Name: De productie van grote aantallen grote gecontroleerde bolvormige tumoren met behulp microputjesplaten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-18T20:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 44 s
Description: Leer hoe je grote aantallen uniforme tumorbolvormen produceert met microputjesplaten. Deze methode maakt gelijktijdige vorming van duizenden tot honderdduizenden bolvormen mogelijk voor onderzoek in oncologie en celbiologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gefinancierd door de Universiteit van Calgary, onder een nieuwe onderzoeker start-up subsidie ​​aan Dr Ungrin.

OPMERKING: Microwell platen zijn in verschillende formaten, afhankelijk van de gewenste resultaten. Specificaties en grove richtlijnen voor de minimum en maximum aantallen cellen die moeten worden gebruikt met elke indeling zijn weergegeven in Tabel 1. De kleinere microwells taps tot een scherpe punt, en dus is er geen lagere limiet, hoewel variabiliteit tussen de bolletjes wordt meer significant bij kleinere maten. Routine productie van sferoïden van gemiddeld slechts 20 cellen elk is eenvoudig 8. De grotere microwell maat is niet volledig taps, probeert dus sferoïden van kleine aantallen cellen vormen kan resulteren in meerdere kleinere sferoïden per microwell. Als gevolg van kleine verschillen in oppervlakte-eigenschappen, de voorbereiding met het oppervlakte-oplossing (stap 1.2) is niet optioneel bij gebruik AggreWell 400EX platen. Dit protocol is gebaseerd op het gebruik van AggreWell 400 platen - voor andere formaten nadelenult Tabel 1. Het aantal cellen in elk putje te laden wordt bepaald door het aantal microputjes bevat het aantal cellen geclusterd elke sferoïde vermenigvuldigen. Om bijvoorbeeld sferoïden van 1000 cellen per stuk produceren, moet elk putje worden geladen met (1200 sferoïden tijden 1.000 cellen per =) 1,2 x 10 6 cellen. Celdichtheid moet worden berekend omdat de cellen in een volume van 0,4 ml wordt geladen. Dus het voorbeeld van sferoïden gevormd van 1000 cellen per 1,2 x 10 6 cellen in 0,4 ml vertaalt tot een dichtheid van 3 x 10 6 cellen per ml. 1. Het voorbereiden microwells Cellen ontvangen <ol><li> Microputjesplaten zijn steriel zoals voorzien, en mag alleen worden verwijderd uit hun verpakking in een steriele omgeving, zoals een laminaire stroming bioveiligheid kast. Steriliteit moeten in de hele protocol worden gehandhaafd. Mocht steriliteit in het gedrang komen, de putten worden gesteriliseerd met behulp van 70% ethanol in water met behulp van devolgende optionele stappen. <ol><li> Voeg 0,5 ml 70% ethanol aan elk ongebruikt ook. Sommige microputjes zullen houden luchtbellen, hoewel dit kan worden verminderd door toevoeging van vloeistof aan de ene kant, en te laten verspreiden over het oppervlak, dan laten vallen verticaal op het oppervlak. Vervang deksel. </li><li> Terwijl ethanol damp snel eventuele luchtbellen moeten doordringen, als er grote aantallen kan het wenselijk zijn om ze te verwijderen. Centrifugeer gedurende 2 min. bij 2000 x g. Merk op dat het belangrijk ervoor te zorgen de rotor goed evenwicht met deze snelheid. </li><li> Met behulp van een lage vergroting omgekeerde microscoop, controleren luchtbellen zijn verwijderd uit de microwells. </li><li> Incubeer gedurende 5 minuten met deksel bij kamertemperatuur. </li><li> Aspireren ethanol. Plaat kan nu met steriel water of PBS worden gewassen voor onmiddellijk gebruik, of aan de lucht gedroogd voor opslag. </li></ol></li><li> Om ervoor te zorgen dat cellen niet interageren met het oppervlak microwell, kan worden bereid onder toepassing van een surfactant. In het algemeen israadzaam deze stap eerst uitgevoerd en vervolgens vergelijken sferoïden gemaakt met en zonder oppervlakteactieve beklede microputjes. <ol><li> Voeg 0,5 ml spoeloplossing aan elke well. Sommige microputjes zullen houden luchtbellen, hoewel dit kan worden verminderd door toevoeging van vloeistof aan de ene kant, en te laten verspreiden over het oppervlak, dan laten vallen verticaal op het oppervlak. Vervang deksel. </li><li> Centrifugeer gedurende 2 minuten bij 2000 xg om luchtbellen te verwijderen. Merk op dat het belangrijk ervoor te zorgen de rotor goed evenwicht met deze snelheid. </li><li> Met behulp van een lage vergroting omgekeerde microscoop, controleren luchtbellen zijn verwijderd uit de microwells. </li><li> Incubeer gedurende ten minste dertig minuten met deksel bij kamertemperatuur of overnacht bij 4 ° C. Platen kunnen worden opgeslagen bij vier graden met de oppervlakteactieve stof in de putjes totdat ze nodig indien goed afgedicht om uitdroging te voorkomen. </li><li> Was plaat met steriel water of PBS onmiddellijk vóór gebruik. Heeft platen niet toete drogen na het coaten. </li></ol></li></ol> 2. Voorbereiden van Cellen OPMERKING: De details van celpreparaat zal enigszins variëren met het specifieke celtype onderzocht. We hebben echter deze omstandigheden waargenomen effectief een groot aantal cellen, met inbegrip van de lijnen besproken, alsook menselijke en murine embryonale stamcellen (ESC), humane geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSC), fibroblasten, vermeende primitieve endoderm zijn, en stromale cellen. Andere groepen hebben dit systeem met succes voor een breed scala aan toepassingen, waaronder chondrogenese van mesenchymale stamcellen 9 gebruikt, gestandaardiseerde generatie van neurale precursoren van pluripotente stamcellen 10, toxicologische analyses hepatocyten 11 en evaluatie van het ruggenmerg