Name: Een nieuwe methode voor de cultuur en de gepolariseerde Stimulatie van Human darmslijmvlies Explantaten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-01T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Leer een nieuwe methode voor de cultuur en gepolariseerde stimulatie van menselijk darmslijmvlies. Deze techniek behoudt weefselpolariteit en maakt fysiologische stimulatie via de apicale route mogelijk voor immunologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken Erika Mileti voor een uitstekende technische ondersteuning en Dr Antonio Di Sabatino voor het verstrekken van zuurstof kamers. Financiering: Dit werk werd ondersteund door subsidies van het 7e EU-kaderprogramma (IBDase, ERC: Dendroworld) en Fondazione Cariplo naar MR en ondersteuning door een Marie Curie internationale opleiding mobiliteit netwerk (Cross-Talk, subsidieovereenkomst nr: 21553-2) naar KT.

1. Het verkrijgen en voorbereiden van de Tissue <ol><li> Weefsel (mucosa gezond of IBD) wordt verkregen tijdens de operatie. Nadat het monster uitgesneden overdracht naar het lab zo snel mogelijk hem in Ca + + / Mg + +-vrij HBSS buffer gesupplementeerd met Pen / Strep bij 4 ° C of op ijs. </li></ol> * De grootte van het monster is afhankelijk van de beschikbaarheid van het weefsel: het gedeelte van het verkregen weefsel, strikt wat niet nodig is voor diagnose en kan sterk variëren tussen gezonde proefpersonen en IBD. Gezond weefsel wordt uitgesneden uit patiënten die een operatie voor darmkanker. <ol start="2"><li> Spoel het weefsel voorzichtig en maak het schoon van alle mesenteriale materiaal. Scheid de mucosa laag van de submucosa met steriele scharen en pincetten terwijl het weefsel in HBSS buffer in een petrischaal (niet noodzakelijkerwijs gedompeld). Raak het mucosale oppervlak van de tang zo weinig mogelijk. </li><li> Snijd slijmvlies in strepen ten minste 1 cm breed en zo lang mogelijk. Gebruik twee steriele scalpels, veel alsof u uw voedsel snijden. </li><li> Wassen schoon slijmvlies zachtjes in HBSS en uit te breiden op een petrischaal met de apicale zijde naar boven. </li></ol> 2. Montage van het Weefsel <ol><li> Bereid vers medium (tisDMEM). Gebruik DMEM aangevuld met glutamine (2 mM) en NaPyr (1 mM) en voeg 15% FBS-Na (Fetal Bovine Serum - North American), 1% ITS-X en 200 ng / ml EGF op het moment van gebruik. </li><li> Vul een 10 cm petrischaal met de rest van de FBS-Na (gebruik ongeveer 30 ml, zodat metalen roosters volledig zal worden ondergedompeld) en dompel de metalen roosters. Houd de plaat de plastic flessen te openen en te ondersteunen op zijn tap. </li></ol> * De metalen roosters zijn gemaakt van ijzer. De mazen vierkant met een zijde van 0,5 mm. <ol start="3"><li> Neem 3 pl chirurgische lijm met een 10 of 20 ul pipet. Breng het voorzichtig aan een van de grenzen van een kunststof cilinder terwijl het fIRM met de tang. </li><li> Plaats voorzichtig de cilinder aan de apicale zijde van de mucosa, zoals dicht bij een van de randen van de strip mogelijk. </li><li> Om de lijm tijd te geven om stevig hechten de cilinder op het weefsel, de voorbereiding van de centrum-goed orgelcultuur plaat: Verdeel 850 pi-1 ml medium in het centrum goed en ondersteunen het metalen rooster aan de randen van het centrale putje van de plaat. </li><li> Weggesneden overtollige weefsel van de grenzen van de cilinder met twee steriele scalpels als voorheen. </li><li> Til de cilinder met de aangehechte weefsel en plaatst de basolaterale zijde van de metalen rooster in het midden van de plaat. </li></ol> 3. Prikkel <ol><li> Gebruik de stimuli van uw keuze in de gewenste concentratie. </li><li> Pas geschikte volume in het midden van de plastic cilinder zonder de cilinder of het mucosale oppervlak met de pipetpunt verstoren. Zorg ervoor dat uw gekozen bundel wordt gelijkmatig het oppervlak in de cilinder. Indicated volumes: Grote kunststof cilinder: 200 pi Medium kunststof cilinder: 100 pl Kleine plastic cilinder: 50 ui </li><li> Incubeer 3 uur in een conventionele incubator. </li></ol> * Als u wilt incubeer gedurende langere tijd punten, zorg ervoor dat je een veel kleiner volume van stimuli (10-20 pi) te gebruiken en direct plaats het weefsel in een atmosfeer van 100% O 2 in de druk van 1 atm (zie 3.5) . <ol start="4"><li> Neem het medium met de stimuli van de apicale oppervlak van het weefsel en NIET VERVANGEN met vers medium, omdat het weefsel niet genoeg krijgen O 2 als een dikke laag medium op de apicale gezicht voorkomt gasuitwisseling. Bedek het bord. </li><li> Plaats het weefsel in een atmosfeer van 100% O2 in de druk van 1 atm. </li></ol> 4. Oogst <ol><li> Na 24 uur van de totale cultuur tijd (± 2,5 uur) verwijder voorzichtig de cilinder van the weefsel met behulp van een scalpel voorzichtig schrapen lijm uit en slaan afhankelijk van de gewenste analyse (vast voor immunohistochemie en / of immunofluorescentie assays of snap bevriezen in vloeibare N2 voor RNA-zuivering en genexpressie of eiwit zuivering en Western blot assays ). </li><li> Oogst de basolaterale medium voor cytokinesecretie profilering. Centrifugeer bij 8.000 rpm gedurende 7 minuten tot pellet puin, breng de bovenstaande vloeistof in een Eppendorf buis (alternatief aliquot) en direct bewaard bij -20 ° C. </li></ol> * Als u wilt supernatanten langer te bewaren, bewaar ze bij -80 ° C.

