Name: Gavaging Adult zebravis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 9 s
Description: Leer een gavagetechniek voor volwassen zebravissen om oplossingen nauwkeurig toe te dienen. Deze methode ondersteunt onderzoek naar pathogene organismen via de orale-fecale route.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De Rockefeller University Comparative Bioscience Center steun verleend aan dit project. Wij danken Janelle Monnas voor technische ondersteuning.

1. Voorbereiden van de verdoving Solution <ol><li> Bereid een oplossing van 150 mg / l MS-222 systeem in water, hetzij uit een voorraadoplossing of poedervorm. </li><li> Controleer de pH met een pH-meter. </li><li> Buffer met natriumbicarbonaat als nodig totdat de pH tussen 7-7.5. </li><li> Bereid een tank van het systeem water vrij van MS-222 voor de vissen om te herstellen inch De hersteltijd is meestal minder dan 1 minuut. </li></ol> 2. Voorbereiden van de Gavage Apparatus <ol><li> Snijd de heldere 22-G implantatie slang aan op een iets meer dan benaderende lengte van de mond naar de darm bol van de vis. Aanvankelijk, raden we verlamming van een vis voor elke nieuwe groep gebruikt om de beste schatting van de lengte die nodig is te krijgen. </li><li> Duw de cut duidelijke inplanting slang op de ½-inch 22-G naald totdat het veilig is en er geen risico van losmaken. Als een ½ 22-C naald niet beschikbaar is, snijd een langere naald approximately die lengte. </li><li> Wanneer voltooid, moet de katheter implantatie buis uitstrekken ongeveer 1 cm van de punt van de naald of korter wanneer de vis kleiner. </li><li> Bevestig de 22-G naald hub naar een 1-cc luerlok spuit. </li></ol> 3. Voorbereiding voor Gavage <ol><li> Snijd een groef in een spons met een scalpel. </li><li> Week de spons in het systeem water vrij van MS-222. </li><li> Plaats de vochtige spons op een vlakke ondergrond. </li><li> Het opstellen van de juiste 5 ul oplossing voor maagsonde in de 22-G katheter buis en een 1-cc spuit. </li></ol> 4. Anesthesie en Gavage <ol><li> Snel de vis ten minste 24 uur voor de procedure. </li><li> Leg de vis in de MS-222 oplossing totdat hij verliest zijn oprichtreflex, en reageert niet op een staartvin snuifje, maar handhaaft opercular beweging. Dit duurt meestal ongeveer 2-3 minuten. </li><li> Haal de vis uit de verdoving oplossing en plaats deze inde groef in de spons met het hoofd lichtjes uitsteekt uit de spons, maar de kieuwen waarop de spons. </li><li> Verplaats de spons in een verticale positie. </li><li> Open de mond van de zebravis met behulp van de 22-G katheter slangen. </li><li> Steek de slang totdat de punt is langs de kieuwen (ongeveer 1 cm of de lengte van de buis). De implantatie lijnen dienen niet te worden gedwongen. Weerstand suggereert de buis kan worden raken van de kieuw boog of het hart. </li><li> Als er weerstand is, zachtjes trekken, herpositioneren en probeer het opnieuw. </li><li> Injecteer het materiaal langzaam. </li><li> Tijdens het injecteren, zorg ervoor dat de oplossing niet verlaten via de kieuwen of de mond. </li><li> Haal de vis uit de spons en de plaats in de vuilwatertank. </li><li> Herstel optreedt bij minder dan 1 min en wordt aangegeven door de vis rechtop zwemmen en evenwicht te bewaren. </li><li> Monitor vis voor regurgitatie zoals getoond door het visualiseren van de vis actief verdrijven material uit zijn mond, of geen opercular beweging. </li><li> Vissen kunnen worden teruggestuurd naar hun reguliere tank zodra ze hersteld zijn. </li></ol>

