Name: A Single-fly test voor foerageergedrag in Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-04T21:30:00.000+00:00
Duration: 13 min 1 s
Description: Leer een geautomatiseerde test voor foerageergedrag in Drosophila melanogaster. Deze methode kwantificeert gedragsveranderingen door voedseldeprivatie en helpt onderzoekers de relatie tussen honger en olfactorisch zoekgedrag bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door subsidies voor onderzoek naar JWW van het National Institute of Health (R01DK092640) en de National Science Foundation (0.920.668).

1. Fly Collection en uithongering <ol><li> Achterzijde van de experimentele vliegen onder gecontroleerde temperatuur en vochtigheidsgraad (bv. 21 ° C, 50-60% relatieve vochtigheid) op een 12-uur licht / donker-cyclus. </li><li> Verzamel vrouw vliegt op de dag van eclosion en leg ze, samen met 4-5 mannetjes, in nieuwe voeding flesjes (maximaal 30 per flacon). Leeftijd vliegt 2-5 dagen. </li><li> Bereid de kamers voor vlieg verhongering. <ol><li> Duw een weefsel (4,8 x 8,4 inch) tot aan de bodem van een lege plastic flacon. Volledig genieten van het weefsel met gedestilleerd water. Gebruik een voorwerp naar beneden te duwen op het weefsel en knijp er zachtjes het overtollige water. </li><li> Keer de injectieflacon om het extra water weggooien. Er moet voldoende water om de vliegen gehydrateerd en honger kamer vochtig houden, maar niet genoeg om de vliegen verdrinken. </li></ol></li><li> Breng de vliegen uit het voedsel flacon op in een honger kamer en sluit de flacon ongeveer 18-24 uur voordat het experiment begint. Bewaar devaatjes onder gecontroleerde temperatuur en vochtigheid &#39;s nachts tot het experiment begint de volgende dag. </li></ol> 2. Voorbereiding van de Voedsel Geur <ol><li> Bereid een 1% agarose-oplossing door 0,1 g agarose lage smelttemperatuur tot 10 ml gedestilleerd water in een glazen kolf. Verwarm de agarose oplossing in een magnetron enkel tot het begint te koken, maar ruim voor het overkookt. <ol><li> Stop de magnetron en zwenk de kolf een keer. Herhaal deze stap nog twee keer tot de agarose volledig is opgelost. Bewaar de agarose oplossing in een vloeibare toestand door het houden van de kolf warm op een kookplaat ingesteld op 50 ° C. </li></ol></li><li> Voeg 990 ul van de 1% agarose-oplossing en 10 ul van appelazijn om een ​​1,5 ml Eppendorf buis naar een 1% appelazijn oplossing. Vortex de oplossing totdat gemengd en doe dit in een droge bad incubator ingesteld op 50 ° C. </li></ol> 3. Testen Kamer en Gedrag Kamer Setup <ol><li&gt; Stel de testkamer op de gewenste condities (temperatuur en vochtigheid). </li><li> Schakel de LED-paneel (660 nm). </li><li> Spoel de zeven en testplaten met warm water en verwarm ze in een droogoven tot alle vocht verdampt. Koel de zeven en platen naar beneden om het testen op kamertemperatuur voordat u begint met experimenten. </li><li> Plaats een ondiepe schaal op de top van de diffuser bord en vul het met water om de plaatselijke luchtvochtigheid te verhogen en om het water te maskeren in de agarose druppel. </li><li> Plaats de zeven over het water gerecht. </li></ol> 4. Vlieg Laden in de testkamer Plates Diagrammen met specificaties voor het testen van borden zijn te vinden in de sectie Aanvullende Files. Het testen plaat is gemaakt van helder acryl en bestaat uit 6 testen arena&#39;s. Een eenvoudige slider bevat met kamers die vliegen laden, tijdelijke insluiting, en gelijktijdige release van 6 vliegen mogelijk te maken in hun respectievelijke kamers bijde start van het experiment. Dradenkruis geëtst in het centrum van elke arena in de plaat aan waar geurstoffen worden gepipetteerd. <ol><li> Plaats de schuifregelaars in de acryl testplaat. </li><li> Schuif de afzuiger in de flacon langs de prop katoen en laat ongeveer 6 vliegen te lopen in de aspirator.it is van cruciaal belang zo zacht mogelijk te zijn in het omgaan met hen. Men kan gebruik maken van phototactic vlieg gedrag om vliegen ertoe te kruipen richting de afzuiger door te wijzen de flacon opening naar een schemerig licht bron. Eventueel kan men ook zachtjes afzuigen ongeveer 6 vrouwtjes zuigen. </li><li> Steek de punt van de aspirator in het eerste gat van de testplaat. Laat een vlieg te passeren in de cel en voorzichtig vooruit de schuif naar voren om een ​​vlieg te laden in de volgende hole. Ga door tot vliegen bezetten alle 6 die cellen van de plaat. </li><li> Pipetteer 5 ul van 1% appelazijn agarose oplossing direct op het midden van de cross dradenkruis op het binnenvlak van de testplaat. </li></ol> 5. Plaatsing van de testplaat <ol><li> Om het testen plaat te centreren, opent u het bestand met de naam &quot;Positioneren Tool.vi.