Name: Een laser-induced Mouse Model van chronische oculaire hypertensie aan Visual Gebreken karakteriseren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Leer hoe u chronische oculaire hypertensie induceert bij muizen via laserfotocoagulatie van het trabeculaire netwerk. Deze methode volgt intraoculaire druk en visuele scherpte met optomotorische tests.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De werkzaamheden die in dit document is ondersteund door de Dr Douglas H. Johnson Award voor Glaucoom Research van de American Health Assistance Foundation (XL), de William &amp; Mary Greve Special Scholar Award van het Onderzoek ter voorkoming van Blindheid (XL), de Illinois Vereniging ter Voorkoming van Blindheid (HC) en NIH-subsidie ​​R01EY019034 (XL).

Procedures C57BL/6J-muizen (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) worden opgewekt aan de Northwestern University&#39;s Animal Care Facility. Alle dieren worden gebruikt in overeenstemming met de door de Northwestern University Institutional Animal Care en gebruik Comite en gelijkvormig aan de richtlijnen inzake het gebruik van dieren in Neuroscience Research van de NIH goedgekeurde protocollen. 1. Laserfotocoagulatie De procedure van laserfotocoagulatie is gewijzigd ten opzichte van eerder gepubliceerde protocollen 5-7. <ol><li> Verdoven een 40-60 dagen oude muis door een intraperitoneale injectie van ketamine (100 mg / kg, Butler Schein diergezondheid, OH) en xylazine (10 mg / kg, Lloyd Inc van Iowa, Shenandoah, IA). </li><li> Verwijden de pupil van het rechteroog van het proefdier door plaatselijke behandeling met een of twee druppels 1% atropine sulfaat-oplossing (Alcon Labs, Inc, Fort Worth, TX). </li><li> Na mydriasis, plat de eennterior kamer om laser inductie verbeteren 6. Plaats een glazen micropipet met scherpe tip (World precisie-instrumenten Inc, Sarasota, FL) in de voorste ruimte onder de spleetlamp (SL-3E, Topcon, Oakland, NJ) om uit te lekken uit de vloeistof in de voorste oogkamer. </li><li> Beperken de muis in een plastic kegel houder (Braintree Sci Inc, MA) en vastgebonden op een zelfgemaakt platform (zie figuur 1A). Houd de muis met weerhouder en onthult het rechteroog van de muis om de lichtbron achter de spleetlamp. Lijn de rechter oog van de verdoofde muis onder de spleetlamp. </li><li> Terwijl u de muis restrainer met beide handen, gelden de laser verlichting aan de hoornvlies limbus met een Argon laser (Ultima 2000SE, Coherent, Santa Clara, CA). Lever ongeveer 80-100 laserspots (514 nm, 100 mW, 50 msec puls en 200 urn spot) loodrecht rond de omtrek van het trabeculaire netwerk. De C57BL / 6 muizen hebben gepigmenteerde iris die als een barrière voor elke p fungeertotential verdwaalde energie 7. </li><li> Instill topische 0.5% moxifloxacine (Alcon Labs, Inc, Fort Worth, TX) op het oculaire oppervlak om de laser-behandelde stippellijn 0,5% proparacaïne (Bausch &amp; Lomb, Rochester, NY) om pijn te verlichten desinfecteren. </li><li> Houd het dier op een verwarmingselement (Sunbeam Products Inc, Boca Raton, FL) voor herstel voor ongeveer een uur totdat het volledig wakker. </li><li> Het linkeroog onbehandeld te dienen als controle. </li></ol> 2. IOP Metingen <ol><li> Plaats de wakkere muis in een buis te laden in de kunststof conus houder en dan beperken zij op het platform (zie Figuur 2A). </li><li> Laat 5-10 minuten zodat de muis krijgt aangepast aan de houder plaats. Benader de rebound tonometer (TonoLab, Koloniale Medical Supply, Franconia, NH) om de muis oog totdat de sonde tip is 2-3 mm afstand van het oppervlak van het hoornvlies 14. </li><li> Druk op de knop meting te laten de sonde raken het midden oppervlakvan het hoornvlies voorzichtig. Drie opeenvolgende sets van zes metingen van IOP van hetzelfde oog worden verkregen en gemiddeld de IOP van het oog. De onbehandelde controle oog wordt altijd eerst gemeten om een ​​nulmeting voor de laser-behandelde oog dat de volgende keer wordt gemeten krijgen. </li></ol> 3. Optomotor Test Gezichtsscherpte en contrastgevoeligheid getest 14,15. De twee ogen van individuele muizen worden afzonderlijk onderzocht door het omkeren van de richting drijven raster, dat wil zeggen een klok drifting raster gebruikt om de visuele functie van het linkeroog en linksom drijven raster voor het rechteroog 16 identificeren. Elke test duurt ongeveer 15 minuten en wordt herhaald door twee waarnemers onafhankelijk van elkaar. <ol><li> Plaats de muis en laat de muis om vrij te bewegen op een verhoogd platform omringd door vier computerschermen (figuur 3A-B). </li><li> Het opzetten van de monitoren, zodat ze elkaar horizontaal drijven sinusvormigeroosters als visuele stimuli met een gemiddelde lichtsterkte van 39 cd / m 2. De bewegingsrichting van het rooster moeten afwisselen achtereenvolgens tussen de klok mee en tegen de klok in. </li><li> Analyseer de bewegingen van het dier. De bewegingen van het dier in-concert met de drijvende roosters worden beschouwd als &quot;positief&quot; binnen 15 seconden na de visuele stimulus is en vervolgens geleidelijk verhoogd. De hoogste respons uitlokken visuele stimulus wordt gedefinieerd als gezichtsscherpte het dier 17. </li><li> Onderzoekt de contrastgevoeligheid op drie vooraf geselecteerde ruimtelijke frequenties: 0.075, 0.16 en 0.3 cycli per graad (CPD). Het contrast drempel voor elk oog wordt gedefinieerd als de laagste contrast die visuele responsen uitlokt bij de vooraf vastgestelde frequentie. De contrastgevoeligheid is het omgekeerde van de drempel van 17. </li></ol>

