Name: Bronchoalveolaire Lavage (BAL) voor onderzoek; verkrijgen adequaat monster Yield (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-24T19:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 47 s
Description: Leer een veilige bronchoalveolaire lavage-techniek voor longonderzoek met behulp van fiberoptische bronchoscopie en zachte handmatige zuiging. Deze methode maximaliseert celopbrengst en viabiliteit bij patiënten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bedankt aan Elena Mitsi (Research assistent) en Sr Carole Hancock (Research nurse) en theater medewerkers voor hun bijdrage aan het filmen, en David Shaw (research nurse) voor zijn steun bij ons onderzoek bronchoscopies. Dank ook aan onze vrijwilliger Rebecca Dunphy voor het toestaan ​​van deze procedure te worden verfilmd.

1. De onderwerpen worden voldaan bij aankomst door de Respiratory Research Nurse <ol><li> Het onderwerp is het vasten gedurende&gt; 4 uur voor vast voedsel en 2 uur voor heldere vloeistoffen 1. </li><li> De procedure wordt uitgevoerd als een dagopname met passende pre-en post-procedure controles (volgens de standaard ziekenhuis-beleid). </li><li> Het onderwerp draagt ​​een ziekenhuis jurk. </li><li> Een kleine gauge canule wordt ingebracht (idealiter in de linker) en in situ blijft tot het einde van de post-procedure herstelperiode 1. </li><li> Preprocedure waarnemingen worden genomen (bloeddruk, hartslag, zuurstofverzadigingen [SATS]). </li><li> Het onderwerp wordt overgebracht naar de bronchoscopie suite. </li></ol> 2. Het onderwerp is voorbereid op de procedure in de Suite van een Respiratory Research clinicus Ervaren in bronchoscopie <ol><li> Controle van apparatuur is aangesloten, zoals 3-lead ECG, saturatiemeter 1,10 en bloeddrukmeter. Anesthetic ondersteuning is niet nodig met inbegrip van informed consent. </li><li> Zuurstof kan via zuurstofbril worden afgeleverd bij maximaal 4 L / min, om satellieten te bereiken&gt; 90% 1. </li><li> De operator controleert de bronchoscoop, dit omvat het garanderen van een effectieve zuigkracht door opzuigen steriele fysiologische zoutoplossing. </li><li> Topische anesthesie met lidocaïne kan op de neus (met Instillagel 1) en het mondslijmvlies (met Xylocaine) </li><li> Als sedatie passend en door de proefpersoon gevraagd, wordt intraveneus midazolam toegediend 1. Een passende omkering agent (flumazenil) is per direct beschikbaar. </li><li> Reanimatie apparatuur moet gemakkelijk beschikbaar 1,10 zijn. </li></ol> 3. De bronchoscoop is geplaatst en gepositioneerd <ol><li> Intubatie is meestal via de neus. Indien dit niet mogelijk vanwege neuspoliepen, ontstoken neusschelpen of ongemak dan het onderwerp geïntubeerd via de mond (een mond-wacht wordt gebruikt ter voorkomingbeschadiging van de reikwijdte of de tanden van de patiënt). </li><li> Topische verdoving bij de larynx wordt voltooid met 4% lidocaïne, gewoonlijk in totaal 4-6 ml gebruikt. Gewoonlijk dit veroorzaakt hoesten op instillatie. </li><li> De stembanden worden doorgegeven, en verder mucosale anesthesie met behulp van 2 ml van 2% lidocaïne bij de kiel, bij de verdeling van de rechter onderste kwab (RLL) en rechts midden kwab (RML) en bij de RML ingang. </li><li> De bronchoscoop is gepositioneerd binnen de RML, idealiter in het mediale segment in een positie waar het distaal genoeg om in een veilige positie, maar niet te distale zodat de luchtwegen instort wanneer zuigkracht wordt toegepast (&#39;Wink test&#39; met de zuigknop ). </li><li> Goede positionering wordt tijdens de knipoog proef aangegeven door een bronchoscoop die volledig kan worden gehandhaafd in positie door de bronchoscopist en een luchtweg dat niet volledig te sluiten direct op zachte zuigkracht. </li></ol> 4. De BAL wordt uitgevoerd <ol><li> Vier 60 ml spuiten zijn pregevuld met verwarmde zoutoplossing - 60 ml, 50 ml, 50 ml en 40 ml in opeenvolgende spuiten. Wanneer het onderwerp en bronchoscopist zijn klaar de eerste spuit van zout is ingeprent door de bronchoscopie assistent terwijl de bronchoscopist handhaaft de positie in de RML. </li><li> Zachte hand zuigkracht wordt vervolgens uitgevoerd door de assistent met dezelfde poort en 50 ml spuit. </li><li> Deze procedure wordt dan herhaald nog 3x, met een maximaal volume van 200 ml in onze specifieke techniek. </li><li> De opgehaalde BAL vloeistof wordt voorzichtig verdreven in gelabelde containers al op smeltend ijs gehouden. Glascontainers kunnen worden presiliconized om celhechting te remmen en het maximaliseren cel terugkeer. </li><li> De BAL vloeistof verschijnt wazig tegen het licht met oppervlakte zeepbellen gevormd door oppervlakteactieve stoffen. </li><li> De bronchoscoop wordt langzaam volledig teruggetrokken. </li><li> De BAL vloeistof wordt vervoerd onverwijld op ijs voor onmiddellijke verwerking. </li></ol> 5. Onderwerp Recovery </p&gt; <ol><li> Het onderwerp wordt teruggewonnen voor 2-4 uur door het respiratoir onderzoek verpleegkundige op een afdeling. </li><li> Gedurende deze tijd ze mogen rusten en dan alleen eten en drinken&gt; 60 min 1 na de procedure (wanneer hun zwaluw wordt beoordeeld als veilig), om het risico van aspiratie. </li><li> Postprocedure waarnemingen worden gecontroleerd en geregistreerd. Een klinisch onderzoek plaatsvindt vóór lozing. </li><li> Het onderwerp wordt geïnformeerd predischarge over de vaak voorkomende bijwerkingen (koorts, milde recht submammary pijn op de borst, keelpijn) en krijgt een telefoonnummer voor het geval significante bijwerkingen optreden 1. </li><li> Het onderwerp wordt opgevolgd op 1-5 dagen na de procedure met een klinische contact. Dit kan ofwel via telefoon of persoonlijk. </li></ol> 6. De cellen worden in het laboratorium geïsoleerd - Speel op Smeltend Ijs waar mogelijk <ol><li> Het volume van BAS vloeistof wordt opgenomen en gefiltreerd door een dubbele laag steriel gaas wattenstaafjeom slijm pluggen verwijderen in prechilled, steriele 50 ml centrifuge buizen. </li><li> Cellen worden gepelleteerd door centrifugatie bij 500 xg bij 4 ° C gedurende 5-10 minuten en gewassen door vortexen in 50 ml koude normale zoutoplossing. Centrifugeren wordt eenmaal herhaald. </li><li> Cellen worden opnieuw gesuspendeerd in kweekmedium (RPMI-1640 + 10% foetaal runderserum + 2 mM L-glutamine + penicilline [40 IE / ml], streptomycine [75 IE / ml], en amfotericine B [0,5 IU / ml]) en differentiële telling uitgevoerd met een gelijk volume van trypan blauw en een hemocytometer. </li><li> De celsuspensie wordt genormaliseerd om de gewenste dichtheid (we 1 x 10 6 cellen / ml), geïntroduceerd door pipetteren in geschikte weefselkweek platen en geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 3 uur tot macrofagen hechting mogelijk. 1 ml van deze celsuspensie per putje is geschikt voor 24 putjes. </li><li> Voor lymfocyten werken, na 3 uur incubatie, het kweekmedium wordt voorzichtig op en neer gepipetteerd 3x, en verzameld. Dit medium bevat lymfocytenen hechtend macrofagen en kunnen worden gebruikt om lymfocyt functie getest, maar kan ook worden gebruikt in zuiveringsstappen bijv. met CD14 magnetische parels macrofagen verwijderen. </li><li> Voor macrofagen werken, na 3 uur incubatie, het medium wordt zorgvuldig verwijderd met minimale pipetteren en vervangen door verse, warme medium zonder antibiotica (RPMI 1640 + 10% foetaal runderserum + 2 mM L-glutamine). De macrofagen aanhanger van de weefselkweekplaat (zie figuur 1). </li></ol>