&quot; &quot;LabVIEW VI voor Positioning Tool. vi is te vinden in de sectie Aanvullende Files. Voer het bestand door te klikken op de witte pijl in de linkerbovenhoek van het scherm. </li><li> Plaats de testplaat bovenop de zeef zodat de arena opening naar de zeef verdieping en de geur doel op het plafond van de plaat. Lijn de crosshairs geëtst in de achterkant van de testplaat met het kruis haren op het beeldscherm. </li><li> Wanneer uitlijning is voltooid, afbreken executie door te klikken op de rode stip in de buurt van de linkerbovenhoek van de monitor. </li></ol> 6. Noteer de Fly Positie tijdens het experiment <ol><li> Op te sporen en noteer de coördinaten van de vlieg tijdens elk voedsel zoeken proef, opent de acquisitie software bestand &quot;Fly Tracking -. Zes Zones.vi &quot;LabVIEW VI&#39;s voor&quot; Fly Tracking - Zes Zones.vi &quot;is te vinden in de sectie Aanvullende Files Voer het bestand door te klikken op de witte pijl in de linkerbovenhoek van de monitor. . </li><li> Wijs het bestand een naam en klik op &quot;OK.&quot; </li><li> Vooraf de schuifknoppen in de testkamers de vliegen vrij in de test arena&#39;s. Wees voorzichtig dat u de testkamers te verplaatsen, omdat dit zal leiden tot onjuiste uitlijning met analyse software coördinaten. </li><li> Klik op &quot;Start&quot; (opname begint) en ervoor te zorgen dat de enige bron van licht in de testkamer is de 660 nm LED-paneel. </li><li> Wanneer het proces is voltooid, verwijdert de zeef en het gedrag kamer. Til het testen plaat uit de zeef en verwijder de vliegen door onderdompeling de plaat in ijs. Reinig de plaat met warm water en verwijder eventuele agarose puin. Plaats de test platen in een droogoven vocht te verwijderen. </li><li> Ventileer de testafdeling door te draaien op een small ventilator voor ongeveer 2 minuten. Schakel de ventilator uit en plaatst u de volgende groep van vliegen naar de volgende testen plaat. </li></ol> 7. Data analyse met behulp van Custom Software &quot;Data-analyse voor Fly Tracking-zes zones&quot; zijn te vinden in de sectie Aanvullende Files. Tijdens de data-acquisitie, de acquisitie software registreert individuele fly positie coördinaten voor elk tijdstip in een tekstbestand. Een digitale camera boven het testen platen verkrijgt beelden met een snelheid van 0,5 Hz. De analyse software programma &quot;Data-analyse voor Fly Tracking-zes zones&quot; haalt informatie uit dat tekstbestand naar a) het berekenen van de gemiddelde snelheid, b) bepalen het tijdstip waarop een vlieg succes ligt de geurbron, en c) bouwen grafische vensters dat de gebruiker om het beeld te staan: vliegen locatie, afstand van de vlieg van de geurbron in de tijd en de gemiddelde fly snelheid in de tijd. Het formatteert de gegevens ook voor eenvoudige export in een SPREadsheet programma. In deze macro wordt het voedsel zoektijdvertraging gedefinieerd als het tijdstip waarop vliegt besteden ten minste 5 seconden binnen een straal van 5 mm van het midden van de arena. <ol><li> Open de analyse software bestand &quot;Data-analyse voor Fly Tracking - Zes Zones&quot;. Onder het tabblad &quot;Windows&quot;, klik op &quot;Create New Table.&quot; Herhaal deze stap tot zes tafels zijn gemaakt. </li><li> Onder het tabblad &quot;Macro&#39;s&quot;, klik op &quot;Foodfinding.&quot; Een Main Panel moeten verschijnen met de volgende opties: Open Ruwe gegevensbestand voor lay-out; Open Ruwe gegevensbestand voor Data File; Fly Location; Afstand, snelheid, Lay-out; FormatDataFile. </li><li> Om ruwe data te bekijken zonder het toevoegen van waarden in een tekstbestand, klik op &quot;Open Raw Data File voor lay-out.