Name: Bepaling van de toelaatbare vetzuren en Cholera toxine Concentraties behulp Human Intestinal epitheelcellen en BALB / c muis macrofagen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: Leer hoe je veilige concentraties van vetzuren en choleratoxine bepaalt met behulp van menselijke intestinale epitheelcellen en BALB/c-muismacrofagen. Deze MTT-assay-methode ondersteunt onderzoek naar celoverleving en cholera-preventie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wij danken Paula Cobos en Dr Evros Vassiliou voor lab bijstand en het verstrekken van de muis macrofagen, respectievelijk. We ons lab manager Richard Criasia danken ook voor begeleiding en hulp met materialen. Tot slot, de auteurs danken Ramanpreet Kaur voor hulp bij videoproductie.

1. Tissue Culture <ol><li> Gebruik Mus musculus macrofagen (BALB / c muizen) voor cholera toxine bepalingen. Aanvankelijk cultuur al M. musculus cellen volgens de instructies van leverancier. </li><li> Propageren BALB / c muizen cellen in Dulbecco&#39;s gemodificeerd Eagle&#39;s Medium met L-glutamine aangevuld met 10% foetaal runderserum en 1% antibioticum / antimycoticum of RPMI 1640 basismedium aangevuld met 10% foetaal runderserum, 5% L-glutamine en 1 % antibiotische / antimycotische reagens. </li><li> Groeien cellen in 75 cm2 flessen met corning ontluchtingsdoppen bij 37 ° C, 95% lucht en 5% CO2. </li><li> Brengen humane intestinale epitheelcellen binnen 24 uur na levering volgens de instructies van de fabrikant voor de bepaling van vetzuren vaststellingen. </li><li> Propageren humane intestinale epitheel cellen in 75 cm2 flessen met corning ontluchtingsdoppen in HybriCare media aangevuld met 10% FBS en 30 ng / ml menselijk EGF bij 37 ° C. Gebruik geen antibiotica/ Antimycoticum reagentia volgens de instructies van de fabrikant. </li><li> Split alle cellen (01:03) bij ongeveer 70% confluentie. </li><li> Bevriezen en brengen alle cellen gedurende het onderzoek met behulp van standaard protocollen vriespunt. </li><li> Opmerking: Voor grotere schaal concentratiebepaling van vetzuren, met de sneller groeiende, makkelijker te onderhouden, muis macrofagen aanvankelijk. Voor fijne schaal vetzuurconcentratie bepaling, gebruiken menselijke epitheelcellen. Gebruik de muis macrofagen voor alle cholera toxine behandelingen (zie bespreking). </li></ol> 2. Fatty Acid en Cholera toxine Behandelingen <ol><li> Overdracht van oliezuur, linolzuur en linoleenzuur van bedrijf-mits glazen ampullen met gesteriliseerde glazen flesjes. </li><li> Overdracht vetzuurpercentage een afzonderlijk gesteriliseerde Eppendorf buis en los het eerst in 100% ethanol bij een verdunning van 1:06, en vervolgens in RPMI 1640 compleet media