<ol><li>BTS, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+British+Thoracic+Society+Bronchoscopy+Guideline+Committee+-+A+sub-Committee+of+the+Standards+of+Care+Committee+of+the+British+Thoracic+Society%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">The British Thoracic Society Bronchoscopy Guideline Committee - A sub-Committee of the Standards of Care Committee of the British Thoracic Society.</a> Thorax. 56 (Suppl I), 1-21 (2001).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+recommendations+and+guidelines+for+bronchoalveolar+lavage+%28BAL%29+report+of+the+European+Society+for+Pneumology+Task+Group%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir%22%5BJournal%5D)">Technical recommendations and guidelines for bronchoalveolar lavage (BAL) report of the European Society for Pneumology Task Group.</a> Eur. Respir. , 561-585 (1989).</li>
<li>Gordon, S. B., Irving, G. R., Lawson, R. A., Lee, M. E., Read, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+trafficking+and+killing+of+Streptococcus+pneumoniae+by+human+alveolar+macrophages+are+influenced+by+opsonins%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Intracellular trafficking and killing of Streptococcus pneumoniae by human alveolar macrophages are influenced by opsonins.</a> Infect. Immun. 68, 2286-2293 (2000).</li>
<li>Gordon, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+immunoglobulin+responses+to+Streptococcus+pneumoniae+are+altered+but+not+reduced+in+human+immunodeficiency+virus-infected+Malawian+adults%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Pulmonary immunoglobulin responses to Streptococcus pneumoniae are altered but not reduced in human immunodeficiency virus-infected Malawian adults.</a> J. Infect. Dis. 188, 666-670 (2003).</li>
<li>Fullerton, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Domestic+smoke+exposure+is+associated+with+alveolar+macrophage+particulate+load%5BTitle%5D)+AND+%22Trop.+Med.+Int.+Health%22%5BJournal%5D)">Domestic smoke exposure is associated with alveolar macrophage particulate load.</a> Trop. Med. Int. Health. 14, 349-354 (2009).</li>
<li>Jambo, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+CD4%2B+T+cell+responses+to+respiratory+antigens+are+impaired+in+HIV-infected+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar CD4+ T cell responses to respiratory antigens are impaired in HIV-infected adults.</a> Thorax. 66, 375-382 (2011).</li>
<li>Eagan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+fluid+immunoglobulin+from+HIV-infected+subjects+has+impaired+opsonic+function+against+pneumococci%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Lung fluid immunoglobulin from HIV-infected subjects has impaired opsonic function against pneumococci.</a> Clin. Infect. Dis. 44, 1632-1638 (2007).</li>
<li>Rose, A. S., Knox, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+lavage+as+a+research+tool%5BTitle%5D)+AND+%22Sem.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar lavage as a research tool.</a> Sem. Respir. Crit. Care Med. 28, 561-573 (2007).</li>
<li>Wright, A. K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Nasal+Challenge+with+Streptococcus+pneumoniae+is+Immunising+in+the+Absence+of+Carriage%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Human Nasal Challenge with Streptococcus pneumoniae is Immunising in the Absence of Carriage.</a> PLoS Pathog. , (2012).</li>
<li>Bolliger, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERS%2FATS+statement+on+interventional+pulmonology+European+Respiratory+Society%2FAmerican+Thoracic+Society%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir.+J%22%5BJournal%5D)">ERS/ATS statement on interventional pulmonology European Respiratory Society/American Thoracic Society.</a> Eur. Respir. J. 19, 356-373 (2002).</li>
<li>Ettensohn, D. B., Jankowski, M. J., Duncan, P. G., Lalor, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+lavage+in+the+normal+volunteer+subject.+I.+Technical+aspects+and+intersubject+variability%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar lavage in the normal volunteer subject. I. Technical aspects and intersubject variability.</a> Chest. 94, 275-280 (1988).</li>
<li>Ettensohn, D. B., Jankowski, M. J., Redondo, A. A., Duncan, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+lavage+in+the+normal+volunteer+subject.+2.+Safety+and+results+of+repeated+BAL%2C+and+use+in+the+assessment+of+intrasubject+variability%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar lavage in the normal volunteer subject. 2. Safety and results of repeated BAL, and use in the assessment of intrasubject variability.</a> Chest. 94, 281-285 (1988).</li>
<li>De Brauwer, E. I., Jacobs, J. A., Nieman, F., Bruggeman, C. A., Drent, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+lavage+fluid+differential+cell+count.+How+many+cells+should+be+counted%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Quant.+Cytol.+Histol%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar lavage fluid differential cell count. How many cells should be counted.</a> Anal. Quant. Cytol. Histol. 24, 337-341 (2002).</li>
<li>Mtunthama, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malawians+permit+research+bronchoscopy+due+to+perceived+need+for+healthcare%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Ethics%22%5BJournal%5D)">Malawians permit research bronchoscopy due to perceived need for healthcare.</a> J. Med. Ethics. 34, 303-307 (2008).</li>
<li>Pereira, W., Kovnat, D. M., Snider, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+prospective+cooperative+study+of+complications+following+flexible+fiberoptic+bronchoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">A prospective cooperative study of complications following flexible fiberoptic bronchoscopy.</a> Chest. 73, 813-816 (1978).</li>
<li>Huang, Y. C., Bassett, M. A., Levin, D., Montilla, T., Ghio, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+phase+reaction+in+healthy+volunteers+after+bronchoscopy+with+lavage%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Acute phase reaction in healthy volunteers after bronchoscopy with lavage.</a> Chest. 129, 1565-1569 (2006).</li>
<li>Gritzfeld, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+Human+Pneumococcal+Carriage%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Experimental Human Pneumococcal Carriage.</a> J. Vis. Exp. (72), (2013).</li>
</ol>

