Name: Isoleren Primaire Melanocyte-achtige cellen van de Muis van het Hart (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: Leer de isolatie van primaire melanocyt-achtige cellen uit muizenharten voor cardiale biologieonderzoek. Deze methode omvat enzymatische digestie en centrifugatie om levensvatbare cellen te verkrijgen voor patch-klemmen en transcriptoomanalyse.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de National Institutes of Health award R01 HL105734 om VVPMDL wordt ondersteund, voor een deel, door de National Institutes of Health Research Career Award K08 HL094748. VVP is een innovatieve Onderzoeker van de American Heart Association ondersteund door subsidie ​​11IRG900384.

1 Voorbereiden van de nodige oplossingen en apparatuur <ol><li> Eerst steriliseren de chirurgische instrumenten (rechte vorm tang, gebogen vorm tang, recht model scharen en scharen gebogen vorm) door ze te autoclaveren gedurende 15 minuten. bij 121 ° C. Bereid 2 sets van instrumenten, waarbij een set wordt gebruikt voor het ontleden van de harten en de andere set wordt gebruikt voor hakken het weefsel. </li><li> Los 1 pakje MCDB153 voedingsbodems in 900 ml gesteriliseerd, gefilterd water en roer langzaam tot het poeder is opgelost. Voeg 1,2 g natriumbicarbonaat of 15.7 ml natriumwaterstofcarbonaat-oplossing [7,5% w / v], per liter eindvolume drager voorbereid en roer tot opgelost. Breng de pH op 7,2 door toevoeging van ofwel 1 N HCl of 1 N NaOH, en giet dan de media door een 0,2 micrometer fles top filter onder steriele omstandigheden in een weefselkweek kap (bioveiligheid kast). Verzamelen dan de media en het op 4 ° C. </li><li> Bereid de aanvullingen opIn de kweekmedia (Materials List). De supplementen worden toegevoegd aan de media vlak voor het materiaal nodig voor het plateren van de cellen. </li><li> Bereid DPBS met 10% FBS plus antibiotica (penicilline en streptomycine). </li><li> Bereid vervolgens een 0,25% trypsine-oplossing door toevoeging van 0,25 g trypsine (bovine pancreas, activiteit&gt; 2500 USP eenheden / mg, ultrapuur, USB) 100 ml van DPBS plus antibiotica (penicilline en streptomycine). </li><li> Andere benodigde apparatuur die nodig is om deze procedure te voltooien onder een stereomicroscoop, Petri-schalen (10-cm), 50 ml conische buizen, 40-micrometer cel filters, DPBS plus antibiotica, 60-mm cultuur gerechten en 35-mm cultuur gerechten. </li></ol> 2 Isoleren van Harten van Neonatale Mouse Pups <ol><li> Eerst verkrijgen P0 P2 neonatale muis pups (n = 6 tot 8). Het wordt aanbevolen om pups die door het fokken Dct-Cre homozygote vrouwen met mannen die heterozygoot zijn voor ofwel de R26R zijn te gebruiken: EYFP allel of de Z / EG-allel op het etiketmelanocyt-achtige cellen. Beide R26R: EYFP en Z / EG muizen zijn verkrijgbaar bij Jackson Laboratories (voorraad nummers 006148 en 003920, respectievelijk). </li><li> Vervolgens euthanaseren de neonatale muis pups, vegen hun borst met een alcoholdoekje en leg dan de pups in een 10-cm petrischaal met DPBS. </li><li> Snijd de huid over de borst en het borstbeen met gesteriliseerde tang en schaar en open de borst voorzichtig onder een stereomicroscoop. De harten van de neonatale muis pups zijn erg klein dus wees voorzichtig om ervoor te zorgen om het hele hart te verwijderen met de atria verbonden. </li><li> Was de harten in DPBS en overbrengen naar een nieuwe 10-cm petrischaal. </li></ol> 3 enzymatische afbraak <ol><li> Breng de Petri-schaal met de gesneden harten een