Name: Chirurgische Techniek voor Spinal Cord Levering van therapieën: Demonstratie van orde in Göttingen minivarkens (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-07T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Leer een chirurgische techniek voor het leveren van gentherapie en celtherapie in het ruggenmerg met behulp van Göttingen minivarkens. Deze methode verbetert de veiligheid en nauwkeurigheid van intraspinale injecties.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken de Emory University afdeling Animal Resources personeel voor veterinaire zorg. Financieringsbronnen zijn onder meer: ​​ALS Association, Ministerie van Defensie, en Neuralstem, Inc

1. Animal Use Procedures aangetoond hierin zijn goedgekeurd door de Emory University Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC). Vrouw Göttingen minivarkens een gewicht van ongeveer 15-20 kg worden gebruikt. 2. Anesthesie Dieren worden gevast ongeveer 12 uur voorafgaand aan de operatie. Animal sedatie en anesthesie inductie bestaan ​​uit een cocktail van intramusculaire Ketamine (35 mg / kg), Acepromazine (1,1 mg / kg) en Atropine (0,04 mg / kg). Dieren worden vervolgens geïntubeerd en onderhouden op zuurstof en 1-3% isofluraan algemene anesthesie. Op dit punt wordt de rug en het hoofd van elk dier geschoren. Diepte van de anesthesie wordt gecontroleerd door de veterinaire personeel. Aangezien interdigitale, cornea en palpeerbaar reflexen, en hart-en ademhalingsfrequentie, pulsoximetrie, directe / indirecte bloeddruk, end-tidal kooldioxide metingen en spiertonus / reactie op schadelijke stimuli worden gebruikt dieptemonitor<html> van de anesthesie. 3. Positionering Dieren worden genomen om de operatiekamer en geplaatst in een buikligging op een frame op maat ontworpen om patiënten positionering na te bootsen op een Jackson spinale operatietafel. Het frame gebruikt verstelbare banden die zijn geplaatst onder de borst en het bekken van het dier, zodat de buik te hangen vrij en derhalve om de druk op de buik en borst en daaruit epidurale veneuze bloeding (figuur 1). Het frame heeft ook externe immobilisatie van de wervelkolom van de procedure 1. Daarnaast worden dieren op een verwarmde re-circulerende pad om de lichaamstemperatuur en een marginale oorader gecatheteriseerd voor toediening van vocht en eventueel noodzakelijke drug delivery tijdens de operatie te handhaven. Tenslotte wordt het operatiegebied voorbereid met alcohol en Chlorhexadine of Betadine oplossing en chirurgische doeken worden op de chirurgische veld. le &quot;&gt; 4. Laminectomie Een ongeveer 10-15 cm incisie in de huid wordt uitgevoerd en de paraspinale musculatuur wordt doorsneden van de wervelkolom bilateraal. Vervolgens wordt een multi-level dorsale laminectomie uitgevoerd. De lamina en doornuitsteeksels van drie wervels liggende C3-C5 of L2-L4 segmenten verwijderd met rongeurs en een chirurgische boor. 5. Plaatsing van de Spinal Derrick We noemen Spinal Derrick het apparaat ontworpen voor de levering van (gen-en cel) therapieën in het ruggenmerg 2-5. Gedetailleerde bespreking van het ontwerp en de evolutie van dit apparaat vindt u op Riley et al.., 2011. 4 Om de inrichting aan de patiënt verzekeren, zijn percutane berichten geplaatst via 1cm incisies boven en onder de primaire incisie en gemonteerd op de lamina boven en onder de primaire incisie. Vervolgens worden twee geïntegreerde retractors aan de four percutane berichten boven en onder de incisie het gebied van de wervelkolom dat reeds bloot laminectomie. 6. Dural Opening Met behulp van een Woodson tandheelkundige hulpmiddel en een 11 blad is een 2,5 cm incisie gemaakt door de dura, waardoor de ruggenmerg. De dura wordt weerkaatst de pial laag met 4-0 Nurolon hechting en bevestigd aan de diepe paraspinale spieren. Chirurgische pasteitjes worden in de rostrale en caudale uiteinden van de opening. Deze bieden een gedeeltelijke barrière voor cerebrospinale vloeistof flow en ook een veilige doelstelling voor de chirurgen om sukkels plaatsen zonder beschadiging van het snoer. In mensen, voor chirurgische microscoop vergroting is pial oppervlak ontleed op dit punt. Door technische beperkingen, is deze procedure niet vereist of haalbaar dieren. 