Isolatie, karakterisering en vergelijkende differentiatie van humane Dental Pulp stamcellen uit permanente tanden met behulp van twee verschillende methoden

Het algemene doel van deze procedure is om menselijke gentile polsstamcellen van permanente tanden te isoleren, karakteriseren en differentiëren door middel van twee methoden. Dit wordt bereikt door gezonde impacteerde wijsheidstanden te verzamelen en deze rond de cement-enamel-junctie aan het begin door te snijden. Dental poly stamcellen D PSCs worden geïsoleerd door middel van twee verschillende methoden.

In de eerste methode worden poliepweefsels enzymatisch verteerd door incubatie in collageenase type een plus schijfruimteoplossing. Hier noemen we ze ed. Met betrekking tot de isolatiemethode in de tweede methode worden palpweefsels alleen in de kolf geplaatst zonder enige vertering.

Op deze manier beginnen dpss uit het weefsel in de kolf te migreren. Deze cellen, OG genaamd, verwijzen naar de uitgroei-isolatiemethode. De tweede stap van de procedure is de identificatie van stamcellen met behulp van valcytometrie.

De derde stap van de procedure is de inductie van odontoblastdifferentiatie, en de laatste stap van de procedure is de vergelijkende evaluatie van odontoblastdifferentiatie tussen twee groepen door inrode kleuring en QBCR. Ik ben RA Kde van de afdeling Stamcellen en Ontwikkelingsbiologie aan het Rian Instituut. Vandaag ga ik u de isolatie, karakterisering en vergelijkende differentiatie van menselijke mesenchymale stamcellen laten zien door middel van twee methoden.

Hallo, ik ben Dr. Rezaian van het Rio Instituut. We werken aan een project met betrekking tot menselijke tandpulsaamcellen. Deze cellen zijn een soort mechy-stamcellen, die gemakkelijk te verkrijgen zijn met minimale pijn en morbiditeit.

Mechy-stamcellen specificeren met plastic aran-vermogen, formatie van kolonies en meerdere differentiatiecapaciteit. Hallo, ik ben Dr. Ami van de afdeling Stamcellen. Op het instituut gebruiken we deze procedure in ons lab om stamcellen te isoleren voor het doel van onderzoeksstudies en toekomstige toepassingen.

In de regeneratieve geneeskunde is de allereerste stap voor het gebruik van deze bron van stamcellen voor toekomstige op stamcellen gebaseerde therapie het kiezen van het beste protocol voor het isoleren van stamcellen uit menselijk weefsel. Om dit doel te bereiken, is het van cruciaal belang om bepaalde aspecten van cellulair gedrag onder verschillende stamceelisolatiecondities te onderzoeken. Eerst ga ik menselijke tandpulsaamcellen isoleren door middel van enzymatische dissociatie van pulp of uitgroei van stamcellen uit weefselimplantaten.

Vervolgens karakteriseren en differentiëren we ze in ogen blast. Dus laten we beginnen. Eerste manier, space en collageenase Type een worden beide opgelost in PBS.

Filter ze vervolgens met oh 0,2 micron spuitfilter. Trek beide in een conische buis. Voeg vervolgens pener en PBS toe om de uiteindelijke concentratie te bereiken.

Breng gezonde wijsheidstanden over naar het lab in de koude basismedium onder de staalconditie. Reinig het oppervlak van de tand met 70% ethanol voordat je gaat studeren. Zorg ervoor dat je de bries van het oppervlak van de tand verwijdert.

Snijd de tand rond de cement-enamel-junctie met behulp van gesteriliseerde tanddisc om de pulpkamer te onthullen. Het moet worden overwogen dat het snijproces langzaam moet worden uitgevoerd om oververhitting van tandweefsel te voorkomen. Scheid vervolgens voorzichtig het pulpweefsel van de kroon, wat betekent dat het pulpweefsel in stukken van een tot twee millimeter wordt gesneden met de Scarpa-mes.

Breng kleine stukken pulpweefsel over in een milliliter enzymoplossing gedurende een uur bij 37 graden Celsius. Vortex elke 30 minuten om het breken van pulpweefsels te helpen. Verwijder vervolgens grote aggregaten door ze door een 70 micron celstrainer te laten gaan. Voeg vervolgens PBS met PENER toe, centrifugeer in 1.200 RPM gedurende vijf minuten.

Verwijder de supernatant voorzichtig. Vervolgens suspenderen we de plaat in het proliferatiemedium pm, brengen we het over in de kweekflask en voegen we medium toe. Vervolgens incuberen we in het incubatieproces.

Ververs het medium elke drie dagen totdat de celconfluence is bereikt voor de uitwerkmethode. Herhaal het snijproces. Na het snijden van de tand betekent het popweefsel in fragmenten van een tot twee millimeter.

Plaats ze vervolgens in de kweek. Flash met proliferatie, medium en geïncubeerd. Het moet worden overwogen dat het totale volume van het proliferatiemedium de hechting van alle stukken moet ondersteunen voor verdere celuitgroei.

Ververs het medium na het observeren van uitgroei en vervolgens elke drie dagen totdat de celconfluence is bereikt. Voor immunofenotypering incuberen we beide soorten D PSCs met PE of FITC geconjugeerde antilichamen gedurende 30 minuten bij vier graden Celsius in het donker. Voeg vervolgens PBS en centi-views toe bij 1.200 RPM gedurende vijf minuten.

Verwijder de supernatant en suspendeer de plaat in PBS en evalueer tenslotte de oppervlaktemarkers met behulp van flowcytometersubcultuur, beide soorten DPCs gedurende drie passages. Vervolgens tripsin ijs en breng ze over naar zes rode kweekschalen bij 60% Co-fluency, vervang PM door odontogeen medium. Drie putjes blijven als negatieve controle door PM toe te voegen.

Ververs het medium elke drie dagen op de 21e dag, was de cellen met PBS. Bevestig ze vervolgens met een milliliter per putje. 10%formaal gelhoogte gedurende 15 minuten op kamertemperatuur.

Na 15 minuten verwijdert u het fixatief voorzichtig en was de cellen drie keer met gedestilleerd water. Vervang vervolgens het water door een milliliter per rode alza in rode kleuringsoplossing. Na 20 minuten verwijderen we overtollig kleurmiddel en wassen we de cellen vier keer met gedeïoniseerd water.

Voeg vervolgens een millimeter per putje water toe om de cellen te beschermen tegen uitdroging. Na de kleuring kunt u zien dat drie opritten rood worden in vergelijking met de controles onder de microscoop. U kunt kleurabsorpcie rond de cel zien bij hoge vergroting voor kwantificering van rode kleuring. Na het verwijderen van water, voegt u een milliliter per putje, 10% zuur,