Name: Een In vitro Co-infectie model om te onderzoeken Plasmodium falciparum-HIV-1 Interacties in menselijke primaire monocyt-afgeleide immuuncellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 39 s
Description: Ontdek een in vitro co-infectiemodel om Plasmodium falciparum-HIV-1-interacties te bestuderen in menselijke primaire monocyt-afgeleide macrofagen. Deze methode meet virale replicatie via P24-eiwit en luciferase-activiteit.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de Canadese Institutes of Health Research door middel van een katalysator Co-infecties en co-morbiditeit subsidie. Human erytrocyten werden verzorgd door het Centre Hospitalier de l&#39;Universite Laval bloedbank.

Let op: Experimenten met HIV-1 en Plasmodium falciparum moet worden uitgevoerd in de juiste bioveiligheidsniveau laboratoria (BSL2 voor parasieten en BSL3 voor HIV-1 en co-infecties) en speciale voorzorgen moeten genomen bij het ​​gebruik van mogelijk besmet menselijk bloed worden. 1. Perifere bloed mononucleaire cellen (PBMC) Zuivering (Gebaseerd op 8 en 9) <ol><li> Beginnen met verse menselijk bloed van gezonde donoren (500 ml) behandeld met anticoagulantia (heparine, citraat, zuur citraat dextrose of citraat fosfaat dextrose). Gebruik endotoxine-free reagentia bij het zuiveren en het isoleren van PBMC en in de rest van het protocol. </li><li> Ontsmet de bloedzak, met inbegrip van de buis, met 70% ethanol, knip de tube en zorgvuldig het bloed over in een T150 kolf. </li><li> Bereid 16 buizen met 15 ml Lymfocyten Scheiding Medium (Ficoll) per 50 ml conische tube (zorg ervoor dat Ficoll de kamertemperatuur heeft bereikt).Voorzichtig laag 30 ml vers bloed op de top. </li><li> Centrifugeer 400 g gedurende 30 min bij 20 ° C met onderbroken. </li><li> Tijdens het centrifugeren bereiden 8 x 50 ml conische buizen met 25 ml Balanced Salt Solution kamertemperatuur Hank&#39;s (HBSS) per buis. </li><li> Voorzichtig overdragen troebel cel ring op het grensvlak (bevat PBMC) van de 50 ml buis met de HBSS (pool 2 cellen ringen per buis). Complete jaargangen tot 50 ml met HBSS. </li><li> Centrifugeer 150 g gedurende 15 min bij 20 ° C met pauzes. </li><li> Tijdens het centrifugeren van de bewolkte cel ring, het verzamelen van de gele bovenste laag van de Ficoll stap, het zwembad van het plasma op te vullen een 50 ml conische buis. Inactiveren aanvullen plasma door het verwarmen van de buis 50 ml bij 56 ° C gedurende 30 min en 10 min centrifugeren bij 1800 x g. Houd supernatant (bevat verdund autoloog plasma kan worden gebruikt als aanvulling op medium latere stappen). </li><li> Verwijder voorzichtig het supernatant af en resuspend de celpellet van stap 1,7 in 25 ml HBSS en pool 2 pellets per 50 ml buis. Spin 300 g gedurende 8 min bij 20 ° C. </li><li> Verwijder het supernatant en resuspendeer de pellets in 10 ml HBSS en zwembad in een 50 ml buis. </li><li> Neem een ​​hoeveelheid, uit te voeren trypanblauw uitsluiting naar sterfte beoordelen en tel dan PBMC. </li><li> Volledige volume van 50 ml met HBSS en centrifuge 10 min bij 300 x g. Verwijder de supernatant en de cellen te resuspenderen in RPMI 1640 te 5x10 6 cellen / ml (een dient ongeveer 400-500 x 10 6 PBMC verkrijgen 500 ml bloed). </li></ol> 2. Monocyten-ontwikkelde macrofagen (MDM) Differentiatie (Gebaseerd op 8 en 9) <ol><li> Seed ongeveer 1,25 x 10 8 PBMC in 15 cm gerechten met RPMI 1640 (25 ml / gerecht). </li><li> Laat cellen 1-2 uur hechten bij 37 ° C met 5% CO2 atmosfeer. </li><li> Overdracht niet-aangehechte cellen in een nieuwe fles en was bord met 15 ml endotoxine vrij PBS twee keer (5min, 300 xg). De aangehechte cellen geïsoleerde monocyten. </li><li> Om vers geïsoleerde monocyten om te differentiëren in MDM, voeg 20 ml RPMI 1640 medium aangevuld met 5% autoloog plasma (vanaf stap 1.8). Voeg menselijke recombinant macrofaag kolonie stimulerende factor (M-CSF, 25 ng / ml) en penicilline / streptomycine oplossing (PS, 100 U / ml penicilline, 100 pg / ml streptomycine). Incubeer gedurende 2 dagen, te wijzigen medium en incubeer 2-3 extra dagen bij 37 ° C in 5% CO2 atmosfeer. </li><li> Verwijder oude medium en was met endotoxine vrij PBS een keer, voeg de PBS voorzichtig en zuig onmiddellijk. Om volledig gedifferentieerde MDM losmaken behandelen cellen ~ 7 ml Accutase (Accutase, een commercieel verkrijgbaar mengsel van proteasen en collagenolytische activiteit het losmaken van cellen uit de plastic schaal mogelijk) 15-20 minuten bij 37 ° C in een 5% CO 2 sfeer, schud halverwege de tijd. </li><li> Voeg 3-5 ml autoloog plasma (vanaf stap 1.8) in elke plaat (om de bescherming van de cellen, terwijlschrapen). </li><li> Voorzichtig schrapen cellen ervoor te zorgen dat de middellange-de cellen te allen tijde en transfer / zwembad in een 50 ml buis omvat. </li><li> Spoel platen met endotoxine vrij PBS om te herstellen zo veel cellen mogelijk te maken. </li><li> Spin 5 min bij 200 xg, gooi supernatant. </li><li> Resuspendeer in 5 ml MDM kweekmedium (RPMI 1640 aangevuld met 10% complement-geïnactiveerd foetaal koeienserum (iFBS), PS, 25 mM HEPES) en aantal cellen (MDM opbrengst meestal 2-8% van de totale PBMC). Let op: een hoeveelheid van MDM kunnen worden genomen in deze stap om celpopulatie zuiverheid te beoordelen door middel van flowcytometrie, meestal 99% van de verkregen MDM express CD14. </li><li> Zaad 1x10 5 MDM in 600 ul van MDM kweekmedium per well in 24-well platen. </li><li> Incubeer nacht bij 37 ° C in een 5% CO2 atmosfeer bij infecties. </li></ol> 3. Productie en kwantificering van HIV-1 virale Voorraden <ol><li> Produceer virale voorraden met behulp van