer 1 uur. Hypothermie is een belangrijke oorzaak van postoperatieve mortaliteit en moeten zorgvuldig worden intra-en postoperatief vermeden. Intraoperatieve vochtverlies moeten worden vervangen door sc injectie van 2,5 ml normale zoutoplossing plus 2,5 ml Glucose 5% om de 8 uur gedurende de eerste 24 uur. De ratten moeten ook gratis toegang tot glucose-oplossing (of...

Dunne darm transplantatie is uitgegroeid tot een geaccepteerde behandeling voor patiënten met onomkeerbare intestinale mislukking. Onze experimenteel model van orthotope dunne darm transplantatie bij ratten dient als een betrouwbaar instrument om de onderliggende immunologische en inflammatoire processen die darmtransplantatie compliceren aan te pakken.

Orthotope dunne darm bij ratten

Dunnedarmtransplantatie is een geaccepteerde klinische optie geworden voor patiënten met het kortdarm syndroom en falen van parenterale voeding ...

Het algemene doel van deze procedure is het uitvoeren van een orthotope darmtransplantatie bij de rat. Dit wordt bereikt door eerst de dunne darm uit het donordier te winnen. De tweede stap van de procedure is de zogenaamde back table-preparatie van het darmtransplantaat voorafgaand aan de transplantatie.De derde stap van de procedure is de transplantatie door het uitvoeren van de arteriële en veneuze anastomose, gevolgd door reperfusie van het transplantaat. De laatste stap van de procedure is het herstellen van de enterale continuïteit door het voltooien van de intestinale anastomose in een end-to-end configuratie vanwege de respectievelijke jejunostomie en ileo-ileostomie. Uiteindelijk kunnen resultaten worden behaald die een langdurige overleving van isogenetisch getransplanteerde dieren aantonen door een uitstekende graftfunctie en voldoende orale nutriëntenabsorptie in allergenische combinaties.Verschillende aspecten van acute en chronische intestinale afstoting kunnen echter worden bestudeerd. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen op het gebied van intestinale transplantatie, zoals de mechanismen van acute en chronische afstoting die kunnen leiden tot transplantaatfalen en de klinische uitkomst kunnen verslechteren. Een visuele demonstratie van deze methode is essentieel.De cruciale stappen zijn moeilijk te leren, voornamelijk vanwege de kleine diameter van de vaten en de noodzaak om een snelle en nauwkeurige microsurgische techniek toe te passen om de warme ischemie-tijd te minimaliseren. Houd de donorrat vóór de operatie 24 uur vastend, met vrije toegang tot water en een glucoseoplossing. Anestheseer het dier met 2% isofluraan via inhalatie. Controleer de sedatie door middel van een knijpreflex-test bij de teen.Knijp in de huid, scheer de buik en desinfecteer de huid drie keer met een huidpreparaat. Voer vervolgens een mediane incisie uit met een scalpel na subcutane toediening van het analgeticum. Voer een mediane incisie uit onder een operatieve microscoop.Wikkel de dunne darm in met zoutoplossing gedrenkt gaas en plaats deze aan de linkerzijde van de buikholte met een steriel kommetje en een wattenstaafje. Scheid voorzichtig de fysiologische adhesies tussen de pancreas en het colon ascendens, indien nodig met behulp van microscharen, gebruikmakend van 7-0 zijden hechtdraad 8-0, en ligeer de ileocecale en rechter middelcolische vaten nadat het colon ascendens naar de rechterzijde van de vena mesenterica superior of SMV is gespreid met 7-0 ligaturen 8-0; ligeer vervolgens de rechter- en middelcolische vaten met een mosquito-klem die op zijn plaats wordt gehouden met vormgegeven plastazine. Trek de maag naar boven zodat de gehele SMV wordt rechtgetrokken en blootgesteld.Ligateer en divideer vervolgens de pancreatoduodenale venen die vanuit de SMV komen. Draai daarna het transplantaat naar de rechterzijde van het abdomen; terwijl het transplantaat zich aan de rechterzijde van het abdomen bevindt, wordt het losse bindweefsel, inclusief alle lymfevaten tussen de SMV en de abdominale aorta, toegankelijk. Gebruik 7-0 zijde om het weefsel te ligateren en te divideren om postoperatieve lymfelekkage uit het intestinale transplantaat te voorkomen.Verwijder het bindweefsel, scheid de vaten en ligeer en verdeel de rechter nieraarslagslag. Behandel de rat systemisch met 200 units heparine via IV-toediening via de penielvene. Ligeer de marginale arteriën en verdeel het dunne darmsegment bij de junctie van het duodenum en jejunum en bij het terminale ileum.Ligeer de aorta proximaal van de oorsprong van de SMA en transecteer de poortader bij de samenvloeiing met de miltvenen. Oogst het transplantaat met de vasculaire pedikel, bestaande uit de SMA