Name: Karakterisering van inflammatoire reacties tijdens intranasale kolonisatie met Streptococcus pneumoniae (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 12 s
Description: Leer een methode voor intranasale kolonisatie van de muis met Streptococcus pneumoniae en extractie van cellen uit neusspoelingen. Deze techniek maakt kwantificering van bacteriën en analyse van immuunresponsen mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs willen Dr. Jeffery Weiser van de Universiteit van Pennsylvania bedanken voor zijn geschenk van de klinische stammen van Streptococcus pneumoniae. Dit werk werd gefinancierd door de Canadian Institutes for Health Research. CV werd gefinancierd door een M.G. DeGroote fellowship en een fellowship van de Canadian Thoracic Society. Dit werk werd gefinancierd door de Ontario Lung Association en Canadian Institutes of Health Research (CIHR). Het werk in het Bowdish laboratorium wordt mede ondersteund door het Michael G. DeGroote Centre for Infectious Disease Research en het McMaster Immunology Research Centre.

<ol><li>Bogaert, D., de Groot, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+pneumoniae+colonisation%3A+the+key+to+pneumococcal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Streptococcus pneumoniae colonisation: the key to pneumococcal disease.</a> Lancet Infect. Dis. 4, 144-154 (2004).</li>
<li>Kadioglu, A., Weiser, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+Streptococcus+pneumoniae+virulence+factors+in+host+respiratory+colonization+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The role of Streptococcus pneumoniae virulence factors in host respiratory colonization and disease.</a> Nat. Rev. Microbiol. 6 (4), 288-301 (2008).</li>
<li>McCool, T. L., Cate, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immune+response+to+pneumococcal+proteins+during+experimental+human+carriage%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">The immune response to pneumococcal proteins during experimental human carriage.</a> J. Exp. Med. 195, 359-365 (2002).</li>
<li>Nelson, A., Roche, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capsule+enhances+pneumococcal+colonisation+by+limiting+mucus-mediated+clearance%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Capsule enhances pneumococcal colonisation by limiting mucus-mediated clearance.</a> Infect. Immun. 75, 83-90 (2007).</li>
<li>van Rossum, A., Lysenko, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+and+bacterial+factors+contributing+to+the+clearance+of+colonisation+by+Streptococcus+pneumoniae+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Host and bacterial factors contributing to the clearance of colonisation by Streptococcus pneumoniae in a murine model.</a> Infect. Immun. 73, 7718-7726 (2005).</li>
<li>Barocchi, M. A., Ries, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pneumococcal+pilus+influences+virulence+and+host+inflammatory+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">A pneumococcal pilus influences virulence and host inflammatory responses.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 2857-2862 (2006).</li>
<li>Malley, R., Henneke, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+of+pneumolysin+by+Toll-like+receptor+4+confers+resistance+to+pneumococcal+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Recognition of pneumolysin by Toll-like receptor 4 confers resistance to pneumococcal infection.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 1966-1971 (2003).</li>
<li>McCool, T. L., Weiser, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limited+role+of+antibody+in+clearance+of+Streptococcus+pneumoniae+in+a+murine+model+of+colonization%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Limited role of antibody in clearance of Streptococcus pneumoniae in a murine model of colonization.</a> Infect. Immun. 72, 5807-5813 (2004).</li>
<li>Gingles, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+genetic+resistance+in+invasive+pneumococcal+infection%3A+identification+and+study+of+susceptibility+and+resistance+in+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Role of genetic resistance in invasive pneumococcal infection: identification and study of susceptibility and resistance in inbred mouse strains.</a> Infect. Immun. 69 (1), 426-434 (2001).</li>
<li>Jeong, D., Jeong, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Difference+in+resistance+to+Streptococcus+pneumoniae+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim.+Res%22%5BJournal%5D)">Difference in resistance to Streptococcus pneumoniae infection in mice.</a> Lab Anim. Res. 27, 91-98 (2011).</li>
<li>Wu, H. Y., Virolainen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+Streptococcus+pneumoniae+nasopharyngeal+colonization+model+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microb.+Pathog%22%5BJournal%5D)">Establishment of a Streptococcus pneumoniae nasopharyngeal colonization model in adult mice.</a> Microb. Pathog. 23, 127-137 (1997).</li>
<li>Southam, D. S., Dolovich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+intranasal+instillations+in+mice%3A+effects+of+volume%2C+time%2C+body+position%5BTitle%5D)+AND+%22Lung+Physiol%22%5BJournal%5D)">Distribution of intranasal instillations in mice: effects of volume, time, body position.</a> Lung Physiol. 282, 833-839 (2002).</li>