calciumfosfaat transfectie in HEK293T-cellen Follovleugel van het protocol van Fortin et al.. 10. </li><li> Met het oog op enkele cyclus virussen met de luciferase-reporter-gen dat codeert, co-transfecteren HEK293T cellen te verkrijgen met ofwel 20 ug NL4.3 Luc + Env - R + en 10 ug van pHCMV-G, of 15 microgram NL4.3 Luc + Env - R + en 15 microgram pJRFL env. Gebruik 30 ug NL4.3 Luc + Env - R + onder controle glycoproteïne-deficiënte virussen te genereren. Voor de volledige replicatieve virus, gebruik 30 ug NL4.3Bal env. De vectoren pHCMV-G en pJRFL env coderen de enveloppe glycoproteïnen van vesiculaire stomatitis virus (VSV-G) en van een CXCR5-troop HIV-1 (anders dan NL4.3Bal env), respectievelijk. Meer informatie over de plasmiden worden verkregen 8. Plasmiden kan worden verkregen via de NIH AIDS Research and Reference Program (NIAID, NIH). </li><li> Kwantificeer alle virale voorraden met behulp van ELISA voor de HIV-1 p24 capside-eiwit 11En verifiëren alvorens hun aanstekelijke potentieel te gebruiken. Wij evalueren de infectiviteit van onze virusvoorraden behulp van TZM-bl indicator cellen 12. </li></ol> 4. Cultuur van Plasmodium falciparum parasieten (gebaseerd op 13) 4.1 Algemene cultuur en het onderhoud van parasieten <ol><li> Houd P. falciparum 3D7 aseksuele parasieten in humane erythrocyten (bloedgroep O +) in een 4% hematocriet in RPMI 1640 (gebufferd met 25 mM HEPES en 25 mM NaHCO 3) aangevuld met 0,5% (w / v) Albumax II, 25 ug / ml gentamicine en 370μM hypoxanthine bij 37 ° C in een gasmengsel van 1% zuurstof / 5% koolstofdioxide in stikstof. </li><li> Parasitemie kan worden gevolgd door het maken van een dun uitstrijkje van de cultuur en de kleuren met een 15% Giemsa oplossing. </li><li> Zorg altijd voor een niet-geïnfecteerde rode bloedcellen (uRBC) cultuur schaal in de dezelfde voorwaarden als parasieten om te gebruiken als controle. Aan de late fase parasit te verkrijgenes (trofozoïeten / begin schizonten), synchroniseren van de parasieten als volgt: </li></ol> 4,2 Parasite synchronisatie <ol><li> In de ochtend, oogsten de parasiet cultuur, spin 5 min bij 300 xg en verwijder het supernatant. </li><li> Resuspendeer in 5 vol celvolumes met 5% (w / v) D-sorbitol en incubeer 5 min bij 37 ° C. </li><li> Spin 5 minuten bij 300 x g, gooi supernatant, Resuspendeer pellet in 30 ml kweekmedium en zet terug in de incubator. </li><li> Ongeveer 8 uur later, herhaalt u de stappen 4.2.1 tot 4.2.3, om goed gesynchroniseerd parasieten te verkrijgen. Late parasieten (trofozoïeten / begin schizonten) kan vervolgens worden geoogst de volgende ochtend het experiment te voeren. Voorafgaand aan zuivering, uit te voeren Giemsa kleuring te levenscyclus podium te bevestigen. </li></ol> 4,3 Plasmodium falciparum-geïnfecteerde rode bloedcellen (iRBC) zuivering <ol><li> Steriliseer de VarioMacs afscheider (stand en magneet) met 70% ethanol en pkant onder de biologische kap. </li><li> Bevestig de drie-weg kraan om CS kolom bodem. </li><li> Snijd het uiteinde van de naald plastic beschermer met de Miltenyi speciale frees en bevestig de naald aan de kraan beneden. </li><li> Zet de kolom in de magneet voorzichtig. </li><li> Verwijder luchtbellen in de kolom door langzaam 10 ml van MDM kweekmedium met kit ingesloten spuit geschroefd aan de linkerkant van de afsluiter. </li><li> Was kolom met ~ 20 ml MDM kweekmedium. </li><li> RBC oogst van de cultuur plaat, een keer wassen met 10 ml MDM medium (300 xg, 5 min) en resuspendeer de RBC pellet in 12 ml MDM kweekmedium. Voeg langzaam naar kolom en laat de suspensie stroom door (alleen geïnfecteerde rode bloedcellen bevatten parasieten in de trofozoïet of schizont fase gehandhaafd door het magnetische veld door de aanwezigheid van hemozoin kristallen). </li><li> Was eenmaal met 20 ml medium en stoppen vloeistofstroom wanneer zij tot de witte schijf boven de kolom. </li><li>Verwijder de kolom van de magneet en elueer iRBC in een schone steriele buis met 12 ml MDM kweekmedium. </li><li> Smeer een deel van het herstelde iRBC en uit te voeren Giemsa kleuring te levenscyclus podium te bevestigen. </li><li> Tel hersteld iRBC met behulp van een hemocytometer (geïsoleerde RBC zijn 100% iRBC). </li><li> Pellet-cellen (300 xg, 5 min), gooi supernatant en de behandeling van cellen met 500 pi verse AB + menselijk serum (opsonisch stap 14). </li><li> Gedurende 30 minuten bij 37 ° C in een 5% CO2 atmosfeer. </li><li> Was eenmaal met 10 ml MDM kweekmedium (300 x g, 5 min), en resuspendeer iRBC tot de gewenste concentratie. Meestal zal een 10% parasitemie 15 cm cultuur schotel geeft ongeveer ~ 0,5-1x10 8 strak gesynchroniseerde iRBC. </li></ol> 5. Blootstelling van MDM naar Plasmodium falciparum <ol><li> Om te MDM uRBC of iRBC bloot moeten cellen worden geresuspendeerd in MDM kweekmedium om een ​​verhouding van uRBC / iRBC verkrijgen: MDM van 75:1. In eerdervoorbereide 24-well platen met MDM, voeg de juiste RBC schorsing volume aan elke well. Voer alle experimenten in drievoud. </li><li> Incubeer co-culturen gedurende 4 uur bij 37 ° C in een 5% CO2 atmosfeer. </li><li> Was de cellen met 600 pi van endotoxine vrij PBS 3 keer voorzichtig voeg de PBS en zuig onmiddellijk. </li><li> Om de resterende RBC lyseren, was de putten door het toevoegen van 200 pi van ijs-koud steriel water voor 20 sec en aspiratie. </li><li> Voeg 600 pi MDM kweekmedium en geïncubeerd 24 uur bij 37 ° C in een 5% CO2 atmosfeer. </li></ol> 6. Infectie van MDM met een volledig replicatieve HIV-1 <ol><li> Om het effect van P. beoordelen falciparum op HIV-1 replicatie in MDM, toevoegen volgens het schema aangegeven in fig. 1A, 10 