Name: Een niet-invasieve methode voor In situ Bepaling van het Koppelen van Succes in vrouwelijke Amerikaanse Kreeften ( Homarus americanus) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 18 s
Description: Leer een niet-invasieve methode om het koppelingssucces van vrouwelijke Amerikaanse kreeften (Homarus americanus) in situ te bepalen. Deze techniek helpt onderzoekers de voortplantingsdynamiek in zwaar beviste populaties te begrijpen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen graag alle New England commerciële lobstermen wiens boten mochten we proeven van dank - hun medewerking wordt zeer gewaardeerd. Daarnaast danken wij Little Bay Lobster Company (Newington, NH) en Champlin&#39;s Seafood (Point Judith, RI) die liet ons toe om steekproeven uit te voeren bij hun faciliteiten. De volgende UNH studenten van onschatbare waarde hulp in deze studie: Haley Wit, Françoise Morrison, Sarah Havener, Audra Chaput, en mei Grose. Dit project werd ondersteund door subsidies van NH SeaGrant tot WHW (project # R/CFR-11) en een UNH Marine Program Grant JSG.

Deel A: Het gebied Sampling Techniek 1. Vrouw Metingen <ol><li> Voor elk vrouwtje kreeft, meet de lengte van de schaal (CL) en de breedte van de tweede abdominale segment van de dichtstbijzijnde 1,0 mm met een paar beugels. OPMERKING: De tweede abdominale segment wordt gemeten omdat de breedte van de buik (waar vrouwtjes dragen hun eieren) is een indicator van seksuele rijpheid. Daarnaast kan het voordelig zijn om na te gaan de rui podium om later overeenkomen deze gegevens met reproductieve stadium (zie stap 1.2). </li><li> Clip een kleine distale deel van een van de abdominale pleopods (een standaard methodologische protocol kreeften) en bewaar de pleopod in schoon zeewater om later te bekijken met een dissectiemicroscoop 9. OPMERKING: Deze stap kan ook de aanwezigheid van cement klieren op de pleopods, wat een indicatie is dat vrouwen zich voorbereiden op hun eieren 10 extruderen zijn onthullen. </li></ol> 2. Naald Insertion <ol><li> Steek de naald (18 G, zie tabel 1) ~ 1 cm in de rudimentaire bakje, schuin in de richting van de staart bij ~ 45 ° (figuur 1). Opmerking: In kreeften met intacte sperma pluggen, kan de naald weerstand ontmoeten tijdens inbrengen, aangezien het wordt geduwd door het sperma plug vóór het bereiken van de hoogste concentratie van sperma aan de onderkant van de rudimentaire houder (fig. 1). NB: De aanwezigheid van de stekker, op zich, is een betrouwbare indicator die kreeften hebben gepaard. In sommige dieren is er mogelijk weinig weerstand zijn, possibly omdat er geen spermatofoor aanwezig is, de spermatofoor klein is, is het nog steeds niet in een plug gehard, of het kan zijn al gebruikt om een ​​of meer legsels bevruchten. </li></ol><img alt="Figuur 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50498/50498fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50498/50498fig1.jpg" width = &quot;600px&quot; /&gt; Figuur 1. Naald inbrengen en uitzicht op kreeft rudimentaire bakje. Plaatsen van de stompe getipt naald in de rudimentaire vergaarbak van de kreeft op een sperma monster te behandelen. De hoek en diepte van de naald zijn beide van cruciaal belang voor het verkrijgen van consistente monsters. Rechts: Mening van een rudimentaire vergaarbak die is ontleed en verticaal gesplitst. Het sperma plug neemt de bovenste of buitenste deel van de houder, terwijl de spermatozoa zich onderaan (diepste punt) van de houder. Het is belangrijk op te merken dat de bemonstering op deze diepte de houder kan lek raken en resulteren in een bloed-verontreinigd monster. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50498/50498fig1highres.jpg" target="_blank">Klik hier voor grotere afbeelding</a> . 3. Penetreren van de Sperma Plug <ol><li> Na de eerste insertie, steiler de hoek van de naald bijna verticale (loodrecht op de lichaamsas), en zeer langzaam beginnen te werkennaar beneden in de houder. </li><li> Houd de naald gekanteld staat in een hoek, zodat de punt iets gericht is naar de staart. In dit geval wordt de naaldpunt wordt samendrukken van de bovenkant van de plug, totdat het uiteindelijk dringt in de matrix. </li><li> Langzaam blijven duwen de naald naar beneden tot weerstand nogmaals wordt gevoeld - dit is de bodem van het bakje en waar het monster is genomen. </li></ol> 4. Sperma Removal <ol><li> Verwijder een monster (vaak met expander materiaal vloeibaar sperma en andere vloeistof) vanaf de onderkant van de houder en breng de monster in een gelabelde 2,0 ml plastic buis. </li><li> Spoel het bakje met ~ 0,1-0,5 ml koud zeewater. </li><li> Verwijder ongeveer 0,3 ml vloeistof en in dezelfde buis. </li><li> WINKEL sperma monsters op ijs tot zij in het laboratorium onderzocht. Deel B: Onderzoek van sperma monsters in het lab OPMERKING: Monsters uit de rudimentaire houders van de individuele l<html> obsters moeten worden onderzocht om te bepalen of zaadcellen aanwezig of afwezig waren. </li><li> Verwijder ~ 50 ul van vloeistof van elke plastic buis plaats op een glasplaatje met een dekglas en aanzicht 100x met een samengestelde microscoop. </li><li> Score monsters: sperma schaars, talrijk, of afwezig is (deze studie niet gekwantificeerd werkelijke aantal zaadcellen, figuur 2). </li></ol><img alt="Figuur 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50498/50498fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50498/50498fig2.jpg" width="600px" /> Figuur 2. Kreeft spermastaal beelden. Beelden van kreeft sperma monsters genomen van rudimentaire vergaarbak van een vrouw, zoals gezien met een samengestelde microscoop bij 40x vergroting. Afbeelding aan de linkerkant toont een voorbeeld dat veel sperma bevatte, terwijl de andere (rechts) toont een spaarzame monster (schaal bar = 10 micrometer).. Jpg &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; Klik hier voor grotere afbeelding.