<li>Miller, M. A., Stabenow, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+Murine+Intranasal+Dosing+Efficiency+Using+Luminescent+Francisella+tularensis%3A+Effect+of+Instillation+Volume+and+Form+of+Anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Visualization of Murine Intranasal Dosing Efficiency Using Luminescent Francisella tularensis: Effect of Instillation Volume and Form of Anesthesia.</a> PLoS ONE. 7 (2), (2012).</li>
<li>Briles, D. E., Novak, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal+Colonization+with+Streptococcus+pneumoniae+includes+subpopulations+of+surface+and+invasive+pneumococci%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Nasal Colonization with Streptococcus pneumoniae includes subpopulations of surface and invasive pneumococci.</a> Infect. Immun. 73 (10), 6945-6951 (2005).</li>
<li>Wu, H. -Y., Virolainen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+Streptococcus+pneumoniae+nasopharyngeal+colonization+model+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microb.+Pathog%22%5BJournal%5D)">Establishment of a Streptococcus pneumoniae nasopharyngeal colonization model in adult mice.</a> Microb. Pathog. 23, 127-137 (1997).</li>
<li>Mo, Y., Wan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+reverse+transcription-PCR+and+real-time+PCR+in+nanotoxicity+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Application of reverse transcription-PCR and real-time PCR in nanotoxicity research.</a> Methods Mol. Biol. 926, 99-112 (2012).</li>
<li>Kuper, C. F., Koornstra, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+nasopharyngeal+lymphoid+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of nasopharyngeal lymphoid tissue.</a> Trends Immunol. 13, 219-224 (1992).</li>
<li>Zhang, Q., Leong, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+regulatory+T+cells+in+nasal+associated+lymphoid+tissue+in+children%3A+relationships+with+pneumococcal+colonization%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Characterisation of regulatory T cells in nasal associated lymphoid tissue in children: relationships with pneumococcal colonization.</a> PLoS Pathog. 7, (2011).</li>
<li>Briles, D. E., Novak, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal+colonization+with+Streptococcus+pneumoniae+includes+subpopulations+of+surface+and+invasive+pneumococci%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Nasal colonization with Streptococcus pneumoniae includes subpopulations of surface and invasive pneumococci.</a> Infect. Immun. 73, 6945-6951 (2005).</li>
<li>Weinberger, D. M., Trzcinski, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pneumococcal+capsular+polysaccharide+structure+predicts+serotype+prevalence%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Pneumococcal capsular polysaccharide structure predicts serotype prevalence.</a> PLoS Pathog. 5, (2009).</li>
<li>Bryant, W. P., J,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Which+Pneumococcal+Serogroups+Cause+the+Most+Invasive+Disease%3A+Implications+for+Conjugate+Vaccine+Formulation+and+Use%2C+Part+I.%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Which Pneumococcal Serogroups Cause the Most Invasive Disease: Implications for Conjugate Vaccine Formulation and Use, Part I.</a> Clin. Infect. Dis. 30, 100-121 (2000).</li>
<li>Hausdorff, W. P., Feikin, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiological+differences+among+pneumococcal+serotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Epidemiological differences among pneumococcal serotypes.</a> Lancet Infect. Dis. 5, 83-93 (2005).</li>
<li>Brueggemann, A., Griffiths, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+Relationships+between+Invasive+and+Carriage+Streptococcus+pneumoniae+and+Serotype+and+Clone+Specific+Differences+in+Invasive+Disease+Potential%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Clonal Relationships between Invasive and Carriage Streptococcus pneumoniae and Serotype and Clone Specific Differences in Invasive Disease Potential.</a> J. Infect. Dis. 187, 1424-1432 (2003).</li>
<li>Mohler, J., Azoulay-Dupis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+pneumoniae+strain-dependent+lung+inflammatory+responses+in+a+murine+model+of+pneumococcal+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Streptococcus pneumoniae strain-dependent lung inflammatory responses in a murine model of pneumococcal pneumonia.</a> Intensive Care Med. 29, 808-816 (2003).</li>
<li>Wu, H. Y., Virolainen, A., Mathews, B., King, J., Russell, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+Streptococcus+pneumoniae+nasopharyngeal+colonization+model+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microb.+Pathog%22%5BJournal%5D)">Establishment of a Streptococcus pneumoniae nasopharyngeal colonization model in adult mice.</a> Microb. Pathog. 23, 127-137 (1997).</li>
<li>Zhang, Z., Clarke, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+effectors+mediating+Th17-dependent+clearance+of+pneumococcal+colonization+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Cellular effectors mediating Th17-dependent clearance of pneumococcal colonization in mice.</a> J. Clin. Invest. 119, 1899-1909 (2009).</li>