<ol><li>Schuller, S., Lucas, M., Kaper, J. B., Giron, J. A., Phillips, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ex+vivo+response+of+human+intestinal+mucosa+to+enteropathogenic+Escherichia+coli+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The ex vivo response of human intestinal mucosa to enteropathogenic Escherichia coli infection.</a> Cell. Microbiol. 11, 521-530 (2009).</li>
<li>Tsilingiri, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probiotic+and+postbiotic+activity+in+health+and+disease%3A+comparison+on+a+novel+polarised+ex-vivo+organ+culture+model%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Probiotic and postbiotic activity in health and disease: comparison on a novel polarised ex-vivo organ culture model.</a> Gut. , (2012).</li>
<li>Tsilingiri, K., Rescigno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Should+probiotics+be+tested+on+ex+vivo+organ+culture+models%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Should probiotics be tested on ex vivo organ culture models?</a> Gut Microbes. , Manuscript in preparation (2012).</li>
<li>Mileti, E., Matteoli, G., Iliev, I. D., Rescigno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+immunomodulatory+properties+of+three+probiotic+strains+of+Lactobacilli+using+complex+culture+systems%3A+prediction+for+in+vivo+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Comparison of the immunomodulatory properties of three probiotic strains of Lactobacilli using complex culture systems: prediction for in vivo efficacy.</a> PLoS One. 4, e7056(2009).</li>
<li>Cencic, A., Langerholc, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+cell+models+of+the+gut+and+their+applications+in+food+microbiology--a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Food+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Functional cell models of the gut and their applications in food microbiology--a review.</a> Int. J. Food Microbiol. 141, Suppl 1. S4-S14 (2010).</li>
<li>te Velde, A. A., Verstege, M. A., Hommes, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+appraisal+of+the+current+practice+in+murine+TNBS-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm.+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Critical appraisal of the current practice in murine TNBS-induced colitis.</a> Inflamm. Bowel Dis. 12, 995-999 (2006).</li>
<li>Senior, P. V., Pritchett, C. J., Sunter, J. P., Appleton, D. R., Watson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crypt+regeneration+in+adult+human+colonic+mucosa+during+prolonged+organ+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anat%22%5BJournal%5D)">Crypt regeneration in adult human colonic mucosa during prolonged organ culture.</a> J. Anat. 134, 459-469 (1982).</li>
<li>Browning, T. H., Trier, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+culture+of+mucosal+biopsies+of+human+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Organ culture of mucosal biopsies of human small intestine.</a> J. Clin. Invest. 48, 1423-1432 (1969).</li>
<li>Besselink, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probiotic+prophylaxis+in+predicted+severe+acute+pancreatitis%3A+a+randomised%2C+double-blind%2C+placebo-controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Probiotic prophylaxis in predicted severe acute pancreatitis: a randomised, double-blind, placebo-controlled trial.</a> Lancet. 371, 651-659 (2008).</li>
<li>Lakhdari, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+NF-kappaB+modulation+capabilities+within+human+intestinal+commensal+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Identification of NF-kappaB modulation capabilities within human intestinal commensal bacteria.</a> J. Biomed. Biotechnol. 2011, 282356(2011).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De behoefte aan fysiologisch relevante modellen waarop behandelingen voor menselijke darmslijmvlies geldig kan worden getest is lang benadrukt. Veel onderzoekers hebben potentiële artefacten en geïdentificeerd in zowel cel 5 en muismodellen 6 tot dusver voor dat doel gebruikt. Sterker nog, ook al veelbelovende preklinische gegevens wordt vaak verkregen, deze zelden te vertalen naar significant klinisch voordeel. De methode in dit werk beschreven, geeft een relatief eenv...