ng van p24 (in 300 ul MDM media) NL4.3Bal env virussen in de geschikte putjes, enkel nog MDM-medium in controleputjes . </li><li> Incubeer 2 uur bij 37 ° C in een 5% CO2 atmosfeer. </li><li> Was de cellen met endotoxine vrij PBS 3 keer voorzichtig voeg de PBS en zuig onmiddellijk. Voeg 600 pi vers MDM-medium per well. </li><li> Incuberen bij 37 ° C in een 5% CO2 atmosfeer. </li><li> Bij dag 3, 6, 9 en 12 na de start van virale infectie, oogst 200 pi van elke supernatant, toevoegen van 200 ul vers medium MDM daarna. Houd geoogst supernatanten bij -20 ° C voor kwantificering van de belangrijkste capside HIV-1 p24 proteïne door ELISA na Fortin et al.. 10. </li></ol> 7. Infectie van MDM met Single Cycle Virus Encoding Luciferase <ol><li> Om de parasiet effect op HIV-1 genexpressie in MDM bepalen toevoegen volgens het schema aangegeven in figuur 1B, 10 ng p24 (in 300 pl medium MDM) van hetzij NL4.3 Luc + Env - R + ( VSV-G), NL4.3 Luc + Env - R + (JRFL env) of NL4.3 Luc +Env - R + virussen in de overeenkomstige putjes. </li><li> Incubeer 2 uur bij 37 ° C in een 5% CO2 atmosfeer. </li><li> Was de cellen met 600 pi van endotoxine vrij PBS 3 keer voorzichtig voeg de PBS en zuig onmiddellijk. Voeg 600 pi vers MDM-medium per well. </li><li> Incuberen bij 37 ° C in een 5% CO2 atmosfeer. </li><li> Verwijder het medium 72 uur na infectie en voeg 200 ul lysisbuffer 1X (meegeleverd met de luciferase assay kit). Laat de cellen bij kamertemperatuur lyseren onder voorzichtig schudden. Bewaren bij -20 ° C. </li><li> Dooi de plaat en breng 40 pi van het lysaat een 96-well plaat luminometer en voeg 100 ul luciferase substraat (die met de luciferase-test kit) en meet de luciferase (vuurvlieg luciferase) activiteit in een luminometer volgens de instructies van de fabrikant. </li></ol> 8. Representatieve resultaten Met behulp van onze co-infectie model, laten we zien dat exposure P. falciparum in het MDM vermindert hun vatbaarheid voor HIV-1 infectie. Inderdaad, een significante reductie (p &lt;0,05, ANOVA 2, dag 12) tot het vrijkomen van virusdeeltjes, zoals gemeten door HIV-1 p24 capside-eiwit in de supernatant werd waargenomen in MDM voorbehandeld met parasieten (Figuur 2A). Deze waarneming is bevestigd cellen geïnfecteerd met virussen die codeert voor een luciferase-reportergen. MDM infectie met deze virussen herbergen een exogeen VSV-G of HIV-1 glycoproteïnen tot significant (p &lt;0,05, Student&#39;s t-test) minder luciferase in cellen blootgesteld aan P. falciparum (Figuur 2B). Opmerkelijk is dat VSV-G-pseudogetypeerde virussen veel groter dan de luciferaseactiviteit JRFLenv tegenhangers opgeleverd, is vanwege de grotere infectie-efficiëntie van VSV-G pseudogetypeerde deeltjes 15. Gezien het feit dat parasiet blootstelling aan MDM effecten beide soorten virussen, duidt dit erop dat het enige stap in het virale gen-ex invloedpression (Figuur 2B). Het is belangrijk te vermelden dat levensvatbaarheid van de cellen werd niet beïnvloed door MDM blootstelling aan iRBC (gegevens niet getoond), wat aangeeft dat de waargenomen remming specifiek is en niet door celsterfte. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/4166/4166fig1.jpg" /> Figuur 1. A) Plate regeling voor MDM infectie met een volledig replicerende virus Mock:. Niet-geïnfecteerde cellen. uRBC: cellen blootgesteld aan niet-geïnfecteerde rode bloedcellen. iRBC: cellen blootgesteld aan Plasmodium falciparum geïnfecteerde rode bloedcellen. Bal: cellen geïnfecteerd met NL4.3Bal env Bal / uRBC:. Cellen blootgesteld aan uRBC en geïnfecteerd met NL4.3Bal env Bal / iRBC:.. Cellen blootgesteld aan iRBC en geïnfecteerd met NL4.3Bal env B) Plate regeling voor MDM infectie met enkele cyclus luciferase-codering virus Mock:. niet-geïnfecteerde cellen. uRBC: cellen blootgesteld aan niet-geïnfecteerde rode bloedcellen. iRBC: cellen blootgesteld aan Plasmodium falciparum-infected rode bloedcellen. Δenv: cellen geïnfecteerd met NL4.3 Luc + Env - R + JRFL:. Cellen geïnfecteerd met NL4.3 Luc + Env - R + (JRFL env). VSV-G: cellen geïnfecteerd met NL4.3 Luc + Env - R + (VSV-G) Δenv / uRBC:.. cellen blootgesteld aan uRBC en geïnfecteerd met NL4.3 Luc + Env-R + Δenv / iRBC: cellen blootgesteld aan iRBC en geïnfecteerd met NL4.3 Luc + Env - R + JRFL / uRBC: cellen blootgesteld aan uRBC en geïnfecteerd met NL4.3 Luc + Env - R + (JRFL env).. JRFL / iRBC: cellen blootgesteld aan iRBC en geïnfecteerd met NL4.3 Luc + Env - R + (JRFL env). vsv-g/uRBC: cellen blootgesteld aan uRBC en geïnfecteerd met NL4.3 Luc + Env - R + (VSV-G) vsv-g/iRBC:. cellen blootgesteld aan iRBC en geïnfecteerd met NL4.3 Luc + Env - R + (VSV-g). <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/4166/4166fig2.jpg"/&gt; Figuur 2. . A) Effect van Plasmodium falciparum op HIV-1 virus productie in MDM MDM blootgesteld aan uRBC of iRBC een verhouding 75:1 (uRBC / iRBC: MDM) gedurende 4 uur en grondig gewassen. Cellen werden geïnfecteerd met 10ng van NL4.3Bal env p24 gedurende 2 uur. Virale productie werd door ELISA voor HIV-1 p24 in celvrije bovendrijvende op verschillende tijdstippen na de eerste virale infectie. Een representatief experiment wordt getoond B) Effect van Plasmodium falciparum op HIV-1 virale transcriptie in MDM MDM waren geïnfecteerd met uRBC of iRBC in een verhouding 75:1 (uRBC / iRBC:.. MDM). De cellen werden vervolgens geïnfecteerd met 10ng van p24 van enkelvoudige cyclus virus (ofwel NL4.3 Luc + Env - R +, NL4.3 Luc + Env - R + (JRFL env) of NL4.3 Luc + Env - R + (VSV- g)). Luciferase-expressie werd geëvalueerd in cellysaten 72 uur na de eerste virus. Een representatief experiment weergegeven.