<ol><li>FAO and Agriculture Organization of the United Nations). Fisheries and Aquaculture Department. , Available from: 
 
 <a target="_blank" href="http://www.fao.org">http://www.fao.org</a> (2012).</li>
<li>MacDiarmid, A., Butler, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+economy+and+limitation+in+spiny+lobsters%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Ecol.+Sociobiol%22%5BJournal%5D)">Sperm economy and limitation in spiny lobsters.</a> Behav. Ecol. Sociobiol. 46, 14-24 (1999).</li>
<li>Kendall, M. S., Wolcott, D. L., Wolcott, T. G., Hines, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+male+size+and+mating+history+on+sperm+content+of+ejaculates+of+the+blue+crab+Callinectes+sapidus%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Influence of male size and mating history on sperm content of ejaculates of the blue crab Callinectes sapidus.</a> 230, 235-240 (2002).</li>
<li>Sato, T., Ashidate, M., Goshima, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+male+mating+frequency+and+male+size+on+ejaculate+size+and+reproductive+success+of+female+spiny+king+crab%2C+Parolithodes+brevipes%5BTitle%5D)+AND+%22Mar.+Ecol.+Prog.+Ser%22%5BJournal%5D)">Effects of male mating frequency and male size on ejaculate size and reproductive success of female spiny king crab, Parolithodes brevipes.</a> Mar. Ecol. Prog. Ser. 296, 251-262 (2005).</li>
<li>Sato, T., Goshima, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impacts+of+male-only+fishing+and+sperm+limitation+in+manipulated+populations+of+an+unfished+crab%2C+Hapalogaster%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Impacts of male-only fishing and sperm limitation in manipulated populations of an unfished crab, Hapalogaster.</a> 313, 193-204 (2006).</li>
<li>Rondeau, A., Sainte-Marie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variable+mate-guarding+time+and+sperm+allocation+by+male+snow+crabs+%28Chionoecetes+opilio%29+in+response+to+sexual+competition%2C+and+their+impact+on+the+mating+success+of+females%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Bull%22%5BJournal%5D)">Variable mate-guarding time and sperm allocation by male snow crabs (Chionoecetes opilio) in response to sexual competition, and their impact on the mating success of females.</a> Biol. Bull. 201, 204-217 (2001).</li>
<li>Waddy, S. L., Aiken, D. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWaddy%2C+SL+%22Mating+and+insemination+in+the+Ameri+can+lobster%2CHomarus+americanus.+Crustacean+sexual+behavior%22">Mating and insemination in the Ameri can lobster,Homarus americanus. Crustacean sexual behavior</a>. Bauer, R. T., Martin, J. W. , Columbia University Press. NY. 126-144 (1990).</li>
<li>Johnson, K. J., Goldstein, J. S., Watson, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+methods+for+determining+the+fertility+status+in+early-stage+American+lobster%2C+Homarus+americanus%2C+eggs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Crust.+Biol%22%5BJournal%5D)">Two methods for determining the fertility status in early-stage American lobster, Homarus americanus, eggs.</a> J. Crust. Biol. 31, 693-700 (2011).</li>
<li>Aiken, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proecdysis%2C+setal+development%2C+and+molt+prediction+in+the+American+lobster+%28Homarus%29%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Proecdysis, setal development, and molt prediction in the American lobster (Homarus).</a> 30, 1337-1344 (1973).</li>
