Name: Isoleren Primaire Melanocyte-achtige cellen van de Muis van het Hart (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: Leer de isolatie van primaire melanocyt-achtige cellen uit muizenharten voor cardiale biologieonderzoek. Deze methode omvat enzymatische digestie en centrifugatie om levensvatbare cellen te verkrijgen voor patch-klemmen en transcriptoomanalyse.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door de National Institutes of Health award R01 HL105734 om VVPMDL wordt ondersteund, voor een deel, door de National Institutes of Health Research Career Award K08 HL094748. VVP is een innovatieve Onderzoeker van de American Heart Association ondersteund door subsidie ​​11IRG900384.

1 Voorbereiden van de nodige oplossingen en apparatuur <ol><li> Eerst steriliseren de chirurgische instrumenten (rechte vorm tang, gebogen vorm tang, recht model scharen en scharen gebogen vorm) door ze te autoclaveren gedurende 15 minuten. bij 121 ° C. Bereid 2 sets van instrumenten, waarbij een set wordt gebruikt voor het ontleden van de harten en de andere set wordt gebruikt voor hakken het weefsel. </li><li> Los 1 pakje MCDB153 voedingsbodems in 900 ml gesteriliseerd, gefilterd water en roer langzaam tot het poeder is opgelost. Voeg 1,2 g natriumbicarbonaat of 15.7 ml natriumwaterstofcarbonaat-oplossing [7,5% w / v], per liter eindvolume drager voorbereid en roer tot opgelost. Breng de pH op 7,2 door toevoeging van ofwel 1 N HCl of 1 N NaOH, en giet dan de media door een 0,2 micrometer fles top filter onder steriele omstandigheden in een weefselkweek kap (bioveiligheid kast). Verzamelen dan de media en het op 4 ° C. </li><li> Bereid de aanvullingen opIn de kweekmedia (Materials List). De supplementen worden toegevoegd aan de media vlak voor het materiaal nodig voor het plateren van de cellen. </li><li> Bereid DPBS met 10% FBS plus antibiotica (penicilline en streptomycine). </li><li> Bereid vervolgens een 0,25% trypsine-oplossing door toevoeging van 0,25 g trypsine (bovine pancreas, activiteit&gt; 2500 USP eenheden / mg, ultrapuur, USB) 100 ml van DPBS plus antibiotica (penicilline en streptomycine). </li><li> Andere benodigde apparatuur die nodig is om deze procedure te voltooien onder een stereomicroscoop, Petri-schalen (10-cm), 50 ml conische buizen, 40-micrometer cel filters, DPBS plus antibiotica, 60-mm cultuur gerechten en 35-mm cultuur gerechten. </li></ol> 2 Isoleren van Harten van Neonatale Mouse Pups <ol><li> Eerst verkrijgen P0 P2 neonatale muis pups (n = 6 tot 8). Het wordt aanbevolen om pups die door het fokken Dct-Cre homozygote vrouwen met mannen die heterozygoot zijn voor ofwel de R26R zijn te gebruiken: EYFP allel of de Z / EG-allel op het etiketmelanocyt-achtige cellen. Beide R26R: EYFP en Z / EG muizen zijn verkrijgbaar bij Jackson Laboratories (voorraad nummers 006148 en 003920, respectievelijk). </li><li> Vervolgens euthanaseren de neonatale muis pups, vegen hun borst met een alcoholdoekje en leg dan de pups in een 10-cm petrischaal met DPBS. </li><li> Snijd de huid over de borst en het borstbeen met gesteriliseerde tang en schaar en open de borst voorzichtig onder een stereomicroscoop. De harten van de neonatale muis pups zijn erg klein dus wees voorzichtig om ervoor te zorgen om het hele hart te verwijderen met de atria verbonden. </li><li> Was de harten in DPBS en overbrengen naar een nieuwe 10-cm petrischaal. </li></ol> 3 enzymatische afbraak <ol><li> Breng de Petri-schaal met de gesneden harten