Een introductie tot de micropipet

De micropipet is een belangrijk instrument dat wordt gebruikt om kleine volumes vloeistof nauwkeurig te meten. Dit onderzoeksinstrument, dat in talloze onderzoekslaboratoria over de hele wereld te vinden is, is verkrijgbaar in verschillende vormen en maten. Ondanks de variatie tussen micropipetten werken ze echter allemaal op een vergelijkbare manier om microliterhoeveelheden vloeistof nauwkeurig te meten. Micropipetten worden gebruikt met wegwerptips die, net als de micropipetten zelf, in verschillende maten verkrijgbaar zijn.

Alle micropipetten hebben dezelfde basiscomponenten voor het opzuigen en dispenseren van vloeistoffen. De zuiger bevindt zich aan de bovenzijde van de pipet en wordt gebruikt voor het opzuigen of uitstoten van vloeistof, afhankelijk van de positie waarin deze wordt ingedrukt of losgelaten.

De volumeregelaarschijf wordt gebruikt om het volume van de over te dragen vloeistof aan te passen.

Het volume-display wordt van boven naar beneden afgelezen. Afhankelijk van de gebruikte micropipet weerspiegelen de getallen verschillende grootteordes in de volumemeting. Hier ziet u een meting van 370 microliters.

Wegwerptips worden op de onderzijde van de micropipet geplaatst.

De tipuitstootknop en de uitstootas werken samen om pipetpunten uit te werpen wanneer deze moeten worden weggegooid.

De familie micropipetten omvat verschillende modellen in diverse maten die een nauwkeurige reeks volumes overbrengen.

Hier ziet u de familie opgesteld volgens de volumebereiken die ze elk kunnen overbrengen. Zo doseert de P-1000 tussen 200-1000 µl, terwijl het kleinste model, de P-2, volumes tussen 0,2-2 µl overbrengt.

Elk familielid is herkenbaar aan een nummer bovenop de plunjer en aan de kleur, waardoor duidelijk is om welke pipette het gaat en welk volume ermee kan worden overgebracht.

Afhankelijk van het experiment kunnen andere micropipetten nodig zijn, zoals de P5000, P100 en P10. Samen kan deze uitgebreide collectie helpen bij het verplaatsen van vloeistofvolumes van 0,2-5000 µl.

Om een accurate en precieze overdracht van vloeistoffen verder te waarborgen, worden verschillende maten pipettepunten gebruikt voor verschillende soorten pipetten; deze zijn vaak, maar niet altijd, kleurgecodeerd voor een eenvoudige herkenning. Wat betreft het overgedragen volume zijn witte micropipettepunten doorgaans voor 0,5-2,5 μl, gele punten voor 1-200 µl en blauwe punten voor 200 tot 1000 μl.

Kies bij het gebruik van een micropipet eerst het instrument met het juiste bereik voor het volume dat u wilt overbrengen. De juiste keuze van de pipet kan het verschil betekenen tussen een geslaagd of een mislukt experiment.

Begin met het instellen van de draaischijf op het gewenste volume. Om het aspiratievolume te verhogen, draait u de schijf tegen de klok in, gaat u een derde slag voorbij het gewenste volume en verlaagt u dit vervolgens langzaam tot de uiteindelijke markering. Om het volume te verlagen, draait u de schijf met de klok mee.

Houd er rekening mee dat de cijfers in de volume-aanduiding verschillende grootteordes hebben, afhankelijk van de micropipet. Links zien we bijvoorbeeld de P1000, die 370 µl aangeeft. Er staat een nul op de duizendtallenplaats, een 3 op de honderdtallenplaats en een 7 op de tientallenplaats. Rechts staat de P200, die 159 µl weergeeft met een 1 op de honderdtallenplaats, een 5 op de tientallenplaats en een 9 op de eenhedenplaats.

Zodra het volume is ingesteld, selecteert u een tip.

Houd de micropipet nu in een rechtopstaande positie, met het smalle deel van de behuizing in de palm van uw hand en de oversteek over uw wijsvinger.