weefselkweek kap (bioveiligheid kast) en volg dan de onderstaande behulp van steriele technieken in de kap stappen. </li><li> Was eerst de harten drie keer in een steriele DPBS plus antibiotica. </li><li> Plaats de harten (n = 6-8) in een60-mm kweekschaal en voeg 6-8 ml 0,5% trypsine oplossing van de schotel. </li><li> Vervolgens stuurde de harten in kleine stukjes (minder dan 1 mm in grootte) en incubeer ze op 37 ° C gedurende 30 min in een 5% CO2 atmosfeer. </li><li> Na de incubatietijd is voltooid, giet de verkregen oplossing van hartweefsel en trypsine van de schaal in een steriele 50 ml conische buis. </li><li> Dan, met een 10 ml steriele pipet snel maar voorzichtig vermaal de oplossing in de 50 ml conische buis 30-50 keer. </li><li> Filtreer de verkregen oplossing door een 40-um cel zeef op een nieuwe, schone 50 ml conische buis met het filtraat te verzamelen. </li><li> Vervolgens centrifugeren de 50 ml buis bij 240 x g in een tafelmodel centrifuge gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur geroerd. Dan, Zuig voorzichtig af en resuspendeer de resterende pellet in 6-8 ml steriele DPBS. Herhaal deze stap nog 2 keer. Deze stap pellets de atriale myocyten en cardiale melanocyten, maar niet omlaag brengen van de fibroblasts aangezien de fibroblasten kleiner en in de supernatant blijven. </li></ol> 4 Plating Cardiac Melanocyte-achtige cellen <ol><li> Wanneer driemaal spoelen na centrifugatie zorgvuldig afvoer of aspireren van de wasoplossing (DPBS) en resuspendeer de pellet in 6 ml MCDB kweekmedium waarin de supplementen toegevoegd. </li><li> Nu, trek de geresuspendeerde oplossing in een steriele pipet overdracht en plaats de cellen in een 35-mm schaal, of in een putje van een 6-well plaat, en het zwembad de geïsoleerde cardiale cellen van 3 neonatale muizen in een 35-mm schaal of goed. </li><li> Incubeer de schotels een nacht bij 37 ° C in een 5% CO2 atmosfeer, zuigen uit het kweekmedium samen met eventuele losse cellen en spoel de platen eenmaal met DPBS. Voeg dan vers medium aan de platen en de media vervangen elke 2 dagen. Cellen geïsoleerd uit neonatale of embryonale harten kunnen in cultuur worden gehouden voor maximaal 3 weken, terwijl cellen geïsoleerd uit volwassen horents kan in cultuur worden gehouden voor maximaal 10 dagen. </li></ol> 5. Isolating Cardiac Melanocyte-achtige cellen uit volwassen muis Hart <ol><li> Verwijder eerst de harten van volwassen muizen (3-4 weken oud, n = 3) via een middellijn sternotomie na toediening van heparine 100 U intraperitoneaal aan de muizen vervolgens euthanasie hen. Het wordt aanbevolen om pentobarbital te gebruiken om muizen te euthanaseren voor deze procedure, maar dit geneesmiddel is niet beschikbaar op alle locaties. </li><li> Vervolgens was de weggesneden harten in steriele DPBS met antibiotica in een weefselkweek kap (bioveiligheid kast). Knijp de harten iets met gebogen ontleden tang om alle resterende bloed van ze te verwijderen en spoel dan de harten in DPBS nog een keer. </li><li> Verwijder de atria en atrioventriculaire ring van de harten (deze structuren bevatten de melanocyten-achtige cellen) en plaats de weggesneden weefselmonsters in een 35 mm schaal. </li><li> Snij de harten in kleine stukjes met behulp van gebogen schaar en krachtps en voeg 6-8 ml 0,5% trypsine oplossing van de schotel. Incubeer dan de gerechten bij 37 ° C gedurende 45-60 minuten. </li><li> Nu, volg de stappen van de bovenstaande procedure vanaf stap 3.6 en later. </li></ol>