<li>Aiken, D. E., Waddy, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cement+gland+development%2C+ovary+maturation%2C+and+reproductive+cycles+in+the+American+lobster+Homarus+americanus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Crust.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cement gland development, ovary maturation, and reproductive cycles in the American lobster Homarus americanus.</a> J. Crust. Biol. 2, 315-327 (1982).</li>
<li>Pugh, T. L., Goldstein, J. S., Lavalli, K. L., Clancy, M., Watson, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((At-sea+determination+of+female+American+lobsters+%28Homarus+americanus%29+mating+activity%3A+Patterns+vs.+expectations%5BTitle%5D)+AND+%22Fish.+Res%22%5BJournal%5D)">At-sea determination of female American lobsters (Homarus americanus) mating activity: Patterns vs. expectations.</a> Fish. Res. 147, 327-337 (2013).</li>
<li>Bauer, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogenetic+trends+in+sperm+transfer+and+storage+complexity+in+decapod+crustaceans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Crust.+Biol%22%5BJournal%5D)">Phylogenetic trends in sperm transfer and storage complexity in decapod crustaceans.</a> J. Crust. Biol. 6, 313-325 (1986).</li>
<li>Talbot, P., Helluy, S. Reproduction and embryonic development. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTalbot%2C+P+%22Biology+of+the+Lobster%3A+Homarus+americanus%22">Biology of the Lobster: Homarus americanus</a>. Factor, J. R. , Academic Press. NY. 177-216 (1995).</li>
<li>Cooper, R. A., Uzmann, J. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCooper%2C+RA+%22Ecology+of+juvenile+and+adult+Homarus.+The+biology+and+management+of+lobsters%22">Ecology of juvenile and adult Homarus. The biology and management of lobsters</a>. Cobb, J. S. 2, Academic Press. NY. 97-142 (1980).</li>
<li>Estrella, B. T., McKiernan, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catch-per-unit-effort+and+biological+parameters+from+the+Massachusetts+coastal+lobster+%28Homarus+americanus%29+resource%3A+description+and+trends%5BTitle%5D)+AND+%22NOAA+Tech.+Rep.+NMFS%22%5BJournal%5D)">Catch-per-unit-effort and biological parameters from the Massachusetts coastal lobster (Homarus americanus) resource: description and trends.</a> NOAA Tech. Rep. NMFS. 81, (1989).</li>
<li>Waddy, S. L., Aiken, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+fertilization+and+consecutive+spawning+in+large+American+lobster%2C+Homarus+americanus%5BTitle%5D)+AND+%22Can.+J.+Fish.+Aquat.+Sci%22%5BJournal%5D)">Multiple fertilization and consecutive spawning in large American lobster, Homarus americanus.</a> Can. J. Fish. Aquat. Sci. 43, 2291-2294 (1986).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atlantic+States+Marine+Fisheries+Commission+%28ASMFC%29.+American+lobster+stock+assessment+report+for+peer+review%5BTitle%5D)+AND+%22ASMFC+Stock+Assessment%22%5BJournal%5D)">Atlantic States Marine Fisheries Commission (ASMFC). American lobster stock assessment report for peer review.</a> ASMFC Stock Assessment. , Washington, D.C. (2009).</li>
</ol>

De auteurs verklaren geen belangenconflicten.

Deze video en papier omtrek en tonen een werkwijze voor het bepalen of vrouwelijke kreeften succes gedekt. Deze benadering is eenvoudig genoeg dat het kan worden gebruikt voor grootschalige bemonstering van kreeften op zee door verschillende gebruikers. De methode is gebaseerd op het detecteren van de aanwezigheid van een spermatofoor in de rudimentaire vergaarbak die wordt doorgegeven van man naar vrouw kreeften tijdens de paring. Deze spermatoforen gedeeltelijk verharden tot een zaadcel plug kort nadat ze zijn afgezet...