<ol><li>Gupta, N., Yucel, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glaucoma+as+a+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Glaucoma as a neurodegenerative disease.</a> Curr. Opin. Ophthalmol. 18, 110-114 (2007).</li>
<li>Quigley, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+death+in+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Retin.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Neuronal death in glaucoma.</a> Prog. Retin. Eye Res. 18, 39-57 (1999).</li>
<li>McKinnon, S. J., Schlamp, C. L., Nickells, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+retinal+ganglion+cell+death+and+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse models of retinal ganglion cell death and glaucoma.</a> Experimental Eye Research. 88, 816-824 (2009).</li>
<li>Pang, I. H., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+glaucoma+retinopathy+and+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">Rodent models for glaucoma retinopathy and optic neuropathy.</a> J. Glaucoma. 16, 483-505 (2007).</li>
<li>Levkovitch-Verbin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translimbal+laser+photocoagulation+to+the+trabecular+meshwork+as+a+model+of+glaucoma+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Translimbal laser photocoagulation to the trabecular meshwork as a model of glaucoma in rats.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 43, 402-410 (2002).</li>
<li>Aihara, M., Lindsey, J. D., Weinreb, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+mouse+ocular+hypertension%3A+establishment+of+the+model%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Experimental mouse ocular hypertension: establishment of the model.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 44, 4314-4320 (2003).</li>
<li>Grozdanic, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+mouse+model+of+chronic+ocular+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Laser-induced mouse model of chronic ocular hypertension.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 44, 4337-4346 (2003).</li>
<li>Sappington, R. M., Carlson, B. J., Crish, S. D., Calkins, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbead+occlusion+model%3A+a+paradigm+for+induced+ocular+hypertension+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">The microbead occlusion model: a paradigm for induced ocular hypertension in rats and mice.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 51, 207-216 (2010).</li>
<li>Ding, C., Wang, P., Tian, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+general+anesthetics+on+IOP+in+elevated+IOP+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of general anesthetics on IOP in elevated IOP mouse model.</a> Experimental Eye Research. 92, 512-520 (2011).</li>
<li>Kalesnykas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+ganglion+cell+morphology+after+optic+nerve+crush+and+experimental+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Retinal ganglion cell morphology after optic nerve crush and experimental glaucoma.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53, 3847-3857 (2012).</li>
<li>Shareef, S. R., Garcia-Valenzuela, E., Salierno, A., Walsh, J., Sharma, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+ocular+hypertension+following+episcleral+venous+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Chronic ocular hypertension following episcleral venous occlusion in rats.</a> Experimental Eye Research. 61, 379-382 (1995).</li>
<li>Chiu, K., Chang, R., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+chronic+ocular+hypertension+model+on+SD+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Laser-induced chronic ocular hypertension model on SD rats.</a> J. Vis. Exp. (10), e549(2007).</li>
<li>Fu, C. T., Sretavan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+ocular+hypertension+in+albino+CD-1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Laser-induced ocular hypertension in albino CD-1 mice.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 51, 980-990 (2010).</li>