regeneratie salamanders 12. De specifieke protocol voor het werken met HT29 cellen wordt hier getoond. <ol><li> Begin met een T75 fles van HT29 cellen, gekweekt in DMEM+ 10% FBS </li><li> Aspireren groeimedium van kolf en voeg 3 ml trypsine. </li><li> Incubeer cellen gedurende 5 minuten bij 37 ° C. </li><li> Stop trypsine digestie door toevoeging van 3 ml groeimedium. Pipetteer een voor celtelling en breng de rest in een 15 ml centrifugebuis. </li><li> Centrifugeer gedurende 5 minuten bij 200 x g. </li><li> Terwijl het centrifugeren aan de gang is, tellen cellen. </li><li> Zuig trypsine / medium-mengsel en vervangen door vers groeimedium volume bepaald door de vereiste celdichtheid zoals hierboven berekend. </li><li> (OPTIE) Leid de celsuspensie door een zeef om eventuele klonten te verwijderen. OPMERKING: Mobiele oogstomstandigheden zal enigszins variëren tussen de lijnen. Als een dissociatie protocol voor bv. passage van de cellen van belang beschikbaar is, moet dat worden gebruikt als uitgangspunt. Met gevoelige cellijnen gebruik van trypsine kan excessieve celdood. In deze gevallen hebben we goede resultaten waargenomen met behulp TrypLE als alternatief dissociatiOp reagens 8. Als de cellen samengeklonterd tijdens dissociatie en levensvatbaarheid verliezen, kan toevoeging van DNAse de enzymoplossing dit oplossen. Vermindering van dissociatie tijden en met gebruikmaking van een aanwrijven stap te breken celklonten kan ook toenemen levensvatbaarheid. </li></ol> 3. Spheroïde Vorming OPMERKING: sferoïden worden opgewekt in een diversiteit aan media formuleringen, maar eerste proeven worden uitgevoerd met het medium waarin de cellen gekweekt om de gevolgen van de overgang naar een 3-dimensionale kweeksysteem tegen de gevolgen van wisselende samenstelling van het medium onderscheiden. <ol><li> Voeg 0,4 ml groeimedium aan elk putje. </li><li> Centrifugeer gedurende 2 minuten bij 2000 xg om luchtbellen te verwijderen. Merk op dat het belangrijk ervoor te zorgen de rotor goed afgesteld bij deze snelheid vóór centrifugatie. </li><li> Met behulp van een lage vergroting omgekeerde microscoop, controleren luchtbellen zijn verwijderd uit de microwells. </li><li> Voeg 0,4 mlcelsuspensie op de gewenste dichtheid (hierboven berekend). Meng door en neer te pipetteren, zonder dat er luchtbellen in de microwells. Het is belangrijk dat de cellen gelijkmatig verdeeld over de bron, teneinde consistente sferoïden verkrijgen. </li><li> Centrifugeer gedurende 5 minuten bij 200 x g. Als de plaat niet zelf-niveau tijdens het centrifugeren, kan convectie stromingen die resultaat ontstaan ​​ongelijke verdeling van de cellen over de microwells. Daarom moet de plaat intern in evenwicht alsmede tegen de andere plaat, zodat het gewicht gelijkmatig verdeeld over beide zijden van de plaat drager. </li></ol> OPMERKING: als bewijs van ongelijke celverdeling wordt gezien, kan het nodig zijn om een ​​kleine hoeveelheid smeermiddel van toepassing op de scharnierpunten op de plaat drager - raadplegen centrifuge fabrikant voor instructies. OPMERKING: Nadat de cellen zijn in de microwells gecentrifugeerd, ze zijn redelijk weerstandtant om uitwassen van kleine bewegingen van de plaat. Abrupte bewegingen die resulteren in klotsen van het medium moet worden vermeden, maar de overdracht van de plaat uit centrifuge naar microscoop of incubator mag niet leiden tot significante cel verplaatsing. <ol start="6"><li> Met behulp van een omgekeerde microscoop, controleert cellen geclusterd binnen de microputjes, en dat ze gelijkmatig verdeeld over de put. </li><li> Incubeer overnacht bij 37 ° C. </li><li> Met behulp van een omgekeerde microscoop, observeren het proces van de bolvormige formatie. Sommige cellijnen compacte bolletjes vormen binnen 24 uur, anderen kan het langer duren. De overgang van cluster te aggregeren in HT29-cellen wordt getoond in figuur 2. </li><li> Recover sferoiden uit de microwells en transfer naar suspensiecultuur door voorzichtig jetting ze uit met een pipet. Als alternatief onderhouden sferoïden in situ met medium vervangen 8 - de duur hangt af van hun oorspronkelijke grootte en groeisnelheid, die define het tot ze groeien de microputjes waarin ze werden gevormd. <ol><li> Om medium vervangen zonder verlies sferoïden zuigen medium aan de rand van de put met een Pasteur pipet. Langzaam breng de punt naar beneden totdat het begint te vloeibaar te trekken uit de meniscus, en volg de meniscus af als het daalt. Voeg dan vers medium tegen de put muur op dezelfde plaats. Enkele sferoïden verloren gaan, maar als medium altijd wordt afgezogen en vervangen in dezelfde positie, dit aantal klein in vergelijking met de grote aantallen in de put blijft. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Hirschhaeuser, F., Menne, H., Dittfeld, C., West, J., Mueller-Klieser, W., Kunz-Schughart, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicellular+tumor+spheroids%3A+An+underestimated+tool+is+catching+up+again%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Multicellular tumor spheroids: An underestimated tool is catching up again.</a> Journal of Biotechnology. 148 (1), 3-15 (2010).</li>
<li>Sherar, M. D., Noss, M. B., Foster, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+backscatter+microscopy+images+the+internal+structure+of+living+tumour+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ultrasound backscatter microscopy images the internal structure of living tumour spheroids.</a> Nature. 330 (6147), 493-495 (1987).</li>