<li>Parker, D., Martin, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+pneumoniae+DNA+initiates+type+I+interferon+signaling+in+the+respiratory+tract%5BTitle%5D)+AND+%22MBio%22%5BJournal%5D)">Streptococcus pneumoniae DNA initiates type I interferon signaling in the respiratory tract.</a> MBio. 2, (2011).</li>
<li>Haya, D. L., Camilli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+identification+of+serotype+4+Streptococcus+pneumoniae+virulence+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Large-scale identification of serotype 4 Streptococcus pneumoniae virulence factors.</a> Mol. Microbiol. 45, 1389-1406 (2002).</li>
<li>Nakamura, S., Favis, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+stimulation+of+type+I+interferons+during+influenza+virus+coinfection+promotes+Streptococcus+pneumoniae+colonization+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Synergistic stimulation of type I interferons during influenza virus coinfection promotes Streptococcus pneumoniae colonization in mice.</a> J. Clin. Invest. 121, 3657-3665 (2011).</li>
<li>Kim, J. O., Weiser, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+intrastrain+phase+variation+in+quantity+of+capsular+polysaccharide+and+teichoic+acid+with+the+virulence+of+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Association of intrastrain phase variation in quantity of capsular polysaccharide and teichoic acid with the virulence of Streptococcus pneumoniae.</a> J. Infect. Dis. 177, 368-377 (1998).</li>
<li>Roche, A. M., King, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+attenuated+Streptococcus+pneumoniae+strains+induce+serotype-independent+mucosal+and+systemic+protection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Live attenuated Streptococcus pneumoniae strains induce serotype-independent mucosal and systemic protection in mice.</a> Infect. Immun. 75, 2469-2475 (2007).</li>
<li>Cohen, J. M., Khandavalli, S., Camberlein, E., Hyams, C., Baxendale, H. E., Brown, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+contributions+against+invasive+Streptococcus+pneumoniae+pneumonia+of+antibody+and+Th17-Cell+responses+to+nasopharyngeal+colonisation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Protective contributions against invasive Streptococcus pneumoniae pneumonia of antibody and Th17-Cell responses to nasopharyngeal colonisation.</a> PLoS One. 6 (10), (2011).</li>
<li>Cohen, J. M., Khandavalli, S., Camberlein, E., Hyams, C., Baxendale, H. E., Brown, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+contributions+against+invasive+Streptococcus+pneumoniae+pneumonia+of+antibody+and+Th17-Cell+responses+to+nasopharyngeal+colonisation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Protective contributions against invasive Streptococcus pneumoniae pneumonia of antibody and Th17-Cell responses to nasopharyngeal colonisation.</a> PLoS One. 6 (10), (2011).</li>
<li>Richards, L., Ferreira, D. M., Miyaji, E. N., Andrew, P. W., Kadioglu, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immunising+effect+of+pneumococcal+nasopharyngeal+colonisation%3B+protection+against+future+colonisation+and+fatal+invasive+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Immunobiology%22%5BJournal%5D)">The immunising effect of pneumococcal nasopharyngeal colonisation; protection against future colonisation and fatal invasive disease.</a> Immunobiology. , 215-251 (2010).</li>
<li>Lanie, J. A., Ng, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+sequence+of+Avery%27s+virulent+serotype+2+strain+D39+of+Streptococcus+pneumoniae+and+comparison+with+that+of+unencapsulated+laboratory+strain+R6%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Genome sequence of Avery's virulent serotype 2 strain D39 of Streptococcus pneumoniae and comparison with that of unencapsulated laboratory strain R6.</a> J. Bacteriol. 189, 38-51 (2007).</li>
<li>Robertson, G. T., Ng, W. L., Foley, J., Gilmour, R., Winkler, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+transcriptional+analysis+of+clpP+mutations+of+type+2+Streptococcus+pneumoniae+and+their+effects+on+physiology+and%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Global transcriptional analysis of clpP mutations of type 2 Streptococcus pneumoniae and their effects on physiology and.</a> 184, 3508-3520 (2002).</li>
<li>Orihuela, C. J., Gao, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+contributions+of+pneumococcal+virulence+factors+to+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific contributions of pneumococcal virulence factors to pathogenesis.</a> J. Infect. Dis. 190, 1661-1669 (2004).</li>
<li>Orihuela, C. J., Gao, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ-specific+models+of+Streptococcus+pneumoniae+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Scand.+J.+Infect.+D%22%5BJournal%5D)">Organ-specific models of Streptococcus pneumoniae disease.</a> Scand. J. Infect. D. 35, 647-652 (2003).</li>
<li>Swirski, F. K., Nahrendorf, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+splenic+reservoir+monocytes+and+their+deployment+to+inflammatory+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of splenic reservoir monocytes and their deployment to inflammatory sites.</a> Science. 325, 612-616 (2009).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets bekend te maken.