<li>Rangarajan, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+visual+deficits+in+aging+DBA%2F2J+mice+by+two+behavioral+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Detection of visual deficits in aging DBA/2J mice by two behavioral assays.</a> Curr. Eye Res. 36, 481-491 (2011).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direction-specific+disruption+of+subcortical+visual+behavior+and+receptive+fields+in+mice+lacking+the+beta2+subunit+of+nicotinic+acetylcholine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Direction-specific disruption of subcortical visual behavior and receptive fields in mice lacking the beta2 subunit of nicotinic acetylcholine receptor.</a> J. Neurosci. 29, 12909-12918 (2009).</li>
<li>Douglas, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Independent+visual+threshold+measurements+in+the+two+eyes+of+freely+moving+rats+and+mice+using+a+virtual-reality+optokinetic+system%5BTitle%5D)+AND+%22Visual+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Independent visual threshold measurements in the two eyes of freely moving rats and mice using a virtual-reality optokinetic system.</a> Visual Neuroscience. 22, 677-684 (2005).</li>
<li>Prusky, G. T., Alam, N. M., Beekman, S., Douglas, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+quantification+of+adult+and+developing+mouse+spatial+vision+using+a+virtual+optomotor+system%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Rapid quantification of adult and developing mouse spatial vision using a virtual optomotor system.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 45, 4611-4616 (2004).</li>
<li>Morrison, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+chronic+pressure-induced+optic+nerve+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage.</a> Experimental Eye Research. 64, 85-96 (1997).</li>
<li>Cone, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+anesthesia%2C+mouse+strain+and+age+on+intraocular+pressure+and+an+improved+murine+model+of+experimental+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">The effects of anesthesia, mouse strain and age on intraocular pressure and an improved murine model of experimental glaucoma.</a> Experimental Eye Research. 99, 27-35 (2012).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain-derived+neurotrophic+factor+and+TrkB+modulate+visual+experience-dependent+refinement+of+neuronal+pathways+in+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Brain-derived neurotrophic factor and TrkB modulate visual experience-dependent refinement of neuronal pathways in retina.</a> J. Neurosci. 27, 7256-7267 (2007).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+neonatal+development+of+retinal+ganglion+cell+dendrites+by+neurotrophin-3+overexpression%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Regulation of neonatal development of retinal ganglion cell dendrites by neurotrophin-3 overexpression.</a> The Journal of Comparative Neurology. 514, 449-458 (2009).</li>
<li>Sun, W., Li, N., He, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+morphological+survey+of+mouse+retinal+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Large-scale morphological survey of mouse retinal ganglion cells.</a> The Journal of Comparative Neurology. 451, 115-126 (2002).</li>
<li>Feng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+Ocular+Hypertension+Induces+Dendritic+Degeneration+of+Mouse+Retinal+Ganglion+Cells+that+Depends+on+Cell-type+and+Location%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Sustained Ocular Hypertension Induces Dendritic Degeneration of Mouse Retinal Ganglion Cells that Depends on Cell-type and Location.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. , (2013).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen. De auteurs zijn full-time medewerkers van de Northwestern University. De auteurs kregen GEEN financiering die werd verstrekt door bedrijven die reagentia en instrumenten die in dit artikel te produceren.