<ol><li>WHO. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22World+Malaria+Report%22">World Malaria Report</a>. , (2005).</li>
<li>Kublin, J. G., Patnaik, P., Jere, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Plasmodium+falciparum+malaria+on+concentration+of+HIV-1-RNA+in+the+blood+of+adults+in+rural+Malawi%3A+a+prospective+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Effect of Plasmodium falciparum malaria on concentration of HIV-1-RNA in the blood of adults in rural Malawi: a prospective cohort study.</a> Lancet. 365, 233-240 (2005).</li>
<li>Cuadros, D. F., Branscum, A. J., Crowley, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-malaria+co-infection%3A+effects+of+malaria+on+the+prevalence+of+HIV+in+East+sub-Saharan+Africa%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">HIV-malaria co-infection: effects of malaria on the prevalence of HIV in East sub-Saharan Africa.</a> Int. J. Epidemiol. 40, 931-939 (2011).</li>
<li>Xiao, L., Owen, S. M., Rudolph, D. L., Lal, R. B., Lal, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmodium+falciparum+antigen-induced+human+immunodeficiency+virus+type+1+replication+is+mediated+through+induction+of+tumor+necrosis+factor-alpha%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Plasmodium falciparum antigen-induced human immunodeficiency virus type 1 replication is mediated through induction of tumor necrosis factor-alpha.</a> J. Infect. Dis. 177, 437-445 (1998).</li>
<li>Froebel, K., Howard, W., Schafer, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+by+malaria+antigens+renders+mononuclear+cells+susceptible+to+HIV+infection+and+re-activates+replication+of+endogenous+HIV+in+cells+from+HIV-infected+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Parasite+Immunol%22%5BJournal%5D)">Activation by malaria antigens renders mononuclear cells susceptible to HIV infection and re-activates replication of endogenous HIV in cells from HIV-infected adults.</a> Parasite Immunol. 26, 213-217 (2004).</li>
<li>Diou, J., Tardif, M. R., Barat, C., Tremblay, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+derived+from+hemozoin-loaded+monocytes+display+a+partial+maturation+phenotype+that+promotes+HIV-1+trans-infection+of+CD4%2B+T+cells+and+virus+replication%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells derived from hemozoin-loaded monocytes display a partial maturation phenotype that promotes HIV-1 trans-infection of CD4+ T cells and virus replication.</a> J. Immunol. 184, 2899-2907 (2010).</li>
<li>Diou, J., Tardif, M. R., Barat, C., Tremblay, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malaria+hemozoin+modulates+susceptibility+of+immature+monocyte-derived+dendritic+cells+to+HIV-1+infection+by+inducing+a+mature-like+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Malaria hemozoin modulates susceptibility of immature monocyte-derived dendritic cells to HIV-1 infection by inducing a mature-like phenotype.</a> Cell Microbiol. 12, 615-625 (2010).</li>
<li>Diou, J., Gauthier, S., Tardif, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ingestion+of+the+malaria+pigment+hemozoin+renders+human+macrophages+less+permissive+to+HIV-1+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Ingestion of the malaria pigment hemozoin renders human macrophages less permissive to HIV-1 infection.</a> Virology. 395, 56-66 (2009).</li>
<li>Davies, J. Q., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+human+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of human macrophages.</a> Methods Mol. Biol. 290, 105-116 (2005).</li>
<li>Fortin, J. F., Cantin, R., Lamontagne, G., Tremblay, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-derived+ICAM-1+glycoproteins+incorporated+on+human+immunodeficiency+virus+type+1+are+biologically+active+and+enhance+viral+infectivity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Host-derived ICAM-1 glycoproteins incorporated on human immunodeficiency virus type 1 are biologically active and enhance viral infectivity.</a> J. Virol. 71, 3588-3596 (1997).</li>
<li>Bounou, S., Leclerc, J. E., Tremblay, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+host+ICAM-1+in+laboratory+and+clinical+strains+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+increases+virus+infectivity+and+CD4%28%2B%29-T-cell+depletion+in+human+lymphoid+tissue%2C+a+major+site+of+replication+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Presence of host ICAM-1 in laboratory and clinical strains of human immunodeficiency virus type 1 increases virus infectivity and CD4(+)-T-cell depletion in human lymphoid tissue, a major site of replication in vivo.</a> J. Virol. 76, 1004-1014 (2002).</li>
<li>Wei, X., Decker, J. M., Liu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+resistant+human+immunodeficiency+virus+type+1+in+patients+receiving+fusion+inhibitor+%28T-20%29+monotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob.+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Emergence of resistant human immunodeficiency virus type 1 in patients receiving fusion inhibitor (T-20) monotherapy.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 46, 1896-1905 (2002).</li>
<li>Trager, W., Jensen, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+malaria+parasites+in+continuous+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Human malaria parasites in continuous culture.</a> Science. 193, 673-675 (1976).</li>
<li>Turrini, F., Ginsburg, H., Bussolino, F., Pescarmona, G. P., Serra, M. V., Arese, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytosis+of+Plasmodium+falciparum-infected+human+red+blood+cells+by+human+monocytes%3A+involvement+of+immune+and+nonimmune+determinants+and+dependence+on+parasite+developmental+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Phagocytosis of Plasmodium falciparum-infected human red blood cells by human monocytes: involvement of immune and nonimmune determinants and dependence on parasite developmental stage.</a> Blood. 80, 801-808 (1992).</li>
<li>Akkina, R. K., Walton, R. M., Chen, M. L., Li, Q. X., Planelles, V., Chen, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-efficiency+gene+transfer+into+CD34%2B+cells+with+a+human+immunodeficiency+virus+type+1-based+retroviral+vector+pseudotyped+with+vesicular+stomatitis+virus+envelope+glycoprotein+G%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">High-efficiency gene transfer into CD34+ cells with a human immunodeficiency virus type 1-based retroviral vector pseudotyped with vesicular stomatitis virus envelope glycoprotein G.</a> J. Virol. 70, 2581-2585 (1996).</li>
<li>Zhao, C., Papadopoulou, B., Tremblay, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leishmania+infantum+enhances+human+immunodeficiency+virus+type-1+replication+in+primary+human+macrophages+through+a+complex+cytokine+network%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Immunol%22%5BJournal%5D)">Leishmania infantum enhances human immunodeficiency virus type-1 replication in primary human macrophages through a complex cytokine network.</a> Clinical Immunol. 113, 81-88 (2004).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