een weefselkweek kap (bioveiligheid kast) en volg dan de onderstaande behulp van steriele technieken in de kap stappen. </li><li> Was eerst de harten drie keer in een steriele DPBS plus antibiotica. </li><li> Plaats de harten (n = 6-8) in een60-mm kweekschaal en voeg 6-8 ml 0,5% trypsine oplossing van de schotel. </li><li> Vervolgens stuurde de harten in kleine stukjes (minder dan 1 mm in grootte) en incubeer ze op 37 ° C gedurende 30 min in een 5% CO2 atmosfeer. </li><li> Na de incubatietijd is voltooid, giet de verkregen oplossing van hartweefsel en trypsine van de schaal in een steriele 50 ml conische buis. </li><li> Dan, met een 10 ml steriele pipet snel maar voorzichtig vermaal de oplossing in de 50 ml conische buis 30-50 keer. </li><li> Filtreer de verkregen oplossing door een 40-um cel zeef op een nieuwe, schone 50 ml conische buis met het filtraat te verzamelen. </li><li> Vervolgens centrifugeren de 50 ml buis bij 240 x g in een tafelmodel centrifuge gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur geroerd. Dan, Zuig voorzichtig af en resuspendeer de resterende pellet in 6-8 ml steriele DPBS. Herhaal deze stap nog 2 keer. Deze stap pellets de atriale myocyten en cardiale melanocyten, maar niet omlaag brengen van de fibroblasts aangezien de fibroblasten kleiner en in de supernatant blijven. </li></ol> 4 Plating Cardiac Melanocyte-achtige cellen <ol><li> Wanneer driemaal spoelen na centrifugatie zorgvuldig afvoer of aspireren van de wasoplossing (DPBS) en resuspendeer de pellet in 6 ml MCDB kweekmedium waarin de supplementen toegevoegd. </li><li> Nu, trek de geresuspendeerde oplossing in een steriele pipet overdracht en plaats de cellen in een 35-mm schaal, of in een putje van een 6-well plaat, en het zwembad de geïsoleerde cardiale cellen van 3 neonatale muizen in een 35-mm schaal of goed. </li><li> Incubeer de schotels een nacht bij 37 ° C in een 5% CO2 atmosfeer, zuigen uit het kweekmedium samen met eventuele losse cellen en spoel de platen eenmaal met DPBS. Voeg dan vers medium aan de platen en de media vervangen elke 2 dagen. Cellen geïsoleerd uit neonatale of embryonale harten kunnen in cultuur worden gehouden voor maximaal 3 weken, terwijl cellen geïsoleerd uit volwassen horents kan in cultuur worden gehouden voor maximaal 10 dagen. </li></ol> 5. Isolating Cardiac Melanocyte-achtige cellen uit volwassen muis Hart <ol><li> Verwijder eerst de harten van volwassen muizen (3-4 weken oud, n = 3) via een middellijn sternotomie na toediening van heparine 100 U intraperitoneaal aan de muizen vervolgens euthanasie hen. Het wordt aanbevolen om pentobarbital te gebruiken om muizen te euthanaseren voor deze procedure, maar dit geneesmiddel is niet beschikbaar op alle locaties. </li><li> Vervolgens was de weggesneden harten in steriele DPBS met antibiotica in een weefselkweek kap (bioveiligheid kast). Knijp de harten iets met gebogen ontleden tang om alle resterende bloed van ze te verwijderen en spoel dan de harten in DPBS nog een keer. </li><li> Verwijder de atria en atrioventriculaire ring van de harten (deze structuren bevatten de melanocyten-achtige cellen) en plaats de weggesneden weefselmonsters in een 35 mm schaal. </li><li> Snij de harten in kleine stukjes met behulp van gebogen schaar en krachtps en voeg 6-8 ml 0,5% trypsine oplossing van de schotel. Incubeer dan de gerechten bij 37 ° C gedurende 45-60 minuten. </li><li> Nu, volg de stappen van de bovenstaande procedure vanaf stap 3.6 en later. </li></ol>