<ol><li>Hornyak, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitf+dosage+as+a+primary+determinant+of+melanocyte+survival+after+ultraviolet+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Res%22%5BJournal%5D)">Mitf dosage as a primary determinant of melanocyte survival after ultraviolet irradiation.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 22, 307-318 (2009).</li>
<li>Yonetani, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+expansion+of+immature+melanoblasts+and+their+ability+to+repopulate+melanocyte+stem+cells+in+the+hair+follicle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">In vitro expansion of immature melanoblasts and their ability to repopulate melanocyte stem cells in the hair follicle.</a> J. Invest. Dermatol. 128, 408-420 (2008).</li>
<li>Levin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanocyte-like+cells+in+the+heart+and+pulmonary+veins+contribute+to+atrial+arrhythmia+triggers%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Melanocyte-like cells in the heart and pulmonary veins contribute to atrial arrhythmia triggers.</a> J. Clin. Invest. 119, 3420-3436 (2009).</li>
<li>Patel, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+insights+in+the+cellular+basis+of+atrial+fibrillation%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev.+Cardiovasc.+Ther%22%5BJournal%5D)">Novel insights in the cellular basis of atrial fibrillation.</a> Expert Rev. Cardiovasc. Ther. 8, 907-915 (2010).</li>
<li>Sviderskaya, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+neurons+and+melanocytes+induced+from+immortal+lines+of+postnatal+neural+crest-like+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Functional neurons and melanocytes induced from immortal lines of postnatal neural crest-like stem cells.</a> FASEB J. 23, 3179-3192 (2009).</li>
<li>Sviderskaya, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P16Ink4a+in+melanocyte+senescence+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Natl.+Cancer.+Inst%22%5BJournal%5D)">P16Ink4a in melanocyte senescence and differentiation.</a> J. Natl. Cancer. Inst. 94, 446-454 (2002).</li>
<li>Cook, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+melanoblasts+in+culture%3A+Expression+of+BRN2+and+synergistic+regulation+by+fibroblast+growth+factor-2%2C+stem+cell+factor%2C+and+endothelin-3%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Human melanoblasts in culture: Expression of BRN2 and synergistic regulation by fibroblast growth factor-2, stem cell factor, and endothelin-3.</a> J. Invest. Dermatol. 121, 1150-1159 (2002).</li>
<li>Fang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+conditions+for+the+generation+of+melanocytes+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Defining the conditions for the generation of melanocytes from human embryonic stem cells.</a> Stem Cells. 24, 1668-1677 (2006).</li>
<li>Brito, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timeline+and+distribution+of+melanocyte+precursors+in+the+mouse+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Res%22%5BJournal%5D)">Timeline and distribution of melanocyte precursors in the mouse heart.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 21, 464-470 (2008).</li>
<li>Yajima, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+isolation+of+heart+melanocytes+is+specified+and+the+level+of+pigmentation+in+the+heart+may+correlate+with+coat+color%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Res%22%5BJournal%5D)">The isolation of heart melanocytes is specified and the level of pigmentation in the heart may correlate with coat color.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 21, 471-476 (2008).</li>
</ol>

We hebben niets te onthullen.

Cardiale melanocyten aanwezig in anatomische locaties binnen het hart dat gewoonlijk tot atriale aritmie triggers geven. Deze gebieden omvatten de longaders, de atrioventriculaire annulus, het achterste linker atrium en het foramen ovale (figuur 4). Naar de rol die deze cellen spelen in aritmieën begrijpen, ontwikkelen we technieken om ze te isoleren en bestuderen hun fysiologie. Maar we erkend dat verbetering van deze techniek ter verkrijging gezonder en grotere hoeveelheden cardiale melanocyten zou to...