Andrea M. Collins wordt gefinancierd door de Bill en Melinda Gates Foundation, en geen potentieel tegenstrijdige belangen. Ze heeft fondsen van Merck (MSD) en GSK ontvangen conferenties en honoraria voor lezingen bij te wonen. 50 onderzoek Bals verricht zelfstandig. Jamie Rylance wordt gefinancierd door de Wellcome Trust, en heeft geen belangenconflict. Hij heeft geen andere fondsen ontvangen. 70 onderzoek Bals verricht zelfstandig. Daniel G. Wootton wordt gefinancierd door een NIHR PhD Fellowship, en heeft geen belangenconflicten. 40 onderzoek Bals verricht zelfstandig. Angela D. Wright heeft geen potentieel tegenstrijdige belangen. Geholpen met meer dan 100 onderzoek Bals. Adam KA Wright heeft geen potentieel tegenstrijdige belangen. Hij heeft verwerkt meer dan 50 BAL monsters. Duncan G. Fullerton </strong&gt; Heeft geen potentieel tegenstrijdige belangen. 100 onderzoek Bals verricht zelfstandig. Stephen B. Gordon heeft geen potentieel tegenstrijdige belangen. Hij heeft geld van Merck (MSD) en Novartis ontvangen om conferenties bij te wonen. 400 onderzoek Bals verricht zelfstandig.

Om goede resultaten te bereiken zijn de volgende nuttig: <ol><li> Goede anesthetisation aan de basis van de tong en posterieure orofarynx. Dit is belangrijk omdat het verbetert procedurele tolerantie van het subject en de comfort. </li><li> Ofwel een pediatrische (buitendiameter 3,4-3,6 mm) of volwassene bronchoscoop (buitendiameter 4,8-5,9 mm) worden gebruikt. </li><li> Als er enige ongemak tijdens nasale intubatie, is orale intubatie de voorkeur. In het algemeen nasale intubatie is ofwel een eenvoudige techniek of dienen te worden afgeschaft. </li><li> Na initiële indruppelen van lidocaïne voor de orofarynx, kunnen de onderhavige bronchoscope worden ingetrokken voorkeur afwachting het begin van de anesthesie, vooral als de bronchoscoop oraal wordt ingebracht. </li><li> Zorgen voor ten minste 10 x 10 ml spuiten zijn voorgevuld met slechts 2-4 ml lidocaïne. Lucht moet worden overgelaten in de spuiten voor een verbeterde levering van de narcose direct op snoeren en endobronchiale mucosa. </li><li> Aangezien hoesten tijdens de procedure aanzienlijk vermindert BAL opbrengst; gebruik opgewarmd zoutoplossing en het hebben van goede mucosale verdoving zijn belangrijk om dit te verminderen. </li><li> De 50 ml spuiten moet worden ingevuld met verwarmd zoutoplossing. Het is gebruikelijk dat de eerste 50 ml normale zoutoplossing ingedruppeld tussen 10-20 ml door dode ruimte verlies en de rest loopt in de terminale luchtwegen oplevert. Aliquots weer een grotere hoeveelheid vloeistof. </li><li> De bestuurder moet altijd controleren de bronchoscoop voorafgaand aan intubatie, inclusief het verzekeren van effectieve zuigkracht door opzuigen steriele fysiologische zoutoplossing. Verlies van zuigkracht kan vaak optreden als gevolg van knikken van de buis of lekken rond de verbindingen met de bronchoscoop of zuiginrichting. </li><li> Tijdens het handmatig zuigkracht, idealiter de luchtwegen dienen niet instorten. Als afzuiging herhaaldelijk instort de luchtwegen, worden BAL terug gereduceerd tot een klepmechanisme en lokale ontsteking en bloeden is meer waarschijnlijk: dit op zijn beurt maakt de luchtwegen merts prikkelbaar en hoesten waarschijnlijker. Het kiezen van de meest geschikte RML subsegmentele tak en het gebruik van lage zuigdrukken zijn dus beide belangrijk. </li><li> Wanneer lucht voortdurend afgezogen controleer de aansluiting van de spuit aan de bronchoscoop en ook de positie van de bronchoscoop in de distale luchtwegen. Als dit een terugkerend probleem, na de procedure ervoor zorgen dat er geen gaten in de bronchoscoop zelf. </li><li> BAL van rokers vaak donkerder door de aanwezigheid van intracellulaire deeltjes. Rokers kunnen de bronchoscopie tolereren minder goed, en hebben meer hoesten. </li><li> De voorkeur BAL volume opbrengst is&gt; 100 ml. Een opbrengst van&gt; 150 ml uitstekend. We hebben nog geen opbrengsten&gt; 170 ml ervaren. Er is geen lineair verband tussen de cel opbrengst BAL volume opbrengst. </li><li> Opbrengsten van &lt;100 ml zijn, in onze ervaring, eerder leiden tot bijwerkingen zoals hoesten, pijn op de borst en koorts. Wij adviseren dat proefpersonen met opbrengsten van &lt;100 reco ml wordenspreekt zich in de linker zijligging, kan deze afvoer van eventueel resterende longvocht helpen. </li><li> Klinische contact moet met het onderwerp te geschieden binnen 1-5 dagen om geen bijwerkingen te garanderen. </li><li> Midazolam sedatie wordt gebruikt voor &lt;50% van de patiënten in het Verenigd Koninkrijk en &lt;5% in Malawi. Midazolam lijkt geen directe verbetering van de verdraagbaarheid, bepaalde operatoren vinden dat sedatie soms contraproductief kan het behoud van een samenhangend (en geruststellend) dialoog met het onderwerp. </li><li> In onze ervaring is er een aanzienlijke leercurve met deze techniek. Bijvoorbeeld coördinatie tussen arts en verpleegkundige kost tijd en levert vaak lager aan het begin van het leerproces. </li><li> Bij HIV-positieve personen, maken we gebruik van antibiotica profylactisch prebronchoscopy. </li></ol>