We hebben hier geïllustreerd twee verschillende benaderingen om de impact van de malariaparasiet op de HIV-1 virale cyclus, dat wil zeggen te analyseren door het analyseren van virale gen-expressie of nageslacht virus productie en replicatie in monocyt-afgeleide macrofagen. Soortgelijke benaderingen werden gebruikt voor andere HIV-1-parasiet co-infecties 16. Echter, deze nieuwe gegevens zijn een stap voorwaarts in het onderzoek naar malaria-HIV-1 co-infecties. . Inderdaad, Diou et al. 8 bestudeerde het effect van hemozoin, geen levende parasieten, over HIV-1 replicatie, in overeenstemming met onze resultaten, zij opgemerkt dat hemozoin was voldoende om de virale productie te remmen door MDM, en niet MDMs. Met behulp van de beschreven experimentele lay-out, zagen we dat P. falciparum oefent duidelijk nadelige invloed op de HIV-1 replicatieve cyclus in macrofagen: een aanzienlijke remming van virale productie waargenomen wordt in macrofagen voorbehandeld blootgesteld aan parasieten (Figure 2A) en een specifieke effect van de parasiet virale transcriptie in figuur 2B. Toch kunnen we niet om bijkomende effecten van de parasiet op binnendringen van het virus of fusie (decapsidation), of op post-integratie mechanismen, zoals de eiwitsynthese of virale deeltjes montage en knopvorming. Bovendien is het mogelijk dat een verschillende invloed op HIV-1 replicatie zou worden verkregen indien de parasiet werden ofwel toegevoegd tegelijk of na MDM infectie met het virus. Onze in vitro co-infectie model biedt een krachtig hulpmiddel om gedetailleerd onderzoek van HIV-1 / P. uit te voeren falciparum interacties in de gastheercel. Bijvoorbeeld, de combinatie van deze experimentele inrichting met andere technieken zoals kwantitatieve real time PCR, die gericht en kwantificeren specifieke stappen virale retrotranscription en virale genoom integratie het gastheercelgenoom, zijn zeer goed mogelijk en moet opleveren verder het deurtjeghts in de mechanismen die betrokken zijn bij co-infecties. Bovendien specifieke assays evalueren eerste stappen van de virale cyclus (viraal fusion, decapsidation, ingang kwantificering) kan worden toegepast om deze basisprotocol te onderzoeken welke effect op virale replicatie. Deze wijzigingen laten zien hoe flexibel dit protocol is HIV-1 kwantificatie en detectie met betrekking tot: inderdaad, zelfs op standaard HIV-1 reverse transcriptase kwantificatie testen met behulp van tritium-gelabelde nucleotiden is denkbaar dat de ELISA te vervangen voor HIV-1 p24. Naast MDM, verwachten we systeem worden op andere celtypen die relevant zijn voor HIV-1-malaria interacties, zoals monocyten en dendritische cellen. Dat MDM zijn hechtende cellen vergemakkelijkt de manipulatie, kan gemakkelijk uitwassen iRBC die niet zijn genomen, of in contact met MDM zonder wegnemen van macrofagen. Dit voordeel geldt niet voor dendritische cellen en monocyten, die in suspensie gekweekt bemoeilijkt de sebereiding van uRBC en gratis iRBC met dergelijke cellen en we zijn momenteel bezig met deze kwestie. Het systeem kan ook nuttig zijn om meer complexe interacties zoals de effecten van Plasmodium blootgestelde monocyt-afgeleide cellen op HIV-1 virus cyclus in andere cellen zoals CD4 positieve T-cellen co-kweek experimenten bestuderen. Tenslotte kan ons protocol geschikt voor experimenten naar het effect van P. falciparum iRBCs op HIV-1 reactivatie in PBMC voor HIV-1 geïnfecteerde personen. Ethiek verklaring Menselijke PBMC werden verkregen uit het bloed van gezonde donoren, in overeenstemming met de richtlijnen van de bio-ethiek Comite van het Centre Hospitalier de l&#39;Universite Laval Research Center. De schriftelijke toestemming is verkregen van alle bloeddonoren.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Multicell </td><td> 350 tot 000-CL </td><td></td></tr><tr><td> PBS-endotoxine vrij </td><td> Sigma </td><td> D8662 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> Wisent </td><td> 080-150 </td><td> Hitte-geïnactiveerd bij 56 ° C gedurende 30 min </td></tr><tr><td> Accutase </td><td> eBiosciences </td><td> 00-4555-56 </td><td></td></tr><tr><td> Albumax II </td><td> Gibco </td><td> 11021-037 </td><td> Opgelost in RPMI 1640, filter-gesteriliseerd </td></tr><tr><td> Lymfocyt scheidingsmedium </td><td> Multicell </td><td> 305 tot 010-CL </td><td></td></tr><tr><td> White luminometer platen </td><td> Promega </td><td> Z3291 </td><td></td></tr><tr><td> CS Macs scheiding columms </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-041-305 </td><td></td></tr><tr><td> VarioMacs scheidingsteken </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-090-282 </td><td></td></tr><tr><td> Penicilline / streptomycine oplossing </td><td> Wisent </td><td> 450 tot 201-EL </td><td></td></tr><tr><td> D-sorbitol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S1876 </td><td></td></tr><tr><td> Cell schraper (25 cm) </td><td> Sarstedt </td><td> 83,1830 </td><td></td></tr><tr><td> 24-Nou Cell kweekplaten </td><td> BD Falcon </td><td> 353047 </td><td></td></tr><tr><td> 150 x 20 mm cultuur schotel </td><td> Sarstedt </td><td> 83.1803.003 </td><td></td></tr><tr><td> M-CSF </td><td> Genscript </td><td> Z02001 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H4034 </td><td></td></tr><tr><td> Menselijk serum AB + </td><td> Valley Biomedische </td><td> HP1022 </td><td></td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Wisent </td><td> 311 tot 505-CL </td><td></td></tr><tr><td> Gentamicine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G1397 </td><td></td></tr><tr><td> Hypoxanthine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H9636 </td><td></td></tr><tr><td> NaHCÛ3 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S5761 </td><td></td></tr><tr><td> Luciferase Assay System </td><td> Promega </td><td> E1500 </td><td></td></tr><tr><td> Menselijke rode bloedcellen </td><td></td><td></td><td> Verkregen gezuiverd uit Chul bloedbank. </td></tr></tbody></table>