We identificeerden recent een nieuwe cel populatie in het hart van muizen en mensen die melanine-synthese enzymen uiten en morfologisch lijken cutane melanocyten. We noemden &#39;cardiale melanocyten&#39; deze cellen en vond ze aanwezig in anatomische locaties van waaruit atriumaritmie triggers vinden vaak hun oorsprong in de mens zijn. We vonden ook cardiale melanocyten bijdragen aan atriale ritmestoornissen bij muizen met kiembaan verwijdering van Dct. Cardiale melanocyten dun verspreid muis atrium waar ze bevatten minder dan 0,1% van alle atriale cellen. Om de elektrische en biologische eigenschappen van cardiale melanocyten onderzoeken we een procedure te isoleren van het muizenhart met Cre-induceerbare melanocyt-specifieke merkers ontwikkeld. Onze eerste procedure werd ontwikkeld van die welke voor neonatale muizen hartspiercellen en leverde zeer kleine aantallen cellen die geschikt zijn voor patch clamp opnamen of PCR-analyse te isoleren. Echter, aan het verbeteren van het genezenste en de levensvatbaarheid van cardiale melanocyten, voor meer diepgaande elektrofysiologische analyse of biochemische studies, we een verfijnde procedure uit die bedoeld zijn om de huid melanocyten isoleren ontwikkeld. De beschreven en gedemonstreerd, beoordeling procedure heeft het voordeel van het produceren gezondere cardiale melanocyten die kunnen worden uitgeplaat als een zuivere populatie of cardiomyocyten.

<table><tbody><tr><td>MCDB 153</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7403</td><td>Oplossen in water</td></tr><tr><td>DPBS, zonder calcium zonder magnesium</td><td>Invitrogen</td><td>14190136</td><td>Voorraadconc.: 1x&lt;br/&gt; Werkconc.: 1x</td></tr><tr><td>Penicilline-streptomycine </td><td>Invitrogen</td><td>15140163</td><td>Voorraadconc.: 100x&lt;br/&gt; Werkconc.: 1x</td></tr><tr><td>Fetaal runderserum</td><td>Life Technology</td><td>Gecertificeerd</td><td>Werkconc.: 4%</td></tr><tr><td>TPA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1585</td><td>Oplossen in DMSO&lt;br/&gt;Voorraadconc.: 3,2 &amp;mu;M&lt;br/&gt;Werkconc.: 32 nM</td></tr><tr><td>Transferrine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8158</td><td>Oplossen in DPBS&lt;br/&gt;Voorraadconc.: 0,1 mg/ml&lt;br/&gt;Werkconc.: 1 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>Dibutyril cyclisch AMP</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D0627</td><td>Oplossen in DPBS&lt;br/&gt;Voorraadconc.: 0,5 mM&lt;br/&gt;Werkconc.: 5 &amp;mu;M</td></tr><tr><td>Insuline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I6634</td><td>Oplossen in 10 mM azijnzuur&lt;br/&gt;Voorraadconc.: 1 mg/ml&lt;br/&gt;Werkconc.: 5 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>Basisch FGF</td><td>BD Biosciences</td><td>354060</td><td>Oplossen in water&lt;br/&gt;Voorraadconc.: 4 ng/&amp;mu;l&lt;br/&gt;Werkconc.: 4 ng/ml</td></tr></tbody></table>

isoleren primaire melanocyte-achtige cellen van de muis van het hart

Isolating Primary Melanocyte-like Cells from the Mouse Heart

We identificeerden een nieuwe populatie van melanocyt-achtige cellen (ook bekend als cardiale melanocyten) in de harten van muizen en mensen die bijdragen aan atriale aritmie triggers in muizen. Om de elektrische en biologische eigenschappen van cardiale melanocyten onderzoeken we een procedure om ze te isoleren van de muis hart dat we afgeleid van de producten ontworpen voor neonatale muizen hartspiercellen isoleren ontwikkeld. Om gezonder hart melanocyten geschikt voor uitgebreidere patch clamp of biochemische studies te verkrijgen, ontwikkelden we een verfijnde procedure voor het isoleren en plating cardiale melanocyten op basis van die oorspronkelijk ontworpen om de huid melanocyten isoleren. De verfijnde procedure wordt gedemonstreerd in deze review en produceert grotere aantallen gezonde melanocyten-achtige cellen die kunnen worden verzilverd als een zuivere populatie of met hartspiercellen.