Achtergrond Glasvezel bronchoscopie is ontwikkeld voor de klinische praktijk, en wordt veel gebruikt zowel diagnostisch en therapeutisch 1,2. Bronchoalveolaire lavage (BAL) verwijdert niet-hechtende cellen en longvoering vocht uit het mucosale oppervlak; biopsie wordt gebruikt om mucosale en submucosale weefsels proeven. In onderzoeksomgevingen BAL laat bemonstering van aangeboren (longmacrofagen 3-5), cellulaire (B-en T-cellen 6) en humorale (immuunglobuline 7) reacties in de longen. BAL is internationaal geaccepteerd voor onderzoeksdoeleinden 8 en sinds 1999 de techniek is uitgevoerd in&gt; 1000 personen in het Verenigd Koninkrijk en Malawi door onze groep. We gebruiken deze techniek in studies van aangeboren, cellulaire en humorale immuunrespons tegen pneumokokken antigeen inbegrip van experimentele menselijke pneumokokken vervoer 9,17, biomassa-rook 5, HIV en vaccinatie, en aanvullende behandeling stusterft naar herstel van een longontsteking. De techniek maakt gebruik van zachte hand-held aanzuigen van fluïdum ingeprent, dit is ontworpen om BAL volume terug te maximaliseren en toepassen minimale afschuifkracht op trilharen epitheel om de structuur en functie van cellen in de BAL-vloeistof behouden. In onderzoeksverband gebruikt BAL een andere techniek dan die beoefend door ademhalings-en intensive care artsen (vaak genoemd bronchiale wassen, wassen, maagspoeling, of BAL) die zijn gericht op diagnostische of therapeutische voordeel te krijgen. Het onderzoek techniek is ontworpen om cellen te oogsten en levensvatbaarheid behouden om de groei van cellen in ex vivo kweken bevorderen. Om deze redenen is het onderzoek techniek maakt gebruik van een groter volume instillate (typisch in de orde van 200 ml) en maakt gebruik van handmatige zuigkracht naar cel schade. Patiënten krijgen plaatselijke verdoving aangeboden bewuste sedatie (midazolam), en tolereren de procedure goed met minimale bijwerkingen. Mondelinge en schriftelijke subjectievet informatie verbetert de tolerantie en schriftelijk toestemming is verplicht: 1. Doel Het algemene doel is dat de procedure veilig en effectief moet zijn. Onderwerpen mogen ervaren geen fysiologische verstoring en exploitanten moeten consequent verzamelen van meer dan 100 ml BAL van onderwerpen. Na de procedure, moeten onderwerpen minimale bijwerkingen ervaren. Veiligheid Veiligheid van de betrokkenen is essentieel. Onderwerpen worden zorgvuldig geselecteerd met behulp van duidelijke criteria in-en uitsluiting. Dit protocol bevat een beschrijving van de mogelijke risico&#39;s en de genomen maatregelen om de emissies te verminderen. Contra-indicaties voor onderzoek bronchoscopie kan worden uitgedrukt in absolute of relatieve, en zijn opgenomen in onze studie protocol als uitsluitingscriteria en integratie. Onze onderwerpen zijn allemaal gescreend om volledige gezondheid te waarborgen. Absolute contraonder instabiele cervicale wervelkolom, reageert hypoxie, instabiele angina, bloedingsdiathese, en kwaadaardige hartritmestoornissen. Relatieve contra, waaronder die aandoeningen geassocieerd met verhoogde complicaties omvatten: Algemeen: slecht coöperatie onder 1, geen significante algemene medisch probleem bijv. epilepsie, vorige slecht verdragen bronchoscopie, bekende bijwerkingen van lidocaïne of midazolam, zwangerschap, slechte voeding. Respiratoire: hypoxie [saturaties (satellieten) op lucht &lt;94%], hypercapnie, instabiele astma 1, aanzienlijk verminderde respiratoire functie 1 (FEV 1 &lt;1 L), pulmonale hypertensie. Cardiovasculair: uremie, binnen 6 weken na myocardinfarct 1, superior vena cava obstructie. Andere: immunosuppressie (onze groep regelmatig deze procedure uitvoertdure bij HIV positieve personen). Zie tabel 1 - Risico&#39;s verbonden aan BAL voor onderzoek.