voor een uiteindelijke concentratie van 10 ug / ul. </li><li> Vortex elke oplossing en transferer aan glazen flessen voor opslag in de diepvries (-20 ° C). </li><li> Cellaag bij 2.500 cellen / putje in 96 putjes weefselkweekplaten. </li><li> Voeg de juiste compleet medium aan de totale goed volume 200 ul voor de behandeling van cellen met vetzuren in voorbereiding MTT assays brengen. </li><li> Na een uur wildgroei periode 24, verwijder het papier en vervang het door vers medium. </li><li> Voeg de juiste concentratie van elk vetzuur te testen aan de putjes (zie resultaten). Voeg complete media aan het totaal goed volumes tot 200 ui te brengen. </li><li> Incubeer de behandelde platen gedurende 24 uren voordat de MTT assay. </li><li> Los het choleratoxine in PBS bij een concentratie van 1 mg / ml en de hoeveelheid oplossing in cryovials en bewaar de cryobuisjes bij 2-8 ° C. </li><li> Voor celbehandelingen verdunnen toxine 1:100 hetzij gesteriliseerde PBS (pH 7,4) of onvolledige DMEM voor een uiteindelijke werkende concentratie van 1 ng / ul. </li><li> Om cellen te behandelen met cholera toxine invoorbereiding MTT assays plaat cellen zoals hierboven beschreven. </li><li> Na een uur wildgroei periode van 24, voeg de juiste concentraties van cholera toxine (voor onze concentratie, zie resultaten) worden getest om de putten na het gebruikt in vetzuur toepassingen (hierboven) procedures. </li><li> Incubeer de behandelde platen gedurende 24 uren voordat de MTT assay. </li><li> Als positieve (c positieve gehele papier) en negatieve controle (negatief c), zowel vetzuur en cholera toxine behandelingen, incubeer cellen met compleet medium en 70% ethanol, respectievelijk. </li><li> Voor alle monsters en behandelingen gebruik minimaal drie replicaties (n = 3), met meer replicaties voor positieve controle (n = 6 in deze studie). </li></ol> 3. MTT assay <ol><li> Wordt MTT stockoplossing aan een concentratie van 2,5 mg / ml. </li><li> Verwijder de oplossing in elk putje van de plaat met 96 putjes te testen en vervangen door 200 gl vers compleet medium oplossing. </li><li> Advertentied 10 ul van de MTT oplossing in elk putje. </li><li> Incubeer de platen bij 37 ° C gedurende 3-4 uur. </li><li> Gooi de media oplossing en voeg 100 ul van 0,04 M HCI in isopropanol aan elke well. </li><li> Incubeer de plaat bij kamertemperatuur gedurende vijf minuten. </li><li> De oplossing wordt uit elk putje naar een nieuwe centrifugebuis. </li><li> Centrifugeer bij 20.000 xg bij kamertemperatuur gedurende 1 min., of totdat een neerslag werd gevormd. </li><li> Overdracht tussen 20-40 pi van elk monster een microplaataflezer. </li><li> Lees absorptie bij 570 nm met een spectrofotometer. </li></ol>