<html> Amerikaanse kreeft (Homarus americanus) is een van de meest productieve visserij in de Noord-Atlantische Oceaan (~ 56.000 mt in 2011, ter waarde van meer dan $ 390.000.000) 1. Echter, er is een algemeen gebrek aan begrip over de reproductieve dynamiek van deze soort in het wild levende populaties. Het genereren van meer nauwkeurige schattingen van de reproductieve output, zoals het aantal en grootte van individuen die actief deelnemen aan de voortplanting, kan de evaluatie van de visstand te verbeteren. Zo hebben vrouwen die verhinderd zijn hun volledige reproductieve potentieel bereiken als gevolg van sperma beperking is geïdentificeerd als een zorg voor verschillende commercieel geëxploiteerde mariene schaaldieren inclusief: langoesten 2, blauwe krabben 3, koning krabben 4, steen krabben 5, en sneeuw krabben 6. Het algemene doel is om te bepalen of sperma beperking een factor zou kunnen zijn in bepaalde gebieden van de Amerikaanse kreeft visserij ook. nt &#39;&gt; De eerste tekenen van een mogelijke beperking sperma probleem kreeften waargenomen tijdens het uitvoeren van een onafhankelijke tagging studie met eierdragende vrouwelijke kreeften (met zichtbaar intacte onlangs geëxtrudeerd eieren). Herover rapporten van vissers aangegeven dat ~ 15% van deze dieren was gedaald hun ei klauwen na slechts 1-2 maanden. De werkhypothese was dat sommige kreeften werden met eieren die niet was bevrucht en, als gevolg daarvan, &#39;viel&#39; 7. Voorlopige gegevens van een volgende studie hebben het feit bevestigd dat kreeften zal extrusie van eieren zelfs als ze niet met succes gekoppeld en deze onbevruchte eitjes worden alleen uitgevoerd voor ~ 1 maand 8. Daarom, gezien de constatering van de vrouwen het dragen van onbevruchte eitjes in natuurlijke populaties, we gevraagd om te bepalen in welke mate sperma beperking zouden kunnen bijdragen aan een submaximale niveau van reproductie door seksueel volwassen kreeften. Om dit doel te bereiken, werd een techniek ontwikkeld om de spermato detecterenPhore afgezet door mannetjes tijdens de paring. Dit document en video beschrijven een niet-invasieve, eenvoudige methode ontwikkeld voor het bepalen van de paring succes van vrouwelijke kreeften. De techniek kan snel en betrouwbaar worden gebruikt op zee, hetzij aan boord van onderzoek of commerciële vissersvaartuigen. De details van deze bemonsteringsmethode en enkele representatieve resultaten worden aan de toepassing van de techniek illustreren.

<table><tbody><tr><td>Calipers</td><td>Mitutoyo Digimatic</td><td>500-196-20</td><td>http://www.globalindustrial.com</td></tr><tr><td>3 ml Luer-Lok syringe</td><td>Beckton-Dickinson</td><td>309585</td><td>www.bd.com</td></tr><tr><td>Monoject aluminium hub blunt needles, 18 G x 1</td><td>Webster Veterinary</td><td>8881202348</td><td>www.mywebstervet.com</td></tr><tr><td>2.0 ml Plastic storage tubes</td><td>Eppendorf</td><td>wu-06333-72</td><td>http://www.coleparmer.com</td></tr><tr><td>Styrofoam koeler met ijs</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Compound lichtmicroscoop</td><td>Olympus</td><td>BH System</td><td>http://www.olympusamerica.com</td></tr><tr><td>Glazen zijden met dekglas</td><td></td><td></td><td>75 mm x 25 mm, ~1 mm dikte</td></tr><tr><td>Pipettor met wegwerp tips</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

een niet-invasieve methode voor<em&gt; in situ</em&gt; bepaling van het koppelen van succes in vrouwelijke amerikaanse kreeften (<em&gt; homarus americanus</em&gt;)

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters (Homarus americanus)