<li>Foty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Simple+Hanging+Drop+Cell+Culture+Protocol+for+Generation+of+3D+Spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A Simple Hanging Drop Cell Culture Protocol for Generation of 3D Spheroids.</a> J. Vis. Exp. (51), 2720(2011).</li>
<li>Naber, H. P. H., Wiercinska, E., Ten Dijke, P., Van Laar, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spheroid+Assay+to+Measure+TGF-%CE%B2-induced+Invasion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Spheroid Assay to Measure TGF-β-induced Invasion.</a> J. Vis. Exp. (57), e3337(2011).</li>
<li>Ungrin, M. D., Joshi, C., Nica, A., Bauwens, C., Reproducible Zandstra, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ultra+high-throughput+formation+of+multicellular+organization+from+single+cell+suspension-derived+human+embryonic+stem+cell+aggregates%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">ultra high-throughput formation of multicellular organization from single cell suspension-derived human embryonic stem cell aggregates.</a> PLoS ONE. 3 (2), e1565(2008).</li>
<li>Bauwens, C. L., Song, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geometric+control+of+cardiomyogenic+induction+in+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Geometric control of cardiomyogenic induction in human pluripotent stem cells.</a> Tissue Engineering. Part A. 17 (15-16), 1901-1909 (2011).</li>
<li>Bratt-Leal, A. M., Carpenedo, R. L., Ungrin, M. D., Zandstra, P. W., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incorporation+of+biomaterials+in+multicellular+aggregates+modulates+pluripotent+stem+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Incorporation of biomaterials in multicellular aggregates modulates pluripotent stem cell differentiation.</a> Biomaterials. 32 (1), 48-56 (2011).</li>
<li>Ungrin, M. D., Clarke, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rational+bioprocess+design+for+human+pluripotent+stem+cell+expansion+and+endoderm+differentiation+based+on+cellular+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Rational bioprocess design for human pluripotent stem cell expansion and endoderm differentiation based on cellular dynamics.</a> Biotechnology and Bioengineering. 109 (4), 853-866 (2012).</li>
<li>Markway, B. D., Tan, G. K., Brooke, G., Hudson, J. E., Cooper-White, J. J., Doran, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+chondrogenic+differentiation+of+human+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+low+oxygen+environment+micropellet+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Enhanced chondrogenic differentiation of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells in low oxygen environment micropellet cultures.</a> Cell Transplantation. 19 (1), 29-42 (2010).</li>
<li>Kozhich, O., Hamilton, R., Mallon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+Generation+and+Differentiation+of+Neural+Precursor+Cells+from+Human+Pluripotent+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reviews+and+Reports%22%5BJournal%5D)">Standardized Generation and Differentiation of Neural Precursor Cells from Human Pluripotent Stem Cells.</a> Stem Cell Reviews and Reports. , 1-6 (2012).</li>
<li>Fey, S. J., Wrzesinski, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+Drug+Toxicity+Using+3D+Spheroids+Constructed+from+an+Immortal+Human+Hepatocyte+Cell+Line%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Determination of Drug Toxicity Using 3D Spheroids Constructed from an Immortal Human Hepatocyte Cell Line.</a> Toxicological Sciences. , (2012).</li>
<li>Mchedlishvili, L., Mazurov, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstitution+of+the+central+and+peripheral+nervous+system+during+salamander+tail+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Reconstitution of the central and peripheral nervous system during salamander tail regeneration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2012).</li>
<li>Butler, C. M., Foty, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+Aggregate+Cohesion+by+Tissue+Surface+Tensiometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Measurement of Aggregate Cohesion by Tissue Surface Tensiometry.</a> J. Vis. Exp. (50), e2739(2011).</li>
<li>Xu, K., Buchsbaum, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Mammary+Epithelial+Cells+from+Three-dimensional+Mixed-cell+Spheroid+Co-culture%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of Mammary Epithelial Cells from Three-dimensional Mixed-cell Spheroid Co-culture.</a> J. Vis. Exp. (62), e3760(2012).</li>
<li>Baraniak, P. R., Cooke, M. T., Saeed, R., Kinney, M. A., Fridley, K. M., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stiffening+of+human+mesenchymal+stem+cell+spheroid+microenvironments+induced+by+incorporation+of+gelatin+microparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Mechanical+Behavior+of+Biomedical+Materials%22%5BJournal%5D)">Stiffening of human mesenchymal stem cell spheroid microenvironments induced by incorporation of gelatin microparticles.</a> Journal of the Mechanical Behavior of Biomedical Materials. 11, 63-71 (2012).</li>
<li>Purpura, K. A., Bratt-Leal, A. M., Hammersmith, K. A., McDevitt, T. C., Zandstra, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+engineering+of+3D+pluripotent+stem+cell+niches+to+guide+blood+development%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Systematic engineering of 3D pluripotent stem cell niches to guide blood development.</a> Biomaterials. , (2012).</li>
</ol>