<ol><li>Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oleic+Acid%3A+Its+effects+on+stratum+corneum+in+relation+to+%28trans%29+dermal+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery.</a> Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).</li>
<li>Tandon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X-ray+diffraction+and+spectroscopic+studies+of+oleic+acid-sodium+acetate%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Phys.+Lipids%22%5BJournal%5D)">X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic acid-sodium acetate.</a> Chem. Phys. Lipids. 109 (1), 37-45 (1990).</li>
<li>Kris-Etherton, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+debate+about+n-6+polyunsaturated+fatty+acid+recommendations+for+cardiovascular+health%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Diabetic+Association%22%5BJournal%5D)">The debate about n-6 polyunsaturated fatty acid recommendations for cardiovascular health.</a> Journal of the American Diabetic Association. 110 (2), 201-204 (2010).</li>
<li>Rizzo, W. B., Phillips, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenoleukodystrophy%3A+dietary+oleic+acid+lowers+hexacosanoate+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Adrenoleukodystrophy: dietary oleic acid lowers hexacosanoate levels.</a> Annals of Neurology. 21 (3), 232-239 (1987).</li>
<li>Bozan, B., Temelli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+oxidative+stability+of+flax%2C+safflower+and+poppy+seed+and+seed+oil%5BTitle%5D)+AND+%22Bioresource+Tech%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and oxidative stability of flax, safflower and poppy seed and seed oil.</a> Bioresource Tech. 99, 6354-6359 (2005).</li>
<li>Krein, S., Meldurm, H., Hawkins, S., Foy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+benefits+of+conjugated+linoleic+acid+to+3-dimensional+wrinkle+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+American+Academy+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Clinical benefits of conjugated linoleic acid to 3-dimensional wrinkle morphology.</a> J. American Academy of Dermatology. 60 (3), AB30(2009).</li>
<li>Yu, Y., Correll, P. H., Heuvel, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conjugated+linoleic+acid+decreases+production+of+pro-inflammatory+products+in+macrophages%3A+Evidence+for+a+PPARy+dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Conjugated linoleic acid decreases production of pro-inflammatory products in macrophages: Evidence for a PPARy dependent mechanism.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1581 (3), 89-99 (2002).</li>
<li>Palombo, J., Ganguly, A., Bistrian, B., Menard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anti-proliferative+effects+of+biologically+active+isomers+of+conjugated+linoleic+acid+on+human+colorectal+and+prostatic+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">The anti-proliferative effects of biologically active isomers of conjugated linoleic acid on human colorectal and prostatic cancer cells.</a> Cancer Letters. 177, 163-172 (2002).</li>
<li>Granda, M., Sinclair, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acids+and+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pharm.+Design%22%5BJournal%5D)">Fatty acids and obesity.</a> Current Pharm. Design. 15 (36), 4117-4125 (2009).</li>
<li>Rosenstein, E., Kushner, L., Kramer, N., Kazandjian, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pilot+study+of+dietary+fatty+acid+supplementation+in+the+treatment+of+adult+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins%2C+Leukotrienes+and+Essential+F.A%22%5BJournal%5D)">Pilot study of dietary fatty acid supplementation in the treatment of adult periodontitis.</a> Prostaglandins, Leukotrienes and Essential F.A. 68 (3), 213-218 (2003).</li>
<li>Ferretti, A., Flanagan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antithromboxane+activity+of+dietary+alpha-linolenic+acid%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins+Leukot.+Essent.+Fatty+Acids%22%5BJournal%5D)">Antithromboxane activity of dietary alpha-linolenic acid: a pilot study.</a> Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 54 (6), 451-455 (1995).</li>
<li>Arpita, C., Pradeep, K. D., Chowdhury, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Fatty+Acids+and+Cholesterol+Present+in+Bile+on+Expression+of+Virulence+Factors+and+Motility+of+Vibrio+cholera%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Effect of Fatty Acids and Cholesterol Present in Bile on Expression of Virulence Factors and Motility of Vibrio cholera.</a> Infection and Immunity. 75 (4), 1946-1953 (2007).</li>
<li>Yamasaki, S., Asakura, M., Neogi, S. B., Hinenoya, A., Iwaoka, E., Aoki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+virulence+potential+of+Vibrio+cholerae+by+natural+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J.+Med.+Res%22%5BJournal%5D)">Inhibition of virulence potential of Vibrio cholerae by natural compounds.</a> Indian J. Med. Res. 133 (2), 232-239 (2011).</li>
<li>WHO | Efforts must be intensified to control Zimbabwe cholera outbreak [WHO PRESS RELEASE] [Internet]. , World Health Organization. Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://www.who.int/csr/don/2009_01_30/en/">http://www.who.int/csr/don/2009_01_30/en/</a> (2010).</li>
<li>Hendriksen, R. S., Price, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Population+Genetics+of+Vibrio+cholerae+from+Nepal+in+2010%3A+Evidence+on+the+origin+of+the+Haitian+outbreak%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Population Genetics of Vibrio cholerae from Nepal in 2010: Evidence on the origin of the Haitian outbreak.</a> mBio. 2 (4), 1-6 (2011).</li>
<li>Schaeffler, A., Gross, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid-induced+induction+of+Toll-like+receptor-4%2Fnuclear+factor-kappa+B+pathway+in+adipocytes+links+nutritional+signaling+with+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Fatty acid-induced induction of Toll-like receptor-4/nuclear factor-kappa B pathway in adipocytes links nutritional signaling with innate immunity.</a> Immunology. 126 (2), 233-245 (2009).</li>
</ol>