Ondanks het feit dat een van de meest productieve visserij in het noordwestelijk deel van de Atlantische Oceaan, er nog veel onbekend is over de natuurlijke voortplanting dynamiek van Amerikaanse kreeften. Recent werk in uitgebuit schaaldieren populaties (krabben en kreeften) suggereert dat er omstandigheden zijn waarin volwassen vrouwtjes in staat zijn om hun volledige potentieel te bereiken reproductieve vanwege sperma beperking. Om deze mogelijkheid in verschillende gebieden van de Amerikaanse kreeft visserij onderzoeken, werd een betrouwbare en niet-invasieve methode ontwikkeld voor het bemonsteren van grote aantallen vrouwelijke kreeften op zee. Deze werkwijze omvat het plaatsen van een stompe getipt naald in de vrouwelijke vruchtbare houder om de aanwezigheid of afwezigheid van een sperma plug bepalen en een monster dat kan worden onderzocht op de aanwezigheid van sperma trekken. Een reeks control studies werden uitgevoerd bij het dok en in het laboratorium om de betrouwbaarheid van deze techniek te testen. Deze inspanningen meebrengt bemonstering 294 vrouwelijke kreeften te bevestigen dat de aanwezigheid ofa sperma plug was een betrouwbare indicator van sperma binnen de houder en dus paring. Dit document beschrijft de methodologie en de resultaten van een subset van de totale vrouwelijke bemonsterde resultaten. Van de 230 vrouwelijke kreeften bemonsterd uit George&#39;s Bank en Cape Ann, MA (grootte range = 71-145 mm in lengte van de schaal), 90,3% waren positief voor sperma. Mogelijke verklaringen voor het ontbreken van zaadcellen in sommige vrouwen zijn onder andere: onvolwassenheid (gebrek aan fysiologische rijpheid), afbraak van het sperma stekker na gebruik om een ​​koppeling van eieren bevruchten, en gebrek aan paring activiteit. De onderzoeken geven aan dat deze techniek voor de behandeling van de paarsucces vrouwelijke kreeften is een betrouwbare proxy die kan worden gebruikt in het veld tot reproductieve activiteit documenteren natuurlijke populaties.

<html> De hier vermelde gegevens zijn voor een subset van vrouwelijke kreeften die ontstaan ​​uit zowel nearshore en offshore locaties. De nearshore groep bestond uit 44 kreeften die zijn gevangen in de kustwateren in de buurt van Cape Ann, Massachusetts en vervoerd koelers naar het laboratorium voor onderzoek. Een totaal van 186 offshore-kreeften werden gevangen op George&#39;s Bank en bemonsterd met een commercieel bedrijf faciliteit in New Hampshire. Sperma monsters werden verkregen van al...

-Visserij-geïnduceerde veranderingen om uitgebuit schaaldier visserij, zoals de Amerikaanse kreeft visserij, kan mogelijk invloed hebben op hun reproductieve dynamiek, wat leidt tot een vermindering van de paring succes. Het doel van deze studie was om een ​​niet-invasieve methode voor het vaststellen van de paring succes van vrouwelijke kreeften die fysiologisch of functioneel volwassen kunnen ontwikkelen.

Een niet-invasieve methode voor<em&gt; In situ</em&gt; Bepaling van het Koppelen van Succes in vrouwelijke Amerikaanse Kreeften (<em&gt; Homarus americanus</em&gt;)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American ...