<ol><li>Hornyak, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitf+dosage+as+a+primary+determinant+of+melanocyte+survival+after+ultraviolet+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Res%22%5BJournal%5D)">Mitf dosage as a primary determinant of melanocyte survival after ultraviolet irradiation.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 22, 307-318 (2009).</li>
<li>Yonetani, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+expansion+of+immature+melanoblasts+and+their+ability+to+repopulate+melanocyte+stem+cells+in+the+hair+follicle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">In vitro expansion of immature melanoblasts and their ability to repopulate melanocyte stem cells in the hair follicle.</a> J. Invest. Dermatol. 128, 408-420 (2008).</li>
<li>Levin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanocyte-like+cells+in+the+heart+and+pulmonary+veins+contribute+to+atrial+arrhythmia+triggers%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Melanocyte-like cells in the heart and pulmonary veins contribute to atrial arrhythmia triggers.</a> J. Clin. Invest. 119, 3420-3436 (2009).</li>
<li>Patel, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+insights+in+the+cellular+basis+of+atrial+fibrillation%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev.+Cardiovasc.+Ther%22%5BJournal%5D)">Novel insights in the cellular basis of atrial fibrillation.</a> Expert Rev. Cardiovasc. Ther. 8, 907-915 (2010).</li>
<li>Sviderskaya, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+neurons+and+melanocytes+induced+from+immortal+lines+of+postnatal+neural+crest-like+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Functional neurons and melanocytes induced from immortal lines of postnatal neural crest-like stem cells.</a> FASEB J. 23, 3179-3192 (2009).</li>
<li>Sviderskaya, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P16Ink4a+in+melanocyte+senescence+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Natl.+Cancer.+Inst%22%5BJournal%5D)">P16Ink4a in melanocyte senescence and differentiation.</a> J. Natl. Cancer. Inst. 94, 446-454 (2002).</li>
<li>Cook, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+melanoblasts+in+culture%3A+Expression+of+BRN2+and+synergistic+regulation+by+fibroblast+growth+factor-2%2C+stem+cell+factor%2C+and+endothelin-3%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Human melanoblasts in culture: Expression of BRN2 and synergistic regulation by fibroblast growth factor-2, stem cell factor, and endothelin-3.</a> J. Invest. Dermatol. 121, 1150-1159 (2002).</li>
<li>Fang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+conditions+for+the+generation+of+melanocytes+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Defining the conditions for the generation of melanocytes from human embryonic stem cells.</a> Stem Cells. 24, 1668-1677 (2006).</li>
<li>Brito, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timeline+and+distribution+of+melanocyte+precursors+in+the+mouse+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Res%22%5BJournal%5D)">Timeline and distribution of melanocyte precursors in the mouse heart.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 21, 464-470 (2008).</li>
<li>Yajima, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+isolation+of+heart+melanocytes+is+specified+and+the+level+of+pigmentation+in+the+heart+may+correlate+with+coat+color%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Res%22%5BJournal%5D)">The isolation of heart melanocytes is specified and the level of pigmentation in the heart may correlate with coat color.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 21, 471-476 (2008).</li>
</ol>

We hebben niets te onthullen.

Cardiale melanocyten aanwezig in anatomische locaties binnen het hart dat gewoonlijk tot atriale aritmie triggers geven. Deze gebieden omvatten de longaders, de atrioventriculaire annulus, het achterste linker atrium en het foramen ovale (figuur 4). Naar de rol die deze cellen spelen in aritmieën begrijpen, ontwikkelen we technieken om ze te isoleren en bestuderen hun fysiologie. Maar we erkend dat verbetering van deze techniek ter verkrijging gezonder en grotere hoeveelheden cardiale melanocyten zou to...

