Een effectieve Manual Uitbenerij methode om Intact Mouse neusweefsel bereiden met Bewaarde Anatomische Organisatie

Hallo, ik ben David Dunton uit het laboratorium van Dr. Wung Lynn aan de UMBC. In deze video tonen we een effectieve techniek om neusweefsel van muizen voor te bereiden met behoud van de anatomische organisatie. Met deze techniek kan men een enkel specimen verkrijgen dat vrijwel het gehele neusweefsel bevat, inclusief het respiratoire en olfactorische, epitheliale en subepitheliale weefsel.

We tonen de stapsgewijze verwijdering van diverse gelaatsbeenderen rondom het neusweefsel, waarbij zelfs het meest delicate weefsel, zoals de uiteinden van het hoofdolfactorisch epitheel, behouden blijft. Onze methode biedt aanzienlijke voordelen ten opzichte van decalcificatiemethoden omdat agressieve chemische behandelingen worden vermeden en de botverwijdering in 20 tot 30 minuten kan worden voltooid. Andere voordelen van deze techniek zijn dat deze niet beperkt wordt door de leeftijd van de muis en dat ze kan worden uitgevoerd op gefixeerd of vers weefsel.

Deze voordelen maken onze techniek ideaal voor morfologische, immunohistochemische en fysiologische studies. Hier tonen we een schematisch diagram van het dorsale aspect van de schedel- en neusbeenderen. In deze video zullen we ons concentreren op de dissectie van de beenderen van de neus.

Dit is een schematisch diagram van het ventrale aspect van de schedelbotten en de neus. Dit is een dorsaal aanzicht met een ongedisseceerde schedel en neus bovenaan en een gedisseceerde neus onderaan. Nu worden de uiteinden van het belangrijkste reukepitheel getoond.

Hier tonen we de botten van de neus, beginnend vanaf het dorsale aspect. Dit is het dorsale deel van de processus zygomaticus, gevolgd door de arcus zygomaticus. Dit is het os nasale, en vervolgens wordt de centraal gelegen lamina cribrosa getoond.

Het ganglion van Gruenberg bevindt zich ver anterior. Vanuit een lateraal perspectief tonen we het deel van het zeefbeen dat de turbinale van het olfactory epithelium bedekt, het ganglion van Gruenberg, de maxilla en de frontale incisieven. Schakelen we over naar een ventraal perspectief, dan tonen we de molaren, de frontale incisieven, het palatine bot en het vomer bot.

Begin met het verwijderen van het vulner-been door de ventrale zijde van de neus te bekijken. Om het vulner-been te verwijderen, gebruikt u een pincet om het vulner-been in de lengte te breken, en verwijder daarna de botfragmenten door ze van het onderliggende weefsel weg te klappen om beschadiging aan het RO-neusorgaan te voorkomen. Gebruik voor deze taak een pincet om het ventrale deel van de voorste snijtanden te breken.

Gebruik een knijpbeweging en breek de voortanden in de richting van het ulmer-bot. Zodra de voortanden zijn gebroken, verwijdert u de resterende botfragmenten die met weefsel verbonden zijn met behulp van een pincet. Om de maxilla los te maken, begint u aan de ventrale zijde en breekt u de maxilla net ventraal van de zygomatische boog.

Klap de neus naar de dorsale zijde en breek de maxilla net anterior van de zygomatische boog. Om de maxilla los te maken zodat de rechterzijde van het neusbeen verwijderd kan worden, ruimt u het resterende deel van de frontale botmassa aan de rechterzijde van het neusbeen op. Gebruik hiervoor een Rongeur.

Het is noodzakelijk om voorzichtig te zijn bij het gebruik van de Ron-currettes om beschadiging van de dunne lamina cribrosa te voorkomen, aangezien beschadiging van de lamina cribrosa ertoe kan leiden dat de neus in tweeën splitst. Klap het gebroken bot omhoog en verwijder het. Klap vervolgens het dorsale deel van de zygomatische plaat weg van het onderliggende weefsel.

Scheid het neusbeen langs de middellijn. Pak dit bot vast met een pincet of een gum, en beweeg het bot voorzichtig van links naar rechts terwijl u het omhoog tilt. Deze procedure moet met precisie worden uitgevoerd, omdat het onderliggende weefsel gemakkelijk beschadigd kan raken tijdens het verwijderen van het bot. Zodra het bot is verwijderd, is het onderliggende weefsel afzonderlijk zichtbaar, zoals getoond in dit stilstaande beeld.

Om het bot te verwijderen, wordt dit simpelweg doorgesneden met behulp van een pincet of schaar. Verwijder vervolgens de anterior maxilla. Indien deze op dit punt nog niet is verwijderd, is de anterior maxilla inmiddels losgekomen; verwijder deze door eventuele resterende verbindingen met het weefsel te verbreken.

Verwijder vanuit een dorsaal perspectief het frontale bot dat zich direct links van het neusbot bevindt. Gebruik de Rongeurs om het frontale bot te breken. U kunt botknijpers of een pincet gebruiken om dat stuk frontale bot te verwijderen.

U kunt op dit moment ook de maxilla losmaken, hoewel dat niet noodzakelijk is. Om de linkerzijde van het neusbeen te verwijderen, gebruikt u de pincet om het neusbeen voorzichtig te scheiden van veel van de omliggende beenderen. Pak vervolgens dit bot vast met de pincet en beweeg het bot voorzichtig van zijde naar zijde terwijl u het omhoog tilt om het neusbeen van het onderliggende weefsel te scheiden.