een<em&gt; in vitro</em&gt; co-infectie model om te onderzoeken<em&gt; plasmodium falciparum</em&gt;-hiv-1 interacties in menselijke primaire monocyt-afgeleide immuuncellen

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

Plasmodium falciparum, de verwekker van de dodelijkste vorm van malaria, en het humaan immunodeficiëntie virus type-1 (HIV-1) behoren tot de belangrijkste gezondheidsproblemen wereldwijd, die verantwoordelijk is voor een totaal van 4 miljoen doden per jaar 1. Door hun uitgebreide overlap bij de ontwikkeling van regio&#39;s, vooral Sub-Sahara Afrika, co-infecties met malaria en HIV-1 komen vaak voor, maar de wisselwerking tussen de twee ziekten wordt slecht begrepen. Epidemiologische rapporten suggereren dat malaria-infectie tijdelijk HIV-1 replicatie verbetert en verhoogt de HIV-1 viral load in co-geïnfecteerde individuen 2,3. Omdat deze viremie hoog blijft gedurende een aantal weken na de behandeling met middelen tegen malaria, kan dit fenomeen een impact hebben op progressie van de ziekte en de transmissie. De cellulaire immunologische mechanismen achter deze opmerkingen zijn alleen nauwelijks bestudeerd. De weinige in vitro studies investigtratie na impact van malaria op de HIV-1 hebben aangetoond dat de blootstelling aan oplosbare malaria-antigenen kunnen HIV-1 infectie en reactivering in immuuncellen te verhogen. Echter, deze studies hele celextracten van P. falciparum schizont parasieten en perifeer bloed mononucleaire cellen (PBMC), waardoor het moeilijk te ontcijferen die malaria-component (en) verantwoordelijk was voor de waargenomen effecten en wat de beoogde gastheercellen waren 4,5. Recent werk heeft aangetoond dat blootstelling van onrijpe monocyt-afgeleide dendritische cellen de malaria pigment hemozoin hun vermogen om HIV-1 te dragen aan CD4 + T-cellen 6,7 verhoogd, maar dat het HIV-1-infectie van macrofagen 8 af. Om licht te werpen op dit complexe proces, een systematische analyse van de interacties tussen de malariaparasiet en HIV-1 in verschillende relevante menselijke primaire cel populaties wordt kritisch nodig is. Verschillende technieken voor het onderzoeken van de invloed van HIV-1 op de fagocytose van micro-organismen en het effect van deze pathogenen op HIV-1 replicatie zijn beschreven. Wij hier vormen een methode om de effecten van P. te onderzoeken falciparum-geïnfecteerde erythrocyten op de replicatie van HIV-1 in humane primaire monocyt-afgeleide macrofagen. De invloed van de parasitaire blootstelling aan HIV-1 transcriptie / translationele gebeurtenissen wordt bewaakt door een cyclus pseudogetypeerde virussen waarbij een luciferase reporter-gen is vervangen Env gen en het effect op de hoeveelheid virus vrijkomt door de geïnfecteerde macrofagen wordt bepaald door de HIV-1 capside-eiwit p24 door ELISA celsupernatanten.

Wij hebben een<em&gt; In vitro</em&gt; Malaria-HIV-1 co-infectie model om de impact van de te bestuderen<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt; De HIV-1 replicatieve cyclus humane primaire monocyt-afgeleide macrofagen. Dit veelzijdige systeem gemakkelijk worden aangepast aan andere primaire celtypen gevoelig HIV-1-infectie.

Een<em&gt; In vitro</em&gt; Co-infectie model om te onderzoeken<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt;-HIV-1 Interacties in menselijke primaire monocyt-afgeleide immuuncellen

Plasmodium falciparum, het veroorzakende agens van de dodelijkste vorm van malaria, en het menselijk immunodeficiëntie virus type-1 (hiv-1) behoren tot de belangrijkste ...

