Beoordelen van Muizen Resistance Artery functie gebruiken Pressure myography

Het algemene doel van het volgende experiment is om de realtime vasculaire reactiviteit van muisresistente slagaders in vitro onder bijna fysiologische omstandigheden te bepalen. Dit wordt bereikt door een klein segment van het vat op twee microcanules te plaatsen en het op fysiologische luminaal druk te houden. Het vat wordt vervolgens samengetrokken met een alfa-een receptoragonist fenylephrine om het vermogen van elk medicijn om het vat te verwijden te bestuderen.

Het uitdagen van het samengetrokken vat met acetylcholine beoordeelt zijn vermogen om in realtime te verwijden via een endothelium-afhankelijk mechanisme. De resultaten tonen de percentageverandering in lumendiameter als reactie op acetylcholine en verifiëren dat SGC alfa een tekort resulteert in verminderde endothelium-afhankelijke vasodilatatie. Het belangrijkste voordeel van deze techniek in vergelijking met bestaande methoden zoals draad mammografie, is dat druk mammografie de karakterisering van kleine microvaten mogelijk maakt, die relevanter zijn voor het handhaven van bloeddrukhomeostase dan grotere geleidingsvaten.

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van cardiovasculaire gezondheid, zoals hypertensie, waarbij macro-resistente vaten een cruciale rol spelen. Begin door een muis te euthanaseren met pentobarbital. Open nu de buikholte en begin met het dissekeren van het mesenteriale weefsel.

Identificeer nu een derderangs mesenteriale slagader en isoleer deze van het bind- en vetweefsel. Het onderscheid maken tussen slagaders en aders op microvaatniveau is problematisch wanneer er geen bloed in de vaten zit. Daarom is dit in het intacte dier het liefst te doen.

Snijd vervolgens een segment van twee tot drie millimeter van de derderangs mesenteriale slagader en plaats het in een schaal met hoopjes. PSS-buffer. Het arteriële segment mag geen vertakkingen bevatten.

Bereid de myo-kamer voor door de canules voorzichtig te vullen via inlaat- en uitlaatkleppen met hoopjes PSS-oplossing. Gebruik een spuit van 10 milliliter, wees ervan bewust dat overmatige druk de kwetsbare transducer die op de canules is aangesloten, kan beschadigen. Nadat de canules strak zijn gevuld, sluit u beide kleppen. Breng nu het geïsoleerde arteriële segment over in de kamer en monteer het ene uiteinde van het vat op de rechter canule.

Bind het voorzichtig vast met een fijne draad van nylondraad met behulp van een spuitvloeistof en vul het vat via de inlaatklep met hoopjesoplossing. Monteer nu het andere uiteinde van het vat op de linker canule en bevestig de canule aan het vat met de nylondraad. Vul de kamer met maximaal 10 milliliter hoopjesoplossing.

Controleer op lekkage door voorzichtig hoopjesoplossing via de inlaatklep te duwen met behulp van een spuit. Plaats nu de kamer onder de videocamera. Start de zuurstof en verwarm de kamer tot 37 graden Celsius terwijl de inlaatklep gesloten is, aangesloten op de P een buis van de eerste hoopjesoplossing reservoir.

Laat eventuele luchtbellen en oplossing door de buis passeren totdat er geen luchtbellen meer in de buis zijn. Open nu de klep. Verbind met de linkerklep van de kamer met buis P twee.

Komend van de drukregeling, zorg ervoor dat er geen luchtbellen of lekkage in het hele systeem zijn. Ga naar het drukmenu op het myo-interfacepaneel of in de software en zet de pomp aan terwijl u de stroom uitzet. Open het programma en klik op verzamelen.

Bewaking en analyse van de vatlumenvatdiameter en wanddikte is nu mogelijk. Om de interluminale druk geleidelijk te verhogen, selecteert u de P een druk en voert u een opeenvolging van stijgende druk in. Waarden van vijf tot 60 millimeter kwikkolommen, draaien of convoluteren soms terwijl de druk toeneemt, dus pas de spanning of spanning dienovereenkomstig aan met behulp van een verticale of longitudinale micropositioner.

Zodra de druk 60 millimeter is en het bad op 37 graden Celsius staat, brengt u het vat minimaal 45 minuten en maximaal een uur in evenwicht tijdens de evenwichtsperiode. Verander de badoplossing eenmaal met voorverwarmde hoopjes. Nu het arteriële segment in evenwicht is, brengt u 10 milliliter kaliumchloride depolariserende oplossing aan op 37 graden Celsius.

Het gladde spierweefsel zal volledig depolariseren en maximale vernauwing bereiken. Nadat een stabiele vernauwing is verkregen, spoelt u het bad drie keer met hoopjesoplossing met tussenpozen van 10 minuten. Controleer nu de levensvatbaarheid van het vat en de integriteit van het endotheel.

Bepaal eerst het passieve lumendiameter door calciumvrij PSS toe te passen dat twee millimol EGTA per liter bevat vanuit de opgenomen tracings. Meet de lumendiameter voor elke dosisrespons, die zal worden gebruikt om alle parameters te berekenen. Druk de acetylcholine-relaxatierespons uit als een vergelijking tussen de behandeling met de agonist en calciumvrij buffer in termen van hoeveel elk de lumendiameter van de fenylephrine-geïnduceerde vernauwing heeft veranderd.

State Pressure Myography werd gebruikt om vasculaire relaxatie in reactie op acetylcholine te bestuderen in mesenteriale weerstandsslagaders geïsoleerd van wild type en SGC alfa een knock-out muizen op de S zes en zwarte zes achtergronden en vooraf samengetrokken met fenylephrine. SGC alfa een tekort was geassocieerd met het verminderde vermogen van acetylcholine om vasculaire relaxatie te induceren, ongeacht de genetische achtergrond van de onderzochte muizen. Echter, endothelium-afhankelijke relaxatie van SGC Alfa een null muizen was meer duidelijk beïnvloed in de S zes achtergrond dan de zwarte zes Achtergrond.

Samen suggereren deze bevindingen dat de verminderde gevoeligheid van de vaatwand voor endothelium-afhankelijke relaxatie kan bijdragen aan de stamspecifieke hypertensie bij SGC Alfa een knock-out muizen. Eenmaal beheerst, kan deze techniek in een of twee uur worden uitgevoerd als deze correct wordt uitgevoerd. Naast deze procedure kunnen andere methoden zoals confocale microscopie gelijktijdig worden uitgevoerd op de levende bloedvaten. Dit zou bijvoorbeeld toelaten om intracellulaire ijzerconcentraties te meten die kunnen helpen bij het identificeren van onderliggende signaalmechanismen.