met een aortasegment. Gebruik hiervoor een 20 gauge IV-katheter op een spuit van 10 milliliter via de aortageleider.Perfuse het transplantaat met drie milliliter gekoelde University of Wisconsin-oplossing (UW). Spoel vervolgens, met een spuit van 50 milliliter, het darmlumen vanuit het AL-uiteinde schoon met 30 milliliter koude cetin- en zoutoplossing tijdens de voorbereiding van de ontvanger. Bewaar het transplantaat in koude UW-oplossing vóór de operatie aan de ontvangende rat.Houd het dier vastend met vrije toegang tot een glucoseoplossing in water gedurende 24 uur nadat het dier is geanestheseerd met 2% isofluraan. Dien carprofen toe voor intraoperatieve analgesie. Scheer de buik en desinfecteer de huid drie keer met een huidpreparaat.Voer vervolgens een mediane incisie uit. Wikkel de ontvangende darm in met in normale zoutoplossing gedrenkte GREs en plaats deze op de borst van het ontvangende dier. Gebruik steriele gaasjes en wattenstaafjes om het retroperitoneum bot te openen en de abdominale aorta en vena cava inferior bloot te leggen, net onder de nierbloedvaten tot op het niveau van de iliacale vaten om bloedverlies zoals in acht te voorkomen.De kleine lumbaire en spinale zijtakken van de aorta en vena cava worden afgeklemd met micro-clips. Klem de aorta en de IVC af onder de linker niervaten, proximaal en boven de iliakale bifurcatie. Maak vervolgens distaal de voorwand van beide vaten open en spoel het resterende bloed weg.Verplaats het transplantaat naar het operatieveld om een end-to-end anastomose uit te voeren tussen het aortasegment van het transplantaat en de infrarenale aorta van de ontvanger. Gebruik hiervoor een continue 10-0 Prolene-hechting. Plaats het transplantaat aan de rechterzijde van het abdomen, voer de hechtingen van de achterwand van de arteriële anastomose uit en knoop de onderste fixatiehechting vast.Draai vervolgens het transplantaat naar de linkerzijde van het abdomen om de voorwand van de anastomose bloot te leggen, terwijl het transplantaat zich nog aan de linkerzijde van het abdomen bevindt. Begin de Porter-cable anastomose door een onderste fixatiehechting te plaatsen. Voer vervolgens met 10 zero prolyne een kop-aan-kop anastomose uit tussen de portaalveen van het transplantaat en de Vena Cava Inferior (VCI) van de ontvanger.Zet vervolgens vanaf de buitenkant de hechtingen van de voorwand vast wanneer alle hechtingen op hun plaats zitten. Verwijder de distale klemmen, gevolgd door de bovenste klemmen. Gebruik directe druk met wattenstaafjes om eventuele anastomotische bloedingen te stelpen.Controleer het transplantaat op een gelijke en snelle reperfusie na ligatie van de mesenteriale vaten, resecteer de gehele dunne darm van de ontvanger, waarbij twee tot drie centimeter van het proximale jejunum en één centimeter van het distale ileum behouden blijft met gebruik van ongeveer 16 ononderbroken six zero Monocryl-hechtingen. Herstel de enterische continuïteit door middel van proximale en distale end-to-end darmanastomosen. Spoel de peritoneale holte met normale zoutoplossing tot deze schoon is.Dien twee milliliters normale zoutoplossing intraperitoneaal toe voor vochtvulling. Gebruik vervolgens drie nul Vicryl voor de spierlaag, aangevuld met een continue huidhechting om de buikholte na de operatie te sluiten. Plaats de rat onder een warmtelamp voor een spoedig herstel.Houd het dier vastend met toegang tot water en glucosoplossing en dien elke acht uur subcutane injecties van normale zoutoplossing en glucose toe gedurende de eerste 24 uur op dag twee; start daarna het dieet van rattenvoer en water ad libitum opnieuw na de transplantatieprocedure. Het algemene uiterlijk, de conditie van de vacht en het aspect van de slijmvliezen moeten na de eerste postoperatieve dag normaal zijn. Het activiteitsniveau moet terugkeren naar de preoperatieve status.Apathisch of abnormaal gedrag wijst echter op vroege chirurgische complicaties. Deze figuur toont het gemiddelde postoperatieve gewicht na orthotope dunnedarmtransplantatie. Na een aanvankelijk verlies van maximaal 20% van het lichaamsgewicht, zullen de ratten rond postoperatieve dag zes tot acht weer beginnen aan te komen en normaal gesproken rond postoperatieve dag 14 ongeveer 90% van hun preoperatieve gewicht hebben bereikt.Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te focussen op minimaal bloedverlies en een korte warme ischemie. Tijd is essentieel voor een succesvolle uitvoering na de ontwikkeling. Deze techniek heeft de weg vrijgemaakt voor onderzoekers in het veld van darmtransplantatie om acute en chronische afstoting in een knaagdiermodel te onderzoeken.