<table><tbody><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Reagentia&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>10X HBSS</td><td>Eurocalne</td><td>ECM4006XL</td><td></td></tr><tr><td>Peni/Strepto</td><td>Lonza</td><td>DE17602E</td><td></td></tr><tr><td>Gentamycine</td><td>Gibco</td><td>15750-037</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Lonza</td><td>BE12614</td><td></td></tr><tr><td>FBS-Na</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>100X ITS-X</td><td>Gibco</td><td>51500-056</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Tebu-bio</td><td>100-15</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Lonza</td><td>BE17605E</td><td></td></tr><tr><td>Niet-essentiële aminozuren 100X</td><td>Gibco</td><td>11140-035</td><td></td></tr><tr><td>NaPyr</td><td>Gibco</td><td>11360-039</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Materialen&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Kloningscilinders 6x8 mm</td><td>BellCo</td><td>2090-00608</td><td></td></tr><tr><td>Kloningscilinders 8x8 mm</td><td>BellCo</td><td>2090-0080</td><td></td></tr><tr><td>Kloningscilinders 10x10 mm</td><td>BellCo</td><td>2090-01010</td><td></td></tr><tr><td>Metalen roosters</td><td>Zelfgemaakt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Orgaankweekplaat met centraal putje</td><td>BD Falcon</td><td>353037</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische lijm (Vetbond)</td><td>3M</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Zuurstofpotten</td><td>Zelfgemaakt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zuurstoftanks</td><td>Air Liquid Sanit&amp;#224;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

een nieuwe methode voor de cultuur en de gepolariseerde stimulatie van human darmslijmvlies explantaten

A Novel Method for the Culture and Polarized Stimulation of Human Intestinal Mucosa Explants

Enkele modellen die nu bestaan ​​om realistisch te simuleren van de complexe menselijke darm micro-omgeving, waar een verscheidenheid aan interacties plaatsvinden. Juiste homeostase direct afhankelijk van deze interacties als ze vormen een volledige immunologische respons induceren van tolerantie tegen voedsel antigenen, terwijl tegelijkertijd montage effectieve immuunrespons tegen pathogene microben ongeluk wordt ingenomen met voedsel. Intestinale homeostase is ook bewaard gebleven door middel van verschillende complexe interacties tussen de microbiota (inclusief voedsel-geassocieerde gunstige bacteriestammen) en de gastheer, die de bevestiging / degradatie van slijm te regelen, de productie van antimicrobiële peptiden door de epitheliale barrière, en de &quot;opvoeding&quot; van epitheelcellen bevolking &#39;dat de tolerogene of immunogene fenotype van unieke, darm-resident lymfecellen bestuurt&#39;. Deze interacties zijn tot dusver zeer moeilijk te reproduceren met in vitro assaysbehulp van gekweekte cellijnen of perifere mononucleaire bloedcellen. Bovendien muismodellen aanzienlijk verschillen in bestanddelen van het darmslijmvlies (slijmlaag organisatie commensaalbacteriën gemeenschap) ten opzichte van de menselijke darm. Aldus hebben studies van verschillende behandelingen te brengen in de klinieken voor belangrijke stress of pathologische aandoeningen zoals prikkelbare darmsyndroom, inflammatoire darmziekte of colorectale kanker moeilijk uitvoerbaar zijn. Om deze problemen aan te pakken, hebben we een nieuw systeem dat ons in staat stelt om explantaten van het menselijk darmslijmvlies dat hun in situ conditionering behouden door de gastheer microbiota en de immuunrespons te stimuleren, in een gepolariseerde fashion ontwikkeld. Gepolariseerde apicale stimulatie is van groot belang voor het resultaat van de opgewekte immuunreactie. Het is herhaaldelijk aangetoond dat dezelfde stimuli produceren totaal verschillende reacties wanneer en passeren apicale oppervlak van de intestinale epithelium, het stimuleren van epitheelcellen basolateraal of die in direct contact met de lamina propria onderdelen, schakelen het fenotype van tolerogene tot immunogeen en het veroorzaken van onnodige en overmatige ontsteking in het gebied. We bereikten gepolariseerd stimulatie door lijmen een grot cilinder die afgebakend het gebied van stimulatie op de apicale gezicht van het slijmvlies zoals zal in het protocol worden beschreven. We gebruikten dit model te onderzoeken, onder meer differentiële effecten van drie verschillende Lactobacilli stammen. We tonen aan dat dit model systeem is zeer krachtig om de immunomodulerende eigenschappen van probiotica te beoordelen bij gezonde en aandoeningen.