Dr Ungrin heeft een financieel belang in de AggreWell technologie als uitvinder.

Wij hebben een systeem waarbij grote aantallen uniforme sferoïden worden gegenereerd uit meerdere cellijnen van verschillende bronnen opgesteld. We moeten nog een hechtende cellijn die geen bolletjes vormt wel onder deze omstandigheden tegenkomen. We hebben eerder waargenomen cel verlies in populaties gevoelig voor anoikis 5,8, maar tot op heden deze kwestie is niet ontstaan ​​met tumorlijnen. Het systeem is willekeurig schaalbaar oppervlak met gedrag consistent microputjes in 24 putjes en 6 putjes, alsmede prototype bioreactoren met 50.000 microputjes elk in ontwikkeling. Indien sferoïde asymmetrie een zorg, kan de incubatietijd in stap 4.8 worden verhoogd tot twee of drie dagen. Sferoïden ook gedurende een periode na extractie van de microputjes symmetrie verhogen, maar in dat geval moet worden cultuur dichtheden voldoende laag te houden, als sferoïden in contact met elkaar will vaak samensmelten tot grotere structuren. Daarom hebben we eerder behandelde culturen binnen de microputjes waarin de aggregaten gevormd bij de belangrijkste beperking door de grootte van de sferoïde. Hierdoor is een functie van zowel de groeisnelheid en begingrootte 8 en bij verlenging cultuur binnen de microwell plaat wordt voorzien, moet dit worden beschouwd tevoren. Opties om wildgroei te voorkomen, mocht dat toch gebeuren, onder andere ook te beginnen met kleinere bolletjes, of in dienst van de grotere microwells van de AggreWell 800 plaat. Indien sferoïden niet toenemen in samenhang verloop van tijd een potentiële oorzaak celdood. Vooral in grotere aggregaten van zeer metabolisch actieve cellen, kan massa beperkingen vervoer over de levering van zuurstof en essentiële voedingsstoffen resulteren in een necrotische kern 2 - dus een niet-samenhangend spheroïde kan slechts een gevolg van overmatig celdood zijn. Als alternatief, metingen van de mechanische samenhangning van sferoïden zijn gebruikt om intercellulaire bindingskrachten beoordelen in verhouding tot het metastatisch potentieel van een bepaalde cellijn 13. Het zou interessant zijn om de relatie tussen de bolvormige vorm en metastatische potentieel te onderzoeken, misschien met behulp van morfometrische parameters zoals rondheid en omtrek-verhouding. Naast het onderzoeken van de mechanische en morfometrische eigenschappen van sferoïden, opstelling in de microputjes systeem maakt grootschalige productie van gemengde samenstelling sferoïden, bestaande uit combinaties van meerdere celtypes en / of biomaterialen 6,7. De interacties van tumorcellen met andere celtypen belangrijk nauwer modelleren het gedrag van tumoren in vivo 14, dus kan het interessant zijn om sferoïden genereren van tumorcellen in combinatie met fibroblasten en endotheelcellen, bijvoorbeeld. Microdeeltjes van biomateriaal kan ook worden opgenomen, en kan invloed spheroid eigenschappen zowel direct door hun interacties met cellen 7,15, en ook als reservoir voor de gecontroleerde afgifte van groeifactoren en cytokines in het inwendige van de sferoïde 16. Als er een bezorgdheid over steriliteit, bijvoorbeeld bij het werken met een microwell plaat waarin sommige putten eerder gebruikt, die enige tijd doorgebracht in een incubator als onderdeel van een voorgaande experiment, de putjes worden gesteriliseerd met 70% ethanol in water. Zodra sferoïden zijn gevormd, kunnen zij ook worden uit de overblijvende niet opgenomen cellen gescheiden door het passeren van de schorsing meer dan een cel zeef. Individuele cellen zal passeren, terwijl de bolletjes blijven behouden. Als de sferoïde wordt vermoed afstoten potentieel metastatische cellen in de loop van de cultuur, kan het wenselijk deze procedure meerdere malen te zijn - aanvankelijk van feitelijke cellen te verwijderen, en vervolgens purifie isolerend populaties van de cellen afgegeven door de bolletjes.

Er is een toenemende hoeveelheid bewijsmateriaal dat tumorcellen zich anders gedragen in de driedimensionale culturen dan wanneer ze worden gekweekt op plastic, en dat therapeutische middelen die op conventionele weefselkweek platforms werkzaamheid kunnen verliezen toen overgestapt op een meer fysiologisch-relevante systeem 1. Het is daarom wenselijk om het gedrag van kankercellen bestuderen onder deze omstandigheden, zowel inzicht in de onderliggende biologische verkrijgen en ook de slaagkans van overgang nieuwe therapeutische middelen van de screening mogelijk om de kliniek te verhogen. Een nuttige modelsysteem met een lange historie telt driedimensionale clusters van kankercellen bekend als bolvormige tumoren 1,2. Idealiter zou technieken sferoïde vorming van grote aantallen uniforme bolvormige deeltjes waarvan de omvang en samenstelling worden gecontroleerd door de experimentator mogelijk. Terwijl opknoping-drop en goed-plaat benadert 3,4 zijn in staat om een aantal van deze re vervulleneisen, throughput het algemeen beperkt, en het genereren van grote aantallen sferoïden wordt een arbeidsintensieve taak. We hebben onlangs een systeem ontwikkeld om soortgelijke uitdagingen in de regeneratieve geneeskunde veld 5 op te lossen. Gebruikmakend gedwongen aggregatie binnen een reeks dicht op elkaar gepakte micronschaal putjes (zie figuur 1), deze benadering maakt de vorming van sferoïden van willekeurige aantallen cellen, inclusief mengsels van verschillende celtypes 6, alsmede de inbouw van verschillende biomaterialen 7. Sferoïden zijn gevormd in grote aantallen - duizenden tot honderdduizenden of meer - en kunnen direct worden geëxtraheerd of gehandhaafd in de microputjes waarin zij zijn gevormd met medium ruil voor tenminste een 8 tot twee (niet gepubliceerde waarneming) weken. Dit systeem is daarom goed geschikt voor het genereren van grote aantallen uniforme en reproduceerbare bolvormige tumoren voor de beoordeling van de effectiveness van nieuwe antitumormiddelen of fundamentele biologische onderzoeken.