orthotopic-small-bowel-transplantation-in-rats

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De muis dunne darm transplantatie model is erkend als een belangrijk instrument om mechanismes van de afstoting en het scherm nieuwe immunosuppressieve geneesmiddelen te bestuderen. Echter, is dit model beperkt tot gebruik omdat de betrokken technieken is een zeer technisch uitdaging. Nu introduceren wij de gewijzigde techniek.

Dunne darm transplantatie in Muizen

Deze video toont de orthotope aorta transplantatie model als een eenvoudig model om de ontwikkeling van transplantatie vasculopathie (TVP) studie bij ratten.

Orthotope Aorta Transplantatie: Een Rat Model voor de ontwikkeling van chronische vasculopathie Study

Hier beschrijven we de orthotope rat achterste ledematen transplantatie procedure, die lijkt te zijn de gouden...

Orthotope Hind-Limb Transplantatie bij ratten

We een gemakkelijk te stellen herziening van de klassieke twee manchet techniek orthotope levertransplantatie in rat.

Orthotope levertransplantatie bij ratten

Orthotope levertransplantatie bij ratten is een onmisbare experimenteel model voor biomedisch onderzoek. Hier presenteren we onze chirurgische procedures voor orthotope rat levertransplantatie met een lever-arteriële reconstructie met behulp van een 50% gedeeltelijke graft.

Chirurgische ingrepen voor een Rat Model van deelspoelen orthotope levertransplantatie met hepatische arteriële reconstructie

De wederopbouw van de suprahepatic vena cava (SHVC) blijft een moeilijke stap in rat orthotopic lever transplantatie. In dit artikel tonen we een stapsgewijze protocol voor SHVC wederopbouw in ratten met behulp van een roman magnetische wapendrager-techniek.

Een Rat Model van Orthotopic met behulp van een roman magnetische Anastomosis techniek voor Suprahepatic Vena Cava wederopbouw levertransplantatie

Het doel van dit manuscript en protocol is uit te leggen en in detail de chirurgische ingreep van orthotopic nier transplantatie bij ratten te tonen. Deze methode is vereenvoudigd om de juiste doorbloeding van de donor nier te bereiken en de reperfusie tijd te verkorten met behulp van de veneuze en urineleider manchet anastomosis techniek.

Orthotopic rat nier transplantatie: een nieuwe en vereenvoudigde chirurgische aanpak

We beschrijven een model van heterotopische buikharttransplantatie bij ratten, wat wijzigingen van de huidige strategieën impliceert, die leiden tot een vereenvoudigde chirurgische aanpak. Daarnaast beschrijven we een nieuw afstotingsmodel door in-ear injectie van vitale hartspiercellen, waardoor verdere transplantatie immunologische analyses bij ratten mogelijk zijn.

Een immunologisch model voor heterotopische hart- en hartspierceltransplantatie bij ratten

Het orthotopische niertransplantatiemodel bij ratten draagt bij aan het onderzoek naar het mechanisme van renale allograftafstoting. Het huidige model verhoogt de overleving van de ontvangers zonder interferentie met de bloedtoevoer en veneuze reflux van het onderlichaam met behulp van een end-to-end anastomose van nierimplantatie en een end-to-side "tunnel" -methode van ureter-blaasanastomose.

Een rat orthotopisch niertransplantatiemodel voor niertransplantaatafstoting

Dit protocol beschrijft een verbeterde techniek voor orthotope linkerlongtransplantatie bij ratten, gericht op het verminderen van operationele problemen en het verbeteren van overlevingskansen.

Orthotope linkerlongtransplantatie bij ratten

Dit protocol beschrijft een op ratten gebaseerd darmtransplantatiemodel met ileostoma voor tijdsverloopbeoordeling van geneesmiddelinterventie op transplantaatafstoting.

Een afstotingsmodel voor rattentransplantaat van darmtransplantatie met geëxterioriseerde ileostoma voor beoordeling van de longitudinale prognose

Leer orthotopische dunne darmtransplantatie bij ratten voor onderzoek naar immunologische en inflammatoire processen. Deze methode biedt inzicht in transplantatiebiologie en verbetert klinische uitkomsten.

Orthotope dunne darm bij ratten

Meer video's verkennen