In deze studie presenteerden we gedetailleerde methoden voor de intranasale kolonisatie van muizen met behulp van een klinische isolaatstam van Streptococcus pneumoniae en de daaropvolgende isolatie en karakterisering van de immuuncellen die als reactie op de bacteriën worden gerekruteerd voor nasopharynx. We hebben aangetoond hoe een bacterieel entmateriaal kan worden gekweekt in voedingsrijke media en kan worden gebruikt om een kolonisatiegebeurtenis bij muizen vast te stellen, die aanvankelijk beperkt is tot ...

<table><tbody><tr><td>Anti-Mouse Ly6C FITC</td><td>BD Pharmingen</td><td>553104</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse Ly6G PE</td><td>BD Pharmingen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse CD45.1 eFluor 450</td><td>eBioscience</td><td>48-0453-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse F4/80 Antigen APC</td><td>eBioscience</td><td>17-4801-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse CD11c PerCP-Cy5.5</td><td>eBioscience</td><td>45-0114-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse CD11b PE-Cy7</td><td>eBioscience</td><td>25-0112-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse CD3 Alexa Fluor 700</td><td>eBioscience</td><td>56-0032-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse CD4 eFluor 605NC</td><td>eBioscience</td><td>93-0041-42</td><td></td></tr><tr><td>Intramedic Polyethylene Tubing - PE20</td><td>Becton Dickinson</td><td>427406</td><td></td></tr><tr><td>BD 1 ml Syringe</td><td>Becton Dickinson</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>BD 26 G 3/8 Intradermal Bevel</td><td>Becton Dickinson</td><td>305110</td><td></td></tr><tr><td>Buffer RLT Lysis Buffer</td><td>Qiagen</td><td>79216</td><td></td></tr><tr><td>Difco Tryptic Soy Agar</td><td>Becton Dickinson</td><td>236950</td><td></td></tr><tr><td>Defibrinated Sheep Blood</td><td>PML Microbiologicals</td><td>A0404</td><td></td></tr><tr><td>RNAqueous-Micro Kit</td><td>Ambion</td><td>AM1931</td><td></td></tr><tr><td>M-MuLV Reverse Transcriptase</td><td>New England Biolabs</td><td>M0253L</td><td></td></tr><tr><td>GoTaq qPCR Master Mix</td><td>Promega</td><td>A6001</td><td></td></tr></tbody></table>

karakterisering van inflammatoire reacties tijdens intranasale kolonisatie met streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Nasofaryngeale kolonisatie door Streptococcus pneumoniae is een voorwaarde voor invasie in de longen of bloedbaan1. Dit organisme is in staat om het mucosale oppervlak van de nasopharynx te koloniseren, waar het kan verblijven, zich kan vermenigvuldigen en uiteindelijk gastheerverdediging kan overwinnen om andere weefsels van de gastheer binnen te dringen. Het vaststellen van een infectie in de normaal lagere luchtwegen resulteert in longontsteking. Als alternatief kunnen de bacteriën zich verspreiden in de bloedbaan die bacteriëmie veroorzaakt, wat gepaard gaat met hogesterftecijfers 2, of anders rechtstreeks leiden tot de ontwikkeling van pneumokokken meningitis. Het begrijpen van de kinetiek van en immuunresponsen op nasofaryngeale kolonisatie is een belangrijk aspect van S. pneumoniae-infectiemodellen.
Ons muismodel van intranasale kolonisatie is aangepast aan menselijke modellen3 en is gebruikt door meerdere onderzoeksgroepen in de studie van gastheer-pathogene reacties in de nasopharynx4-7. In het eerste deel van het model gebruiken we een klinisch isolaat van S. pneumoniae om een zelfbeperkende bacteriële kolonisatie vast te stellen die vergelijkbaar is met vervoergebeurtenissen bij menselijke volwassenen. De hierin beschreven procedure omvat de bereiding van een bacterieel entmateriaal, gevolgd door de vaststelling van een kolonisatiegebeurtenis door levering van het entmateriaal via een intranasale toedieningsweg. Ingezeten macrofagen zijn het overheersende celtype in de nasopharynx tijdens de steady state. Meestal zijn er weinig lymfocyten aanwezig in niet-geïnfecteerde muizen8, maar mucosale kolonisatie zal leiden tot laag- tot hoogwaardige ontsteking (afhankelijk van de virulentie van de bacteriële soort en stam) die zal resulteren in een immuunrespons en de daaropvolgende rekrutering van gastheerimmuuncellen. Deze cellen kunnen worden geïsoleerd door een lavage van de tracheale inhoud door de nares, en gecorreleerd met de dichtheid van kolonisatiebacteriën om de kinetiek van de infectie beter te begrijpen.