De auteurs van deze studie geen financieel belang van de resultaten van dit onderzoek. Financiering voor deze studie werd aan FT verstrekt door Kean University, maar FT is momenteel een medewerker op Kingsborough Community College.

Suggestie van de concentratie van vetzuren en Cholera toxine Hoewel het exacte mechanisme hoe de vetzuren mucosale immuniteit bekend, hebben verschillende studies geprobeerd om de positieve effecten te onderzoeken. Onze studie beoogt methode aan de maximale concentratie van vetzuren die cellen evenals de maximale concentratie van cholera toxine kan tolereren cellen kunnen verdragen zonder een significante invloed op celoverleving te bepalen. Om de concentratie van d...

De gezondheidsvoordelen van vetzuren, zoals oliezuur, linolzuur en linoleenzuur werden en worden gedocumenteerd. Bijvoorbeeld, oliezuur helpt penetratie van lipofiele geneesmiddelen in het lichaam 1,2 vergemakkelijken vermindert coronaire hartziekte met 24% wanneer gelezen verzadigde vetzuren 3 en wordt gebruikt om metabolische ziekten zoals Adrenoleukodystrophy 4 is een X-gebonden behandelen erfelijke aandoening van vetzuurmetabolisme. . Terwijl een noodzakelijke voorloper arachidonzuur in zoogdieren, linolzuur (in tegenstelling oliezuur) niet wordt gesynthetiseerd door het lichaam en moet door externe bronnen zoals lijnzaad consumptie door 5 Studies geven verschillende gezondheidsvoordelen van linolzuur zoals: anti-aging eigenschappen voor de huid; 6 anti-inflammatoire eigenschappen; 7 verminderde proliferatie van colorectale en prostaatkanker cellen; 8 en de mogelijkheid om obesitas te bestrijden en promotie of cardiovasculaire gezondheid. 9 linoleenzuur speelt een rol bij het ​​verminderen van periodontale ontsteking, 10 en moduleren tromboxaan en prostacycline biosynthese. 11 Arpita 12 onderzocht de invloed van gal vetzuren en cholesterol op V. cholerae &#39;s expressie van virulentiefactoren en de beweeglijkheid. Yamasaki 13 aangegeven dat methanol extract van rode chili pepers, en andere natuurlijk gewonnen verbindingen, cholera toxine productie potentieel kunnen verlagen. Het is denkbaar om het gebruik van voedingsmiddelen die rijk zijn in de bovenstaande vetzuren (zoals lijnzaad) bij de preventie en verlichting van infectieziekten zoals cholera door het verstrekken van mucosale immuniteit onderzocht. We onderzoeken verricht om vetzuren te solubiliseren en zou op basis van celproliferatie assays, de maximale concentratie van vetzuren die menselijke intestinale epitheliale cellen kan verdragen zonder nadelige gevolgen cell levensvatbaarheid. We veronderstelden dat oliezuur, linolzuur en linoleenzuur verschaffen een gunstig effect op de levensvatbaarheid van cellen bij lagere concentraties, maar bij hogere concentraties zij toxisch voor de cellen is. Ook oplosbaar choleratoxine en bepaald de maximale concentratie van cholera toxine dat BALB / C muizen macrofagen kan verdragen zonder significant in cellevensvatbaarheid. Onze hypothese is een toxisch effect van cholera toxine op levensvatbaarheid van de cellen, zelfs bij zeer lage niveau. Werkwijze solubiliseren een cholera toxine en te gebruiken om de maximale hoeveelheid van het toxine dat de cellen kunnen tolereren zonder significant in overlevingsvermogen bepalen een voordeel voor toekomstige studies. Bijvoorbeeld kan een combinatie van de bovenstaande methoden worden bepaald of vetzuren cellen te voorzien van mucosale immuniteit tegen cholera infecties. Om het beste van onze kennis, is dit rationeel en methodiek niet onderzocht. Wij discuss hoe onze voorlopige gegevens kunnen worden gebruikt in latere onderzoeken om te bepalen of oliezuur, linolzuur en linoleenzuur cellen te voorzien van mucosale immuniteit tegen cholera-infectie.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Cellen/Reagens</td></tr><tr><td>Mus musculus macrofagen</td><td>ATCC</td><td>ATCC RAW 264.7</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium</td><td>ATCC</td><td>30-2002</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>ATCC</td><td>30-2115</td><td></td></tr><tr><td>Fetaal bovien serum </td><td>Bio-west</td><td>S0250</td><td></td></tr><tr><td>Antibioticum/antimyoticum </td><td>Hyclone</td><td>SV3007901</td><td></td></tr><tr><td>Menselijke intestinale epitheliale cellen </td><td>ATCC</td><td>ATCC CCL-241</td><td></td></tr><tr><td>HybriCare media </td><td>ATCC</td><td>46-X</td><td></td></tr><tr><td>Oleaanzuur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O1008</td><td></td></tr><tr><td>Linolzuur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-1376</td><td></td></tr><tr><td>Linolenzuur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-2376</td><td></td></tr><tr><td>Cholera toxine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8052</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Apparatuur</td></tr><tr><td>BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates</td><td>BD Biosciences</td><td>351172</td><td></td></tr><tr><td>Spectrofotometer met Dynex Revelations 4.22 software</td><td>Dynex</td><td>91000101</td><td></td></tr></tbody></table>