Het algemene doel van deze procedure is het ontwikkelen van een in vitro model om de effecten van met Plasmodium falciparum geïnfecterde erytrocyten op de replicatie van HIV-1 in humane primaire monocyt-afgeleide macrofagen te bestuderen. Dit wordt bereikt door eerst Plasmodium falciparum-geïnfecterde rode bloedcellen te isoleren met behulp van het veac-systeem, om vervolgens humane monocyt-afgeleide macrofagen bloot te stellen aan de geïnfecteerde cellen. Vervolgens worden de aan rode bloedcellen blootgestelde monocyt-afgeleide macrofagen geïnfecteerd met volledig replicatief HIV of luciferase-coderend HIV met enkelvoudige replicatie.Ten slotte worden de cultuursupernatanten op dag 3, 6, 9 en 12 na infectie geoogst voor het volledig replicatieve virus en voor het luciferase-coderende virus. De geïnfecteerde cellen worden na 72 uur infectie gelyseerd. Uiteindelijk kan de virale replicatie worden gemonitord door de hoeveelheid HIV-1 p24-capside-eiwit in de supernatanten te kwantificeren via ELISA en kan de virale transcriptie worden gemonitord door luciferase-kwantificatie van de cellysaten.Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen op het gebied van malaria- en hiv-co-infecties. Bijvoorbeeld: hoe beïnvloedt infectie met de plasmodium-parasiet de hiv-replicatie? Hoewel deze methode is ontwikkeld om interacties tussen plasmodium en hiv in macrofagen te bestuderen, kan deze ook worden toegepast op andere celtypen.Bijvoorbeeld, dendritische cellen, monocyten of CD4 T-cellen; de procedure wordt gedemonstreerd door Guadalupe Andreani, een postdoc-onderzoeker in het laboratorium. Begin met het oogsten van rode bloedcellen uit de kweekplaat, was de teruggewonnen cellen in 10 milliliters monocyt-afgeleid macrofaagmedium en resuspendeer het pellet vervolgens in 12 milliliters monocyt-afgeleid macrofaagkweekmedium. Voeg nu langzaam de celsuspensie toe aan een Milton ECS-kolom en laat de suspensie doorstromen. Nadat de kolom één keer is gewassen met vers medium, wordt deze van de magneet verwijderd en worden 12 milliliters monocyt-afgeleid macrofaagkweekmedium doorgespoeld.Leid het medium door de kolom en vang de geïnfecteerde rode bloedcellen op in een steriele buis om monocyt-afgeleide macrofagen bloot te stellen aan geïnfecteerde of niet-geïnfecteerde rode bloedcellen. Voeg het juiste volume rode bloedcel-suspensie toe aan elke put van een vooraf geprepareerde 24-wells plaat met monocyt-afgeleide macrofagen. Incubeer de co-culturen bij 37 °C in 5% CO2. Verwijder na vier uur het medium dat de rode bloedcellen bevat en voeg vervolgens voorzichtig 600 µL endotoxine-vrije PBS toe aan elke put, waarbij de PBS na elke wasstap onmiddellijk drie keer wordt geaspireerd.Voeg nu 200 µL ijskoud, steriel water toe aan elke put om de rode bloedcellen te lyseren en aspireer het water na 20 seconden. Voeg vervolgens 600 µL kweekmedium voor monocyten-afgeleide macrofagen toe aan elke put en incubeer de culturen gedurende 24 uur bij 37 °C en 5% CO2. Om het effect van Plasmodium falciparum op HIV-1 replicatie in monocyten-afgeleide macrofagen te beoordelen, voegt u 300 µL monocyten-afgeleid macrofaagmedium toe dat P24 van NL4-3 BO HIV-1 virussen bevat aan de betreffende putten, vergelijkbaar met het protocol dat in deze figuur wordt weergegeven.Nadat de cocultures twee uur zijn geïncubeerd, worden de cellen drie keer gewassen met 600 µL endotoxinevrij PBS. Voeg vervolgens 600 µL vers monocyt-afgeleid macrofaagmedium toe aan elke well en incubeer de cocultures verder op dag 3, 6, 9 en 12. Na de initiële virale infectie worden 200 µL van elk supernatant geoogst, waarbij de teruggewonnen celсусpensie wordt vervangen door 200 µL vers monocyt-afgeleid macrofaagmedium. Bewaar de geoogste supernatanten daarna bij -20 °C voor latere analyse via ELISA.Om de impact van de parasieten op de genexpressie van HIV-1 in monocyt-afgeleide macrofagen te bepalen, voeg dan 300 µL monocyt-afgeleid macrofaagmedium toe dat p24 van het luciferase-ENC-gecoate virus van belang bevat aan de overeenkomstige wells, vergelijkbaar met de hier getoonde protocollen. Na het incuberen en wassen van de cocultures, zoals zojuist getoond voor het niet-luciferase-ENC-gecoate virus, wordt het medium 72 uur na infectie verwijderd en worden 200 µL van de luciferase-assay lysisbuffer toegevoegd. Lyeer de cellen nu bij kamertemperatuur met voorzichtig schudden en bewaar de cocultures vervolgens bij -20 °C.Breng na het ontdooien van de plaat 40 µL lysaat van elke well over naar de overeenkomstige well in een luminometerplaat met 96 wells. Voeg vervolgens 100 µL van het luciferase-substraat uit de luciferase-assaykit aan elke well toe. Meet tot slot de vuurvlieg-luciferase-activiteit in een luminometer.Volgens de instructies van de fabrikant in dit experiment werden monocytafgeleide macrofagen blootgesteld aan geïnfecteerde of niet-geïnfecteerde rode bloedcellen en vervolgens geïnfecteerd met NL 4-3. Zoals zojuist gedemonstreerd, werd de productie van het virale eiwit p24 vervolgens gemonitord via ELISA voor HIV-1 p24 in celvrije supernatten op verschillende tijdstippen na de initiële virale infectie. Let op de significante afname in de afgifte van virale deeltjes op dag 12, gemeten aan de hand van het HIV-1 p24-capside-eiwit in het supernat van monocytafgeleide macrofagen die vooraf waren behandeld met parasieten.In dit experiment werden monocyten-afgeleide macrofagen blootgesteld aan geïnfecterde en niet-geïnfecterde rode bloedcellen en vervolgens geïnfecteerd met een luciferase-coderend virus, zoals zojuist gedemonstreerd. De luciferase-expressie werd vervolgens geëvalueerd in het cellysaat 72 uur na de initiële virusinfectie. Infectie van monocyten-afgeleide macrofagen met dergelijke virussen die ofwel exogene VSVG- of HIV-1-glycoproteïnen bevatten, leidde tot significant minder luciferaseproductie in cellen die waren blootgesteld aan p false spar. Het is opmerkelijk dat VSVG-pseudotype virussen een veel grotere luciferase-activiteit opleverden dan hun JRFL-tegenhangers, vanwege de grotere infectie-efficiëntie van VSVG-pseudotype deeltjes.Deze techniek stelt onderzoekers op het gebied van malaria- en hiv-co-infecties in staat om de interacties tussen deze twee pathogenen te onderzoeken in een in vitro-model dat aanpasbaar is voor de studie van verschillende typen immuuncellen.