<table><tbody><tr><td>Fiberoptische bronchoscoop, licht en zuigbron</td><td>ongespecificeerd</td><td></td><td> </td></tr><tr><td> Chirurgische jas, steriele handschoenen </td><td>ongespecificeerd</td><td></td><td> </td></tr><tr><td> Sphygnomomanometer </td><td>ongespecificeerd</td><td></td><td> Voor continue patiëntbewaking </td></tr><tr><td> Pulsoximeter </td><td>ongespecificeerd</td><td></td><td> Voor continue patiëntbewaking </td></tr><tr><td>3-lead ECG-monitor</td><td>ongespecificeerd</td><td></td><td> Voor continue patiëntbewaking </td></tr><tr><td>Nasale zuurstoftoevoer 2-4 L/min</td><td>ongespecificeerd</td><td></td><td> </td></tr><tr><td> Lidocaine 10% spray (Xylocaine) </td><td>AstraZeneca</td><td></td><td>Voor plaatselijke verdoving</td></tr><tr><td> Lidocaine hydrochloride 2% </td><td>ongespecificeerd</td><td></td><td>Voor plaatselijke verdoving</td></tr><tr><td> Lidocaine gel (Instillagel) </td><td>Farco-Pharma, Duitsland</td><td></td><td> Alternatieve producten verkrijgbaar bij andere leveranciers </td></tr><tr><td>Normale zoutoplossing, steriele, 200 ml</td><td>ongespecificeerd</td><td></td><td>Opwarmen tot 30 &#176;C</td></tr><tr><td>10 ml puntige injectiespuit (x10)</td><td>ongespecificeerd</td><td></td><td> Voor toediening van lidocaine </td></tr><tr><td>Intraveneuze canule 18 G</td><td>ongespecificeerd</td><td></td><td> Voor toediening van midazolam </td></tr><tr><td> Midazolam </td><td>ongespecificeerd</td><td></td><td> Voor sedatie </td></tr><tr><td> Flumazenil </td><td>ongespecificeerd</td><td></td><td> Om benzodiazepine-sedatie ongedaan te maken (alleen voor noodgevallen) </td></tr><tr><td>60 ml puntige injectiespuiten (x4)</td><td>ongespecificeerd</td><td></td><td>Voor normale zoutoplossing injectie en BAL-vloeistoftrek. Mogelijk vereist een connector om te bevestigen aan de injectiepoort van de bronchoscoop.</td></tr><tr><td> Steriele gaasdoek </td><td>Vernaid, UK</td><td></td><td> Alternatieve producten verkrijgbaar bij andere leveranciers </td></tr><tr><td> Steriele container voor BAL-vloeistof </td><td>Zie tekst en opmerkingen</td><td></td><td>Silicone behandelde glazen flessen verminderen macrofaag adhesie. Alternatief kunnen 50 ml centrifugebuizen worden gebruikt (totale capaciteit 200 ml)</td></tr><tr><td> Sigmacote </td><td>Sigma, UK</td><td>SL2</td><td> Alleen als siliconische glazen flessen worden gebruikt. NB: Schadelijk en ontvlambaar. Volg, indien gebruikt, de voorzorgsmaatregelen die in de MSDS van de fabrikant zijn vermeld </td></tr><tr><td> Centrifuge </td><td>ongespecificeerd</td><td></td><td>Minimaal 4 x 50 ml buiscapaciteit. Koel tot 4 &#176;C bij voorkeur.</td></tr><tr><td> Shandon Cytospin centrifuge </td><td>Thermo Scientific, UK</td><td></td><td> Alleen voor differentieel tellen </td></tr><tr><td> RPMI 1640 medium met L-glutamine </td><td>Sigma, UK</td><td>R8758</td><td> Alternatieve producten verkrijgbaar bij andere leveranciers </td></tr><tr><td> Fetaal bovien serum </td><td>Sigma, UK</td><td>F6178</td><td> Alternatieve producten verkrijgbaar bij andere leveranciers </td></tr><tr><td> Penicilline-Streptomycine </td><td>Sigma, UK</td><td>P4333</td><td> Alternatieve producten verkrijgbaar bij andere leveranciers </td></tr><tr><td> Amphotericin B </td><td>Sigma, UK</td><td>A2942</td><td> Alternatieve producten verkrijgbaar bij andere leveranciers </td></tr><tr><td> Weefsel kweek platen </td><td>Greiner Bio-One, UK</td><td>662160</td><td> Alternatieve producten verkrijgbaar bij andere leveranciers </td></tr><tr><td> Glazen microscoopglaasjes </td><td>ongespecificeerd</td><td></td><td> Alleen voor differentieel tellen </td></tr><tr><td> Shandon cytofunnel </td><td>Thermo Scientific, UK</td><td>A78710003 </td><td> Alleen voor differentieel tellen </td></tr><tr><td> Shandon cytoclip </td><td>Thermo Scientific, UK</td><td>59910052</td><td> Alleen voor differentieel tellen </td></tr><tr><td> Hemacolor kleuringsset (fixeermiddel, rode en blauwe reagentia) </td><td>Merck, Duitsland</td><td>111661</td><td> Gebruik volgens de instructies van de fabrikant </td></tr></tbody></table>

bronchoalveolaire lavage (bal) voor onderzoek; verkrijgen adequaat monster yield

Bronchoalveolar Lavage (BAL) for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

We beschrijven een onderzoek techniek voor fiberoptische bronchoscopie met bronchoalveolaire lavage (BAL) met handmatige hand gehouden zuigkracht om niet-hechtende cellen en longvoering vocht uit het mucosale oppervlak te verwijderen. In het onderzoek omgevingen, BAL maakt bemonstering van aangeboren (long macrofagen), cellulair (B-en T-cellen), en humorale (immunoglobuline) reacties in de longen. BAL is internationaal geaccepteerd voor onderzoeksdoeleinden en sinds 1999 de techniek is uitgevoerd in&gt; 1000 personen in het Verenigd Koninkrijk en Malawi door onze groep. De techniek maakt gebruik van zachte hand-held aanzuigen van fluïdum ingeprent, dit is ontworpen om maximale BAL volume geretourneerd en toepassen minimale afschuifkracht op trilharen epitheel om de structuur en functie van cellen in de BAL-vloeistof behouden en levensvatbaarheid behouden om de groei te bevorderen van cellen in ex vivo cultuur. Het onderzoek techniek maakt gebruik dus een groter volume insdestillaat (meestal in de orde van 200 ml) en maakt gebruik van handmatige zuigkracht naar cel schade. Patiënten krijgen plaatselijke verdoving aangeboden bewuste sedatie (midazolam), en tolereren de procedure goed met minimale bijwerkingen. Mondelinge en schriftelijke vakinformatie verbetert tolerantie en informed consent is verplicht. Veiligheid van de betrokkenen is essentieel. Onderwerpen worden zorgvuldig geselecteerd met behulp van duidelijke criteria in-en uitsluiting. Dit protocol bevat een beschrijving van de mogelijke risico&#39;s en de maatregelen die zijn genomen om ze te verzachten, een lijst van contra-indicaties, pre-en post-procedure controles, alsmede nauwkeurige bronchoscopie en laboratoriumtechnieken.