We erin geslaagd in het behoud van gezonde en IBD menselijk darmslijmvlies in de cultuur gedurende minstens 24 uur behouden het welzijn van het weefsel. In overeenstemming met eerdere waarnemingen 1 was dit alleen mogelijk als de meerderheid van de kweekperiode (ten minste 85% van het totaal) vond plaats in O 2, zoals het weefsel niet overleven 24 uur in gebruikelijke incubatoren (figuur 2). We hebben ook aangetoond dat verschillende reacties van de explantaten kan worden waargenom...

We stellen een nieuwe werkwijze voor het onderhoud van menselijke intestinale mucosa in cultuur en controle van de reactie op verschillende soorten stimuli gedurende tenminste 24 uur. Bij onze werkwijze, wordt de polariteit van het weefsel gehandhaafd, waardoor een fysiologische stimulering via de apicale route.

Een nieuwe methode voor de cultuur en de gepolariseerde Stimulatie van Human darmslijmvlies Explantaten

Er bestaan momenteel weinig modellen die de complexe micro-omgeving van de menselijke darm, waarin uiteenlopende interacties plaatsvinden, realistisch kunnen simuleren. Een juiste ...

Het algemene doel van het volgende experiment is om de in vivo situatie voor de stimulatie van het menselijke darmmucosale weefsel na te bootsen. Dit wordt bereikt door een cave-cilinder op de apicale zijde van het weefsel te lijmen om te voorkomen dat de stimulus basolateraal contact maakt. In een tweede stap wordt de stimulus aangebracht, wat analyse van de opgewekte immuunrespons mogelijk maakt.Vervolgens wordt de stimulus van de apicale zijde van het weefsel verwijderd om het gedurende 24 tot 36 uur levensvatbaar te houden. De verkregen resultaten kunnen differentiële effecten van verschillende probiotische stammen aantonen op basis van immunohistochemische gegevens, cytokinesecretie, profielanalyse, enzovoort. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals de ASIC-kamer, is dat het gelijktijdige analyse van maximaal 20 condities mogelijk maakt.Het maakt een verlenging van de kweekduur tot 36 uur mogelijk en levert bovendien voldoende materiaal voor diverse analyse-uitlezingen, zoals DNA/RNA-analyse, immunohistochemie, cytokinesecretie, enzovoort. Hoewel dit model inzicht kan bieden in het probioticumveld, kan het ook worden gebruikt voor andere technologieën en om het effect van andere immunomodulatoren te bestuderen, zoals biologicalia, ontstekingsremmende geneesmiddelen en dergelijke. Darmslijmvliesweefsel van gezonde individuen of personen met chronische inflammatoire darmziekten moet tijdens een chirurgische ingreep worden verkregen.Zodra het monster is weggesneden, wordt het snel naar het laboratorium overgebracht, waarbij het gekoeld wordt gehouden in HBSS met pen strep. Begin vervolgens met het wassen van het weefsel in buffer en verwijder al het mesenteriale materiaal. Scheid daarna de mucosalaag van de submucosa met een steriele schaar en een pincet, terwijl het weefsel in de HBSS-buffer blijft.In een petrischaal is het niet nodig om het weefsel volledig ondergedompeld te houden, maar raak het mucosa-oppervlak zo min mogelijk aan met de pincet. Snijd vervolgens het slijmvlies in stroken van ten minste één centimeter breed en zo lang mogelijk, waarbij twee steriele scalpels worden gebruikt op een manier vergelijkbaar met het snijden van voedsel. Was het slijmvlies na het snijden voorzichtig schoon in calcium- en magnesiumvrij HBSS.Leg tot slot de mucosastrepen uit op een petrischaal met de apicale zijden naar boven gericht. Begin met het bereiden van vers TIS DMEM. Vul vervolgens een petrischaal van 10 centimeter met ongeveer 30 milliliters van de F-B-S-N-A en dompel een ijzeren rooster volledig onder in de oplossing.Houd de plaat open en positioneer plastic cilinders op de plaatdekker. Zuig vervolgens drie µL chirurgische lijm