Oefen lichte druk uit om de zuiger ongeveer tot de helft van de eerste stop in te drukken, of tot u meer weerstand begint te voelen.

Deze handeling verdringt lucht uit de pipetpunt.

Houd de zuiger ingedrukt en dompel de punt 1-3 mm in het monster. Laat de zuiger vloeiend terugkeren naar de rustpositie, wacht één seconde tot de vloeistof in de punt is getrokken en verwijder vervolgens de pipet uit het monster.

Wanneer de zuiger terugkeert naar de rustpositie, wordt de vloeistof in het vacuüm getrokken dat is ontstaan door de verdreven lucht.

Inspecteer de punt om te bevestigen dat de gewenste hoeveelheid vloeistof is opgenomen en dat de punt geen luchtbellen bevat.

Houd bij het overbrengen van het monster naar het gewenste vat de micropipet in een hoek van 10-45° tegen de binnenwand van het ontvangende vat. Dit voorkomt de vorming van bellen bij de punt. Om de vloeistof uit te stoten, drukt u de zuiger vloeiend licht in tot de 1ste stop om het dispenseren van de vloeistof te beginnen, en drukt u vervolgens, met meer kracht, de zuiger volledig in tot de tweede stop om het laatste restje vloeistof uit de punt te "uitblazen".

Verwijder de punt volledig uit het vat en laat de zuiger dan terugkeren naar de rustpositie.

Gebruik nu de uitwerpklop om de pipetpunt voorzichtig in de juiste opvangbak te werpen. Let goed op wat u doet, omdat uitgeworpen punten als projectielen kunnen fungeren en potentieel uw collega's in het laboratorium kunnen verwonden.

Om micropipetten goed te laten functioneren en het interne mechanisme voor volumeregeling te beschermen, mag de volumeknop nooit boven of onder het specifieke bereik van de micropipet worden gedraaid. U kunt het instrument anders beschadigen.

Om kruiscontaminatie tussen monsters te voorkomen, dient de tip na elke volumeoverdracht te worden vervangen.

Consistentie van de operator is belangrijk bij het werken met micropipetten. Een gelijkmatige druk op de zuiger levert optimale experimentele resultaten op. Onthoud tot slot dat u de instrumenten altijd rechtop moet bewaren wanneer ze niet in gebruik zijn om de micropipetten in topconditie te houden.

Nu we de basiswerking en de principes van het gebruik van micropipetten hebben behandeld, bespreken we enkele veelvoorkomende laboratoriumtoepassingen voor microvolume-overdrachten, evenals variaties van dit instrument.

Micropipetten worden vaak gebruikt voor het overbrengen van cel-suspensies naar kweekplaten voor diverse experimenten.

In combinatie met gespecialiseerde tips kunnen micropipetten worden gebruikt om monsters zorgvuldig te laden voor analytische technieken, zoals DNA-gelelektroforese.

Micropipetten kunnen ook worden gebruikt om weefsel mechanisch te dissociëren om single-cell suspensies te verkrijgen.

In het laboratorium zijn ook varianten van de micropipet te vinden die werken op basis van luchtverplaatsing.

Repeaterpipetten maken seriële pipettering van kleinere volumes mogelijk na een initiële aspiratie van een groter volume oplossing. Deze pipetten zijn zeer nuttig voor het overbrengen van hetzelfde volume monster naar een groot aantal recipiënten.

Meerkanals pipetten worden gewoonlijk gebruikt voor het overbrengen van volumes in het bereik van 20-200 μl en zijn handig voor het vullen van volledige rijen van 96-wells platen.

U heeft zojuist de JoVE-introductie over micropipetten bekeken.

In deze video hebben we besproken: wat een micropipet is en hoe deze werkt, hoe u een vloeistofvolume opzuigt en dispenseert, enkele veiligheidsvoorschriften en verschillende toepassingen van uw micropipetten. Bedankt voor het kijken en vergeet niet de juiste pipet te kiezen voor uw experimenten.