Goede klinische resultaten zijn een BAL volume van meer dan 100 ml en een patiënt die heeft ervaren hooguit kleine ongemakken (zie tabel 1). Dit vereist een ontspannen en coöperatieve onderwerp. De arts moet er zeker van zijn, volledig voorbereid (materialen), en begrip voor de vrijwilliger. Inter-en intra-individuele variabiliteit in cellulaire opbrengst (inclusief differentiële tellingen) is beschreven. Differentiële celtellingen van gezonde proefpersonen typisch&gt; 90% macrofagen met kleine aantallen neutrofielen (&lt;2%) en lymfocyten (5-10%). BAL cellen gecentrifugeerd op objectglaasjes kunnen worden gekleurd met een differentiële nucleaire vlek deze informatie (figuur 1) te verkrijgen. In figuur 1, zijn BAL cellen werden gefixeerd en gekleurd met Hemacolor kleuring volgens de instructies van de fabrikant. Tenminste 300 cellen worden geteld om betrouwbare resultaten te verkrijgen macrofagen,neutrofielen en lymfocyten, 500 cellen voor zeldzame celtypen. <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Risico </td><td> Risico </td><td> Verminderde in dit protocol door: </td></tr><tr><td colspan="3"> Effect van bronchoscopie en BAL 1, 14 </td></tr><tr><td> Licht ongemak </td><td> &lt;25% 14 # </td><td> Passende pijnstilling en sedatie. Zelfverzekerd en zorgzame benadering van het onderwerp. </td></tr><tr><td> Epistaxis </td><td> &lt;1% # </td><td> Milde druk alleen nasale intubatie. Als onderwerp ongemak of vernauwde opening - orale intubatie plaats. </td></tr><tr><td> Endobronchiale bloeding (bloedspuwing) </td><td> &lt;0.1% * 15 </td><td> Geen biopten genomen. Zorgvuldige controle tijdens bronchoscopie - het vermijden van de luchtwegen slijmvlies. </td></tr><tr><td> Nausea, braken en aspiratie pneumonie </td><td> &lt;0,02% 14 # </td><td> Vasten voor vast voedsel&gt; 4 uur preprocedure 1. Adequate topische anesthesie. Semirecumbent positie tijdens de procedure. Voorzichtig na de procedure observatie. </td></tr><tr><td> Koorts </td><td> 0.01 14-1% #, 16 </td><td> Betrekking tot ontsteking, en kunnen geminimaliseerd door maximale inzameling van BAL. Slechts enkele kwab BAL. # </td></tr><tr><td> Zere neus / keel en heesheid </td><td> &lt;25% 14 # </td><td> Voldoende actueel verdoving van de neus, keel en strottenhoofd (minimaliseren hoesten). </td></tr><tr><td> Infectie </td><td> &lt;0,1% in HIV-negatieve, 1% bij HIV positieve 14 # </td><td> Standaard bronchoscoop wasprocedure 1. Slechts enkele kwab BAL. # Vroegtijdige herkenning van besmetting: klinisch onderzoek binnen 1 uur eend klinische contact 1-5 dagen na bronchoscopie. </td></tr><tr><td> Pijn op de borst / hoest </td><td> &lt;0,2% 14 # </td><td> Single kwab alleen BAL. Maximale BAL collectie. # </td></tr><tr><td colspan="3"> Effecten van drugs: lidocaïne, midazolam </td></tr><tr><td> Aritmie </td><td> Zeer zelden * </td><td rowspan="3"> Maximaal 5 mg / kg 14 lidocaïne gebruikt. Opgewarmd normale zoutoplossing bijgebracht. # Pulsoxymetrie (satellieten&gt; 90% met zuurstof suppletie), hartbewaking hele procedure. Benzodiazepine antagonist (flumazenil) direct beschikbaar. </td></tr><tr><td> Desoriëntatie / agitatie </td><td> &lt;0.1% † # </td></tr><tr><td> Cardio respiratoire depressie </td><td> Zeer zelden * </td></tr></tbody></table> * Niet ervaren in onze groep in meer dan 1500 onderzoek procedures. † Idiosyncratic plaats dosisafhankelijke reactie. # Ervaring Onze groep is in meer dan 1500 onderzoek procedures. Tabel 1. Risico&#39;s verbonden aan BAL voor onderzoek. Dit omvat het gevaar of risico en hoe dit wordt verminderd door het gebruik van de beschreven techniek. Effecten van de bronchoscopie / BAL en ook de effecten van een eventuele medicijnen worden meegenomen. <img alt="Figuur 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/4345/4345fig1highres.jpg" width="500" /> Figuur 1. Een Microscoop Slide Toont BAL Macrofagen en Occasionele neutrofielen. BAL cellen zijn opgelost in methanol en gekleurd met Hemacolor rood (eosine Y) en blauwe (azuurblauwe B).

We beschrijven een onderzoek techniek voor fiberoptische bronchoscopie en bronchoalveolaire lavage met behulp van lage druk zuigkracht. De techniek wordt gebruikt om immuuncellen oogsten uit de longen bronchoalveolaire oppervlakken. Plaatselijke verdoving en milde sedatie (midazolam) gebruikt. Onderwerpen tolereren de procedure goed en ervaring minimale bijwerkingen.

Bronchoalveolaire Lavage (BAL) voor onderzoek; verkrijgen adequaat monster Yield

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy with bronchoalveolar lavage (BAL) using manual hand held suction in order to remove ...