op in een pipet en breng de lijm voorzichtig aan op een van de randen van een plastic cilinder terwijl u deze stevig met de pincet vasthoudt. Plaats de cilinder daarna voorzichtig op de apicale zijde van het slijmvlies, zo dicht mogelijk bij een van de randen van de strips, terwijl de lijm droogt.Dispenseer 850 tot 1000 µL medium in de centrale put van de weefselplaat en plaats het ijzeren rooster op de randen van de centrale put. Snijd met twee scalpels het overtollige weefsel langs de randen van de cilinder weg. Til nu voorzichtig de cilinder met het vastgehechte weefsel op en plaats de basolaterale zijde van het weefsel op het ijzeren rooster in het midden van de plaat.Ga vervolgens over tot de stimulatie van het weefsel. Breng de gewenste stimuli in de gewenste concentratie aan in het centrum van de plastic cilinder. Verstoor de cilinder of het mucosaal oppervlak niet met de pipetpunt en bedek het oppervlak binnen de cilinder gelijkmatig.Incubeer het weefsel nu gedurende maximaal drie uur. Incubatie langer dan drie uur is ook mogelijk met behulp van een kleiner volume stimulusoplossing. Verwijder na de incubatie de stimuli van het apicale oppervlak van het weefsel, maar vervang dit niet door vers medium.Het toevoegen van medium zou het weefsel verstikken. Vul de zuurstofpot nu met één atmosfeer druk van 100% oxygen gedurende 24 uur cultuurtijd. Wees altijd voorzichtig bij het hanteren van de zuurstoftank en zorg ervoor dat deze na gebruik correct wordt afgesloten.Na de 24 uur durende stimulatiecultuur wordt een scalpel gebruikt om de cilinder voorzichtig uit het weefsel te verwijderen door de lijm behoedzaam weg te schrapen. Fixeer vervolgens het weefsel voor IHC- of immunofluorescentie-assays. Of, voor genexpressie- of eiwitanalyse, wordt het weefsel direct ingevroren in vloeibare stikstof.Oogst vervolgens het basaal lateraal medium voor het profileren van de cytokinesecretie. Breng daarna het medium over naar een centrifugebuis en pellet het debris volgens het beschreven protocol. Gezonde menselijke darmmucosa en darmmucosa met IBD werden gedurende ten minste 24 uur gekweekt, waarbij het welzijn van de weefsels werd gewaarborgd.Dit was alleen mogelijk als ten minste 85% van de cultuurtijd plaatsvond in een zuurstofrijke omgeving. Conventioneel gekweekt slijmvlies presteert minder goed. Het gezonde weefsel werd vervolgens gestimuleerd met pro-inflammatoire invasieve salmonella.Twee uur na inoculatie was de destructie van de bovenste laag van het epitheel al zichtbaar in vergelijking met de controles. Na 24 uur werd de degeneratie zeer uitgebreid. Een diepere bespreking van experimentele toepassingen met gepubliceerde resultaten volgt in het geschreven manuscript na de uitwerking ervan.Deze techniek heeft de weg vrijgemaakt voor onderzoekers in het vakgebied van de gastroenterologie om de interactie tussen gastheer en microben in het maagdarmstelsel te bestuderen. Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht hebben in hoe een menselijk darmmucosa in cultuur kan worden gehouden en topisch kan worden gestimuleerd. Vergeet niet dat het werken met menselijke monsters uiterst gevaarlijk kan zijn en dat er altijd de nodige voorzorgsmaatregelen moeten worden genomen bij het uitvoeren van deze procedure.

a-novel-method-for-culture-polarized-stimulation-human-intestinal

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Source: In, J. G.,et al. Human Colonoid Monolayers to Study Interactions Between Pathogens, Commensals, and Host Intestinal Epithelium. J. Vis. Exp. (2019).This video demonstrates the procedure for culturing colon-derived epithelial cells on a collagen-coated Transwell system to generate a mucus-producing monolayer that models the intestinal barrier and enables host–pathogen interaction studies.