<ol><li>Royes, J. -A. B., Chapman, F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoyes%2C+J-AB+%22Preparing+Your+Own+Fish+Feeds%22">Preparing Your Own Fish Feeds</a>. , Department of Fisheries and Aquatic Sciences, Florida Cooperative Extension Service, Insitute of Food and Agricultural Sciences, University of Florida. (2009).</li>
<li>Gomez-Gil, B., Cabanillas-Ramos, J., Paez-Brambila, A., Roque, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+of+the+bioencapsulation+of+enrofloxacin+and+oxytetracycline+in+Artemia+fransciscana+Kellogg%5BTitle%5D)+AND+%22Aquaculture%22%5BJournal%5D)">Standardization of the bioencapsulation of enrofloxacin and oxytetracycline in Artemia fransciscana Kellogg.</a> Aquaculture. 196, 1-12 (1906).</li>
<li>Langdon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microparticle+types+for+delivering+nutrients+to+marine+fish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Aquaculture%22%5BJournal%5D)">Microparticle types for delivering nutrients to marine fish larvae.</a> Aquaculture. 227, 259-275 (2003).</li>
<li>Langdon, C., Nordgreen, A., Hawkyard, M., Hamre, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+wax+spray+beads+for+delivery+of+low-molecular+weight%2C+water+soluble+nutrients+and+antibiotics+to+Artemia%5BTitle%5D)+AND+%22Aquaculture%22%5BJournal%5D)">Evaluation of wax spray beads for delivery of low-molecular weight, water soluble nutrients and antibiotics to Artemia.</a> Aquaculture. 284, 151-158 (2008).</li>
<li>Zang, L., Morikane, D., Shimada, Y., Tanaka, T., Nishimura, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Protocol+for+the+Oral+Administration+of+Test+Chemicals+to+Adult+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">A Novel Protocol for the Oral Administration of Test Chemicals to Adult Zebrafish.</a> Zebrafish. 8, 203-210 (2011).</li>
<li>Goldsmith, J. R., Jobin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Think+Small%3A+Zebrafish+as+a+Model+System+of+Human+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedicine+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Think Small: Zebrafish as a Model System of Human pathology.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. , (2012).</li>
<li>Tysnes, K. R., Jorgensen, A., Poppe, T., Midtlyng, P. J., Robertson, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+expermients+on+use+of+zebrafish+as+a+laboratory+model+for+Giardia+duodenalis+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Parasitologica%22%5BJournal%5D)">Preliminary expermients on use of zebrafish as a laboratory model for Giardia duodenalis infection.</a> Acta Parasitologica. 57, 1-6 (2012).</li>
<li>Marie, B., Huet, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+a+toxic+cyanobacterial+bloom+%28Planktothris+agardhii%29+on+fish%3A+Insights+from+histopathological+and+quantitative+proteomic+assessments+following+the+oral+exposure+of+medaka+fish+%28Oryzias+latipes%29%5BTitle%5D)+AND+%22Aquatic+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Effects of a toxic cyanobacterial bloom (Planktothris agardhii) on fish: Insights from histopathological and quantitative proteomic assessments following the oral exposure of medaka fish (Oryzias latipes).</a> Aquatic Toxicology. 114-115, 39-48 (2012).</li>
<li>Canadian Council on Animal Care. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22CCAC+guidelines+on%3A+the+care+and+use+of+fish+in+research%2C+teaching+and+testing%22">CCAC guidelines on: the care and use of fish in research, teaching and testing</a>. , CCAC. Ottawa, Ontario, Canada. (2005).</li>
<li>Harper, C., Lawrence, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarper%2C+C+%22The+Laboratory+Zebrafish%22">The Laboratory Zebrafish</a>. , CRC Press. Boca Raton, Florida, USA. (2011).</li>
<li>De Tolla, L. J., Srinivas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+Care+and+Use+of+Fish+in+Research%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the Care and Use of Fish in Research.</a> ILAR Journal. 37 (4), (1995).</li>
<li>Topic Popovic, N., Strunjak-Perovic, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tricaine+methane-sulfonate+%28MS-222%29+application+in+fish+anaesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Ichthyology%22%5BJournal%5D)">Tricaine methane-sulfonate (MS-222) application in fish anaesthesia.</a> Journal of Applied Ichthyology. 28, 553-564 (2012).</li>
<li>Field, H. A., Kelley, K. A., Martell, L., Goldstein, A. M., Serluca, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+gastrointestinal+physiology+using+a+novel+intestinal+transit+assay+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+%26+Motility%22%5BJournal%5D)">Analysis of gastrointestinal physiology using a novel intestinal transit assay in zebrafish.</a> Neurogastroenterology & Motility. 21, 304-312 (2009).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen.