&quot; Zoek en selecteer de experimentele data bestand in de browser venster dat verschijnt. Klik op &#39;Openen&#39;. </li><li> Klik op &quot;Fly Location&quot; naar locatie elke vlieg bekijken in elk van de zes arena&#39;s (zes XY plots beeltenis elke fly &#39;s positie in de tijd moet worden weergegeven op het scherm). </li><li> Klik op &quot;Distance&quot; om de afstand elke vlieg uitzicht vanaf de geurbron (zes percelen beeltenis afstand van de vlieg van de geurbron loop van de tijd moet worden weergegeven op het scherm). De horizontale lijn y = 5 mm geeft de drempel waarbij de vlieg wordt geacht bij de voedselbron. </li><li> Klik op &quot;Speed&quot; om elke vlieg gemiddelde snelheid zien tijdens het proces (zes percelen beeltenis van de snelheid van de vlieg in de tijd moet worden weergegeven op het scherm). </li><li> Klik op &quot;Layout&quot; naar een indeling weer met de vlieg locatie, afstand en snelheid grafieken naast de gemiddelde snelheid (gedurende de eerste 50 sec) en de latentie van het vinden van de geurbron per vlieg (figuur 1). Voor de indeling volledig te bekijken, kan het nodig zijn de marges aan. Om dit te doen, klikt u eerst op de layout-venster. Onder het tabblad &quot;Bestand&quot;, klik op &quot;Pagina-instelling voor lay-out.&quot; Reset de marges0,2 inch en klik op &quot;OK.&quot; Direct links van elke locatie perceel is een kleine tafel met de rubrieken &quot;Speed&quot; en &quot;Wachttijd.&quot; De onder elke rubriek ingevoerde waarden geven de gemiddelde snelheid in mm / sec en voedsel zoektijdvertraging in seconden. Lege vermeldingen onder Wachttijd geven de vlieg niet de geurbron lokaliseren. Voedsel zoektijdvertraging wordt gedefinieerd als het tijdstip waarop de vliegen brachten minstens 5 seconden binnen een straal van 5 mm van het midden van de kamer. </li><li> Om een ​​lay-out afdrukken, klikt u op de lay-out gebied (updates lay-out naar het huidige bestand). Klik op &quot;Bestand&quot; en klik vervolgens op &quot;Afdrukweergave.&quot; </li><li> Naar het volgende bestand te bekijken, klikt u op &quot;Open Raw Data File voor lay-out.&quot; Klik op de volgende ruwe data bestand dat u wilt bekijken en klik op &quot;OK.&quot; Klik op de Lay-out-venster om het venster te updaten met de nieuwe data-bestand. </li><li> De instellingen kunnen worden opgeslagen in een experiment bestand voor later gebruik. </li></ol> 8. Gegevens exporteren uitde data analyse software om een ​​spreadsheetprogramma <ol><li> Om de snelheid en latency gegevens te exporteren voor elk bestand, klik op &quot;Open Ruwe gegevensbestand voor Data File.&quot; Selecteer een experimentele data-bestand en klik op &#39;Openen&#39;. Een nieuw browservenster verschijnt. </li><li> In het nieuwe browservenster, klik met de rechtermuisknop op &quot;Nieuw&quot; en klik vervolgens op &quot;Text Document.&quot; Noem de nieuwe tekstdocument. Selecteer de nieuwe naam tekstbestand en klik op &#39;Openen&#39;. Deze slaat de gegevens van de ruwe data bestand in het tekstbestand. </li><li> Om gegevens te exporteren uit een ander bestand, klikt u op &quot;Open Raw Data File voor Data File.&quot; Klik op een ander bestand en klik op &#39;Openen&#39;. Selecteer de tekst bestand uit stap 8.2). Herhaal dit proces voor de resterende data bestanden die u wilt exporteren. </li><li> Zodra alle gewenste bestanden zijn toegevoegd aan het tekstbestand, klik op &quot;Format Data File.&quot; Selecteer de tekst document gebruikt om gegevens van de vorige stappen te slaan en klik op &quot;Open&quot; (een nieuwe Window wordt automatisch geopend). </li><li> Maak een nieuwe tekst document in het venster, wijs het bestand een naam en klik op &#39;Opslaan&#39;. Dit creëert een tekstbestand dat de bestandsnaam, de gemiddelde snelheid en latency bevat voor elke vliegen en in een spreadsheet programma kan worden geïmporteerd. </li><li> Cumulatieve plots zijn opgebouwd uit gegevens over het totale aantal vliegen bereiken het voedsel geur doelwit als een functie van de tijd (Figuur 3). </li><li> Experimentele gegevens worden geanalyseerd op statistische significantie met een z-test voor proporties. </li></ol>