Figuur 1 geeft een overzichtsschema weer met een samenvatting van de belangrijkste stappen van het protocol. De figuren 2-3 geven een visualisatie van de microbiologische methodologie die inherent is aan de hierin beschreven protocollen. Figuur 4 staat voor een juiste positionering van een muis om een intranasale kolonisatie uit te voeren, terwijl figuur 5 typisch veranderingen in gewicht weergeeft van muizen gekoloniseerd met S. pneumoniae stam...

Kolonisatie van de muriene nasopharynx met Streptococcus pneumoniae en de daaropvolgende extractie van aanhangende of gerekruteerde cellen wordt beschreven. Deze techniek omvat het spoelen van de nasopharynx en het opvangen van de vloeistof door de nares en is aanpasbaar voor verschillende uitlezingen, waaronder differentiële celkwantificering en analyse van mRNA-expressie in situ.

Karakterisering van inflammatoire reacties tijdens intranasale kolonisatie met Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Deze procedure omvat de kolonisatie van de nasofarynx van de muis met Streptococcus pneumoniae en de daaropvolgende extractie van koloniserende bacteriën, evenals adherente of gerekruteerde cellen. Dit wordt bereikt door eerst een bacterieel inoculum voor te bereiden van de relevante S. pneumoniae-stam.De levende bacteriën worden vervolgens intranasaal toegediend aan geanestheseerde muizen terwijl deze zich in een fixatieapparaat bevinden. Na de gewenste kolonisatieduur worden de muizen geëuthanaseerd en worden nasale spoelingen uitgevoerd door hun blootgelegde tracheae te canuleren en de inhoud via de neus uit te spoelen. De bacteriële aantallen in de nasale spoelingen kunnen worden gekwantificeerd met microbiologische technieken. Alternatief kunnen immuunresponsen worden geanalyseerd met behulp van flowcytometrie-technieken om de gerekruteerde cellen te fenotyperen of via kwantitatieve PCR-technieken.Om de niveaus van het tot ons interesse behorende tot expressie gebrachte mRNA te meten voordat u begint, moet u muisfixateurs voorbereiden voor het intranasale kolonisatiegedeelte van de procedure en gecannuleerde naalden voor de nasale spoelingen. Een muisfixateur kan eenvoudig wor

characterization-inflammatory-responses-during-intranasal

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

This video demonstrates the establishment of lung infection in an immunocompetent rodent model via intubation and installation of bacterial suspensions into lung lobes. This model enables antibacterial efficacy studies in immunocompetent animals.

Intrabronchial Instillation of Streptococcus pneumoniae in Immunocompetent Rodent Models

Experimentele menselijke pneumokokken vervoer biedt een natuurlijk model van wagen en een potentieel model voor gebruik in de ontwikkeling van vaccins. Deze techniek is waardevol maar ingewikkeld en brengt klinisch risico door een pathogeen in een mens. We hebben een uitgebreide protocol.

Experimentele Human Pneumokokken vervoer

Streptococcus pneumoniae is de toonaangevende ziekteverwekker waardoor ernstige community-acquired pneumonie en verantwoordelijk voor meer dan 2 miljoen doden wereldwijd. De invloed van bacteriële factoren betrokken bij fitness of virulentie kan worden gevolgd in real-time in een acute muis longontsteking of bacteriëmie model met behulp van bioluminescentie bacteriën.