bepaling van de toelaatbare vetzuren en cholera toxine concentraties behulp human intestinal epitheelcellen en balb / c muis macrofagen

Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages

De positieve rol van vetzuren in de preventie en verlichting van non-humane en humane ziekten werden en uitgebreid gedocumenteerd. Deze rollen zijn invloeden op infectieuze en niet-infectieuze ziekten, zoals het voorkomen van ontsteking en mucosale immuniteit tegen infectieziekten. Cholera is een acute intestinale ziekte veroorzaakt door de bacterie Vibrio cholerae. Het komt voor in ontwikkelingslanden en indien onbehandeld, kan leiden tot de dood. Terwijl voor cholera vaccins bestaan, zijn ze niet altijd effectief en andere preventieve methoden nodig. We stellen om aanvaardbare concentraties van drie vetzuren (oliezuur, linolzuur en linoleenzuur) en cholera toxine met de muis BALB / C macrofagen en humane intestinale epitheelcellen, respectievelijk bepalen. We oplosbaar bovengenoemde vetzuren en gebruikt celproliferatie assays om de concentratie trajecten en specifieke concentraties van de vetzuren die niet vastt schadelijk voor de menselijke intestinale epitheliale cellevensvatbaarheid. We oplosbaar choleratoxine en gebruikt in een test om de concentratie trajecten en specifieke concentraties van choleratoxine die statistisch cellevensvatbaarheid doen afnemen in BALB / C macrofagen bepalen. We vonden de optimale vetzuur concentraties tussen 1,5 ng / ul, en die van cholera toxine &lt;30 ng per behandeling. Deze gegevens kunnen toekomstige studies die tot doel hebben een beschermende mucosale rol van vetzuren in de preventie of verlichting van cholera infecties te helpen.

Bepaling van de optimale concentratie van Fatty Acids De optimale concentratie van vetzuren wordt gedefinieerd als de maximale concentratie waarbij de celgroei is vergelijkbaar met of groter dan die van de controle cellen met relatief lage variabiliteit in resultaten. Om de optimale concentratie van oliezuur bepalen werden linolzuur en linoleenzuur cellen aanvankelijk behandeld met verschillende concentraties van elk vetzuur in grote stappen en later met kleinere stappen. Figuur 1</stro...