<ol><li>Dethier, V. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDethier%2C+VG+%22The+hungry+fly+%3A+a+physiological+study+of+the+behavior+associated+with+feeding%22">The hungry fly : a physiological study of the behavior associated with feeding</a>. , Harvard University Press. (1976).</li>
<li>Root, C. M., Ko, K. I., Jafari, A., Wang, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+facilitation+by+neuropeptide+signaling+mediates+odor-driven+food+search%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Presynaptic facilitation by neuropeptide signaling mediates odor-driven food search.</a> Cell. 145, 133-144 (2011).</li>
<li>Root, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+presynaptic+gain+control+mechanism+fine-tunes+olfactory+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">A presynaptic gain control mechanism fine-tunes olfactory behavior.</a> Neuron. 59, 311-321 (2008).</li>
<li>Semmelhack, J. L., Wang, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Select+Drosophila+glomeruli+mediate+innate+olfactory+attraction+and+aversion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Select Drosophila glomeruli mediate innate olfactory attraction and aversion.</a> Nature. 459, 218-223 (2009).</li>
<li>Faucher, C., Forstreuter, M., Hilker, M., de Bruyne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+responses+of+Drosophila+to+biogenic+levels+of+carbon+dioxide+depend+on+life-stage%2C+sex+and+olfactory+context%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Behavioral responses of Drosophila to biogenic levels of carbon dioxide depend on life-stage, sex and olfactory context.</a> J. Exp. Biol. 209, 2739-2748 (2006).</li>
<li>Quinn, W. G., Harris, W. A., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Conditioned behavior in Drosophila melanogaster.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 71, 708-712 (1974).</li>
<li>Fishilevich, E., Domingos, A. I., Asahina, K., Naef, F., Vosshall, L. B., Louis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+behavior+mediated+by+single+larval+olfactory+neurons+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis behavior mediated by single larval olfactory neurons in Drosophila.</a> Curr. Biol. 15, 2086-2096 (2005).</li>
<li>Venken, K. J., Simpson, J. H., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+manipulation+of+genes+and+cells+in+the+nervous+system+of+the+fruit+fly%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Genetic manipulation of genes and cells in the nervous system of the fruit fly.</a> Neuron. 72, 202-230 (2011).</li>
<li>Hamada, F. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+internal+thermal+sensor+controlling+temperature+preference+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An internal thermal sensor controlling temperature preference in Drosophila.</a> Nature. 454, 217-220 (2008).</li>
<li>Kitamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+modification+of+behavior+in+Drosophila+by+targeted+expression+of+a+temperature-sensitive+shibire+allele+in+defined+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Conditional modification of behavior in Drosophila by targeted expression of a temperature-sensitive shibire allele in defined neurons.</a> J. Neurobiol. 47, 81-92 (2001).</li>
<li>Sweeney, S. T., Broadie, K., Keane, J., Niemann, H., O'Kane, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+expression+of+tetanus+toxin+light+chain+in+Drosophila+specifically+eliminates+synaptic+transmission+and+causes+behavioral+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Targeted expression of tetanus toxin light chain in Drosophila specifically eliminates synaptic transmission and causes behavioral defects.</a> Neuron. 14, 341-351 (1995).</li>
<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li>
</ol>

De auteurs verklaren geen concurrerende financieel belang.