Betekenis Deze techniek is een verbetering en biedt een aantal voordelen ten opzichte van de twee eerder beschreven technieken gavaging volwassen zebravissen. Ten eerste, het gebruik van een spons om de vis te beperken kan een persoon om de procedure uit te voeren, in tegenstelling tot een eerder beschreven techniek waarbij twee mensen. 7 tweede katheter implantatie slang flexibeler dan intraveneuze katheters, die kunnen helpen bij het ​​minimaliseren secundaire trauma door tegen per...

Huidige methoden voor het toedienen van verbindingen oraal aan zebravis het toedienen van verbindingen top-bekleed op voer, gemengd in gelatine diëten 1, bioencapsulated in Artemia 2, gemengd met lipide ingekapselde diëten 3, waxspray kralen 4 en via gluten-gebaseerde diëten. 5 Beperkingen van deze methoden van orale toediening omvatten hoge uitloogsnelheden en onvolledige of onvoorspelbare verbinding consumptie door de individuele vissen. Deze variabelen zijn problematisch omdat de besmettelijke ziekte in studies, het kennen van de infectieuze dosis toegediend aan de vis kan zijn van cruciaal belang voor studiesucces. Ook heeft vorige werk aangetoond dat bepaalde verbindingen toegediend in waterbaden toxische laesie aan kieuwen zebravis voordat de intestinale effecten die kunnen worden onder onderzoek plaatsvinden. 6 Maagsonde is een standaard methode die wordt gebruikt in andere proefdier is om precieze hoeveelheden van een product toedienen met aknown concentratie voor de studie in biomedisch en farmaceutisch onderzoek. Pas sinds kort hebben methoden voor gavaging zebravis is in de literatuur beschreven. Een techniek beschreven twee personen onder toepassing van een 24-G katheterschacht bevestigd aan een 2-20 ul pipet 5 pl oplossing te leveren. 7 De beschreven werkwijze had een sterftecijfer van 8,7% en 39% op de eerste en tweede proef, respectievelijk meeste sterfte werd toegeschreven aan zwangere vrouwen. De tweede maagsonde beschreven techniek gebruikt stompe getipt maagsonde spuiten tot 5 pl oplossing voor medakas (Oryzias latipes). 8 Informatie over de sterfte was niet voorzien en de exacte proces van het uitvoeren van de maagsonde werd niet beschreven toedienen. Volgens de Canadese Raad over Animal Care en het Laboratorium zebravis, tot 1% van de vis lichaamsgewicht kan worden toegediend via een maagsonde. 9,10 Ons doel was om een herhaalbare, veilige en efficiënte methode voor het leveren van nauwkeurige volumes com ontwikkelenpond mondeling naar volwassen zebravissen van beide geslachten en in alle fasen van de broedperiode. Deze procedure geschikt is voor een studie die nauwkeurige orale dosering van een verbinding noodzakelijk zijn.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Uitrusting</td></tr><tr><td>Een spons</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1-cc luer lock spuit</td><td>Becton Dickinson Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>22-G Micro-Renathane implantatieslang (gesneden)</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 22-G naald (gesneden, indien nodig)</td><td>Becton Dickinson Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pH-meter</td><td>Hanna sonde</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 scalpelmesje</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td colspan="4">Reagens/Materiaal</td></tr><tr><td>MS-222 (Finquel)</td><td>Argent Laboratories</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

gavaging adult zebravis

Gavaging Adult Zebrafish

De zebravis is een belangrijk geworden in vivo model in het biomedisch onderzoek. Effectieve methoden moeten worden ontwikkeld en gebruikt om verbindingen of agenten leveren oplossingen voor wetenschappelijk onderzoek. Huidige methoden voor het toedienen van verbindingen oraal aan volwassen zebravissen zijn onjuist van de variabiliteit van de vrijwillige consumptie door de vis. Een maagsonde procedure werd ontwikkeld om precieze hoeveelheden van infectieuze agentia te leveren bij de zebravis voor studie in het biomedisch onderzoek. Volwassen zebravissen meer dan 6 maanden oud werden verdoofd met 150 mg / L van gebufferde MS-222 en gavaged met 5 pl oplossing met flexibele katheter implantatie slang bevestigd aan een cut 22-G naald. De flexibele buis werd neergelaten in de mondholte van de zebravis tot het uiteinde van de buis gestrekt boven de kieuwen (ca. 1 cm). De oplossing werd vervolgens langzaam geïnjecteerd in het darmkanaal. Deze methode is effectief 88% van de tijd, met vis herstellen uneventfully. Dezeprocedure is ook efficiënt als een persoon kan 20-30 vissen een maagsonde in een uur. Deze methode kan worden gebruikt om precies te beheren middelen voor infectieziekten studies of studies van andere verbindingen in volwassen zebravissen.