We stellen om aanvaardbare concentraties van drie vetzuren (oliezuur, linolzuur en linoleenzuur) en cholera toxine dat niet significant en negatief effect hadden op overleving van de cel door oplossen van de vetzuren en de toxine en het gebruik ervan in de overleving van de cel assays bepalen.

Bepaling van de toelaatbare vetzuren en Cholera toxine Concentraties behulp Human Intestinal epitheelcellen en BALB / c muis macrofagen

The positive role of fatty acids in the prevention and alleviation of non-human and  human diseases have been and continue to be extensively documented. ...

Het algemene doel van deze procedure is het bepalen van tolereerbare concentraties van vetzuren en choleratoxine die de celoverleving niet negatief beïnvloeden. Dit wordt bereikt door eerst het juiste type cellen te kweken. De tweede stap is het incuberen van de cellen met verschillende concentraties van de drie te testen vetzuren of met het choleratoxine.Na 24 uur wordt de celoverleving beoordeeld met behulp van een MTT-assay. Uiteindelijk tonen de spectrometriegegevens van de MTT-assay de optimale concentraties van vetzuren en choleratoxine aan waarmee cellen kunnen worden behandeld zonder dat de overleving significant afneemt. De implicaties van deze techniek strekken zich uit tot de preventie van cholera-infecties, aangezien vaccinaties niet altijd succesvol zijn.Voor alle co-toxinebepalingen en voor grootschalige concentratiebepaling van vetzuren worden macrophages van Mus musculus uit bowel C-muizen gebruikt; de cellen worden gekweekt in een van twee media: DMEM met L-glutamine aangevuld met 10% foetaal runderserum en 1% antibioticum-antimycoticum of RPMI 1640 basismedium aangevuld met 10% foetaal runderserum, 5% L-glutamine en 1% antibioticum-antimycoticum. Kweek voor dit pr

determination-tolerable-fatty-acids-cholera-toxin-concentrations

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Hier hebben we details van een methodologie voor de snelle isolatie van de muis intestinale dendritische cellen (DC's) en macrofagen. Fenotypische karakterisering van intestinale DCs en macrofagen wordt uitgevoerd met behulp van multi-kleuren flowcytometrische analyse, terwijl magnetische kraal verrijking gevolgd door celsortering wordt gebruikt om zeer zuivere populaties voor functionele studies opleveren.

Isolatie en karakterisering van dendritische cellen en macrofagen van de muis Darm

Een high-throughput assay in vitro fenotype Salmonella of andere bacteriële vereniging, invasie en replicatie in fagocytische cellen met hoge doorvoer capaciteit ontwikkeld. De methode werd gebruikt om Salmonella-gen knock-out mutantstammen evalueren op hun betrokkenheid in gastheer-pathogeen interacties.

High-throughput Assay om Phenotype Salmonella enterica Typhimurium Association, Invasion, en replicatie in macrofagen

We beschrijven de kwantificering van cytosolische en vacuolaire Salmonella typhimurium in uit beenmerg afgeleide macrofagen met behulp van differentiële digitonine permeabilisatie.

Kwantificering van cytosolische vs. vacuole<em&gt; Salmonella</em&gt; In het Primair macrofagen door Differential Permeabilisatie

De novo lipogenese en β-vetzuuroxidatie vormen belangrijke metabole routes in hepatocyte, trajecten die zijn verstoord in verschillende metabole stoornissen, met inbegrip van vette lever ziekte. Hier laten we de isolatie van muizen primaire hepatocyten en beschrijven kwantificering van β-vetzuuroxidatie en lipogenese.

Bepaling van vetzuuroxidatie en Lipogenese in Mouse primaire hepatocyten

Caco-2 cellen kunnen dienen als een in vitro model om het enterocyt transport van lipiden, en in vet oplosbare geneesmiddelen/vitaminen te bestuderen. Het permeabele membraansysteem scheidt het apicale van het basolaterale compartiment, terwijl het lentivirusuitdrukkingssysteem een effectieve genoverexpressiemethode biedt. De isolatie van lipoproteïnen wordt bevestigd door TEM.

