Methoden voor het uitvoeren van Kruisen in Setaria viridis, Een Nieuw Model Systeem voor de Grassen

Het algemene doel van deze procedure is om aan te tonen hoe kruisingen worden uitgevoerd voor cter verus in een nieuw modelsysteem voor grassen. Dit wordt bereikt door eerst de top te selecteren, trimmen en labelen. De tweede stap is om de getrimde pannicle te emasculeren door deze in een waterbad van 48 graden Celsius te dompelen.

Vervolgens wordt de getrimde top gebruikt als vrouwelijk voor bestuiving door een top die pollen afgeeft. De laatste stap is het oogsten van zaden twee weken na de kruisbestuiving. Uiteindelijk wordt Gus-kleuring van de veronderstelde hybride zaden gebruikt om de effectiviteit van de techniek te tonen.

Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van de bestaande methoden zoals fysische emascultatie, is dat het minder invasief is en relatief eenvoudig te implementeren in het laboratorium. Deze methode zal helpen bij het versnellen van de acceptatie van cter verus als een genetisch model door het uitvoeren van kruisingen gemakkelijker te maken. Om te beginnen, verwijder een cel voor water en vul vervolgens een bak met vier bij negen cellen met Metro Mix 360.

Vervolgens besproeit u de cellen licht en zaait u zaden op het oppervlak van de grond, één zaadje per cel. Bedek vervolgens de zaden met een laagje grond van 0,5 centimeter dik, besproeit het oppervlak van de grond om ze te dempen en watert u de bakken vanaf de bodem. Blijf de cellen een tot twee keer per dag vanaf de bodem water geven na het zaaien van de zaden, zorg ervoor dat u niet te veel water geeft.

Stel de groeikameromgevingen in op 31 graden Celsius overdag en 22 graden Celsius 's nachts met een preda-behandeling van 15 graden Celsius van 8:30 uur tot 9:00 uur. Houd ook een licht-donker schema van 12 uur aan en stel de relatieve luchtvochtigheid in op 50%. Onder deze omstandigheden zal Satter verus 21 tot 22 dagen na het zaaien bloeien. Idealiter wordt emascultatie 's middags of 's avonds uitgevoerd.

Selecteer de primaire pentake op elke plant die een tot vijf bloemen in bloei heeft. Snijd vervolgens de punt van de pentake af en verwijder alle bloemen in het onderste deel van de proximale middelste en basissecties met behulp van fijne pincetten. Als een plant slechts een tiende tot een vijfde van de bloemen in bloei heeft.

Om het onderste deel van de distale, middelste en bovenste sectie van de proximale middelste voor verdere trimmen te behouden, snijdt u de punt af en trimt u de bloemen vanaf de basis van de pannicle. Als een pannicle een vierde tot de helft van de bloemen in bloei heeft, behoudt u de proximale middelste sectie voor verder trimmen en snijdt u de distale middelste sectie af. Nadat de pentake is gesneden, gebruikt u chirurgische schaar om de borstels licht te trimmen.

Zorg ervoor dat de borstels in het gebied blijven dat zal worden bestoven om de bloemen te beschermen tegen mogelijke hittebeschadiging. Behoud voor elke spikelet de bovenste rijpe bloem. De bovenste bloem heeft een hogere kans op anthesis op het moment van bestuiving.

Vervolgens verwijdert u alle bloemen die zijn gebloeid en alle onrijpe bloemen, waardoor er ongeveer 20 tot 30 bloemen per top overblijven die gelijkmatig verdeeld zijn. Markeer vervolgens één kant van elke bloem met een rode permanente marker. En noteer het aantal bloemen op de top, label de top met de volgende informatie: de datum van emascultatie, de duur en de temperatuur waarbij de emascultatie wordt uitgevoerd.

Zodra de pannicle is bijgesneden, verwijdert u alle tillers van elke plant om ervoor te zorgen dat meer middelen worden toegewezen aan de ontwikkeling van de hoofdpijler. Een uur voor emascultatie, stelt u een waterbad in op 48 graden Celsius voor de warmtebehandeling. Zodra voorverwarmd, buigt u de getrimde pentacles voorzichtig en dompelt u er drie tot vier tegelijk in warm water gedurende drie tot zes minuten.

Wees voorzichtig om de stengel van de pentake niet te breken. Het vlagblad, dat de pentake ondersteunt, mag niet in contact komen met warm water. Dit is om hittebeschadiging van het bladweefsel te voorkomen.

Zodra emascultatie gedurende de gewenste duur is uitgevoerd, verwijdert u de panicles uit het waterbad en schudt u het water voorzichtig van de pannicle. Bedek vervolgens de emasculeerde pannicle volledig met een aangepaste micro geperforeerde broodzak en zet deze vast met een twist tie. Micro geperforeerde broodzakken kunnen worden aangepast aan de grootte van de pannicle.

Plaats ten slotte de planten terug in de groeikamerraam tot de volgende dag. Om 9:00 uur op de tweede en derde dag, verplaatst u emasculeerde vrouwelijke en niet-emasculeerde mannelijke ouders van de groeikamerraam naar het laboratorium om kruisingen uit te voeren, te observeren en nog een rode toe te voegen. aan de bloemen die zijn gebloeid of bloeien.

Gebruik een rode permanente marker om het totale aantal gebloeide bloemen per pannicle te noteren. Noteer vervolgens de datum van bestuiving en de naam van de mannelijke ouder op het label om bij te houden welke kruisingen zijn uitgevoerd. Observeer het piektijdstip van antithese bij mannelijke ouders onder onze laboratoriumomstandigheden, bloemen op de pentacles van de mannelijke ouder beginnen rond 10:10 uur gelijktijdig te openen. Zodra geopend, zal de volledige uitputting van de helmdraad en de afgifte van pollen plaatsvinden na 20 minuten.

Begin onmiddellijk met bestuiving wanneer er gelige witte helmdraden zichtbaar zijn op de bloemen van de mannelijke ouder. Bestuivingen worden uitgevoerd op de tweede en derde dag door gebruik te maken van pannicle tot pannicle bestuiving of helmdraad tot stigma bestuiving.

Gebruik een losgemaakte pannicle als mannelijk, wrijf de pannicle samen met de emasculeerde pannicle om bestuiving te vergemakkelijken en gooi de mannelijke pannicle weg om besmetting te voorkomen, herhaal het bestuivingsproces totdat elke emasculeerde top is bestoven door twee tot drie pentacles. De meest effectieve methode is helmdraad