Beide geslachten van vis, waaronder zwangere vrouwen werden met succes gavaged (figuur 1). Een succesvolle procedure duurt minder dan een minuut met geen vloeistof gezien het verlaten van de kieuwen of de mond. De slang gaat gemakkelijk, zonder geweld, zonder bloed gezien bij verwijdering van de katheter. De procedure is snel en vereist ongeveer 10 min tot maagsonde 3-4 vis, met een gemiddelde van 30-45 sec per vis. Zebravis mag niet gavaged met meer dan 5 pl van elke oploss...

Het toenemende gebruik van zebravis als diermodel vereist de ontwikkeling van effectieve methoden voor het leveren van bekende hoeveelheden van verbindingen en oplossingen. De maagsonde hieronder beschreven procedure maakt het mogelijk voor de orale aflevering van de precieze omvang van de oplossing betrouwbaar, veilig en efficiënt op volwassen zebravissen.

Gavaging Adult zebravis

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

Het algemene doel van deze video is om een techniek voor het maagsonderen van volwassen zebravissen te demonstreren. We hebben deze techniek ontwikkeld om pathogene organismen te bestuderen die via de oraal-fecale route worden overgedragen. Het kan worden gebruikt om een nauwkeurige hoeveelheid oplossing toe te dienen.Voor studie bij volwassen zebravissen. Het gehele proces bestaat uit vier stappen. De eerste stap is het voorbereiden van de gavage-apparatuur.De tweede stap is het anesthetiseren van de vissen met 150 mg/L gebufferde MS 222. De derde stap is het toedienen van de oplossing aan de vissen via gavage. De laatste stap is het herstel van de vissen en het monitoren op bijwerkingen.Om het sondeerapparaat te maken, knipt u de implantatieslang van 22 gauge op de juiste lengte voor de vis, bevestigt u deze aan de naald van 22 gauge en zet u deze vast op de spuit van 1 ml met luer-lock. Wanneer uw oplossing klaar is, kan deze in het apparaat worden opgezogen. Voor toediening aan de zebravis moet er met een scalpelblad of schaar een inkeping in een spons zijn gemaakt, zodat de vis stevig wordt vastgehouden wanneer deze in de spons wordt geplaatst.De spons moet vooraf worden geweekt in systeemwater om deze vochtig te houden. Er moet ook een herstelbak met systeemwater zonder anestheticum worden voorbereid om de vissen in te plaatsen zodra de procedure is voltooid. Laat de vissen ten minste 24 uur vasten voor de procedure.Verplaats de vissen met een net naar de MS 2 22 anesthesietank. Zodra de vis is geanestheseerd, wat wordt aangetoond door het uitblijven van een reactie op een kneep in de staartvin, haal je de vis uit de anesthesieoplossing en plaats je deze in de spons, zodanig dat de kop er iets uitsteekt maar de kieuwen bedekt zijn. Breng de spons in een verticale positie en open de bek van de zebravis met de 22 gauge implantatiebuis.Voeg de slang voorzichtig in totdat de punt zich voorbij het niveau van het hart bevindt. De lengte varieert afhankelijk van de grootte van de vis; indien er weerstand is, trek de slang dan voorzichtig terug, herpositioneer deze en probeer het opnieuw. Er mag geen kracht nodig zijn om de slang door het darmkanaal van de zebravis te duwen.Zodra de juiste positie is bereikt, injecteert u de oplossing en verwijdert u de slang. Plaats de vis in het hersteltank door deze uit de spons te laten glijden. Bij een correcte uitvoering zou de slang gemakkelijk in het darmkanaal van de zebravis moeten glijden.Er mag geen vloeistof uit de kieuwen of de bek komen. Er mag geen bloed zichtbaar zijn op de punt van de slang of uit de kieuwen van de vis komen. Het meest voorkomende probleem is vloeistof die via de bek of de kieuwen ontsnapt, wat erop wijst dat de slang niet ver genoeg in de vis is ingebracht.Deze procedure heeft een algemeen succespercentage van 88%. Wanneer de procedure correct wordt uitgevoerd, mogen er niet meer dan five µL vloeistof worden toegediend, aangezien dit het succespercentage van de procedure sterk vermindert. Toen we probeerden 10 µL oplossing toe te dienen, daalde het algemene succespercentage naar 50%. In deze video hebben we gedemonstreerd hoe adult zebrafish worden gegavaged. Deze procedure kan worden gebruikt om nauwkeurig bekende hoeveelheden oplossingen toe te dienen aan zebrafish.De voordelen van deze techniek ten opzichte van eerder beschreven technieken zijn dat er flexibeler materiaal wordt gebruikt en dat drachtige vrouwtjes effectiever via een sonde kunnen worden gevoed. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw werk.