We identificeerden recent een nieuwe cel populatie in het hart van muizen en mensen die melanine-synthese enzymen uiten en morfologisch lijken cutane melanocyten. We noemden &#39;cardiale melanocyten&#39; deze cellen en vond ze aanwezig in anatomische locaties van waaruit atriumaritmie triggers vinden vaak hun oorsprong in de mens zijn. We vonden ook cardiale melanocyten bijdragen aan atriale ritmestoornissen bij muizen met kiembaan verwijdering van Dct. Cardiale melanocyten dun verspreid muis atrium waar ze bevatten minder dan 0,1% van alle atriale cellen. Om de elektrische en biologische eigenschappen van cardiale melanocyten onderzoeken we een procedure te isoleren van het muizenhart met Cre-induceerbare melanocyt-specifieke merkers ontwikkeld. Onze eerste procedure werd ontwikkeld van die welke voor neonatale muizen hartspiercellen en leverde zeer kleine aantallen cellen die geschikt zijn voor patch clamp opnamen of PCR-analyse te isoleren. Echter, aan het verbeteren van het genezenste en de levensvatbaarheid van cardiale melanocyten, voor meer diepgaande elektrofysiologische analyse of biochemische studies, we een verfijnde procedure uit die bedoeld zijn om de huid melanocyten isoleren ontwikkeld. De beschreven en gedemonstreerd, beoordeling procedure heeft het voordeel van het produceren gezondere cardiale melanocyten die kunnen worden uitgeplaat als een zuivere populatie of cardiomyocyten.

<table><tbody><tr><td>MCDB 153</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7403</td><td>Oplossen in water</td></tr><tr><td>DPBS, zonder calcium zonder magnesium</td><td>Invitrogen</td><td>14190136</td><td>Voorraadconc.: 1x&lt;br/&gt; Werkconc.: 1x</td></tr><tr><td>Penicilline-streptomycine </td><td>Invitrogen</td><td>15140163</td><td>Voorraadconc.: 100x&lt;br/&gt; Werkconc.: 1x</td></tr><tr><td>Fetaal runderserum</td><td>Life Technology</td><td>Gecertificeerd</td><td>Werkconc.: 4%</td></tr><tr><td>TPA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1585</td><td>Oplossen in DMSO&lt;br/&gt;Voorraadconc.: 3,2 &amp;mu;M&lt;br/&gt;Werkconc.: 32 nM</td></tr><tr><td>Transferrine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8158</td><td>Oplossen in DPBS&lt;br/&gt;Voorraadconc.: 0,1 mg/ml&lt;br/&gt;Werkconc.: 1 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>Dibutyril cyclisch AMP</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D0627</td><td>Oplossen in DPBS&lt;br/&gt;Voorraadconc.: 0,5 mM&lt;br/&gt;Werkconc.: 5 &amp;mu;M</td></tr><tr><td>Insuline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I6634</td><td>Oplossen in 10 mM azijnzuur&lt;br/&gt;Voorraadconc.: 1 mg/ml&lt;br/&gt;Werkconc.: 5 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>Basisch FGF</td><td>BD Biosciences</td><td>354060</td><td>Oplossen in water&lt;br/&gt;Voorraadconc.: 4 ng/&amp;mu;l&lt;br/&gt;Werkconc.: 4 ng/ml</td></tr></tbody></table>

isoleren primaire melanocyte-achtige cellen van de muis van het hart

Isolating Primary Melanocyte-like Cells from the Mouse Heart

We identificeerden een nieuwe populatie van melanocyt-achtige cellen (ook bekend als cardiale melanocyten) in de harten van muizen en mensen die bijdragen aan atriale aritmie triggers in muizen. Om de elektrische en biologische eigenschappen van cardiale melanocyten onderzoeken we een procedure om ze te isoleren van de muis hart dat we afgeleid van de producten ontworpen voor neonatale muizen hartspiercellen isoleren ontwikkeld. Om gezonder hart melanocyten geschikt voor uitgebreidere patch clamp of biochemische studies te verkrijgen, ontwikkelden we een verfijnde procedure voor het isoleren en plating cardiale melanocyten op basis van die oorspronkelijk ontworpen om de huid melanocyten isoleren. De verfijnde procedure wordt gedemonstreerd in deze review en produceert grotere aantallen gezonde melanocyten-achtige cellen die kunnen worden verzilverd als een zuivere populatie of met hartspiercellen.