De in dit artikel beschreven protocol is een verbeterde techniek in vergelijking met degene die we eerder gepubliceerd voor het isoleren van cardiale melanocyten uit de muizen hart. Deze procedure maakt gebruik van het gebruik van fluorescente merkers gevolg van melanine synthese enzym-specifieke Cre-recombinase cardiale melanocyt-achtige cellen te labelen. Het is belangrijk om een marker cardiale melanocyten label bij het ​​werken met vers geïsoleerde embryonale of neonatale cellen, omdat de morfologische verschillen c...

In dit protocol, w e identificeerde een nieuwe populatie van melanocyt-achtige cellen (ook bekend als cardiale melanocyten) in de harten van muizen en mensen die bijdragen aan atriale aritmie veroorzaakt in muizen.

Isoleren Primaire Melanocyte-achtige cellen van de Muis van het Hart

We hebben een nieuwe populatie melanocyt-achtige cellen (ook bekend als cardiale melanocyten) geïdentificeerd in de harten van muizen en mensen die bijdragen aan atrium...

Het algemene doel van deze procedure is het isoleren van levensvatbare hartmelanocyt-achtige cellen uit het hart van een muis. Dit wordt bereikt door eerst harten te oogsten van geëuthanaseerde muizen. De tweede stap is het fijnmalen van de harten en het dissociëren van de cellen middels enzymatische digestie en mechanische agitatie.Vervolgens wordt de cellsuspensie gecentrifugeerd en wordt het pellet met de cardiomyocyten en melanocyt-achtige cellen opnieuw gesuspendeerd. De laatste stap is het uitplaten en kweken. De uiteindelijk geïsoleerde cardiac melanocyt-achtige cellen kunnen worden gebruikt voor patch-studies of microarray-analyse in reactie op pathofysiologische stressoren om de cellulaire exciteerbaarheid of de status van het transcriptoom te beoordelen.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden die zijn ontworpen om cardiomyocyten te isoleren en te kweken, is dat het leidt tot de isolatie van veel functionele hartmelanocyt-achtige cellen. We kregen oorspronkelijk het idee voor deze methode toen we een nieuwe celpopulatie in het hart van de muis ontdekten en de fysiologie hiervan wilden onderzoeken. Begin met het voorbereiden van twee sets gesteriliseerde chirurgische instrumenten: één voor het uitnemen van de harten en een andere voor het fijnmalen van het weefsel.Bereid vervolgens de supplementen voor het medium voor, maar wacht met het toevoegen hiervan aan het kweekmedium tot vlak voor het uitplaten van de cellen. Nadat het kweekmedium is bereid, moet de oplossing in een weefselkweekkap worden gefiltreerd om deze te steriliseren; bewaar het medium vervolgens bij vier graden Celsius. Bereid de DNA's one-oplossing door 0,05 gram DNA's one toe te voegen aan 100 milliliters DPBS met 10% FBS plus antibiotica.Bereid vervolgens een 0,5% trypsine-oplossing door 0,5 gram trypsine toe te voegen aan 100 milliliter DPBS met antibiotica. Verzamel tot slot de overige benodigdheden om de procedure te voltooien, waaronder Petrischalen, conische buizen van 50 milliliter, celzeefjes van 40 micron, DPBS met antibiotica, en kweekschalen van 60 millimeter en 35 millimeter. Na het euthanaseren van P0 tot P2 neonatale muizenpups, veegt u hun borstkas schoon met alcohol en plaatst u hen in een P2-schaal van 10 centimeter met DPBS. Open onder een stereomicroscoop voorzichtig de borstholte en verwijder het gehele hart inclusief de atria.Was de harten in DPBS en breng ze over naar een nieuwe Petri-schaal