7. Spinal Cord Injecties en zijdelingse verplaatsing van de Spinal Derrick voor extra injecties Onmiddellijk voorafgaand aan injecties, wordt een bolus van methylprednisolon (125 mg, IV) gegeven ruggenmerg zwelling voorkomen. Op dit punt wordt het platform railsysteem bevestigd en de zijhekken worden aangepast om de juiste lengte te passen. De gondel is top-geladen in 2 bars en Z drive is gemonteerd op de kruiskoppeling. Vervolgens wordt de beladen canule geplaatst op de Microdrive. Met de kruiskoppeling op de micro-injectie platform zijn de coronale en sagittale hoeken aangepast om een ​​traject loodrecht op het oppervlak van de spinale injecties volgen de plaatsing van de canule te waarborgen. De naald blijft staan ​​dus mediaal van de dorsale wortel ingangszone (DREZ). De DREZ is vastgesteld in het kader 3.5X chirurgische loupe vergroting en drong op een orthogonale traject aan het snoer oppervlak op een punt &lt;1 mm mediaal. In mensen, een pre-operatieve MRI geeft een nulmeting of ruggenmerg afmetingen voor operatieve planning. Bovendien is de dikte van het ruggenmerg gemeten om de gewenste diepte van de voorhoorn bepalen. De suspensie wordt toegediend op een diepte van 4 mm van pial contact. Een flens van Ultem plastic dient als een stop op de pia oppervlak om de naald te voorkomen bevorderen dieper dan gewenst. Zodra de naald wordt geplaatst op het doel, wordt de stijve metalen buitenhuis getrokken, waardoor de flexibele buis blootgesteld. Nadat de injectie is voltooid, wordt de naald blijven voor nog eens 1 min. tot reflux cel voorkomen de canule injectie veroorzaken. Zorg wordt besteed aan het oppervlak vaatstelsel te voorkomen door iets aanpassen van de microdrive of lateralisatie of rostro-caudaal. Sommige bloeden van penetratie sites kunnen optreden. Wanneer een dergelijke bloeding wordt aangetroffen, worden micro-pasteitjes geplaatst over het bloeden prikplaats en zuigkracht wordt toegepast op hen om bloed lont uit de canule penetratie ter voorkoming en opbouw in het koord. Dit maakt betrouwbaar voor het bloed te stollen. Elektrochirurgie wordt vermeden is directe druk. Na naald verwijderen, wordt de stereotaxische apparaat verplaatst naar het volgende doel site langs de rostro-caudale as, gescheiden door 2 of 4 mm of als nodig is om zichtbare bloedvaten op het dorsale oppervlak van het ruggenmerg te voorkomen. Dit proces wordt herhaald zo vaak als voorgesteld in een bepaalde studie. 8. Drijvende canule Een aangepaste infusie cannula van kleine diameter gebruikt voor de injecties. De canule bestaat uit een 30-gauge naald afgeschuinde van vaste lengte verbonden met een 30-gauge flexibele slang silastic van variabele lengte. Het distale einde is voorzien van een Hamilton luer lock die is gekoppeld aan een microinjector pomp. De proximale buis wordt silastic ensheathed in een 24-gauge stijve buitenste canule die stoelen op het proximale uiteinde van de injectienaald flens. Deze flens beide stoelende buitenste canule en dient als diepteaanslag voor de injectienaald. Voor elke injectie wordt het juiste volume van een therapeutische suspensie toegediend door middel van een vooraf geijkte Minj-PD microINJECTOR pomp (Tritech Research, Inc, Los Angeles, CA) met een snelheid van 5 ul per minuut. 9. Sluiting Zodra alle injecties werden gemaakt, wordt de spinale boortoren voorzichtig verwijderd en de incisies gesloten vier lagen. De dura is gesloten met behulp van een 4,0 Nurolon steek, in een waterdichte manier. 0 Vicryl hechtdraad voor de diepe spierlaag. Fascia wordt dan gesloten met 0 Vicryl hechtmateriaal ook in een waterdichte manier. De dermale laag wordt tenslotte afgesloten met 2,0 Vicryl, met een rijgsteek. Wondsluiting wordt uitgevoerd op een 3-0 nylon hechtdraad. 10. Herstel en Beheer van de Pijn Dieren worden geëxtubeerd en gecontroleerd op 2 uur volgende anesthesie herstel. Vervolgens worden de dieren overgebracht naar individuele cleeftijden en ten minste eenmaal per dag gecontroleerd op voedselconsumptie, ontlasting, en mictie. Voor pijnbestrijding is een transdermale pleister Fentanyl (75 mcg) geniet aan de rug van de dieren drie dagen post-operatieve analgesie. Bovendien kan Buprenorfine (0,05 mg / kg, tweemaal daags, IM) worden gegeven drie dagen na de operatie. 11. Resultaten en vertegenwoordiger Outcomes Klinische en gedrag waarnemingen worden uitgevoerd voor de operatie en vervolgens worden opgeslagen op dag 1 tot en met 7 en wekelijks tot eindpunt op basis van de onderzoeksopzet. Behavioral gegevens worden verzameld om neurologische morbiditeit te evalueren zoals eerder beschreven 6. Sensorische functie wordt beoordeeld door de aanwezigheid of afwezigheid van een respons van terugtrekken van mechanische stimulus de tenen van voor-en achterpoten. Motorische functie volgt de Tarlov score (tabel 1): 0 - verlamming, geen beweging; 1 - Voelbare tonus in de achterste ledematen, lichte movement, 2 - Beweging in de achterste ledematen, maar niet in staat om te zitten of te staan; 3 - Mogelijkheid om op te staan ​​en lopen, maar ataxie en voor korte periodes, 4 - volledig herstel, normale motorische functie. Veiligheid van de procedure wordt bepaald door het vermogen van een dier terugkeren naar pre-operatieve baseline. Voorbijgaande neurologische tekorten moeten meestal opgelost tussen postoperatieve dagen 1 en 7, met enkele variaties afhankelijk dieren rassen en procedure (aantal injecties, onder andere parameters). Blijvende morbiditeit wordt bepaald door blijvende neurologische stoornissen die niet corresponderen met de tijd dieren bereiken IACUC standaard eindpunt (figuur 2).