De in dit artikel beschreven protocol is een verbeterde techniek in vergelijking met degene die we eerder gepubliceerd voor het isoleren van cardiale melanocyten uit de muizen hart. Deze procedure maakt gebruik van het gebruik van fluorescente merkers gevolg van melanine synthese enzym-specifieke Cre-recombinase cardiale melanocyt-achtige cellen te labelen. Het is belangrijk om een marker cardiale melanocyten label bij het ​​werken met vers geïsoleerde embryonale of neonatale cellen, omdat de morfologische verschillen c...

In dit protocol, w e identificeerde een nieuwe populatie van melanocyt-achtige cellen (ook bekend als cardiale melanocyten) in de harten van muizen en mensen die bijdragen aan atriale aritmie veroorzaakt in muizen.

Isoleren Primaire Melanocyte-achtige cellen van de Muis van het Hart

We hebben een nieuwe populatie melanocyt-achtige cellen (ook bekend als cardiale melanocyten) geïdentificeerd in de harten van muizen en mensen die bijdragen aan atrium...

Het algemene doel van deze procedure is het isoleren van levensvatbare hartmelanocyt-achtige cellen uit het hart van een muis. Dit wordt bereikt door eerst harten te oogsten van geëuthanaseerde muizen. De tweede stap is het fijnmalen van de harten en het dissociëren van de cellen middels enzymatische digestie en mechanische agitatie.Vervolgens wordt de cellsuspensie gecentrifugeerd en wordt het pellet met de cardiomyocyten en melanocyt-achtige cellen opnieuw gesuspendeerd. De laatste stap is het uitplaten en kweken. De uiteindelijk geïsoleerde cardiac melanocyt-achtige cellen kunnen worden gebruikt voor patch-studies of microarray-analyse in reactie op pathofysiologische stressoren om de cellulaire exciteerbaarheid of de status van het transcriptoom te beoordelen.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden die zijn ontworpen om cardiomyocyten te isoleren en te kweken, is dat het leidt tot de isolatie van veel functionele hartmelanocyt-achtige cellen. We kregen oorspronkelijk het idee voor deze methode toen we een nieuwe celpopulatie in het hart van de muis ontdekten en de fysiologie hiervan wilden onderzoeken. Begin met het voorbereiden van twee

isolating-primary-melanocyte-like-cells-from-the-mouse-heart

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

This video describes the rapid method to isolate and culture the melanocytes and fibroblast simultaneously from the postnatal mouse pup’s skin. These cells can be maintained and manipulated in vitro to study skin cell biology, wound healing, and melanoma.

Rapid Culturing of Primary Murine Melanocytes and Fibroblasts: Isolating Melanocytes and Fibroblasts from Whole Murine Skin Sample

Individuele cardiomyocyten van wilde type en mutante muizen kunnen uit het hart worden geïsoleerd om hun contractiliteit en calciumtransienten te bestuderen. Dit maakt het mogelijk om de bijdrage van cellulaire disfunctie aan hartdisfunctie, van welke oorzaak dan ook, te karakteriseren.

Isolatie en fysiologische analyse van de Muis Cardiomyocyten

We beschrijven een betrouwbare methode voor het isoleren van volwassen muis hartspiercellen. Dit protocol geeft een consistent resultaat voor de cultuur van functionele volwassen hartspiercellen uit verschillende genetisch gemodificeerde muizen.