De Amerikaanse kreeft is een iconisch kenmerk in het gehele geografische verspreidingsgebied, van Atlantic Canada tot New England. In veel gebieden vormt deze soort het doelwit van een van de grootste visserijen op een enkelvoudige soort in het oosten van de Verenigde Staten. Het voortdurende succes van deze visserij wordt toegeschreven aan diverse beheermaatregelen, waaronder biologische controles die bedoeld zijn om de kuitdragende populatie te behouden.Deze regelgeving omvat minimale en maximale maatvoorschriften, bescherming voor eidragende vrouwtjes en een verbod op de vangst van vrouwtjes met een inkeping in het schild (v-notch), die worden beschouwd als bewezen fokkers. De toekomst van de kreeftenvisserij is mede afhankelijk van een gezonde aanvoer van nieuwe rekruten, wat weer afhankelijk is van het succes van het paringssysteem van de kreeft. De sterk geëxploiteerde aard van deze visserij, vergelijkbaar met andere schaaldierenvisserijen wereldwijd, kan echter de reproductieve dynamiek van deze soort beïnvloeden.Daarom was het doel van dit werk om een eenvoudige, niet-invasieve methode te ontwikkelen om het paringssucces van seksueel volwassen vrouwelijke kreeften vast te stellen. Het geslacht van een kreeft wordt het beste onderscheiden door naar de ventrale zijde te kijken; links is een vrouwtje te zien, dat primair wordt gekenmerkt door het eerste paar PLE-podia, die plat en geveerd zijn. Vrouwtjes hebben daarnaast een ovaalvormig seminal receptacle waarin zij het door het mannetje overgedragen sperma opslaan.Het mannetje is rechts te zien, herkenbaar aan het eerste paar pleopoden dat enigszins kegelvormig en verhard is. Deze gonopoden helpen bij het overbrengen van de spermatofoor naar het seminale receptaculum van het vrouwtje.Ook de gonoporen van het mannetje zijn getoond, waaruit deze SPO-metafoor wordt geëxtrudeerd. Tijdens het hofmakerijproces vertonen mannelijke en vrouwelijke kreeften complex gedrag, waaronder chemisch gemedieerde communicatie en het delen van een holte. Het delen van een holte vindt zowel voor als na de vervelling van het vrouwtje plaats en kan worden geïnterpreteerd als bewaking door het mannetje; de paring vindt gewoonlijk binnen een uur na de vervelling van het vrouwtje plaats en duurt slechts zeer kort.Het mannetje draait het pas vervelde vrouwtje op haar rug om de S SPM-metafoor over te dragen naar haar zaadopslagorganen. Een vrouwelijke kreeft is in staat om sperma van een paringsgebeurtenis twee jaar of langer op te slaan, waarna zij haar eikluif uitscheidt. De eieren zijn bevestigd aan de pleopoditen van het vrouwtje aan de onderzijde van haar abdomen.De ontwikkeling van de eieren duurt over het algemeen negen tot 11 maanden en is sterk afhankelijk van de temperatuur van het zeewater. De eieren komen in het voorjaar en de zomer uit als planktonische larven en doorlopen verschillende larvale stadia voordat ze als juvenielen naar de bodem zakken. De methode die we hier beschrijven biedt een techniek om spermaproeven te verkrijgen van een groot aantal vrouwelijke kreeften terwijl men zich aan boord bevindt van commerciële kreeftenvissersschepen of andere onderzoeksplatforms op zee.Een naald met een stompe punt wordt in het zaadreservoir van het vrouwtje ingebracht en een deel van de spermatofoor met het bijbehorende sperma wordt verwijderd. Het spermaproefmonster kan vervolgens worden bewaard en later in het laboratorium worden onderzocht. Vanwege de structuur van het zaadreservoir hebben we geen mortaliteit vastgesteld in verband met deze techniek.Benodigdheden voor veldmonsters omvatten een koelbox met ijs om monsters koud te houden, monsterbuisjes van twee milliliter. Wij hebben plastic Eppendorf-buisjes gebruikt, een stompe naald van 18 gauge bevestigd aan een spuit van drie cc en koud, schoon zeewater.Steriel is ideaal, maar niet noodzakelijk. Daarnaast heeft u een schuifmaat nodig om de morfometrische kenmerken van de kreeft te registreren, zoals de lengte van de carpus, de breedte van het abdomen en, indien gewenst, de afmetingen van de klauwen. Vooraf gedrukte gegevensbladen worden gebruikt om deze meetwaarden samen met het identificatienummer van de monsterbuisjes vast te leggen.De bemonsteraar moet ook details registreren zoals de datum, de bemonsteringslocatie en de methode van vangst via een commerciële val. Meet bijvoorbeeld elke kreeft tot op de dichtstbijzijnde millimeter met een schuifmaat; de carapaxlengte moet dorsaal worden gemeten vanaf de achterkant van de oogkas tot aan