<ol><li>Usvald, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+dosing+regimen+and+reproducibility+of+intraspinal+grafting+of+human+spinal+stem+cells+in+immunosuppressed+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Analysis of dosing regimen and reproducibility of intraspinal grafting of human spinal stem cells in immunosuppressed minipigs.</a> Cell Transplant. 19, 1103-1122 (2010).</li>
<li>Riley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+spinal+cord+therapeutics+delivery%3A+stabilized+platform+and+microelectrode+recording+guidance+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Stereotact.+Funct.+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Targeted spinal cord therapeutics delivery: stabilized platform and microelectrode recording guidance validation.</a> Stereotact. Funct. Neurosurg. 86, 67-74 (2008).</li>
<li>Federici, T., Riley, J., Park, J., Bain, M., Boulis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+safety+validation+of+a+stabilized+viral+vector+direct+injection+approach+to+the+cervical+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Transl.+Sci%22%5BJournal%5D)">Preclinical safety validation of a stabilized viral vector direct injection approach to the cervical spinal cord.</a> Clin. Transl. Sci. 2, 165-167 (2009).</li>
<li>Riley, J. P., Raore, B., Taub, J. S., Federici, T., Boulis, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platform+and+Cannula+Design+Improvements+for+Spinal+Cord+Therapeutics+Delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Platform and Cannula Design Improvements for Spinal Cord Therapeutics Delivery.</a> Neurosurgery. 69, 147-154 (2011).</li>
<li>Riley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cervical+spinal+cord+therapeutics+delivery%3A+preclinical+safety+validation+of+a+stabilized+microinjection+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Cervical spinal cord therapeutics delivery: preclinical safety validation of a stabilized microinjection platform.</a> Neurosurgery. 65, 754-761 (2009).</li>
<li>Raore, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cervical+multilevel+intraspinal+stem+cell+therapy%3A+assessment+of+surgical+risks+in+Gottingen+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Spine%22%5BJournal%5D)">Cervical multilevel intraspinal stem cell therapy: assessment of surgical risks in Gottingen minipigs.</a> Spine. 36, 164-171 (2011).</li>
<li>Boulis, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+stem+cell+therapy+for+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Translational stem cell therapy for amyotrophic lateral sclerosis.</a> Nat. Rev. Neurol. , (2011).</li>
<li>Riley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraspinal+Stem+Cell+Transplantation+in+ALS%3A+A+Phase+I+Safety+Trial%2C+Technical+Note+%26+Interim+Safety+Outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Intraspinal Stem Cell Transplantation in ALS: A Phase I Safety Trial, Technical Note & Interim Safety Outcomes.</a> Neurosurgery. 71 (2), 405-416 (2012).</li>
<li>Boulis, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lumbar+intraspinal+injection+of+neural+stem+cells+in+patients+with+ALS%3A+results+of+a+Phase+I+trial+in+12+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Lumbar intraspinal injection of neural stem cells in patients with ALS: results of a Phase I trial in 12 patients.</a> Stem Cells. 30 (6), 1144-1151 (2012).</li>
</ol>