In dit protocol beschrijven we een stap-voor-stap procedure voor het eten zoekgedrag assay. Naast voedsel gerelateerde geuren kan ook worden aangepast voor de studie van het vermogen van de vlieg andere geur objecten lokaliseren. Bijvoorbeeld kan het worden toegepast naar de studie van mate lokalisatie gedrag bij mannelijke vliegen 3 Er zijn verschillende aanvullende overwegingen voor dit protocol dat wij hier vermelden over deze procedure.: Ten eerste, de opfok temperatuur bepaal...

Staten van de honger bevorderen twee soorten appetitieve gedrag: voedsel zoeken en voedselconsumptie 1. Deze eenvoudige gedrags assay is bruikbaar voor de studie van chemotactische gedrag geassocieerd met het voederen 2,3. In het bijzonder, het tracks vliegen positie, loopsnelheid en latentie tot het lokaliseren van een levensmiddel geur doelwit. Latentie van voedsel bevinding dient als maatstaf voor het meten van veranderingen in de gevoeligheid van geur detectie systeem van de vlieg stroomafwaarts van veranderingen in de interne appetitief staat. Een handmatige versie van deze test is eerder gebruikt om aan te tonen GABA-B receptor signalering is belangrijk voor geur lokalisatie gedrag bij volwassen vliegen 3. De huidige geautomatiseerde versie van de test was instrumenteel in de studie van hoe kort neuropeptide-F (SNPF) signalering hervormt het olfactorische kaart in Drosophila en invloeden appetitive gedrag 2. Het testen wordt uitgevoerd in een donkere, temperatuur en vochtigheid ruimte. Digitaalvideocamera&#39;s boven de helder acrylaat testen platen set bijhouden vliegen verlicht door 660-nm LED-verlichting. Informatie van de camera wordt verwerkt in real-time door een computer gestationeerd naast het testgebied. We maken gebruik van data-acquisitie software om de coördinaten van vliegen posities opnemen en opslaan tijdens de testperiode. In dit paradigma, wordt het onderwerp losgelaten in een arena die een levensmiddel geur in het midden bevat, de geur object creëert een voedsel geur gradiënt in de arena dat voedsel zoekgedrag induceert in de vlieg. Een soortgelijke geur zoekprotocol is toegepast in de richting van de studie van chemosensation in enkele Drosophila larven 7. Terwijl andere gedrags-testen zoals de vier-veld olfactometer 4,5 of t-doolhof 6 evalueren geur aversie of attractie gedrag, wordt dit paradigma best geschikt voor olfactorische gevoeligheid en chemotaxis gedrag te evalueren. Een aantal belangrijke voordelen te begeleiden deze ASSAy. Ten eerste, het maakt het mogelijk snelle verwerving van grote datasets, omdat het verzamelen en analyseren van gegevens meestal worden geautomatiseerd. Ten tweede, deze test isoleert en meet het gedrag van enkele vliegen, zodat het niet langer sociale olfactorische signalen die hun gedrag kunnen beïnvloeden. Ten derde, de eenvoud van het protocol en eenvoudige experimentele design maken de test efficiënt en gemakkelijk om anderen te onderwijzen. Daarnaast kan deze test worden gebruikt voor het verder onderzoeken neurale circuits onderliggende voedsel zoekgedrag door het te combineren met de uitgebreide genetische toolkit beschikbaar Drosophila melanogaster 8. Gerichte expressie van transgenen die stilte of prikkelen neuronen kan worden bereikt met instrumenten zoals het GAL4-UAS-systeem evenals de UAS-shibire ts1, UAS-tetanus-toxine, en UAS-TRPA1 (B) transgenen 9-12.