Wanneer het onderliggende weefsel zich van het bot scheidt, kunt u soms een lateraal perspectief gebruiken om het weefsel te zien dat aan het bot verbonden is. Gebruik de pincet om het weefsel dat aan het bot verbonden is voorzichtig te scheiden, waarna u het bot met een schaar of pincet verwijdert. Nadat het neusbot is verwijderd, verwijdert u de anterior maxilla aan de linkerkant van de neus met dezelfde techniek als voor het verwijderen van de anterior maxilla aan de rechterkant van de neus.

De volgende stap is het verwijderen van de zygomatische plaat aan de linkerkant van de neus. Er kan nog enige aanhechting zijn van de zygomatische plaat en het onderliggende weefsel; als dat het geval is, kunt u de grove pincetten gebruiken om het dorsale deel van de zygomatische plaat voorzichtig dicht te klemmen en los te maken. Bekijk de ventrale zijde van de neus.

Om de molaren en het palatinale bot te identificeren, kunnen ofwel de molaren of het palatinale bot worden verwijderd. Ten eerste is dit een aanzicht van het laterale aspect van de neus, en dit aanzicht toont de verwijdering van de molaren aan de rechterzijde van de neus. Met behulp van de urs, waarbij de rechterzijde van de maxilla is verwijderd, wordt het palatinale bot verwijderd.

Breek vervolgens de resterende maxilla en kiezen en verwijder alle grote botfragmenten van het palatum osseum of de maxilla. Breek alle resterende stukken van het os ethmoidale die zich in de richting van het neusepitheel uitsteken af en verwijder deze. Plaats de fijne pincet onder het bot en klap het bot omhoog om het van het onderliggende weefsel te scheiden.

Gebruik alternatief de Rogers zoals hier getoond om het bot te breken en gebruik vervolgens de fijne pincet om het bot van het onderliggende weefsel te scheiden. Zo ziet de turbinale van het menselijke reukepitheel eruit. Nadat het moid-bot is verwijderd, zal dit bot worden weggenomen.

Vervolgens bevindt het zich caudaal en mediaal ten opzichte van het neusbeen; dit bot wordt verwijderd met een rongeur. Wees voorzichtig tijdens deze stap om beschadiging van de lamina cribrosa te voorkomen. Zodra het bot is gebroken, wordt het met een pincet verwijderd.

Vervolgens volgt een aanzicht van de neus. Zodra dit bot is verwijderd, is er nog één laatste gebied om te controleren: rond het V-neusorgaan. Dat komt omdat er een bot is dat de gepaarde buizen van het V-neusorgaan scheidt, dat ik in deze dissectie nu verwijder.

Dit is het dorsale aanzicht van een neus die is gedissecteerd met behulp van onze techniek. Vervolgens hebben we een neus gedraaid om de verschillende aspecten te tonen. Dit is het dorsale aanzicht, gevolgd door het laterale aanzicht van de linkerzijde van de neus en het ventrale aanzicht.

Nu tonen we in detail de kenmerken van een neus die volledig is gedisseceerd met behulp van onze techniek, beginnend bij het dorsale aspect van de neus. Het eerste gedeelte dat we tonen zijn de turbinalia van het belangrijkste reukepitheel. Er bevinden zich luchtbellen in het weefsel onder de neusbeenderen, en deze luchtbellen worden verwijderd door het monster vanuit het laterale gezichtspunt te vacuümeren.

We tonen de intacte turbinaat van het menselijke reukepitheel. Let op dat er luchtbellen aanwezig zijn binnen de turbinaten. Kliertweefsel bevindt zich anterieur van de turbinaat en het respiratoire epitheel is zichtbaar vanuit dit laterale perspectief.

Vanuit het ventrale perspectief is het kwetsbare neusorgaan zichtbaar. Deze afbeelding toont een uitbreiding van onze dissectietechniek, waarbij de bulbi olfactorii van de hersenen en de neus in één specimen worden verwijderd. Om het weefsel voor het snijden voor te bereiden, neemt u eerst een plastic vorm en vult u deze met optimum cutting temperature media.

Plaats het betreffende weefsel in de gevulde mal en zet de mal in een cirkel van siliconenvet op een plastic petri-schaal; een kolf wordt op de cirkel van siliconenvet geplaatst om een afdichting voor het vacuüm te creëren. Ons laboratorium gebruikt een vacuüm dat wordt gegenereerd door stromend water. Zodra het vacuüm door het stromende water is gecreëerd, worden de waterbelletjes uit het weefsel getrokken.

Het vacuüm wordt gestopt door het water uit te schakelen en de slang los te koppelen. Haal vervolgens de plastic mal eruit. Hier verplaats ik het weefsel naar de gewenste oriëntatie voordat het weefsel wordt ingevroren.

Ons laboratorium gebruikt droogijs om weefsel te invriezen. Dit zijn representatieve resultaten van het coupesnijden van een neus met gebruik van onze dissectietechniek en kleuring met neutraalrood. Dit is een horizontale doorsnede waarop de turbinalia van het man-effector-epitheel, klierweefsel en respiratoir epitheel te zien zijn.

De tweede sectie is een coronaal doorsnede die het complexe plooipatroon van de turbinates (neusconcha's) van het hoofgeur-epitheel laat zien. In deze video tonen we een techniek om de neus handmatig te ontbenen en een specimen te verkrijgen dat ideaal is voor morfologische, immunohistochemische of fysiologische studies.