Voorbereiding en pathogeeninactivatie van Double Dose Buffy Coat bloedplaatjesproducten met behulp van het INTERCEPT Blood System

In deze video wordt een dubbele dosis trombocytenconcentraat bereid uit een pool van zeven buffy coats en vervolgens behandeld met Intercept. Na het bekijken van deze video heeft u een goed inzicht in hoe u een pathogeen-geïnactiveerd dubbel-dosis trombocytenconcentraat produceert. Eerst presenteren we een schematisch overzicht, gevolgd door een demonstratie.

De eerste zeven eenheden gedoneerd volbloed worden gecentrifugeerd en gescheiden om zeven buffy coat-eenheden te verkrijgen die voldoen aan de volume- en hematocrietdoelen. De buffy coats worden verbonden, samengevoegd en gecentrifugeerd. De bloedplaatjessuspensie wordt vervolgens gescheiden van de resterende rode bloedcellen om een dubbele dosis plaatjesconcentraat te produceren voor de inactivatie van pathogenen en leukocyten.

Het dubbele dosis trombocytenconcentraat wordt behandeld met het Intercept-systeem, dat nucleïnezuren crosslinkt. Uiteindelijk levert deze procedure twee therapeutische trombocytendoses op met een acceptabele in vitro kwaliteit over zeven dagen bewaring, bepaald door de beoordeling van pH, glucose, lactaat, PO₂ en PCO₂, en het aantal trombocyten. Een technicus van het bloedcentrum zal de procedure demonstreren en wij zullen de verwerkingseisen beschrijven.

Controleer eerst of het dubbele dosis trombocytenconcentraat voldoet aan de intercept-verwerkingsspecificaties van 300 tot 420 milliliter, een volume van 2,5 tot 7 × 10¹¹ aan trombocyten en minder dan 4 × 10⁶ rode bloedcellen per milliliter. Begin deze procedure met zeven eenheden volbloed, verzameld in 450 milliliter top-bottom collectiesets.

Plaats de bloedzakken in centrifugebuizen en voer een harde centrifugatie uit bij 4,880 RCF gedurende 11 minuten bij kamertemperatuur met reminstelling B vijf volgens de instructies van de fabrikant. Na de centrifugatie zal het bloed gescheiden zijn in drie lagen: rode bloedcellen, de buffy coat en plasma. Pers het plasma in de bovenste satellietzak en de rode bloedcellen in de onderste satellietzak, waarbij de buffy coat van ongeveer 48 milliliters en 37% hematocriet in de opvangcontainer achterblijft.

Plaats de buffy coats gedurende de nacht bij kamertemperatuur op een plaatjesagitator en maak een steriele verbinding tussen zeven buffy coats en 300 milliliters SSP plus plaatjesadditieve oplossing. Klem in een treinkonfiguratie, met de additieve oplossing bovenaan, de lijn tussen de additieve oplossing en de eerste buffy coat af zoals hier wordt getoond. Open de lassen tussen de buffy coat-eenheden en laat ze in de laatste buffy coat-container lopen.

Open vervolgens de klem en de verbinding tussen de additieve oplossing en de eerste buffycoat, en laat ongeveer een derde van de additieve oplossing, circa 100 milliliters, sequentieel door elk van de buffycoat-containers spoelen voordat de klem wordt gesloten; herhaal deze wasbeurt nog twee keer, waarbij telkens ongeveer 100 milliliters van de additieve oplossing wordt gebruikt. Koppel de container met de verzamelde buffycoat los van de lege containers. Het volume van de verzamelde buffycoat, inclusief de additieve oplossing, moet ongeveer 600 milliliters zijn.

Plaats de samengevoegde buffycoats gedurende één uur bij kamertemperatuur op een agitator. Verbind vervolgens een bewaarbehulpstuk voor bloedplaatjes met een geïntegreerd leuco-reductiefilter met de zak die de pool van buffycoats bevat. Plaats de samengevoegde buffycoats en het bewaarbehulpstuk voor bloedplaatjes in een centrifuge en centrifugeer gedurende negen minuten en 20 seconden bij 462 RCF.

Breng na het centrifugeren de plaatjessuspensie via het Luca-reductiefilter over in de bewaarcontainer voor bloedplaatjes. Het resultaat is een dubbele dosis plaatjesconcentraat met ongeveer zeven x 10¹¹ bloedplaatjes in 420 milliliters, dat behandeld kan worden met Intercept voor pathogeneninactivering. Het dubbele dosis plaatjesconcentraat wordt behandeld met een Intercept-verwerkingsset, bestaande uit een antoin-container, een belichtingscontainer en dubbele bewaarcontainers.

Sluit de houder van de bloedplaatjessuspensie aan op de Amin-houder van de intercept-verwerkingsset. Hang vervolgens de bloedplaatjes op. Breek de onderste canule op de Amin-houder om de oplossing naar de verlichtingshouder te laten stromen.

Breek vervolgens de bovenste canule van de Amin-container zodat de bloedplaatjes door de Amin-container in de illuminatiecontainer kunnen stromen. Meng het mengsel van bloedplaatjes en am tosin voorzichtig. Knijp lichtjes in de illuminatiecontainer om de lucht uit de illuminatiecontainer te persen.

Sluit de slang tussen de verlichtings- en amato-container af, zodat er niet meer dan vier centimeter slang uit de verlichtingscontainer steekt. Verwijder en gooi de lege containers weg. Plaats de verwerkingsset in de illuminator, met de verlichtingscontainer in het grote compartiment aan de linkerkant en de organizer in het kleinere compartiment aan de rechterkant.