<table><tbody><tr><td>Apple Cider Vinegar</td><td>Spectrum</td><td></td><td>commercieel verkrijgbaar</td></tr><tr><td>Agarose, Type VII</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0701</td><td>agarose met lage geltemperatuur</td></tr><tr><td>Acrylic Testing Plate</td><td></td><td>op maat</td><td>Plaat bevat 6 arena's. Elke arena heeft een diameter van 60 mm en een hoogte van 6 mm. Zie de tekeningen van de testplaat voor specifieke afmetingen.</td></tr><tr><td>LabVIEW V.8.5</td><td>National Instruments</td><td>776670-09</td><td>platform voor programma's: PositioningTool.vi, FlyTracking--Six Zones.vi OPMERKING: "elapsed time.vi", "time into file.vi" en "two object detect.vi" zijn inbegrepen subroutines die beschikbaar moeten zijn om het hoofdgegevensverzameling programma "FlyTracking--Six zones.vi" te laten draaien.</td></tr><tr><td>LabVIEW Vision 8.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LabVIEW Vision Acquisition Software 8.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LabVIEW Vision Builder AI 3.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Igor Pro V.6</td><td>Wavemetric, Inc.</td><td></td><td>platform voor macro: Data Analysis for Fly Tracking--Six Zones</td></tr><tr><td>Basler scA1390-17fm</td><td>National Instruments</td><td>779980-01</td><td>Digitale Camera OPMERKING: driver voor camera beschikbaar op Baslerweb.com</td></tr><tr><td>8 mm lens</td><td>National Instruments</td><td>780024-01</td><td>Lens voor Basler Digitale Camera</td></tr><tr><td>Ground Glass Diffuser Plate</td><td>Edmund Optics</td><td>op maat</td><td>Verstrooit licht, 25 cm x 30 cm</td></tr><tr><td>US Std. No. 100</td><td>Fischer Scientific</td><td>04-881X</td><td>Zef met nominale opening van 150 μm</td></tr><tr><td colspan="4">Verlichting Optie 1</td></tr><tr><td>LED backlight 660 nm (20 cm x 20 cm)</td><td>Spectra West</td><td>BL47192</td><td>een eenvoudigere maar duurdere verlichting optie.</td></tr><tr><td>Power Supply voor LED Backlight</td><td>Spectra West</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Verlichting Optie 2</td></tr><tr><td>660 nm LEDs</td><td>Superbrightleds</td><td>RL5R1330</td><td>Golflengte 660 nm (ongeveer 7 x 7 LED array voor een 14.7 inch x 9.75 inch paneel)</td></tr><tr><td>Linear DC Power Supply</td><td>GW Instek</td><td>GPS-1830D</td><td>Voeding voor LED paneel</td></tr><tr><td>Solderless Breadboard</td><td>Digikey</td><td>922354-ND</td><td>Breadboard voor LEDs</td></tr></tbody></table>

a single-fly test voor foerageergedrag in drosophila

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

Voor veel dieren, honger bevordert veranderingen in de olfactorische systeem op een manier die de zoektocht naar geschikte voedselbronnen vergemakkelijkt. In deze video artikel beschrijven we een geautomatiseerde test om het effect van honger of verzadiging op olfactorische afhankelijke voedsel zoekgedrag meten de volwassen fruitvlieg Drosophila melanogaster. In een lichtdichte doos verlicht door rood licht dat onzichtbaar is voor fruitvliegjes, een camera gekoppeld aan aangepaste data-acquisitie software bewaakt de positie van zes vliegen tegelijk. Elke vlieg beperkt zich tot lopen in individuele arena&#39;s met een levensmiddel geur in het centrum. Het testen arena&#39;s rusten op een poreuze vloer die functies geur stapeling te voorkomen. Latentie om de geur bron, een metric die olfactorische gevoeligheid onder verschillende fysiologische staten weerspiegelt vinden, wordt bepaald door software-analyse. Hier bespreken we de kritische mechanica van het runnen van deze gedrags-paradigma en betreft specifieke aspecten met betrekking tot vliegen loading, geurcontaminatie, test temperatuur, kwaliteit van de gegevens en statistische analyse.

De data analyse software en inrichting, waarvan een voorbeeld is te zien in figuur 1, worden gebruikt om de prestaties elk vlieg tijdens de 10 min proef toetsen aan een reeks criteria analyse. De volgende criteria worden gebruikt om te bepalen of de gegevens van elke vlieg zal worden gebruikt voor data-analyse en zijn ontworpen om de vliegen die niet in staat om het voedsel te zoeken taak uit te voeren als gevolg van letsel, ziekte, stress of gebrek aan motivatie zijn te elimineren. <p class="jove_c...