an-vitro-co-infection-model-to-study-plasmodium-falciparum-hiv-1

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Selectie van Plasmodium falciparum Parasieten voor Cytoadhesion Human Brain endotheelcellen

This video demonstrates ex vivo infection of human uterine mucosal tissue with human immunodeficiency virus type 1, HIV-1, and their maintenance on top of gelatin sponges at the air-liquid interface. This method allows monitoring of HIV-1 replication and pathogenesis within human tissues.

A Human Cervical Mucosa Infection Model to Study HIV Pathogenesis in Ex Vivo Conditions

This video demonstrates the generation of an in vitro malaria-HIV co-infection cell culture model. HIV-infected peripheral blood mononuclear cells co-cultured with Plasmodium falciparum parasitized erythrocytes potentially support each other's growth and provide insights into the immune responses and disease progression in HIV and malaria co-infections.

Generation of an In Vitro Cell Culture Model of Malaria-HIV Co-Infection

Het humaan respiratoir syncytieel virus (HRSV) kan ernstige bronchiolitis veroorzaken bij jonge zuigelingen. Een deel van de pathogenese van ernstige HRSV-ziekte wordt veroorzaakt door de immuunrespons van de gastheer. Stimulatie van primaire menselijke immuuncellen met HRSV biedt een snel en reproduceerbaar modelsysteem om de activering van ontstekingsroutes en infectie te bestuderen.

Een in vitro model om immuunresponsen van humane perifere bloedmononucleaire cellen op humane respiratoire syncytiële virusinfectie te bestuderen

Unlike celvrij HIV-1 deeltjes geïnfecteerd CD4 + T-cellen effectief waargenomen door plasmacytoïde dendritische cellen (pDCs). Dit manuscript beschrijft een werkwijze waarbij perifere mononucleaire cellen (PBMC's) of geïsoleerde pDCs mede gekweekt met HIV-1 geïnfecteerde T-cellen aangeboren sensing evalueren pDCs zoals bepaald door afgifte van type I IFN.

Het beoordelen van de Aangeboren Sensing van HIV-1 geïnfecteerde CD4<sup&gt; +</sup&gt; T cellen door plasmacytoïde dendritische cellen gebruiken een<em&gt; Ex vivo</em&gt; Co-cultuur systeem.

Menselijk dubbele infectie is moeilijk te repliceren in vitro. Echter, menselijke malariaparasieten kunnen gemakkelijk worden gekweekt in vitro, net als vers geïsoleerde humane perifere bloedmononucleaire cellen die natuurlijk besmet zijn met HIV. Dit biedt een uitstekend model voor het bestuderen van vroege immuunresponsen op malariaparasieten in de context van HIV-co-infectie.

Een<em&gt; In Vitro</em&gt; Model voor het meten van immuunrespons op Malaria in de context van HIV Co-infectie

Dit protocol beschrijft de methoden voor het construeren van een gehumaniseerd muismodel voor beenmerg/lever/thymus met stamcelgebaseerde geëngineerde immuniteit tegen HIV-infectie.

Stamcel-Based Engineered immuniteit tegen HIV infectie in het gehumaniseerde muismodel

Infectie van menselijke weefsels met humaan immunodeficiëntie virus (HIV) ex vivo biedt een waardevolle 3D-model van virus pathogenese. Hier beschrijven we een protocol voor het verwerken en infecteren van weefsel monsters van menselijke amandelen en vrouwelijke genitale mucosae met HIV-1 en onderhouden ze in cultuur in de vloeistof-lucht-interface.

Ex Vivo Infectie van menselijke lymfoïde weefsels en vrouwelijke genitale Mucosa met Humaan Immunodeficiëntie Virus 1 en Histoculture

Hier gepresenteerd is een geoptimaliseerd protocol voor het isoleren, kweken, transfecting, en differentiëren menselijke primaire monocyten van HIV-geïnfecteerde individuen en gezonde controles.

Isolatie, transfectie en cultuur van primaire humane monocyten

Hier beschrijven we een nieuwe methode om de mechanismen van cellulaire immuniteit tegen Plasmodium tijdens het bloedstadium van infectie op te helderen. Dit is een in vitro test die geïnfecteerde rode bloedcellen dodental door cytotoxische lymfocyten meet.

In vitro Bepaling van plasmodium-geïnfecteerde rode bloedceldoding door cytotoxische lymfocyten

Dit protocol beschrijft hoe de combinatie van EcoHIV-infectie met Tmem119-EGFP-muizen een waardevol biologisch systeem biedt voor het onderzoeken van microgliale veranderingen en virale reservoirs in knaagdiermodellen van HIV-geassocieerde neurocognitieve stoornissen.

Identificatie van EcoHIV-geïnfecteerde cellen in microglia-gemanipuleerde transgene muizen

Ontdek een in vitro co-infectiemodel om Plasmodium falciparum-HIV-1-interacties te bestuderen in menselijke primaire monocyt-afgeleide macrofagen. Deze methode meet virale replicatie via P24-eiwit en luciferase-activiteit.

Een In vitro Co-infectie model om te onderzoeken Plasmodium falciparum-HIV-1 Interacties in menselijke primaire monocyt-afgeleide immuuncellen (Video) | JoVE Journal

Een

Meer video's verkennen