van 10 centimeter. Plaats de Petri-schaal met de uitgesneden harten in een steriele werkkabine en hanteer steriele technieken voor de volgende stappen. Was de harten vervolgens drie keer in steriele DPBS aangevuld met antibiotica.Plaats de harten in een kweekschaal van 60 millimeter en voeg zes tot acht milliliter 0,5% trypsin-oplossing toe. Snijd vervolgens de harten in kleine stukjes en incubeer deze 30 minuten bij 37 graden Celsius. Trek na voltooiing van de incubatie de resulterende oplossing uit de schaal over in een steriele conische buis van 10 milliliter.Gebruik een steriele pipet van 10 milliliter om de oplossing snel maar voorzichtig 30 tot 50 keer te resuspenderen, en filter de resulterende suspensie door een celzeef van 40 micron in een nieuwe schone conische buis van 50 milliliter. Aspireer na centrifugatie voorzichtig het supernatant en resuspendeer de resterende pellet in zes tot acht milliliter steriele DPBS. Herhaal deze stap nog twee keer.Na de derde spoeling na centrifugatie wordt de wasoplossing voorzichtig afgegoten of weggezogen en wordt het pellet geresuspendeerd in zes milliliter aangevuld kweekmedium. Trek vervolgens de geresuspendeerde oplossing op in een steriele transferpipet en plaats de cellen in een schaal van 35 millimeter. Neem de geïsoleerde hartcellen van drie pasgeboren muizen na een incubatie van één nacht, zuig het kweekmedium samen met alle niet-gehechte cellen weg, spoel de platen vervolgens één keer met DPBS, voeg vers medium toe aan de platen en vervang het medium.Cellen die zijn geïsoleerd uit neonatale of embryonale harten kunnen elke twee dagen gedurende maximaal drie weken in cultuur worden gehouden, terwijl cellen uit volwassen harten maximaal 10 dagen in cultuur kunnen worden gehouden. Om melanocyt-achtige cellen uit een hart van een volwassen muis te isoleren, moeten de uitgesneden harten eerst in een weefselkweekkast worden gewassen in steriele DPBS met antibiotica. Knijp het hart voorzichtig samen met gebogen dissectiepincetten om resterend bloed te verwijderen en spoel het hart daarna nogmaals met DPBS.Verwijder vervolgens de atria en de atrioventriculaire annulus uit de harten en plaats de uitgesneden weefselmonsters in een schaal van 35 millimeter. Snijd de harten in kleine stukjes met een gebogen schaar en een pincet. Voeg zes tot acht milliliter 0,5% trypsin-oplossing toe aan de schaal en incubeer bij 37 °C gedurende 45 tot 60 minuten.Herhaal na de incubatie de eerder gedemonstreerde stappen om een suspensie van volwassen hartcellen en platers te verkrijgen zoals voorheen. In dit voorbeeld identificeert de witte pijl de cardiale melanocyt in beide panelen. Merk op dat zonder de hulp van de fluorescerende marker de cardiale melanocyt moeilijk te identificeren is en te onderscheiden van de aan de schaal gehechte atriale myocyten; de lichtblauwe pijlpunt wijst naar atriale cellen die niet goed gehecht zijn aan de hier getoonde schaal, gezonde cardiale melanocyten geïsoleerd uit een neonataal muizenhart.Ze hebben uitgebreide dendritische uitlopers ontwikkeld en vertonen een sterke gelijkenis met cutane melanocyten. Zodra deze techniek onder de knie is, kan deze in enkele uren worden uitgevoerd, mits correct uitgevoerd. Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht moeten hebben in hoe levensvatige melanocyten uit het hart kunnen worden geïsoleerd.Dat zal geschikt zijn voor fysiologische en moleculaire analyse.