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Wij presenteren een nieuwe methode voor microgavage van zebravislarven met gebruik van standaardapparatuur voor embryo-microinjectie en stereomicroscopie. We tonen aan dat microgavage een veilige en efficiënte techniek is die nuttig is voor het toedienen van gecontroleerde hoeveelheden uiteenlopende materialen specifiek in het lumen van de darm van de zebravislarve.

Microgavage van zebravis Larven

De zebravis embryo is een uitstekend model voor ontwikkelingsbiologie onderzoek. Tijdens de embryogenese, zebravissen ontwikkelen met een dooier massa, die driedimensionale uitdagingen voor monster observatie en analyse presenteert. Dit protocol beschrijft hoe twee-dimensionale platte mount voorbereidingen van ganse berg in situ (WISH) gekleurd zebravis embryo exemplaren maken.

Flat Mount Voorbereiding voor observatie en analyse van de zebravis embryo Exemplaren gekleurd door Whole Mount<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisatie

Het gebruik van zebravissen voor cardiovasculair onderzoek breidt zich uit naar onderzoek naar volwassen harten. Voor deze toepassingen is snelle en eenvoudige isolatie van hartweefsels essentieel om postmortale veranderingen te voorkomen en om een voldoende aantal monsters te verkrijgen. Hier beschrijven we een snelle en reproduceerbare methode voor het dissecteren van harten van volwassen zebravissen.

Herstel van de Adult zebravis Harten voor High-throughput Toepassingen

Hier presenteren we een protocol voor het isoleren gonadale weefsel van larvale zebravis, die onderzoeken zebravis geslachtsdifferentiatie en het onderhoud vergemakkelijkt.

Dissectie van larvale zebravis Gonadale Tissue

Het doel van dit protocol is voor het meten van de transittijd van fluorescently geëtiketteerde voedsel door de darm van larvale zebrafish in een hoge doorvoersnelheid mode.

High-throughput meting van darm transittijd met behulp van larvale zebravis

Skeletspierregeneratie wordt aangedreven door weefsel ingezeten spierstamcellen, die bij veel spierziekten zoals spierdystrofie worden aangetast, en dit resulteert in het onvermogen van spieren om te regenereren. Hier beschrijven we een protocol dat het mogelijk maakt om spierregeneratie te onderzoeken in zebravismodellen van spierziekte.

Het onderzoeken van Spierregeneratie in Zebrafish Modellen van Spierziekte

Dit protocol beschrijft de procedure voor het verwijderen van de ventrale kwab van de lever bij volwassen zebravissen om de studie van leverregeneratie mogelijk te maken.

Gedeeltelijke hepatectomie bij volwassen zebravissen

Dit protocol schetst de belangrijkste stappen voor het verkrijgen van kiemvrije (GF) visembryo's en het onderhouden ervan vanaf de larven tot het juveniele stadium, inclusief bemonstering en het detecteren van hun steriele status. Het gebruik van GF-modellen met infectie is belangrijk voor het begrijpen van de rol van microben in de gezondheid van de gastheer.

Generatie, onderhoud en identificatie van kiemvrije zebravismodellen van larven tot juveniele stadia

Transplantatie van Whole nier Marrow in Adult zebravis

Hier laten we zien hoe retro-orbitale injectie te doen in volwassen zebravissen.

Retro-orbitale injectie in Adult zebravis

Leer een gavagetechniek voor volwassen zebravissen om oplossingen nauwkeurig toe te dienen. Deze methode ondersteunt onderzoek naar pathogene organismen via de orale-fecale route.

Gavaging Adult zebravis

Meer video's verkennen