Dr Boulis is de uitvinder van apparaten voor een veilige en nauwkeurige injectie van de menselijke ruggenmerg mogelijk te maken. Neuralstem, Inc heeft gekocht een exclusieve licentie voor deze technologie. Dr Boulis ontving een Invento het aandeel van deze vergoeding, en heeft de rechten op royalty&#39;s te betalen voor de distributie van deze technologie. Andere auteurs hebben niets te onthullen.

Ondanks de goedkeuring om door te gaan met de beschreven techniek bij de mens 7-9, kritische vragen moeten nog worden beantwoord, zodat het ruggenmerg therapieën om te slagen. Een strenge begrip van het ruggenmerg tolerantie voor intraparenchymateuze injectie is nodig om de planning en uitvoering van proeven ontwikkeling van therapieën inschakelen voor demyeliniserende, degeneratieve en traumatische ruggenmerg ziekte. Momenteel bestaat er geen duidelijk beeld van het aantal injecties dat de grote zoo...

<table border="1"><tbody><tr><td> Benaming van het apparaat </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Opmerkingen (optioneel) </td></tr><tr><td> Spinal Derrick </td><td> Neuralstem, Inc </td><td></td><td> Neuralstem, Inc heeft gekocht een exclusieve licentie om deze technologie te </td></tr><tr><td> Minj-PD Microinjector pomp </td><td> TriTech Research, Inc </td><td></td><td> Aangepast voor deze specifieke toepassing </td></tr><tr><td> Drijvende canule </td><td> Neuralstem, Inc </td><td></td><td> Speciaal ontworpen voor deze specifieke toepassing </td></tr></tbody></table>

chirurgische techniek voor spinal cord levering van therapieën: demonstratie van orde in göttingen minivarkens

Surgical Technique for Spinal Cord Delivery of Therapies: Demonstration of Procedure in Gottingen Minipigs

Dit is een compacte visuele beschrijving van een combinatie van chirurgische techniek en inrichting voor de levering van (gen en cellen) therapieën in het ruggenmerg. Hoewel de techniek is aangetoond in het dier, de procedure FDA goedgekeurd en momenteel gebruikt voor stamceltransplantatie in het ruggemerg van patiënten met ALS. Terwijl de FDA erkent proof-of-principle gegevens therapeutische werkzaamheid in zeer kenmerk knaagdiermodellen is het gebruik van grote dieren die kritisch zijn voor het valideren van de combinatie van een chirurgische ingreep, een apparaat en de veiligheid van een definitieve therapie voor menselijk gebruik . De grootte, anatomie en algemene kwetsbaarheid van de wervelkolom en het ruggenmerg van de varkens worden opgenomen beter model de mens. Bovendien het chirurgische proces van het blootstellen en het manipuleren van de ruggengraat en sluiten van de wond in het varken nauwelijks van de mens. Wij zijn van mening dat de gezonde varkensmodel een kritisch vertegenwoordigtcal eerste stap in de studie van procedurele veiligheid.

<table border="1"><tbody><tr><td colspan="2"> Tarlov Score </td></tr><tr><td> 0 </td><td> Verlamming, geen beweging </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Waarneembaar tonus in de achterste ledematen, lichte beweging </td></tr><tr><td> 2 </td><td> Beweging in de achterste ledematen, maar niet in staat om te zitten of te staan </td></tr><tr><td> 3 </td><td> Mogelijkheid om op te staan ​​en lopen, maar ataxie en voor korte periodes </td></tr><tr><td> 4 </td><td> Volledig...

Korte visuele beschrijving van de chirurgische techniek en apparaat voor de levering van (gen en cellen) therapieën in het ruggenmerg. De techniek blijkt in het dier, maar is volledig en vertaalbaar momenteel gebruikt bij de mens.