isolating-primary-melanocyte-like-cells-from-the-mouse-heart

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

This video describes the rapid method to isolate and culture the melanocytes and fibroblast simultaneously from the postnatal mouse pup’s skin. These cells can be maintained and manipulated in vitro to study skin cell biology, wound healing, and melanoma.

Rapid Culturing of Primary Murine Melanocytes and Fibroblasts: Isolating Melanocytes and Fibroblasts from Whole Murine Skin Sample

Individuele cardiomyocyten van wilde type en mutante muizen kunnen uit het hart worden geïsoleerd om hun contractiliteit en calciumtransienten te bestuderen. Dit maakt het mogelijk om de bijdrage van cellulaire disfunctie aan hartdisfunctie, van welke oorzaak dan ook, te karakteriseren.

Isolatie en fysiologische analyse van de Muis Cardiomyocyten

We beschrijven een betrouwbare methode voor het isoleren van volwassen muis hartspiercellen. Dit protocol geeft een consistent resultaat voor de cultuur van functionele volwassen hartspiercellen uit verschillende genetisch gemodificeerde muizen.

Isolatie en cultuur van de volwassen muis Cardiomyocytes voor mobiele Signalering en<em&gt; In vitro</em&gt; Hypertrofie

Een ideaal model voor het bestuderen van de biologie van volwassen stamcellen is de muis haarfollikel. Hier presenteren we een protocol voor het isoleren van verschillende populaties van haarfollikelstamcellen en epidermale keratinocyten, met behulp van enzymatische vertering van de dorsale muishuid gevolgd door FACS-analyse.

Isoleren haarfollikel stamcellen en epidermale keratinocyten van Dorsale Mouse Skin

Dit protocol beschrijft een stapsgewijze methode voor de reproduceerbare isolatie en langdurige kweek van volwassen muis-cardiomyocyten met een hoge opbrengst, zuiverheid en levensvatbaarheid.

Isolatie, Cultuur en Transductie van Adult Mouse Cardiomyocytes

Het algemene doel van dit artikel is op de standaardisering van het protocol voor de isolatie, karakterisering en differentiatie van cardiale stamcellen (CSCs) vanuit het hart van de volwassen muis. Hier beschrijven we een dichtheid kleurovergang centrifugeren methode om te isoleren lymfkliertest CSCs en uitgewerkte methoden voor CSC cultuur, proliferatie en differentiatie in cardiomyocytes.

Isolatie, karakterisering en differentiatie van cardiale stamcellen van het hart volwassen muis

Dit protocol schetst een snelle methode voor het gelijktijdig genereren van melanocyt en fibroblast culturen uit de huid van 0-4 dag oude muizen. Deze primaire culturen kunnen in vitro worden gehandhaafd en gemanipuleerd om een verscheidenheid aan fysiologisch relevante processen te bestuderen, waaronder huidcelbiologie, pigmentatie, wondgenezing en melanoom.

Snelle aanmaak van primaire Murine melanocyten en fibroblast-culturen

We ontwikkelden een simple-methode voor het isoleren van hoogwaardige individuele muishartcellen door de antegrade perfusietechniek. Deze methode is Langendorff-vrij en nuttig voor het isoleren van ventriculaire en atriale myocyten of interstitiële cellen, zoals hartfibroseblasten of voorlopers.

Een Antegrade Perfusie methode voor Cardiomyocyt isolatie van muizen

De gouden standaard in de cardiologie voor cellulaire en moleculaire functionele experimenten zijn cardiomyocyten. Dit artikel beschrijft aanpassingen aan de niet-Langendorff-techniek om cardiomyocyten bij muizen te isoleren.

Een eenvoudige en effectieve methode om cardiomyocyten van muizen consequent te isoleren

Hier presenteren we een protocol dat de voorbereiding van celkernen beschrijft. Na microdissectie en enzymatische dissociatie van hartweefsel in afzonderlijke cellen, werden de voorlopercellen bevroren, gevolgd door isolatie van zuivere levensvatbare cellen, die werden gebruikt voor single-nucleus RNA-sequencing en de single-nucleus assay voor transposase-toegankelijk chromatine met high-throughput sequencing-analyses.

Kernisolatie van hartvoorlopercellen van muizen voor epigenoom- en genexpressieprofilering met eencellige resolutie

Dit manuscript beschrijft een gedetailleerd protocol voor het isoleren van retinale gliacellen Müller uit muizenogen. Het protocol begint met enucleatie en dissectie van muizenogen, gevolgd door isolatie, zaaien en kweken van Müller-cellen.

Isolatie van primaire müllercellen van de retinale glia van muizen

Leer de isolatie van primaire melanocyt-achtige cellen uit muizenharten voor cardiale biologieonderzoek. Deze methode omvat enzymatische digestie en centrifugatie om levensvatbare cellen te verkrijgen voor patch-klemmen en transcriptoomanalyse.

Isoleren Primaire Melanocyte-achtige cellen van de Muis van het Hart

Meer video's verkennen