Met behulp van Caco-2 cellen te Lipid Transport studie van de Darm

Dit protocol beschrijft de cefoperazon muismodel van Clostridium difficile infectie (CDI) met een klinisch relevante en genetisch handelbaar stam, R20291. Nadruk op klinische ziekte monitoring, C. difficile bacteriële opsomming, toxine cytotoxiciteit en histopathologische veranderingen in heel CDI in een muismodel worden beschreven in het protocol.

-Cefoperazone behandelde muismodel van klinisch relevante<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; Strain R20291

Twee methoden worden hier voorgesteld om te bepalen van intestinale barrièrefunctie. Een epitheliale meter (volt/ohm) wordt gebruikt voor metingen van de elektrische weerstand van de transepithelial van gekweekte epithelen rechtstreeks in weefselkweek wells. Bij muizen, wordt de FITC-dextran maagsonde methode gebruikt om te bepalen de intestinale permeabiliteit in vivo.

In Vitro en In Vivo benaderingen te bepalen van intestinale epitheliale cel permeabiliteit

Dit protocol beschrijft een assay voor de karakterisering van lipide druppel (LD) vorming in humane intestinale organoïden bij stimulatie met vetzuren. We bespreken hoe deze assay wordt gebruikt voor de kwantificering van LD-vorming, en hoe het kan worden gebruikt voor screening met hoge doorvoer voor geneesmiddelen die de LD-vorming beïnvloeden.

Een op fluorescentie gebaseerde assay voor de karakterisering en kwantificering van de vorming van lipiden druppeltjes in humane intestinale Organoïden

Ontregelde intestinale epitheliale barrièrefunctie en immuunresponsen zijn kenmerken van inflammatoire darmziekten die slecht worden onderzocht vanwege een gebrek aan fysiologische modellen. Hier beschrijven we een muis intestinale lus model dat een goed gevasculariseerd en exteriorized darmsegment gebruikt om mucosale permeabiliteit en leukocyten rekrutering in vivo te bestuderen.

Functionele beoordeling van intestinale permeabiliteit en neutrofiele transepitheliale migratie bij muizen met behulp van een gestandaardiseerd intestinale lusmodel

Escherichia coli veroorzaakt sepsis bij pasgeborenen die de bacteriën rond het moment van geboorte binnenkrijgen. Het proces dat betrokken is bij het vermogen van E. coli om van het enterische kanaal naar de bloedbaan te reizen, is slecht begrepen. Dit in vitro model beoordeelt het vermogen van E. coli stammen om door de darmepitheelcellen te reizen.

Beoordeling van intestinale transcytose van neonatale Escherichia coli bacteriëmie-isolaten

Hier beschrijven we de constructie van een basis driedimensionaal (3D) intestinale cellijnmodelsysteem en een paraffine-inbeddingsprotocol voor lichtmicroscopische evaluatie van vaste darmequivalenten. Kleuring van geselecteerde eiwitten maakt de analyse van meerdere visuele parameters van een enkel experiment mogelijk voor mogelijk gebruik in preklinische onderzoeken naar geneesmiddelen.

Basis driedimensionaal (3D) darmmodelsysteem met een immuuncomponent

Leer hoe je veilige concentraties van vetzuren en choleratoxine bepaalt met behulp van menselijke intestinale epitheelcellen en BALB/c-muismacrofagen. Deze MTT-assay-methode ondersteunt onderzoek naar celoverleving en cholera-preventie.

Bepaling van de toelaatbare vetzuren en Cholera toxine Concentraties behulp Human Intestinal epitheelcellen en BALB / c muis macrofagen (Video) | JoVE Journal

Bepaling van de toelaatbare vetzuren en Cholera toxine Concentraties behulp Human Intestinal epitheelcellen en BALB / c muis macrofagen

Meer video's verkennen