Wij rapporteren boven die aanhoudende oculaire hypertensie kan worden geïnduceerd door laser verlichting in de muis ogen. Vergeleken met de zoutoplossing model 18 en de ader cautery model 11 beide vereisen uitgebreide microchirurgische vaardigheden, de laser verlichting is relatief eenvoudig en gemakkelijk uit te voeren. Meestal kunnen we de laser verlichting voeren voor 4-6 muizen in 2-3 uur. De kritische stappen naar duurzame IOP hoogte te bereiken, zijn de voorste kamer afvlakken voordat laser e...

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reagens</td></tr><tr><td>moxifloxacin</td><td>Alcon Labs, Inc.</td><td>NDC 0065-4013-03</td><td>0,5 %, alleen op recept</td></tr><tr><td>Proparacaine Hydrochloride</td><td>Bausch Lomb</td><td>NDC 24208-730-06</td><td>0,5 %, alleen op recept</td></tr><tr><td>Ophthalmic Solution USP</td><td>Bausch Lomb</td><td>NDC 24208-730-06</td><td>0,5 %, alleen op recept</td></tr><tr><td>ketamine</td><td>Butler Schein Animal Health</td><td>NDC 11695-0550-1</td><td>100 mg / kg </td></tr><tr><td>xylazine</td><td>LLOYD Inc. of Iowa</td><td>NADA 139-236</td><td>10 mg / kg </td></tr><tr><td>atropine sulfate solution</td><td>Alcon Labs, Inc.</td><td>NDC 61314-303-02</td><td>1 %, alleen op recept</td></tr><tr><td colspan="4">Uitrusting </td></tr><tr><td>Slit Lamp, TOPCON </td><td>Visual Systems Inc</td><td>SL-3E</td><td>aangedreven door PS-30A</td></tr><tr><td>OptoMotry 1.8.0 virtueel</td><td>CerebralMechanics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>opto-kinetisch testsysteem</td><td>CerebralMechanics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tonometer, TonoLab, voor muizen</td><td>Colonial Medical Supply</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Verwarmingskussen</td><td>Sunbeam Products Inc</td><td>722-810</td><td></td></tr><tr><td>Argon laser </td><td>Coherent Inc</td><td>Ultima 2000SE</td><td></td></tr><tr><td>DECAPICONE Plastic kegelhouder </td><td>Braintree Sci Inc.</td><td>MDC-200</td><td>voor muis</td></tr></tbody></table>

een laser-induced mouse model van chronische oculaire hypertensie aan visual gebreken karakteriseren

A Laser-induced Mouse Model of Chronic Ocular Hypertension to Characterize Visual Defects

Glaucoom, vaak geassocieerd met verhoogde intraoculaire druk (IOP), een van de belangrijkste oorzaken van blindheid. We wilden een muismodel van oculaire hypertensie te bootsen menselijke high-drukglaucoom stellen. Hier laser verlichting wordt toegepast op het corneale limbus de waterige uitstroom photocoagulate, induceren geslotenhoekglaucoom. De veranderingen van IOP worden geanalyseerd met een rebound tonometer voor en na de laserbehandeling. Een optomotor gedragstest wordt gebruikt om overeenkomstige wijzigingen in de visuele capaciteit te meten. De vertegenwoordiger resultaat van de ene muis die opgelopen IOP hoogte ontwikkeld na de laser verlichting wordt getoond. Een verminderde gezichtsscherpte en contrastgevoeligheid wordt waargenomen in deze oculaire hypertensie muis. Samen, onze studie introduceert een waardevol modelsysteem om neuronale degeneratie en de onderliggende moleculaire mechanismen te onderzoeken in glaucomateuze muizen.