<table><tbody><tr><td>AggreWell 400 plate</td><td>StemCell Technologies Inc.</td><td>27845/27945</td><td></td></tr><tr><td>Rinsing Solution</td><td>StemCell Technologies Inc.</td><td>07010</td><td></td></tr><tr><td>Cell strainer (37 <span id="docs-internal-guid-263ae0a0-aa3d-bddd-2a36-2ae1901f1604" style="font-size:15px;font-family:Arial;color:#000000;background-color:#ffffff;font-weight:normal;font-style:normal;font-variant:normal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;">&micro;m)</td><td>StemCell Technologies Inc.</td><td>27215</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>VWR / LONZA</td><td>CA12001-676</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-Versene (EDTA)</td><td>VWR / LONZA</td><td>CA12001-660</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>VWR / LONZA</td><td>CA12002-212</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>VWR / LONZA</td><td>CA-95042-112</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE</td><td>Invitrogen / Life Technologies</td><td>12605010</td><td></td></tr><tr><td>Inverted microscope</td><td>VWR / Motic</td><td>CA19000-610</td><td></td></tr><tr><td>Allegra X15R centrifuge with carriers for standard well plates</td><td>VWR / Beckman</td><td>CABKA99465, CABK369704, CABK392806</td><td></td></tr><tr><td>Laminar flow biosafety cabinet</td><td>ESBE / Baker</td><td>BKR-SG603AHEUVSP</td><td></td></tr></tbody></table>

de productie van grote aantallen grote gecontroleerde bolvormige tumoren met behulp microputjesplaten

Production of Large Numbers of Size-controlled Tumor Spheroids Using Microwell Plates

Bolvormige tumoren worden steeds meer erkend als een belangrijke in vitro model voor het gedrag van tumorcellen in drie dimensies. Meer fysiologisch relevante dan conventionele hechtende vel culturen, ze nauwkeuriger recapituleren de complexiteit en de effecten zoals die voorkomen in het echte tumoren. Om dit model te benutten om tumorbiologie of de doeltreffendheid van nieuwe therapeutische middelen beter te beoordelen, is het noodzakelijk om te kunnen sferoïden reproduceerbaar te genereren, op een gecontroleerde wijze en in grote aantallen. Het AggreWell systeem bestaat uit een array met hoge dichtheid van piramidevormige microputjes, waarin een suspensie van afzonderlijke cellen gecentrifugeerd. De aantallen cellen clustering onderaan elk microwell, en het aantal en de verhouding van verschillende celtypen betrokken alleen afhangen eigenschappen van de suspensie die door de experimentator. Zo zijn wij in staat om bolvormige tumoren van willekeurige grootte en samenstelling te genereren metuit om het onderliggende platform technologie wijzigen. De honderden microputjes per vierkante centimeter cultuur oppervlak weer zodat zeer hoge productieniveaus via een eenvoudige, nonlabor-intensief proces kan worden bereikt. Wij verwachten dan ook dat dit protocol in grote lijnen nuttig voor onderzoekers op het bolvormige gebied tumor zal zijn.

Sferoïden van meerdere tumorlijnen van uiteenlopende anatomische oorsprong kunnen gemakkelijk worden gegenereerd en naar suspensiekweek geëxtraheerd. Figuur 3 illustreert de vaste groottecontrole verkrijgbaar via deze methode, met zeer gelijkmatige bolvormige populaties onder elke conditie. Duidelijke inter-lijn verschillen in gedrag zijn ook zichtbaar, met HT29 darmkankercellen en TE6 slokdarmkanker cellen die dicht op elkaar gepakte bolletjes met scherp gedefinieerde grenzen, terwijl LNCaP prostaatkankercellen gaf aanleiding tot minder coherent bolletjes met onregelmatige grenzen (zie Overleg voor mogelijke redenen ). De grotere interne krachten in de meer samenhangende aggregaten ook geleid tot ineenstorting een meer symmetrische vorm, zelfs terwijl de microputjes waarin zij zijn gevormd, terwijl de LNCaP aggregaten, vooral in de grotere maat, zichtbaar blijven de vierkante pyramidale geometrie van de microwells. De relatie tussen input mobiele nummers en de Phys<html> ical grootte van de resulterende sferoïde is afhankelijk van een aantal variabelen. Theoretische volumes op basis van het product van het volume per cel en het aantal cellen toegepast kan worden verminderd celverlies, waardoor verlies aan cellen tijdens de eencellige suspensie stadium evenals verlies van uiterst kleine aggregaten kunnen door onvoldoende aantallen buren en uit te grote aggregaten als gevolg van beperkingen en necrose transport in de kern. Grootte zal ook worden beïnvloed door een proliferatie die kunnen optreden tijdens het aggregatieproces. Aangezien deze parameters zal variëren van cellijn tot cellijn, als sferoïden specifieke fysieke afmetingen gewenst zijn het juiste aantal cellen te introduceren moet experimenteel bepaald. Als eerste benadering wordt bolvormige diameter verwachting toenemen met de derdemachtswortel van het aantal cellen opgenomen - bijvoorbeeld een 8-voudige toename in aantal cellen moet resulteren in een verdubbeling van sferoïde diameter. <html> _content &quot;fo: keep-together.within-page =&quot; altijd &quot;&gt; <img alt="Figuur 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50665/50665fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50665/50665fig1.jpg" /> Figuur 1. Schema van sferoïde productie. Het microtiterplaat bestaat uit een array van dicht opeengepakte vierkante pyramidale microputjes (625 per cm 2 voor de 400 <span id="docs-internal-guid-263ae0a0-aa35-f9c7-69a1-8c5aa197db53" style="font-size:15px;font-family:Arial;color:#000000;background-color:#ffffff;font-weight:normal;font-style:normal;font-variant:normal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;">μ m grootte), waarin cellen worden gecentrifugeerd. De cellen worden samengebracht door de hellende zijwanden en de grootte van de verkregen bolvormige wordt geregeld door het variëren van de dichtheid van de celsuspensie gebruikt. 50665fig2highres.jpg &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/50665/50665fig2.jpg &quot;/&gt; Figuur 2. Assemblage van geclusterd cellen in sferoiden. Sferoïden werden gevormd uit zevenhonderd HT29 cellen per stuk. Onmiddellijk na centrifugeren (A), worden cellen los geclusterd in de bodem van elk microputje. Merk op dat de clusters uniform gecompenseerd naar rechtsonder in dit geval. Dit is aanvaardbaar mits clustergrootten consistent in de array blijven. Indien significante clustergrootte verschillen gezien vanaf de ene zijde van de matrix naar de andere, zie opmerking in stap 3.5. Na incubatie gedurende 24 uur (B), hebben intercellulaire kleefkrachten veroorzaakt de clusters te aggregeren en vormen coherente sferoïden kunnen vervolgens worden geëxtraheerd (C). <img alt="Figuur 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50665/50665fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50665/50665fig3.jpg" /><b<html> r /&gt; Figuur 3. Sferoïden generated in microputjesplaten. Sferoïden gevormd uit zevenhonderd (A, C, E) of vijftienhonderd (B, D, F) HT29 colonkankercellen (A, B), LNCaP-prostaatkankercellen (C, D) of TE6 slokdarmkanker cellen (E, F). Let op de consistentie van sferoïden in een preparaat, en ook verschillen tussen cellijnen - met name de losse LNCaP aggregaten ten opzichte van de dichter gepakt en TE6 HT29 cellen. Schaalbalk vertegenwoordigt 200 micrometer. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td colspan="3"> Microwell formaat </td></tr><tr><td></td><td> AggreWell 400 </td><td> AggreWell 40Ex </td><td> AggreWell 800 </td></tr><tr><td> Microwell breedte (al;color:#000000;background-color:#ffffff;font-weight:normal;font-style:normal;font-variant:normal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;&quot;&gt;µm ) </td><td> 400 </td><td> 400 </td><td> 800 </td></tr><tr><td> Microwells per cm 2 </td><td> 625 </td><td> 625 </td><td> 156.25 </td></tr><tr><td> Microwells per putje </td><td> 1200 </td><td> 4700 </td><td> 300 </td></tr><tr><td> Minimum cellen per microwell * </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 2000 </td></tr><tr><td> Maximum cellen per microwell * </td><td> 2000 </td><td> 2000 </td><td> 10.000 </td></tr><tr><td> Minimum cellen per well * </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 6 x 10 5 </td></tr><tr><td> Maximum cellen per well * </td><td> 2.4 x 10 6 </td><td> 9,4 x 10 6 </td><td> 3 x 10 6 </td></tr><tr><td> 1.1.1 - 70% Ethanol volume (ml) </td><td> 0.5 </td><td> 2.0 </td><td> 0.5 </td></tr><tr><td> 1.2.1 - spoeloplossing volume (ml) </td><td> 0.5 </td><td> 2.0 </td><td> 0.5 </td></tr><tr><td> 3.2 - Medium preload volume (ml) </td><td> 0.4 </td><td> 1.6 </td><td> 0.4 </td></tr><tr><td> 3.5 - Mobiele laadvolume (ml) </td><td> 0.4 </td><td> 1.6 </td><td> 0.4 </td></tr><tr><td colspan="4"> * Aantallen cellen per microwell zijn slechts een benadering aangezien deze waarde zal variëren met de grootte van de specifieke cellen gebruikt en moet empirisch worden bepaald </td></tr></tbody></table> Tabel 1. AggreWell opties en protocol wijzigingen.