Chirurgische Techniek voor Spinal Cord Levering van therapieën: Demonstratie van orde in Göttingen minivarkens

Dit is een beknopte visuele beschrijving van een combinatie van een chirurgische techniek en een hulpmiddel voor het toedienen van (gen- en cel)therapieën in het ruggenmerg...

Het algemene doel van deze procedure is om biologische therapeutica veilig toe te dienen en nauwkeurig te richten op specifieke intraparenchymale locaties van belang binnen het ruggenmerg. Dit wordt bereikt door eerst het dier voor te bereiden op de operatie. Vervolgens wordt de laminectomie uitgevoerd en wordt de spinale derrick gemonteerd.Vervolgens wordt de dura geopend en worden de intraspinale injecties uitgevoerd. Tot slot worden de dura, de musculatuur, de fascia en de huid gesloten. Uiteindelijk kunnen resultaten worden behaald die de veiligheid en targeting-uitkomsten aantonen door middel van de verzameling van gedrags- en targetinggegevens.De techniek die in het huidige manuscript wordt beschreven, is het gebruik van een stabilisatieplatform en een flexibele canule voor het afleveren van een biologische payload in het ruggenmerg. De voordelen van deze aanpak zijn dat het een nauwkeurige toediening mogelijk maakt, ter vervanging van standaard stereotactische technieken, die moeilijk toe te passen zijn in het ruggenmerg vanwege de mobiliteit ervan. Naast nauwkeurigheid biedt de techniek een veiligheidsmarge voor het geval de patiënt beweegt.In dit geval resulteert het varken niet in schade aan het ruggenmerg dankzij het immobilisatieplatform, en de beweging van het ruggenmerg binnen het kanaal die optreedt tijdens de ademhaling en de hartslag veroorzaakt geen verdere schade aan het ruggenmerg vanwege de flexibiliteit van de canule. Nadat het minivarken 12 uur heeft gevast en is gesedeerd met een intramusculaire injectie van ketamine, acepromazine en atropine, moet het dier worden geïntubeerd en onderhouden op zuurstof en 1 tot 3% isofluraan. Bewaak de diepte van de anesthesie zoals beschreven in het schriftelijke protocol.Knip het haar op de rug en het hoofd van het dier. Transporteer het gesedeerde dier naar de operatiekamer en plaats het in buikligging op een op maat gemaakt frame om de positionering op een Jackson ruggenmergoperatietafel na te bootsen. Het frame maakt gebruik van verstelbare slings die onder de borst en het bekken van het dier worden geplaatst, waardoor de buik vrij kan hangen, wat de druk op de buik en borst en de daaruit voortvloeiende epidurale veneuze bloedingen minimaliseert.Het frame zorgt daarnaast voor externe immobilisatie van de wervelkolom. Plaats het dier voor de procedure op een verwarmde recirculatiepad om de lichaamstemperatuur op peil te houden. Plaats vervolgens een catheter in de marginale oorader voor de toediening van vloeistoffen en medicatie tijdens de operatie.Bereid vervolgens het operatieveld voor met alcohol en chloorhexidine of Betadine-oplossing en plaats steriele doeken over het operatieveld. Maak een huidincisie van 10 tot 15 centimeter en gebruik monopolaire elektrocauterisatie om de paraspinale musculatuur bilateraal vrij te leggen. Begin vervolgens aan een dorsale multi-level laminectomie met behulp van Rongeurs en een chirurgische boor om de spinous processen te verwijderen en voer een laminotomie uit van de wervels die boven de C3 tot C5 of L2 tot L4 segmenten liggen.De spinal Derrick is een apparaat dat is ontworpen om gen- en celtherapieën in het ruggenmerg toe te dienen. Om het apparaat aan de patiënt te bevestigen, worden huidincisies van één centimeter gemaakt boven en onder de primaire incisie. Plaats percutane pinnen door de incisies en bevestig deze aan de lamina om het benodigde deel van het ruggenmerg bloot te leggen en de laminectomie te voltooien. Voer