Zoals beschreven in de procedures wordt laserbelichting gericht op het trabeculaire maaswerk van het limbale gebied van de waterige uitstroom photocoagulate, induceren geslotenhoekglaucoom (figuur 1). De meeste gelaserde ogen vertoonden geen significante fysieke schade, pigment onthechting of infectie, in overeenstemming met eerdere bevindingen 6. Bij een kleine groep muizen (minder dan 5% van alle gelaserde dieren) vertoonden lichamelijke tekenen van ernstige schade, zoals leeggelopen oog ba...

Chronische oculaire hypertensie wordt opgewekt met behulp van laserfotocoagulatie van de trabekelnetwerk in muis ogen. De intraoculaire druk (IOP) wordt verhoogd tot verscheidene maanden na laserbehandeling. De daling van de gezichtsscherpte en contrastgevoeligheid proefdieren worden gecontroleerd met behulp van de optomotor-test.

Een laser-induced Mouse Model van chronische oculaire hypertensie aan Visual Gebreken karakteriseren

Glaucoma, frequently associated with elevated intraocular pressure (IOP), is one of the leading causes of blindness. We sought to establish a mouse model ...

Het algemene doel van deze procedure is het induceren van chronische oculaire hypertensie door middel van laserfotocoagulatie van het trabeculair netwerk bij muizen. Na het anestheseren van de muis wordt de pupil van de doelogen gedilateerd, waarna de voorste oogkamer wordt afgevlakt. De tweede stap is het induceren van oculaire hypertensie door een laserstraal loodrecht op het oppervlak langs de omtrek van het trabeculair netwerk toe te dienen.Vervolgens wordt de intraoculaire druk van de muis in de loop van de tijd gevolgd met een tonometer. De laatste stap is het uitvoeren van automatische testen om veranderingen in de visuele Scherpte aan te tonen. Uiteindelijk kunnen visuele defecten veroorzaakt door hypertensie in de loop van de tijd worden gemonitord.Nadat een goedgekeurd I-A-C-U-C-protocol is verkregen, wordt een C 57 black six-muis van 40 tot 60 dagen oud geanestheseerd door middel van een intraperitoneale injectie van ketamine en xylazine. Breng vervolgens voorzichtig oogzalf aan in het linkercontroleoog en dilateer daarna de pupil van het rechteroog door lokale behandeling met één of twee druppels 1% atropinesulfaatoplossing. Zodra de pupil volledig is gedilateerd, wordt een scherpe glazen micropipet in de anterieure ruimte van het oog ingebracht om de vloeistof in de voorste kamer af te voeren.Dit zal de voorste kamer afplatten en de laserinductie verbeteren. Plaats vervolgens de muis onder de spleetlamp, fixeer de muis in een plastic conushouder en zet deze vast op een zelfgebouwd platform. Bereid daarna de Argonne-laserbron voor door de golflengte in te stellen op 514 nanometers, het vermogen op 100 milliwatts, de pulslengte op 50 milliseconden en de spotgrootte op 200 micrometers.Zodra de laser is voorbereid, houdt u de muis vast met de fixatiehouder en stelt u het rechteroog van de muis bloot aan de lichtbron achter de spleetlamp om de laser uit te lijnen. Pas vervolgens de laserbestraling toe op de cornea-limbus met behulp van de argonlaser; breng 80 tot 100 laserstippen loodrecht aan rond de omtrek van het trabeculair netwerk. Zie 57 zwarte zes muizen.Zorg voor een gepigmenteerde iris, die dient als barrière voor eventuele strooistraling. Dien na de procedure topicaal 0,5% moxifloxacine toe op het oogoppervlak om het laserbehandelde gebied te desinfecteren en 0,5% propaan om de pijn te verlichten. Houd het dier ongeveer een uur op een warmtemat voor het herstel totdat het volledig wakker is.Plaats een wakker muisje in een buisje en plaats deze vervolgens in de plastic conushouder. Fixeer de muis daarna op het