We introduceren een protocol voor het aanleggen van grote aantallen (duizenden tot honderdduizenden) van gelijke grootte-en-samenstelling gecontroleerde bolvormige tumoren, met behulp van in de handel verkrijgbare microputjesplaten.

De productie van grote aantallen grote gecontroleerde bolvormige tumoren met behulp microputjesplaten

Tumor spheroids are increasingly recognized as an important in vitro model for the behavior of tumor cells in three dimensions. More physiologically ...

Het algemene doel van het volgende experiment is het genereren van grote aantallen tumor-sferoïden met een uniforme, gecontroleerde grootte. Dit wordt bereikt door eerst de microwell-platen voor te bereiden om de cellen te clusteren die tot sferoïden moeten worden gevormd. Als tweede stap wordt een cultuur van het gewenste celtype geoogst, wat de celsuspensie oplevert die de grootte en samenstelling van de OID's bepaalt.De celsuspensie wordt vervolgens gecentrifugeerd in de microwells en geïncubeerd om de vorming van sferoïden mogelijk te maken. Na incubatie zijn de resulterende sferoïden zeer uniform en kunnen ze worden verzameld of gekweekt in de microwells waarin ze zijn gevormd. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden is dat zeer grote aantallen uniforme aggregaten gelijktijdig kunnen worden geproduceerd.Personen die nieuw zijn met deze methode kunnen merken dat hun resultaten sterk variëren in grootte. Het is belangrijk om ervoor te zorgen dat de celsuspensie gelijkmatig over de plaat is verdeeld en dat de zwaaibare plaathouders in de centrale centrifuge vrij kunnen bewegen, zodat de kracht loodrecht op het oppervlak staat. Begin met het voorbereiden van een steriele agro well 400 plaat door 0,5 milliliters spoeloplossing met surfactant aan elke well toe te voegen.Het gebruik van surfactant zorgt ervoor dat de cellen niet reageren met het oppervlak van de microwel. Om te voorkomen dat er luchtbellen in de microwellen worden ingesloten, voegt u de vloeistof aan één zijde toe en laat u deze over het oppervlak verspreiden, in plaats van deze verticaal op het oppervlak te druppelen. Plaats na het toevoegen van de oplossing aan de wellen het deksel terug.Zorg ervoor dat de rotor correct is gebalanceerd voordat de platen twee minuten worden gecentrifugeerd bij 2000 ×g. Gebruik een omgekeerde microscoop met lage vergroting om bellen te verwijderen en controleer of de bellen uit de microputjes zijn verdwenen. Incubeer de plaat gedurende ten minste 30 minuten met het deksel erop bij kamertemperatuur of overnacht bij 4 °C. Aspireer de spoeloplossing uit de putjes en was de plaat onmiddellijk vóór gebruik met steriel water of PBS.Laat de platen na het coderen niet uitdrogen. De details van de celpreparatie variëren afhankelijk van het specifieke celtype dat wordt bestudeerd. We hebben echter vastgesteld dat deze conditie effectief is voor een breed scala aan cellen, inclusief de lijnen die we hier hebben besproken, evenals humane embryonale stamcellen en neuronale embryonale stamcellen, menselijke geïnduceerde pluripotente stamcellen, fibroblasten, putatieve, primitieve endoderm- en stromale cellen. Begin voor de preparatie van de cellen met de T 75-fles HT 29-cellen.Zuig het groeimedium uit de kolf en voeg drie milliliters trypsine toe. Incubeer de cellen gedurende vijf minuten bij 37 °C. Stop de trypsine-digestie door drie milliliters groeimedium toe te voegen.Breng het restant over in een centrifugebuis van 15 milliliter. Neem vervolgens uit de buis van 15 milliliter een aliquot voor het tellen van de cellen. Centrifugeer de cellen gedurende vijf minuten bij 200 ×g terwijl de centrifugatie gaande is.Tel de cellen. Aspireer vervolgens het mengsel van trypsinemedium en vervang dit door vers groeimedium met een volume dat is bepaald op basis van de vereiste celdichtheid, die eerder is berekend zoals beschreven in het tekstprotocol als een optionele stap.Filter de celsuspensie door een zeef om klonters te verwijderen. Sferoïden kunnen in verschillende mediumformuleringen worden gegenereerd, maar de eerste proeven moeten worden uitgevoerd met het medium waarin de cellen zijn gekweekt. Om de gevolgen van de overgang naar een driedimensionaal cultuursysteem te onderscheiden van de gevolgen van een verandering in de samenstelling van het medium, begint u met het toevoegen van 0,4 milliliters groeimedium aan elke well en centrifugeer vervolgens twee minuten bij 2000 ×g. Om luchtbellen te verwijderen, controleert u met een inverted microscoop bij lage vergroting of alle luchtbellen uit de microwells zijn