de geïntegreerde retractorbladen in en bevestig deze aan de derrick.Trek het weefsel terug terwijl u naar boven trekt aan de doornuitsteeksels. Snijd de interspinous ligamenten en het ligamentum flava weg en voltooi de laminectomie. De canule bestaat uit een naald van 30 gauge die is bevestigd aan een elastische slang van 30 gauge met twee metalen hulzen, één beweegbare buitenhuls en één onbeweeglijke binnenhuls.Gebruik een Hamilton lure lock die is bevestigd aan een micropomp-injector, passend op het distale uiteinde, en met een 24 gauge buiten canule die op de proximale zijde van de injectienaaldflens en mantel rust, waarbij het proximale uiteinde wordt gebruikt om het ruggenmerg bloot te leggen. Dien eerst een bolus methylprednisolon toe. Plaats vervolgens voorzichtig de naald om de dura mater van het merg te tillen.Gebruik een Woodson-tandheelkundig instrument en een mesje nr. 11 om een incisie van 2,5 centimeter door de dura te maken. Gebruik vervolgens 4-0 nulonhechtmateriaal om de dura weg te klappen van de peel-laag en bevestig deze aan de diepe paraspinale musculatuur. Plaats chirurgische gazonjes rond het ruggenmerg.Bevestig vervolgens het platformrailsysteem eerst aan de bovenkant, door de gondel op de twee stangen te plaatsen en de Z-aandrijving op het universele gewricht te monteren. Plaats daarna de geladen canule op de micro-aandrijving en gebruik het universele gewricht op het micro-injectieplatform om de coronale en sagittale hoeken aan te passen; dit garandeert een traject dat loodrecht staat op het oppervlak van de spinale injecties, volgend op de plaatsing van de canule. Positioneer vervolgens de naald mediaal ten opzichte van de dorsale wortelingangzone of dres, en trek de starre metalen buitenhuls omhoog, zodat de flexibele buis is blootgesteld.Injecteer in de doelplaats met behulp van een vooraf gekalibreerde micro-injectiepomp. Laat de naald vervolgens nog één minuut op zijn plaats zitten om reflux van cellen via het injectiekanaal van de canule te voorkomen. Verplaats na het verwijderen van de naald het stereotaxische apparaat naar de volgende doelplaats, twee tot vier millimeter verderop langs de rostrale-caudale as, om zichtbare bloedvaten op het dorsale oppervlak van het ruggenmerg te vermijden.Nadat de wervelkolom voorzichtig was verwijderd, gebruikte Derrick 4-0 nylon om de dura mater waterdicht te sluiten. Zodra de diepe spierlaag en fascielagen met Vicryl-hechtdraad zijn gesloten, wordt 3-0 nylonhechtdraad gebruikt om de huid te sluiten. Na het herstel van de anesthesie wordt het dier ge-extubeerd en gedurende twee uur gemonitord. Voor postoperatieve analgesie wordt een transdermale fentanylpleister gedurende drie dagen op de rug van het diier bevestigd.Dien daarnaast, indien nodig, tot drie dagen postoperatief buprenorfine toe. Plaats het dier vervolgens in een individuele kooi en monitor het minstens één keer per dag. Voor het beoordelen van de neurologische morbiditeit worden gedragsgegevens verzameld met betrekking tot voedselconsumptie, defecatie en micronutritie.Zoals eerder beschreven, wordt de veiligheid van de procedure bepaald door het vermogen van een dier om terug te keren naar de preoperatieve baseline. Voorbijgaande neurologische defecten zouden grotendeels moeten verdwijnen tussen postoperatieve dag één en zeven, met enkele variaties afhankelijk van het ras en de procedure. Permanente morbiditeit wordt gedefinieerd als blijvende neurologische defecten die niet zijn verdwenen tegen de tijd dat de dieren het standaard iacuc-eindpunt na deze procedure bereiken.Andere methoden, zoals immunochemie, kunnen worden gebruikt om belangrijke gegevens vast te stellen, zoals de levensvatbaarheid van de cellen, de migratie van de cellen en de nauwkeurigheid van de injectie.