platform. Let erop dat de muis niet te strak wordt gefixeerd, omdat dit kan leiden tot kunstmatig verhoogde metingen van de intraoculaire druk.Geef de muis vijf tot 10 minuten de tijd om te wennen aan de positie in de houder. Benader vervolgens langzaam de rebound-chronometer richting het controleoog totdat de punt van de probe twee tot drie millimeter van het oppervlak van het hoornvlies af is. Het onbehandelde controleoog wordt altijd eerst gemeten om een basislijnmeting te verkrijgen voor het laserbehandelde oog dat daarna wordt gemeten.Zodra de rebound-chronometer in positie is, drukt u op de meetknop waardoor de probespunt zachtjes het centrale oppervlak van het hoornvlies raakt. Neem drie opeenvolgende series van zes metingen van de intraoculaire druk van hetzelfde oog. Deze metingen worden vervolgens gemiddeld voor elk oog; test de visuele Scherpte en contrastgevoeligheid met behulp van een motorische test.Dit wordt bereikt door de muis eerst op een verhoogd platform te plaatsen, omringd door vier computermonitoren, waarbij het dier zich vrij kan bewegen. Stel de monitoren van het optometrie-apparaat zo in dat ze horizontaal driftende sinusvormige rasters weergeven als visuele stimuli met een gemiddelde luminantie van 39 canula per meter squared. De bewegingsrichting van het raster moet opeenvolgend afwisselen tussen rechtsom en linksom.Tijdens de test worden de bewegingen van de muis geregistreerd met een camera die boven de muis is geplaatst. Gebruik een score voor drift met de klok mee om de visuele functie van het linker-oog te bepalen en een score voor drift tegen de klok in voor het rechter-oog.Elke test duurt ongeveer 15 minuten en wordt onafhankelijk herhaald door twee waarnemers die tijdens de test bewegingen tellen die in overeenstemming zijn met de verschuivende gradaties als positieve bewegingen. Indien deze binnen 15 seconden na aanvang optreden, wordt na 15 seconden de visuele stimulus verhoogd om de hoogste respons te vinden; deze opwekkende visuele stimulus wordt vastgesteld als de visuele acuity van het dier. Onderzoek vervolgens de contrastgevoeligheid van elk dier bij drie vooraf geselecteerde ruimtelijke frequenties; definieer de contrastdrempel voor elk oog als het laagste contrast dat visuele responsen opwekt bij de vastgestelde frequenties.De intraoculaire druk neigde verhoogd te zijn in bijna elk met laser behandeld oog. Minder dan 5% van de muizen vertoonde echter fysieke tekenen van ernstige schade, zoals ingezonken oogbollen, ernstige cataract, significante pigmentatie, loslating of bloedingen. Eén voorbeeld van een verandering in de intraoculaire druk wordt hier getoond.Eén week na de laserbehandeling. De intraoculaire druk van het behandelde oog was bijna twee keer zo hoog als die van het onbehandelde oog en bleef gedurende ongeveer 16 weken verhoogd. De verhoogde druk keerde daarna terug naar een bijna normaal niveau.Rond 20 weken trad er een afname van de visuele acuity op in het behandelde oog na de procedure. Dit hield minstens zes maanden aan en duurde langer dan de verhoging van de intraoculaire druk.Op vergelijkbare wijze werd een lagere contrastgevoeligheid waargenomen in het behandelde oog met een verhoogde intraoculaire druk.

a-laser-induced-mouse-model-chronic-ocular-hypertension-to

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Glaucoom is een van de belangrijkste oorzaken van blindheid in de wereld. Verhoogde intraoculaire druk is een belangrijke risicofactor. Laser fotocoagulatie veroorzaakte oculaire hypertensie is een van de gevestigde diermodellen. Deze video laat zien hoe oculaire hypertensie te induceren door Argon laser fotocoagulatie in de rat.