verwijderd.Voeg vervolgens 0,4 milliliters cel-suspensie met de vereiste dichtheid toe aan de microwells. Meng dit vervolgens voorzichtig door te pipetteren zonder luchtbellen in de microwells te introduceren, om ervoor te zorgen dat de cellen gelijkmatig over de well zijn verdeeld. Dit is noodzakelijk om consistente steroiden te verkrijgen.Centrifugeer de plaat vijf minuten bij 200 ×g. De plaat moet intern en ten opzichte van de andere plaat worden gebalanceerd, zodat het gewicht gelijkmatig over beide zijden van de plaatdrager is verdeeld. Dit zorgt ervoor dat de plaat tijdens het centrifugeren zichzelf waterpas stelt, zodat er geen convectiestromen ontstaan die leiden tot een ongelijkmatige verdeling van cellen over de microwells.Verifieer met een omgekeerde microscoop of de cellen zijn geclusterd in de microwells en of ze gelijkmatig over de well zijn verdeeld voordat de cellen overnacht bij 37 °C worden geïncubeerd. Observeer het proces van sferoïdvorming met een omgekeerde microscoop. Sommige cellijnen vormen binnen 24 uur een compact sferoïd.Andere cellen kunnen er langer over doen. De progressie van cluster naar aggregaat in HT 29-cellen wordt hier getoond. Het moeilijkste deel van deze procedure is het verwijderen van de sferoïden zonder de structuren te verstoren. Om sferoïden uit de microwells te extraheren, pipetteert u zeer voorzichtig op en neer zodat de sferoïden uit de microwells komen.Kantel vervolgens de plaat om het mengsel van medium en steroïden af te zuigen. Gebruik pipetpunten met een brede opening voor grotere steroïden om afbraak van de steroïden te voorkomen. Nadat de steroïden uit de microwells zijn teruggewonnen, worden deze overgebracht naar de suspensiecultuur door ze voorzichtig met een pipet uit te spuiten.Als alternatief kunnen de severe rose-exemplaren in de seizure worden gehouden met een mediumvervanging. De duur hiervan is afhankelijk van de initiële grootte en de groeisnelheid, wat de tijd bepaalt totdat ze uit de microwells groeien. Wel werden ze gevormd om het medium te vervangen zonder verlies van steroiden.Zuig het medium aan de rand van de put op. Breng de punt van een Pasteurpipet langzaam naar beneden tot deze vloeistof uit de meniscus begint op te zuigen en volg de meniscus naar beneden terwijl deze daalt. Voeg vervolgens vers medium toe tegen de wand van de put op dezelfde plaats.Houd er bij het toevoegen van het verse medium rekening mee dat u de pipette voorzichtig bedient en de tip tegen de wand houdt om verstoring van de PHE in de microwells te voorkomen. Er kan een kleine hoeveelheid steroïden verloren gaan. Echter, indien het medium telkens vanuit dezelfde positie wordt geaspireerd en vervangen, zal dit aantal beperkt blijven.In vergelijking met de grote aantallen in de put kunnen steroïden uit meerdere tumorlijnen van verschillende anatomische oorsprong gemakkelijk in suspensie worden geëxtraheerd. De consistente groottebeheersing die via deze methode kan worden bereikt, wordt hier aangetoond met zeer uniforme steroïdepopulaties. Onder elke conditie gevormd uit 700 of 1.500 cellen.Duidelijke verschillen in gedrag tussen cellijnen zijn ook zichtbaar bij HT 29 colonkankercellen en TE six slokdarmkankercellen, die dichtgepakte sferoïden vormen met scherp gedefinieerde grenzen. Daarentegen vormen lin cap prostaatkankercellen minder coherente sferoïden met onregelmatige grenzen. De sterkere interne krachten in de meer coherente aggregaten leidden ook tot een inkrimping tot een symmetrischer vorm, zelfs terwijl ze zich nog in de microwells bevonden waarin ze waren gevormd.De lin cap-aggregaten, met name bij de grotere formaten, behouden echter zichtbaar de vierkante parametale geometrie van de microwells. Zodra deze methode onder de knie is, kan dit proces in ongeveer een uur worden uitgevoerd, plus de incubatietijd die nodig is voor de cellen om te hechten en vloeistoffen te produceren. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om ervoor te zorgen dat er geen bellen in de microwells aanwezig zijn voordat de cellen worden toegevoegd.

production-large-numbers-size-controlled-tumor-spheroids-using

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Dit protocol beschrijft een celtransplantatiesysteem met behulp van genetisch gemodificeerde, injecteerbare sferen. Celsferen worden gekweekt op microgepatternde kweekplaten en hersteld na genintroductie met behulp van polyplex nanomicellen. Dit systeem vergemakkelijkt langdurige transgenexpressie van de getransplanteerde cellen in gastdieren terwijl het de aangeboren functie van de cellen behoudt.