Het algemene doel van deze procedure is om op een veilige en effectieve manier een bronchoalveolaire lavage uit te voeren. Dit wordt eerst bereikt door de veiligheid, medewerking en het comfort van de geselecteerde proefpersonen te waarborgen, aan de hand van duidelijke inclusie- en exclusiecriteria.Er worden tevens pre-procedurele controles en observaties uitgevoerd. Eenmaal in de bronchoscopiekamer wordt, nadat alle apparatuur is gecontroleerd, lokale anesthesie toegediend aan het subject en wordt bewuste sedatie aangeboden. Vervolgens wordt, na intubatie van de stembanden, het bronchoscoop naar een goede positie binnen de RML gevorderd.Dit zorgt voor een goede opbrengst van het BAL-vloeistofvolume. Ten slotte wordt de BAL-vloeistof verkregen door middel van voorzichtig handmatig opzuigen en vervolgens zonder vertraging op ijs getransporteerd voor onmiddellijke laboratoriumverwerking. Uiteindelijk oogst deze techniek cellen en behoudt deze de levensvatbaarheid om de groei van cellen in ex vivo culturen te faciliteren.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden die worden toegepast door longartsen en intensivisten — vaak aangeduid als bronchiale lavage of broncho-alveolaire lavage — waarbij diagnostisch of therapeutisch voordeel wordt beoogd, is dat onze techniek gebruikmaakt van zachte handmatige aspiratie van de ingebrachte vloeistof. Dit is ontworpen om het teruggewonnen volume van het bronchiale secreet te maximaliseren en minimale schuifkrachten uit te oefenen op het gecilieerde epitheel, om zo de structuur en functie van de cellen in de bronchiale vloeistof te behouden. De procedure voor broncho-alveolaire lavage wordt uitgevoerd als een dagbehandeling met de juiste controles vóór en na de procedure volgens het standaard ziekenhuisbeleid, inclusief de verificatie dat het schriftelijke toestemmingsformulier correct is ondertekend en gedateerd.Bij aankomst wordt de proefpersoon opgevangen door de ademhalingsonderzoeksverpleegkundige, die vervolgens alle nodige controles voorafgaand aan de procedure uitvoert, waaronder het vaststellen dat de proefpersoon minimaal vier uur heeft vast voor vaste voeding en twee uur voor vloeistoffen. Indien de proefpersoon aan alle vereiste criteria voldoet, trekt deze een ziekenhuisjas aan en worden er pre-procedurele observaties gedaan, waaronder metingen van de bloeddruk, hartslag en zuurstofsaturatie. Er wordt bij voorkeur een cannula met een klein kaliber in de linkerhand geplaatst.Dit blijft in C twee tot het einde van de herstelperiode na de procedure. De proefpersoon wordt vervolgens overgebracht naar de bronchoscopie-unit, waar een ervaren longonderzoeker gespecialiseerd in bronchoscopie aanwezig is. Vervolgens wordt de monitoringsapparatuur aan de proefpersoon bevestigd.Dit omvat een ECG met drie afleidingen, een manometer (Fig. A) en een pulsoximeter. Anesthesie is niet vereist. Aan alle vrijwilligers worden neuscanules aangebracht voordat het bronchoscoop wordt ingebracht; er wordt zuurstof toegediend als de saturatiewaarden onder de 96% dalen, met een debiet van maximaal vier liter per minuut.Op dit punt voert de operator voorafgaande controles uit op het bronchoscoop. Dit omvat het controleren van de zuigkracht door steriele normale zoutoplossing te aspireren. Zodra de operator er zeker van is dat de bronchoscoop optimaal functioneert, wordt lokale anesthesie toegediend aan de neusgangen en het mondslijmvlies van het subject door respectievelijk de toepassing van instill-gel en Xylocaine.Indien sedatie passend is en door de proefpersoon is aangevraagd, wordt een passende dosis midazolam intraveneus toegediend. Zoals bij alle procedures waarbij anesthesie wordt toegepast, moet een passend tegengif onmiddellijk beschikbaar zijn. Zorg daarnaast dat reanimatieapparatuur ook bij de hand is.Het subject wordt via de neus geïntubeerd. Indien dit niet mogelijk is, kan het subject via de mond worden geïntubeerd, mits er een passende mondklem bij de larynx wordt gebruikt. Nadat de stembanden zijn gepasseerd, wordt er topische analgesie toegediend met vier tot zes milliliters 4% lidocaïne.Verder wordt mucosaal analgeticum toegediend met aliquots van 2 mL 2% lidocaïne bij de carina op de splitsing van de rechteronderkwab en de rechtermiddenkwab of RML, en bij de ingang van de RML. Ten slotte bereikt het bronchoscoop de rechtermiddenkwab en wordt deze idealiter in het mediale segment in een veilige distale positie geplaatst. Voer de wink-test uit met de zuigknop om er zeker van te zijn dat de bronchoscoop niet in een te distale positie is geplaatst, wat tot collaps van de luchtweg kan leiden.Vier spuiten van 60 milliliter worden vooraf gevuld met respectievelijk een volume van 60 milliliter, twee volumes van 50 milliliter en een volume van 40 milliliter verwarmde normale steriele zoutoplossing. Wanneer de proefpersoon en de bronchoscopist gereed zijn, wordt de eerste spuit met zoutoplossing door de bronchoscopie-assistent ingebracht. Terwijl de bronchoscopist de positie in de RML behoudt, voert de assistent een voorzichtige handmatige aspiratie uit met behulp van dezelfde poort en spuit.De procedure wordt vervolgens nog drie keer herhaald door elke spuit na elkaar te gebruiken, waarbij een maximaal volume van 200 milliliters wordt gebruikt bij deze specifieke techniek; het teruggewonnen BAL-vocht wordt voorzichtig uitgestoten in plastic containers die vooraf gesiliconiseerd kunnen zijn en op smeltend ijs worden gehouden. Voor-siliconisering remt celadhesie en maximaliseert de celopbrengst. Het BAL-vocht ziet er troebel uit tegen het licht, met zeepbellen aan het oppervlak die worden gevormd door proteïnen en surfactanten.Ten slotte wordt de bronchoscoop langzaam en volledig teruggetrokken. Het subject gaat over tot een gemonitord herstel en het BAL-vloeistof wordt onverwijld op ijs getransporteerd. Voor onmiddellijke verwerking mag het subject tot vier uur herstellen onder zorg van een gespecialiseerd verpleegkundige voor respiratoir onderzoek.Laat de proefpersoon gedurende deze tijd rusten, maar niet eten of drinken tot ten minste 60 minuten na de procedure. Zodra is vastgesteld dat het slikvermogen weer veilig is, dient dit te gebeuren om het risico op aspiratie te verminderen. Post-procedurele observaties worden gemonitord en geregistreerd.Voorafgaand aan het ontslag vindt een klinisch onderzoek plaats. De proefpersoon wordt tevens geïnformeerd over de veelvoorkomende bijwerkingen en krijgt een contactnummer voor het geval dat er significante bijwerkingen optreden. Een follow-upafspraak met de proefpersoon wordt één tot vijf dagen na de procedure uitgevoerd door een arts of verpleegkundige.Dit kan telefonisch of in persoon gebeuren. Zodra u in het onderzoekslaboratorium bent, dienen alle manipulaties op nat ijs te worden uitgevoerd, waar mogelijk.Noteer eerst het volume van het bronchoalveolaire lavagevloeistof. Filtreer de vloeistof vervolgens door een dubbele laag steriel gaas om slijmpluggen te verwijderen en verzamel het filtraat in steriele centrifugebuizen van 50 milliliters. Pellet de cellen door centrifugatie bij 500 G bij vier graden Celsius gedurende vijf tot 10 minuten.Verwijder het supernatant en was met 50 milliliters koud normaal zoutoplossing. Herhaal de centrifugatie. Resuspendeer de cellen vervolgens nogmaals in een passend volume kweekmedium.Meestal zal twee milliliter een goede celdichtheid geven voor het tellen. Voer vervolgens celtellingen uit met behulp van een hemocytometer en trypaanblauw volgens standaardprocedures, en stel de dichtheid van de celsuspensie in op 1 × 10⁶ cellen per milliliter door een passend volume medium toe te voegen. Breng daarna één milliliter van de celsuspensie over in elke put van een 24-wellplaat.Incubeer de cellen in de wellplaat gedurende drie uur bij 37 °C om de adhesie van macrofagen mogelijk te maken voor het werk met lymfocyten. Na drie uur incubatie wordt het cultuurmedium voorzichtig drie keer op en neer gepipetteerd en opgevangen. Dit medium bevat lymfocyten en niet-adherente macrofagen en kan worden gebruikt om de lymfocytfunctie te beoordelen.Het kan ook worden gebruikt in verdere zuiveringsstappen voor werk met macrofagen. Na drie uur incubatie wordt het medium voorzichtig afgezogen en vervangen door vers, warm medium zonder antibiotica; de macrofagen zijn op dit punt aan de weefselkweekplaat gehecht. BAL-cellen zijn gecentrifugeerd op een microscoopglaasje met behulp van een Thermo Shandin cyto-centrifuge en gekleurd met een differentiële kernkleuring om de celtypen zichtbaar te maken.De meeste cellen zijn macrofagen, zoals de cel aangeduid met M, maar er zijn incidenteel neutrofielen (aangeduid met N) en lymfocyten (aangeduid met L) zichtbaar. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u veilig en effectief een bronchoscopie en BAL uitvoert voor onderzoeksdoeleinden met behulp van deze techniek, waarbij in het bijzonder aandacht uitgaat naar een goede anesthesie van de tongbasis en de posterior orofarynx, het controleren van het bronchoscoop op effectieve zuigkracht en de afwezigheid van luchtlekkages vóór de procedure, en het kiezen van de meest geschikte subsegmentale tak van de rechtermiddenkwab. Operators zouden consistent meer dan 100 ml BAL moeten verzamelen van proefpersonen die minimale bijwerkingen ervaren.