surgical-technique-for-spinal-cord-delivery-therapies-demonstration

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Het gebruik van de binnenlandse en miniatuur-varkens in de wetenschap is aanzienlijk gestegen in de afgelopen jaren. Door aan te tonen hoe de intubatie, transurethrale blaas catheterisatie, femorale slagader en ader catheterisatie, evenals transcardial perfusie te voeren, willen we de waarde van Göttingen minivarkens verdere toename in biomedisch onderzoek.

Basis chirurgische technieken in het Göttingen Minipig: intubatie, Blaas catheterisatie, Femorale Vessel catheterisatie, en Transcardial Perfusie

Source: Unger, M. D., et al., Laminotomy for Lumbar Dorsal Root Ganglion Access and Injection in Swine. J. Vis. Exp. (2017)This video demonstrates a laminotomy procedure in an anesthetized pig to access the lumbar dorsal root ganglion for targeted neurotherapeutic delivery using convection-enhanced delivery.

Laminotomy for Targeted Injection into the Lumbar Dorsal Root Ganglion in a Pig Model

This video demonstrates the implantation of a soft electrocorticography array and the long-term cortical recordings in a minipig. It outlines the steps involved in surgically implanting the array over the minipig's auditory cortex and recording both baseline and sound stimulus-evoked neuronal action potentials.

Subdural Implantation of a Soft Electrocorticography Array for Cortical Electrophysiology Recording in Minipigs

De behandeling van cervicale spinale-koordletsel met zowel zelfassemblerende peptiden (SAP) en neurale voorlopercellen (NPC), samen met groeifactoren, is een veelbelovende aanpak om regeneratie en herstel te bevorderen. Een contusie/compressie aneurysma clip ratmodel van cervicale SCI en gecombineerde behandeling waarbij SAP injectie en NPC transplantatie is vastgesteld.

Synergetische gebruik van neurale precursoren en Zelfgeassembleerde Peptiden in Experimentele Baarmoederhalskanker Spinal Cord Injury

Dwarslaesie is een traumatische aandoening die ernstige morbiditeit en hoge sterfte veroorzaakt. In dit werk beschrijven we in detail een kneuzing model van dwarslaesie bij muizen, gevolgd door een transplantatie van neurale stamcellen.

Neurale stamceltransplantatie bij Experimentele Contusive Model van Spinal Cord Injury

Hier introduceren we een methode om transpediculaire schroeven te evalueren door gebruik te maken van een in vivo porcine lumbale ruggengraat model.

Een verdovings-, chirurgie- en oogstmethode voor de evaluatie van transpediculaire schroeven met behulp van een<em&gt; In Vivo</em&gt; Porcine Lumbar Spine Model

De microcirculatie van het ruggenmerg speelt een cruciale rol bij dwarslaesie. De meeste methoden laten geen real-time beoordeling van de microcirculatie van het ruggenmerg toe, wat essentieel is voor de ontwikkeling van microcirculatiegerichte therapieën. Hier stellen we een protocol voor met behulp van Laser-Doppler-Flow Needle-sondes in een groot diermodel van ischemie / reperfusie.

Real-time beoordeling van ruggenmergmicroperfusie in een varkensmodel van ischemie / reperfusie

Hier beschrijven we een nieuwe, snelle techniek voor het modelleren van open ruggenmergletsel bij ratten die laminectomie elimineert. Laterale hemisectie wordt uitgevoerd terwijl u door een microscoop kijkt. De techniek is veelzijdig en kan ook worden gebruikt in de cervicale, thoracale en lumbale regio's van het ruggenmerg van andere dieren.

Een minimaal invasieve, snelle laterale hemisectietechniek van het ruggenmerg voor het modelleren van open ruggenmergletsels bij ratten

Minimaal invasieve technieken en een eenvoudig laboratoriumapparaat verbeteren de reproduceerbaarheid van het ruggenmergletselmodel door operatieve schade aan de proefdieren te verminderen en anatomisch morfologisch onderhoud mogelijk te maken. De methode is de moeite waard omdat de betrouwbare resultaten en reproduceerbare procedure het onderzoek naar de mechanismen van ziekteherstel vergemakkelijken.

Het opzetten van een muiskneuzingsletselmodel op basis van een minimaal invasieve techniek

Dit chirurgische protocol is een stapsgewijze handleiding voor het inbrengen van een intrathecale katheter in de subdurale wervelkolom van een knaagdier om een gerichte behandeling toe te dienen.

Toegang tot de subdurale ruimte van het ruggenmerg van het knaagdier voor behandeling

Leer een chirurgische techniek voor het leveren van gentherapie en celtherapie in het ruggenmerg met behulp van Göttingen minivarkens. Deze methode verbetert de veiligheid en nauwkeurigheid van intraspinale injecties.

Chirurgische Techniek voor Spinal Cord Levering van therapieën: Demonstratie van orde in Göttingen minivarkens

Meer video's verkennen