Gentransfectie richting Sferoïde Cellen op micropatterned Cultuur Platen voor genetisch gemodificeerde Cell Transplantation

Er wordt een protocol gepresenteerd voor robotisch afdrukken van kankercelsferoïden in een 96-wellsplaatformaat met hoge doorvoer met behulp van een waterig tweefasensysteem.

Robotic productie van Cancer Cell sferoïden met een waterige tweefasensysteem voor Drug Testing

Het identificeren van nieuwe geneesmiddeldoelen die overgaan van preklinisch onderzoek naar menselijke proeven is een wetenschappelijke prioriteit. Daartoe beschrijven we hier een functionele genoombenadering voor het onderzoeken van de impact van gendepletie op kankerstamlijnsferoïden, die menselijke kankers beter modelleren in vivo.

Gebruik makend van Functional Genomics Screening om potentieel nieuwe drug targets in Cancer Cell Sferoïde Cultures Identificeer

Hier beschrijven we een snel en flexibel protocol voor de vorming van 3D-celsferoïden door celaggregatie. Dit is gemakkelijk aanpasbaar voor meerdere celtypen en is geschikt voor gebruik in een verscheidenheid aan toepassingen, waaronder celmigratie, invasie of anoikis-assays, en voor het visualiseren en kwantificeren van cel-matrix interacties.

Een efficiënt en flexibel Cel aggregatie voor 3D Sferoïde Production

Dit manuscript introduceert een robuuste methode voor het fabriceren van holle microwells zonder de behoefte aan complexe hoge kosten voorzieningen. Met behulp van magnetische kracht, stalen kralen en een matrix via holes, werden verschillende honderd microwells gevormd in een 3 x 3 cm Polydimethylsiloxaan (PDMS) substraat.

Een gepaarde kraal en magneet Array voor Molding Microwells met variabele concaaf geometrieën

Over een breed scala van indicaties van de ziekte, meer fysiologisch relevante modellen worden ontwikkeld en uitgevoerd in drug discovery-programma's. Het nieuwe modelsysteem hier beschreven demonstreert hoe driedimensionale tumor spheroïden kunnen worden gekweekt en vertoond in een high-throughput 1536-well plaat-gebaseerd systeem om te zoeken naar nieuwe oncologie drugs.

Generatie van High-Throughput driedimensionale Tumor spheroïden voor Drug Screening

Het huidige protocol beschrijft een techniek om op grote schaal en kosteneffectief weefselsferoïden te produceren met behulp van een 3D-geprint stempelachtig apparaat.

Genereren van weefselsferoïden via een 3D-geprint stempelachtig apparaat

Dit artikel demonstreert een gestandaardiseerde methode voor het construeren van driedimensionale tumorsferoïden. Een strategie voor sferoïde observatie en beeldgebaseerde deep-learning analyse met behulp van een geautomatiseerd beeldvormingssysteem wordt ook beschreven.

Generatie van 3D-tumorsferoïden voor geneesmiddelenevaluatiestudies

Hier presenteren we een protocol dat snelle, robuuste en goedkope fabricage van tumorsferoïden mogelijk maakt, gevolgd door hydrogel-inkapseling. Het is breed toepasbaar omdat er geen gespecialiseerde apparatuur voor nodig is. Het zou met name nuttig zijn voor het onderzoeken van sferoïde-matrixinteracties en het bouwen van in vitro weefselfysiologische of pathologiemodellen.

Fabricage en inkapseling van tumorsferoïden in polyethyleenglycolhydrogels voor het bestuderen van sferoïde-matrixinteracties

Hier beschrijven we verschillende methoden voor de vorming van meercellige sferoïden om follow-up multi-parameter live celmicroscopie uit te voeren. Met behulp van fluorescentie lifetime imaging microscopie (FLIM), cellulaire autofluorescentie, kleuringskleurstoffen en nanodeeltjes wordt de benadering voor analyse van celmetabolisme, hypoxie en celdood in levende driedimensionale (3D) kanker en van stamcellen afgeleide sferoïden gedemonstreerd.

Productie en multi-parameter live cell fluorescentie lifetime imaging microscopie (FLIM) van meercellige sferoïden

Deze studie presenteert een kosteneffectieve en efficiënte methodologie voor het genereren van 3D-celstructuren met behulp van een op stempels gebaseerd systeem om microwells in agaroseschimmels te maken. Het systeem bevordert de vorming van uniforme sferoïden/organoïden, waardoor de celinteracties worden verbeterd. Deze aanpak vermindert de experimentele variabiliteit en ondersteunt toepassingen in het testen van geneesmiddelen en weefselmanipulatie.

Generatie van driedimensionale sferoïden/organoïden uit tweedimensionale celculturen met behulp van een nieuw stempelapparaat

Leer hoe je grote aantallen uniforme tumorbolvormen produceert met microputjesplaten. Deze methode maakt gelijktijdige vorming van duizenden tot honderdduizenden bolvormen mogelijk voor onderzoek in oncologie en celbiologie.

De productie van grote aantallen grote gecontroleerde bolvormige tumoren met behulp microputjesplaten

Meer video's verkennen