Generation of a Human Colonoid Monolayer with Barrier Function to Study Host–Pathogen Interactions

In this video, we describe the methodology for setting up an ex vivo gut organ culture system to study the interactions between mouse intestinal tissue fragments and specific gut bacteria. The device consists of two pairs of input-output ports, the first connecting the intestinal tissue lumen and supplying the specific bacterial suspension into it, and the second continuously supplying media to the device's wells to maintain ex vivo tissue viability.

An Ex Vivo Gut Organ Culture System to Study Host-Microbiota Interactions

We beschrijven een methode om humane enteroïden te kweken uit kleine darmcrypten en colonoïden uit coloncrypten die zijn verzameld uit zowel chirurgisch weefsel als biopsieën. In dit methodologische artikel presenteren we de kweekmodaliteiten die essentieel zijn voor het succesvolle groeien en onderhouden van humane enteroïden en colonoïden.

Oprichting van Human Epithelial Enteroids en Colonoids van Whole Tissue en Biopsie

Hier wordt een protocol te oogsten, te onderhouden en te behandelen muis dunne darm organoids met pathogeen geassocieerde moleculaire patronen (PAMPs) en Listeria monocytogenes beschreven, alsmede nadruk op genexpressie en correcte normalisatie technieken voor eiwit.

De<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Cultuur en Pattern Recognition Receptor Stimulatie van de Muis Intestinal Organoids

We beschrijven een in vitro protocol co-cultuur darm microbioom en darmvlokken voor een langere periode met een menselijke darm-on-a-chip microphysiological systeem.

Co-cultuur van de levens- Microbiome met Microengineered Human darmvlokken in een Gut-on-a-Chip microfluïdische apparaat

Dit protocol beschrijft de isolatie en kweek van gemengde muis kleine darmcellen. Deze primaire kweken intestinale maken het onderzoek signaalroutes onderliggende darm peptidesecretie behulp van een aantal technieken.

Gemengde Primaire culturen van Muizen dunne darm Bestemd voor de Studie van Gut hormoon en live cell imaging van entero-Cells

Hier presenteren we een protocol bij de menselijke cultuur-enteroid of colonoid monolayers moeten intact barrièrefunctie gastheer epitheliale-microbiota interacties op het cellulaire en biochemisch niveau studeren.

Menselijke Colonoid Monolayers studie van interacties tussen ziekteverwekkers, Commensals en Host intestinaal epitheel

Dit protocol beschrijft hoe de differentiatie van M cellen in menselijke stamcel afgeleide ileale monolagen en methoden om hun ontwikkeling te beoordelen induceren.

Geïnduceerde differentiatie van M cel-achtige cellen in menselijke stamcel-afgeleide Ileal Enteroid monolayers

Hier presenteren we twee protocollen die het modelleren van intestinale apicale-specifieke interacties mogelijk maken. Organoïde-afgeleide intestinale monolagen en Air-Liquid Interface (ALI) culturen vergemakkelijken de generatie van goed gedifferentieerde epithelia toegankelijk vanaf zowel luminale als basolaterale zijden, terwijl polariteit-omgekeerde intestinale organoïden hun apicale kant blootstellen en vatbaar zijn voor hoge doorvoertesten.

Kweekmethoden om apicale-specifieke interacties te bestuderen met behulp van intestinale organoïde modellen

De studie presenteert een methode voor in vitro onderzoek van bacteriële infecties met behulp van intestinale organoïden afkomstig van weefselstamcellen. Het protocol beschrijft hoe organoïden in twee dimensies kunnen worden gekweekt en onderscheiden, geïnfecteerd met adherent-invasieve Escherichia coli, en belangrijke metingen worden beoordeeld, waaronder het doorbreken van de epitheliale barrière, infectiebeeldvorming en de repitheliale RNA-respons.

Een tweedimensionale organoïde cultuur op invasine of basement membraanextract om gastheer-bacteriën interacties te bestuderen

Leer een nieuwe methode voor de cultuur en gepolariseerde stimulatie van menselijk darmslijmvlies. Deze techniek behoudt weefselpolariteit en maakt fysiologische stimulatie via de apicale route mogelijk voor immunologisch onderzoek.

Een nieuwe methode voor de cultuur en de gepolariseerde Stimulatie van Human darmslijmvlies Explantaten

Meer video's verkennen