het uiteinde van de carapax. Soms kunnen aanvullende metingen, zoals de breedte van het abdomen, nuttig zijn voor het schatten van een rijpheidsindex.Meet vervolgens met een schuifmaat de standaard carapaxlengte. Draai het dier daarna op de buik om de breedte van het abdomen te meten. Om het spermanmonster uit het seminale receptakel te verzamelen, houdt u de vrouwelijke kreeft op de buik vast met het abdomen naar u toe.Steek de naald van de spuit in het zaadvat. Als er een spermatofoor aanwezig is, zal er een zeer stevige zaadprop zijn. U moet voorzichtig penetreren, de spuit legen in een vooraf gelabelde buis, de spuit vullen met een kleine hoeveelheid schoon zeewater en dit in het zaadvat injecteren.Dit helpt bij het scheiden van de sperma van de harde plug. Zet de zuiger vervolgens opnieuw omhoog en breng dit aanvullende monster over in dezelfde monsterbuis. Zowel de hoek als de diepte van de naald zijn cruciaal voor het verkrijgen van consistente monsters.Op deze afbeelding is het seminale receptaculum gedissekeerd en verticaal gesplitst. De spermaplug bevindt zich in het bovenste gedeelte van het receptaculum, terwijl spermatozoa zich onderaan bevinden, op het diepste punt van het receptaculum. Het receptaculum is ongeveer een centimeter diep, afhankelijk van de grootte van het vrouwtje, en de naald moet door de harde plug dringen om de spermaproef te verzamelen.Zorg ervoor dat u niet door de schelpachtige substantie onderin het reservoir drukt. We zullen nu het bemonsteringsproces op een lager tempo tonen, in een laboratoriumomgeving.We raden iedereen die deze techniek wil gebruiken aan om eerst in het laboratorium te oefenen voordat men probeert monsters in het veld te verzamelen. Houd de kreeft opnieuw vast met de ventrale zijde naar boven en het abdomen naar u toe. Gebruik een stompe naald, beginnend onder een hoek van 45 graden met de punt richting het abdomen, om het zaadreservoir te penetreren en te testen op een zaadprop.Indien er een plug aanwezig is, zal de weerstand hier voelbaar zijn bij het uitoefenen van constante druk. Draai de naald lichtjes om deze penetratie te vergemakkelijken. Duw door de spermaplug heen en voer de naald ongeveer één centimeter in, zoals aangegeven door de zwarte referentiemarkering op de getoonde naald.Leeg de spuit in een monsterbuis. Vul de spuit vervolgens met een zeer kleine hoeveelheid koud, vers zeewater om het zaadreservoir door te spoelen en leeg de inhoud opnieuw in de monsterbuis tussen de kreeften door. Zorg ervoor dat de spuit grondig wordt gewassen om contaminatie te voorkomen.Veeg de naald schoon en vul en ledig de spuit vervolgens meerdere keren om ervoor te zorgen dat eventueel monstermateriaal is weggespoeld. Voordat u een andere kreeft bemonstert, raden wij aan om de spuit en naald na enkele keren gebruik te vervangen voor de verwerking en identificatie van sperma. U heeft een 200 µL pipette, wegwerppipetpunten, objectglazen en dekglasjes nodig.Neem een buisje met een spermaproef en verwijder ongeveer 200 µL van het vloeibare materiaal. Pipetteer dit op een voorzien van een label objectglas met dekglas. Bepaal met een standaard samengestelde microscoop bij een vergroting van 100 x de hoeveelheid aanwezige spermacellen. Spermacellen op het objectglas kunnen in diverse posities georiënteerd zijn, waaronder verticale en laterale aanzichten.Zoals te zien is in deze voorbeeldafbeeldingen, raden we aan om kwalitatieve beschrijvingen zoals veel, weinig of geen te gebruiken om de hoeveelheid aanwezige sperma te beschrijven. We hebben deze techniek met succes toegepast op diverse locaties op zee en door kreeften in havens te bemonsteren. De hier getoonde resultaten zijn afkomstig van offshore-kreeften gevangen op George's Bank, die we konden bemonsteren in een commerciële opkweekfaciliteit.In totaal had 84% van deze vrouwtjes sperma in hun seminale receptacula. Opmerkelijk genoeg bevonden de vrouwtjes die dit niet hadden zich in het midden van het groottebereik, en niet bij de kleinere, potentieel onrijpe maten. Deze techniek is niet bedoeld om de werkelijke hoeveelheden sperma in de spermametafoor te kwantificeren.In plaats daarvan biedt het een niet-invasieve methode die op zee kan worden toegepast om vast te stellen of een vrouwelijke kreeft succesvol heeft geproduceerd. Hoe meer we weten over het reproductieve succes bij kreeften, hoe beter we de effecten van de exploitatie van deze soort kunnen begrijpen en deze waardevolle mariene hulpbron dus op passende wijze kunnen beheren.