Scan het donatie-id. Productcode en verwerking. Stel het lotnummer in op de illuminator.

Sluit de metalen afdekking en de lade. Druk op start om de belichting te beginnen. De illuminator geeft een gecontroleerde dosis UVA-licht aan het plaatjes-aminmengsel in de belichtingscontainer.

Amine koppelt tussen de baseparen van de nucleïnezuren van pathogenen die in de bloedplaatjesunit aanwezig kunnen zijn. Na belichting worden permanente crosslinks gevormd die het DNA of RNA aan elkaar vergrendelen, waardoor de pathogenen zich niet langer kunnen repliceren en geen ziekte meer kunnen veroorzaken bij de ontvanger van het bloedproduct. Verwijder na de belichting de verwerkingsset.

Pak vervolgens de containers uit de houder en hang de bloedplaatjes en de verwerkingsset op. Breek de canule bij de uitlaat van de verlichtingscontainer en laat de bloedplaatjes in de CAD-container stromen. In de CAD-container bevindt zich een wafer met geïmmobiliseerde macroporeuze polystyreenbolletjes die de hoeveelheid residu-aminen in het bloedproduct verminderen.

Zorg ervoor dat de CAD-wafer niet buigt. Laat de lucht uit de CAD-container in de verlichtingscontainer stromen. Sluit de slang af nabij de inlaatpoort van de CAD-container.

Verwijder de lege belichtingscontainer en gooi deze weg. Plaats de CAD-container met de bijbehorende bewaarcontainers gedurende zes tot 16 uur op een plaatjesroerder. Dit zal leiden tot een vermindering van het residuele amline tot een concentratie van minder dan of gelijk aan twee micromolair.

Verwijder na de CAD-behandeling de bloedplaatjeseenheden uit de agitator, hang de bloedplaatjes op, breek de canule bij de uitlaat van de CAD-container en laat de bloedplaatjes in de twee bewaarbunners stromen. Pers vervolgens de lucht uit de bewaarbehakers. Afdichten van de slang boven de Y-koppeling en verwijder de CAD-container.

Het resultaat is twee pathogeen-geïnactiveerde bloedplaatjesconcentraten om de in vitro plaatjesfunctie te beoordelen. De plaatjesdosis, pH, pO₂ en de productie van lactaat en glucoseconsumptie van het intercept werden bepaald voor de bloedplaatjesconcentraten tot dag zeven van de bewaring.

Deze figuur toont de gemiddelde startdosis bloedplaatjes van het dubbele dosis bloedplaatjesconcentraat vóór de intercept-behandeling, en de gemiddelde bloedplaatjesdosis in elk van de behandelde gesplitste producten tot dag zeven van de bewaring. Zoals hier te zien is, was het verlies aan bloedplaatjes tijdens de bewaring ongeveer 9%. Deze afname verschilt niet van het verwachte verlies aan bloedplaatjes tijdens de bewaring van conventionele bloedplaatjes. Volgens de Europese vereisten moet de pH van bloedplaatjes tot het einde van de houdbaarheidsduur boven 6.4 blijven.

Tijdens de verwerking daalt de pH van bloedplaatjesconcentraten licht, afhankelijk van het volume van de bloedplaatjesconcentratie en de gasdoorlaatbaarheid van de bewaarcontainer voor bloedplaatjes. Deze figuur toont de pH van de gesplitste bloedplaatjesproducten over zeven dagen bewaring; gedurende de bewaring is de pH stabiel en blijft deze goed behouden binnen de verwerkingseisen. Aerobe stofwisseling dient in bewaarde bloedplaatjes te blijven plaatsvinden en is een indicator voor het vermogen van de bloedplaatjes om in vivo te functioneren na transfusie in een patiënt.

Het O2-verbruik en de CO2-productie van de bloedplaatjes wijzen op een voortdurende respiratie door de intercept-bloedplaatjes in de PL 24 10-container gedurende zeven dagen bewaring. Evenzo zou het anaerobe metabolisme in bewaarde bloedplaatjes moeten doorgaan. Daarom zijn glucoseverbruik en lactaatproductie eveneens indicatoren voor het vermogen van de bloedplaatjes om na transfusie te functioneren.

Deze twee figuren tonen de lactaat- en glucoseniveaus over zeven dagen bewaring. Het glucoseverbruik en de lactaatproductie van de bloedplaatjes zijn consistent met elkaar. Gedurende de zeven dagen bewaring hadden vijf eenheden glucoseniveaus van minder dan 1,11 millimol per liter, wat de ondergrens is voor de glucose-assay.

De bereiding en pooling-validatie van de buffy coat hebben geleid tot trombocytenconcentraten die voldoen aan de inputcriteria voor intercept-behandeling, specifiek wat betreft volume, trombocytenaantal, plasmaratio en contaminatie met rode bloedcellen. De uiteindelijke eenheden voldoen aan de validatiecriteria over zeven dagen bewaring, inclusief de trombocytendosis en pH. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van de conventionele methode voor de bereiding van buffy coat, waarbij een enkelvoudige dosis trombocytenconcentraat wordt geproduceerd, is dat het de opbrengst van componenten uit bloedafnames maximaliseert, de operationele kosten verlaagt door gebruik te maken van een dubbele dosistechniek en de patiëntveiligheid verbetert door transmissie-pathogenen bij transfusies te inactiveren.