Laser-Induced Chronische oculaire hypertensie Model op SD-Rats

Source: Lani-Louzada, R., et al., Full-Circle Cauterization of Limbal Vascular Plexus for Surgically Induced Glaucoma in Rodents. J. Vis. Exp. (2022)This video demonstrates the induction and monitoring of elevated intraocular pressure (IOP) in a rat model. The process involves cauterizing the limbal blood vessels, resulting in vessel occlusion and elevated IOP. The rat is then allowed to recover, and IOP is regularly monitored in both the experimental and control eyes for comparison.

 Induction of Elevated Intraocular Pressure in a Rat Model

Hier presenteren we het protocol voor laser-geïnduceerde choroïdale neovascularisatie (CNV) bij muizen, een experimenteel model dat de vasculaire kenmerken van neovasculaire leeftijdsgebonden maculaire degeneratie (AMD) nastreeft. Eenmaal onder de knie, kan het op betrouwbare en effectieve wijze CNV induceren als modelsysteem om verschillende experimentele maatregelen te testen.

Een muismodel voor Laser-geïnduceerde Choroïdale Neovascularisatie

Hier presenteren we een protocol om intraoculaire drukverhoging te induceren in het muizen oog dat resulteert in het verlies van retinale ganglioncellen zoals waargenomen in glaucoom. Magnetische microkralen worden geïnjecteerd in de voorste kamer en aangetrokken door de iridocorneale hoek met een magneet om de uitstroom van waterige humor te blokkeren.

Een Magnetic Microbead occlusie Model voor het induceren van oculaire hypertensie-Dependent Glaucoom in Muizen

Hier presenteren we het nut van longitudinale in vivo imaging in de follow-up van de morfologische veranderingen van laser-geïnduceerde choroidal neovascularization in muizen.

In Vivo Multimodale beeldvorming en analyse van Laser-geïnduceerde Choroidal Neovascularization muismodel

Chronische oculaire hypertensie wordt geïnduceerd door het toepassen van een circumlimbal hechtdraad bij ratten en muizen, wat leidt tot functionele en structurele verslechtering van de retinale peesknoopcellen overeenstemming met glaucoom.

Een Model van glaucoom veroorzaakt door Circumlimbal hechtdraad bij ratten en muizen

Hier beschrijven we het gebruik van spectrale optische coherentietomografie (SD-OCT) om retinale en oculaire structuren in vivo te visualiseren in modellen van retinale degeneratie, glaucoom, diabetische retinopathie en bijziendheid.

In vivo structurele beoordelingen van oogziekten in knaagdiermodellen met behulp van optische coherentietomografie

Hier beschrijven we een geoptimaliseerd protocol voor retinale ader occlusie met behulp van rose bengal en een lasergeleid retinaal beeldvormingscoopsysteem met aanbevelingen om de reproduceerbaarheid ervan in genetisch gemodificeerde stammen te maximaliseren.

Optimalisatie van het Retinal Vein Occlusion Mouse Model om variabiliteit te beperken

Hier beschrijven we een in vivo beeldvormingstechniek met behulp van optische coherentietomografie om de diagnose en kwantitatieve meting van retinopathie bij muizen te vergemakkelijken.

Toepassing van optische coherentietomografie op een muismodel van retinopathie

Het doel van dit protocol is het karakteriseren van een nieuw model van glaucoomneurodegeneratie op basis van 360° thermische cauterisatie van de limbale vasculaire plexus, die subacute oculaire hypertensie induceert.

Volledige cirkel Cauterisatie van limbale vasculaire plexus voor chirurgisch geïnduceerd glaucoom bij knaagdieren

Leer hoe u chronische oculaire hypertensie induceert bij muizen via laserfotocoagulatie van het trabeculaire netwerk. Deze methode volgt intraoculaire druk en visuele scherpte met optomotorische tests.

Een laser-induced Mouse Model van chronische oculaire hypertensie aan Visual Gebreken karakteriseren

Meer video's verkennen