bronchoalveolar-lavage-bal-for-research-obtaining-adequate-sample

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Source: Venuprasad, K., et al. Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the collection and processing of bronchoalveolar lavage fluid from a euthanized mouse infected with non-typeable Haemophilus influenzae for downstream analysis.

Bronchoalveolar Lavage Fluid Collection from a Mouse Model Infected with Non-typeable Haemophilus influenzae

This video demonstrates the use of flow cytometry to identify and count various immune cells in bronchoalveolar lavage fluid. Initially, single immune cells are identified using a viability dye, followed by differential staining of surface marker proteins, enabling the precise enumeration of each cell type.

Identification and Enumeration of Immune Cells in Bronchoalveolar Lavage Fluid by Flow Cytometry

De gastheer immuunrespons op pathogene infectie een strak gereguleerd proces. Met behulp van een lipopolysaccharide long exposure model in muizen, is het mogelijk om hoge resolutie evaluaties van de complexe mechanismen van pathogenese voeren.

Het gebruik van Oropharyngeal Intratracheaal PAMP Administratie en bronchoalveolaire lavage om de immuunrespons van de gastheer in Muizen Evalueer

We beschrijven een werkwijze voor het induceren neutrofiele longontsteking door uitdaging om vernevelde lipopolysacharide door verneveling, te modelleren acute longbeschadiging. Daarnaast worden fundamentele chirurgische technieken long isolatie, tracheale intubatie en bronchoalveolaire lavage beschreven.

Een methode voor het genereren van Pulmonale neutrofilie behulp Aerosolized Lipopolysaccharide

Dit artikel beschrijft bronchoscopic technieken in de runder-long onder experimentele omstandigheden, dat wil zeggen een bronchoscoop begeleide inenting, bronchoalveolaire lavage, bronchiale borstelen en transbronchiale long biopsie.

De Bovine Lung in het biomedisch onderzoek: visueel geleide Bronchoscopie, intrabronchiale Enten en<em&gt; In Vivo</em&gt; Sampling Technieken

De gezondheidsstatus van de long wordt weerspiegeld door het type en het aantal immuuncellen die aanwezig zijn in de bronchiolen van de long. We beschrijven een bronchoalveolaire lavage techniek die de isolatie en studie van niet-adherente cellen en oplosbare factoren uit het onderste luchtwegen van muizen mogelijk maakt.

Bronchoalveolaire lavage van meneuze longen om ontstekingscelinfiltratie te analyseren

Hier beschrijven we twee extracellulaire vesikel isolatie protocollen, ultrafiltratie centrifugeren en ultracentrifugatie met dichtheid kleurovergang centrifugeren, te isoleren van extracellulaire blaasjes van lymfkliertest bronchoalveolar lavage vloeibare steekproeven. De extracellulaire blaasjes lymfkliertest bronchoalveolar lavage vloeistof door beide methoden afgeleid zijn gekwantificeerd en gekenmerkt.

Isolatie van extracellulaire blaasjes aan de lymfkliertest Bronchoalveolar Lavage vloeistof met behulp van een techniek van ultrafiltratie centrifugeren

We beschrijven een methode voor de verwerking van bronchoalveolaire spoeling vloeistof en matched perifeer bloed van chronisch HIV-geïnfecteerde individuen op antiretrovirale therapie om pulmonale HIV-reservoirs te beoordelen. Deze methoden resulteren in de verwerving van zeer zuivere CD4 T-cellen en alveolaire macrofagen die vervolgens kunnen worden gebruikt voor immunophenotypering en HIV-DNA/RNA-quantificaties door ultragevoelige polymerase-kettingreactie.

Verwerking van bronchoalveolaire lavage vloeistof en geëvenaard bloed voor alveolaar macrofaag en CD4+ T-cel Immunophenotypering en HIV-reservoir beoordeling

Dit manuscript beschrijft een protocol om te bepalen of blootstelling aan ozon, een criterium luchtverontreinigende stof, in vivo alveolaire macrofaag-efferocytose belemmert. Dit protocol maakt gebruik van veelgebruikte reagentia en technieken en kan worden aangepast aan meerdere modellen van long letsel om de effecten op alveolaire macrofaag efferocytose te bepalen.

In vivo beoordeling van alveolaire macrofaag Efferocytose na blootstelling aan ozon

Dit manuscript beschrijft de opstelling van een infectieus model van longontsteking bij muizen en de respectieve karakterisering van letselresolutie, samen met methoden voor het kweken van bacteriën en intratracheale instillatie. Een nieuwe benadering met behulp van hoogdimensionale flowcytometrie om het immuunlandschap te evalueren, wordt ook beschreven.

Experimenteel model om de resolutie van longontsteking te evalueren

Leer een veilige bronchoalveolaire lavage-techniek voor longonderzoek met behulp van fiberoptische bronchoscopie en zachte handmatige zuiging. Deze methode maximaliseert celopbrengst en viabiliteit bij patiënten.

Bronchoalveolaire Lavage (BAL) voor onderzoek; verkrijgen adequaat monster Yield

Meer video's verkennen