a-noninvasive-method-for-situ-determination-mating-success-female

Research

JoVE Journal

Environment

Milieu

Dit videoprotocol demonstreert een methode om effecten van zaadvloeistof bij weekdieren te bestuderen, met behulp van de hermafroditische zoetwaterslak Lymnaea stagnalis.

Effect van Accessory Gland producten op eierleggende in buikpotigen

Het doel van dit protocol is om gebruikers een reeks methoden te bieden voor de hoogwaardige decapsulatie van Lymnaea stagnalis embryo's en larven ter voorbereiding op gehele berging in situ  hybridisatie, en voor daaropvolgende pre- en post-hybridisatie behandelingen.

Een hele berg<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie Methode voor de slak,<em&gt; Poelslak</em

Hier presenteren we een protocol om te isoleren en karakteriseren van de structuur, olfactorische potentie en gedragsmatige reactie van vermeende feromoon verbindingen van zee prikvissen.

De identificatie van de Zeeprik feromonen met behulp van de Bioassay-geleide fractionering

Hier presenteren we een protocol om de dieren individueel te volgen gedurende een lange periode van tijd. Het maakt gebruik van computervisie methoden voor het identificeren van een reeks tags die handmatig gebouwd met behulp van een groep van kreeften als case-studie, tegelijkertijd het verstrekken van informatie over het huis, manipuleren en markeer de kreeften.

Op lange termijn Video-Tracking van Cohoused waterdieren: een Case studie van de dagelijkse motorische activiteit van de langoustines (Nephrops norvegicus)

In dit protocol, worden methoden voor het uitvoeren van inteelt kruisen, en voor de beoordeling van het succes van deze kruisen, beschreven voor de mier Vollenhovia emeryi. Deze protocollen zijn belangrijk voor experimenten gericht op het begrijpen van de genetische basis van geslacht bepaling systemen in de Hymenoptera (Vliesvleugeligen).

Inductie en evaluatie van inteelt kruisen met behulp van de mier, Vollenhovia Emeryi

Dit artikel illustreert de procedure voor het implanteren van een micro akoestische tag in jonge Pacific lamprei en Amerikaanse paling. Onze applicatie is gebaseerd op laboratoriumonderzoek, waaruit blijkt dat akoestische tags met succes geïmplanteerde met geen zichtbare gevolgen kunnen voor zwemmen vermogen of overleving en minimale label verlies.

Implantatie van een nieuwe Micro-akoestische Tag in jonge Pacific lamprei en Amerikaanse paling

Het doel van dit protocol is het genotype van de zeeanemonen Nematostella vectensis tijdens de gastrulatie zonder het embryo op te offeren.

Genotypering van zeeanemonen tijdens de vroege ontwikkeling

Het sperma moet met succes door de eileider navigeren om een eicel te bevruchten. Hier beschrijven we een assay voor het meten van sperma migratie binnen de C. hermafrodiet baarmoeder. Deze analyse kan kwantitatieve gegevens over sperma distributie binnen de baarmoeder na het koppelen, evenals op snelheid, richtings snelheid, en omkerings frequentie verstrekken.

Het meten van sperma begeleiding en beweeglijkheid binnen de Caenorhabditis van het hermafrodiet-reproductieve kanaal

Het behoud van zoet water mossel is afhankelijk van het monitoren van voortplantings patronen en processen van soorten. Deze studie standaardiseert een niet-dodelijk protocol voor het bemonsteren van Gill-inhoud, het karakteriseren van de larvale ontwikkeling en het verstrekken van een digitale repository voor verzamelde gegevens. Dit protocol-database-pakket zal een belangrijk hulpmiddel zijn voor mossel onderzoekers die niet-verontreinigde soorten herstellen.

Standaardiseren van een niet-dodelijke methode voor het karakteriseren van de reproductieve status en de larvale ontwikkeling van zoetwatermosselen (Bivalvia: Unionida)

Het meten van de hartslag tijdens een thermische uitdaging geeft inzicht in fysiologische reacties van organismen als gevolg van acute veranderingen in het milieu. Met behulp van de Amerikaanse kreeft (Homarus americanus) als een model organisme, dit protocol beschrijft het gebruik van impedantie pneumografie als een relatief niet-invasieve en niet-dodelijke aanpak om de hartslag te meten in het laat stadium ongewervelde dieren.

Impedantie pneumografie voor minimaal invasieve meting van hartslag in late fase ongewervelde dieren

Hier presenteren we een algemene methode om de embryonale levensvatbaarheid en het totale aantal geproduceerde embryo's (broed) te bepalen met behulp van het modelorganisme C. elegans.

Het meten van de embryonale levensvatbaarheid en broedgrootte bij Caenorhabditis elegans

Leer een niet-invasieve methode om het koppelingssucces van vrouwelijke Amerikaanse kreeften (Homarus americanus) in situ te bepalen. Deze techniek helpt onderzoekers de voortplantingsdynamiek in zwaar beviste populaties te begrijpen.

Een niet-invasieve methode voor In situ Bepaling van het Koppelen van Succes in vrouwelijke Amerikaanse Kreeften ( Homarus americanus) (Video) | JoVE Journal

Een niet-invasieve methode voor

Meer video's verkennen