Na in Real Time de impact van Pneumokokken virulentiefactoren in een acute longontsteking Muis Model Met behulp van Bioluminescent Bacteriën

De gastheer immuunrespons op pathogene infectie een strak gereguleerd proces. Met behulp van een lipopolysaccharide long exposure model in muizen, is het mogelijk om hoge resolutie evaluaties van de complexe mechanismen van pathogenese voeren.

Het gebruik van Oropharyngeal Intratracheaal PAMP Administratie en bronchoalveolaire lavage om de immuunrespons van de gastheer in Muizen Evalueer

Streptococcus pneumoniae vormt discrete niet-purulente microscopische laesies in het hart. Beschreven wordt het protocol voor een muismodel van hartmicrolaesievorming. Er wordt instructie gegeven over microlaesievisualisatie met behulp van microscopie, onderscheid tussen vroege en late microlaesies en methoden om cardiale remodellering in harten van herstellende dieren te detecteren.

Visualisatie van<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Binnen Cardiac microverwondingen en Latere Cardiac Remodeling

Terwijl in vitro studie van gastheer-pathogeen interacties de karakterisering van specifieke immuunresponsen mogelijk maakt, zijn in vivo modellen vereist om de effecten van complexe responsen te observeren. Door gebruik van Candida albicans blootstelling gevolgd door Pseudomonas aeruginosa-gemedieerde longinfectie, hebben we een muismodel gevestigd van microbiële interacties betrokken bij de pathogeniteit van ventilateur-geassocieerde pneumonie.

Bestuderen van microbiële gemeenschappen<em&gt; In Vivo</em&gt;: Een model van de Host-gemedieerde interactie tussen<em&gt; Candida albicans</em&gt; En<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; In het Airways

We demonstreren de procedure voor intra-tracheale inoculatie van Haemophilus influenzae in de onderste luchtwegen van muizen. Dit is een zeer nuttige tool om signaleringsroutes te bestuderen die luchtwegontsteking reguleren in muismodellen.

Intratracheale toediening van<em&gt; Haemophilus influenzae</em&gt; In muismodellen om te studeren luchtwegontsteking

Verscheidene werkwijzen zijn beschreven in de literatuur voor het modelleren van bacteriële pneumonie bij muizen. Hierin beschrijven we een niet-invasieve, goedkope, snelle werkwijze voor het induceren via aspiratie pneumonie (bijvoorbeeld inhalatie) van een bacterieel inoculum gepipetteerd in de orofarynx. Downstream methoden voor de beoordeling van de pulmonaire aangeboren immuunrespons zijn ook gedetailleerd.

Een niet-invasieve en Technisch Niet-intensieve methode voor Inductie en fenotypering van experimentele bacteriële longontsteking in Muizen

Haemophilus influenzae induceert ontsteking in de luchtwegen. Dit artikel zal zich richten op het gebruik van flowcytometrie en confocale microscopie om immuunresponsen door fagocyten en lymfocyten als reactie op deze bacterie te definiëren.

Beoordeling van respiratoire immuunresponsen op Haemophilus Influenzae

Dit manuscript beschrijft de opstelling van een infectieus model van longontsteking bij muizen en de respectieve karakterisering van letselresolutie, samen met methoden voor het kweken van bacteriën en intratracheale instillatie. Een nieuwe benadering met behulp van hoogdimensionale flowcytometrie om het immuunlandschap te evalueren, wordt ook beschreven.

Experimenteel model om de resolutie van longontsteking te evalueren

Dit artikel beschrijft een nieuw muismodel voor de overgang van pneumokokken van een asymptomatische kolonisator naar een ziekteverwekkende ziekteverwekker tijdens virale infectie. Dit model kan gemakkelijk worden aangepast om polymicrobiële en gastheer-pathogeen interacties te bestuderen tijdens de verschillende fasen van ziekteprogressie en tussen verschillende gastheren.

Een muismodel voor de overgang van Streptococcus pneumoniae van kolonisator naar pathogeen bij virale co-infectie vat leeftijdsverergerde ziekte samen

Leer een methode voor intranasale kolonisatie van de muis met Streptococcus pneumoniae en extractie van cellen uit neusspoelingen. Deze techniek maakt kwantificering van bacteriën en analyse van immuunresponsen mogelijk.

Karakterisering van inflammatoire reacties tijdens intranasale kolonisatie met Streptococcus pneumoniae

Meer video's verkennen