Isolatie en cultuur van de volwassen muis Cardiomyocytes voor mobiele Signalering en<em&gt; In vitro</em&gt; Hypertrofie

Een ideaal model voor het bestuderen van de biologie van volwassen stamcellen is de muis haarfollikel. Hier presenteren we een protocol voor het isoleren van verschillende populaties van haarfollikelstamcellen en epidermale keratinocyten, met behulp van enzymatische vertering van de dorsale muishuid gevolgd door FACS-analyse.

Isoleren haarfollikel stamcellen en epidermale keratinocyten van Dorsale Mouse Skin

Dit protocol beschrijft een stapsgewijze methode voor de reproduceerbare isolatie en langdurige kweek van volwassen muis-cardiomyocyten met een hoge opbrengst, zuiverheid en levensvatbaarheid.

Isolatie, Cultuur en Transductie van Adult Mouse Cardiomyocytes

Dit protocol schetst een snelle methode voor het gelijktijdig genereren van melanocyt en fibroblast culturen uit de huid van 0-4 dag oude muizen. Deze primaire culturen kunnen in vitro worden gehandhaafd en gemanipuleerd om een verscheidenheid aan fysiologisch relevante processen te bestuderen, waaronder huidcelbiologie, pigmentatie, wondgenezing en melanoom.

Snelle aanmaak van primaire Murine melanocyten en fibroblast-culturen

Een methode wordt beschreven voor de gelijktijdige isolatie van myocyten en niet-myocyten van zowel de atria als ventrikels van een enkel volwassen muizenhart. Dit protocol resulteert in consistente opbrengsten van zeer levensvatbare cardiale myocyten en niet-myocyten en beschrijft optimale celspecifieke kweekomstandigheden voor fenotyping en in vitro analyse.

Gelijktijdige isolatie en cultuur van atriale myocyten, ventriculaire myocyten en niet-myocyten uit een volwassen muizenhart

We ontwikkelden een simple-methode voor het isoleren van hoogwaardige individuele muishartcellen door de antegrade perfusietechniek. Deze methode is Langendorff-vrij en nuttig voor het isoleren van ventriculaire en atriale myocyten of interstitiële cellen, zoals hartfibroseblasten of voorlopers.

Een Antegrade Perfusie methode voor Cardiomyocyt isolatie van muizen

De gouden standaard in de cardiologie voor cellulaire en moleculaire functionele experimenten zijn cardiomyocyten. Dit artikel beschrijft aanpassingen aan de niet-Langendorff-techniek om cardiomyocyten bij muizen te isoleren.

Een eenvoudige en effectieve methode om cardiomyocyten van muizen consequent te isoleren

Hier beschrijven we een protocol om een voldoende hoeveelheid enkele niet-cardiomyocyten met hoge levensvatbaarheid te isoleren uit een post-myocardinfarct (MI) muizenhart. Dit kan worden gebruikt voor daaropvolgende single-cell sequencing, flowcytometrie-analyse en primaire celcultuur.

Voorbereiding van een niet-cardiomyocytencelsuspensie voor single-cell RNA-sequencing van een post-myocardinfarct volwassen muizenhart

Hier presenteren we een protocol dat de voorbereiding van celkernen beschrijft. Na microdissectie en enzymatische dissociatie van hartweefsel in afzonderlijke cellen, werden de voorlopercellen bevroren, gevolgd door isolatie van zuivere levensvatbare cellen, die werden gebruikt voor single-nucleus RNA-sequencing en de single-nucleus assay voor transposase-toegankelijk chromatine met high-throughput sequencing-analyses.

Kernisolatie van hartvoorlopercellen van muizen voor epigenoom- en genexpressieprofilering met eencellige resolutie

Leer de isolatie van primaire melanocyt-achtige cellen uit muizenharten voor cardiale biologieonderzoek. Deze methode omvat enzymatische digestie en centrifugatie om levensvatbare cellen te verkrijgen voor patch-klemmen en transcriptoomanalyse.

Isoleren Primaire Melanocyte-achtige cellen van de Muis van het Hart

Meer video's verkennen