In deze video artikel beschrijven we een geautomatiseerde test om het effect van honger of verzadiging op olfactorische afhankelijke voedsel zoekgedrag meten de volwassen fruitvlieg Drosophila melanogaster.

A Single-fly test voor foerageergedrag in Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Het algemene doel van deze procedure is om gedragsveranderingen te kwantificeren die worden veroorzaakt door voedselgebrek bij de volwassen vlieg Salala Melanogaster. Dit wordt bereikt door vliegen eerst 18 tot 24 uur te laten verhongeren. De tweede stap is om individuele vliegen in gedragskamers te laden, die elk een aantrekkelijke geurbron in het midden bevatten.Vervolgens volgt een computersysteem met een digitale camera de positie van elke vlieg in de loop van de tijd en neemt deze op. De coördinaten ervan voor latere gegevensanalyse. De laatste stap is om de latentie van elke vlieg om de geurbron te bereiken te bepalen met behulp van aangepast software.Uiteindelijk kan deze hoge doorvoer voedselzoekgedragstest worden gebruikt om de relatie tussen neurale circuitfunctie en gedragsreacties te bestuderen. Het belangrijkste voordeel van deze test ten opzichte van bestaande methoden, zoals de teamgenoten, is dat het chemotactisch gedrag in enkele vliegen kwantificeert. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van vragen in de neurobiologie, zoals welke zenuwcircuits belangrijk zijn voor chemotactisch gedrag en hoe deze zenuwcircuits worden gemodereerd door de interne fysiologische toestand van het dier.Het doel van deze methode is om grote gedragsgegevenssets in korte tijd te verkrijgen. Hoewel deze methode ons inzicht heeft gegeven in foerageergedrag, kan deze ook worden gebruikt om ander gedrag te bestuderen, zoals lokale zoekopdrachten. Visuele demonstratie van deze methode is van cruciaal belang.Juiste vliegenhandeling en uitvoering van de computersoftware zijn beide essentieel voor het succes van dit experiment. Over het algemeen kunnen individuen die nieuw zijn voor deze methode in het begin een beetje worstelen omdat het wat tijd en geduld kost om te leren hoe ze de vliegen voorzichtig moeten hanteren. Het demonstreren van de procedure zal rond de naald zijn. Vraag een technicus voor mijn laboratorium voor het verzamelen van vliegen.Kweek de experimentele vliegen onder gecontroleerde temperatuur- en vochtigheidsomstandigheden op een cyclus van 12 uur licht en duisternis. Op de dag van de EEC-explosie, verdoof de vliegen onder koolstofdioxide voordat ze onder een microscoop worden gesekseerd. Er kunnen verschillende basiscriteria worden gebruikt om onderscheid te maken tussen mannetjes en vrouwtjes.Mannetjes hebben een klomp zwarte haren op hun vier benen, zogenaamde seksuele kammen, die vrouwtjes niet hebben. Ook is de punt van de mannelijke buik bedekt door een donkere cuticula en vertonen de geslachtsdelen die bij vrouwtjes niet worden gezien. Verzamel vrouwelijke vliegen en plaats ze samen met vier tot vijf witoogmannen in nieuwe voedselbestanden met maximaal 30 vliegen per fles. De vliegen gedurende twee tot vijf dagen bereiden de kamers voor vliegenverhongering voor door eerst een enkel weefsel naar de bodem van een lege plastic fles te duwen, het weefsel volledig doordrenken met gedistilleerd water.Gebruik vervolgens een object om op het weefsel te drukken en voorzichtig het overtollige water eruit te knijpen. Draai de fles om om het extra water weg te gooien. Er moet voldoende water zijn om de vliegen gehydrateerd te houden en de hongerkamer vochtig, maar niet genoeg om de vliegen te verdrinken.Ongeveer 18 tot 24 uur voordat het experiment begint, breng je de vliegen over van de voedselfles naar een hongerkamer en sluit je de fles af. Bewaar de flesjes onder gecontroleerde temperatuur- en vochtigheidsomstandigheden overnacht tot het experiment begint. Bereid een 1% agro-oplossing voor door 100 milligram laagsmeltende temperatuur aros toe te voegen aan 10 milliliter gedistilleerd water.In een glazen kolf. Verwarm de agro-oplossing in een magnetron tot het begint te koken, maar stop voordat het overkookt, stop de magnetron en slinger de kolf eenmaal. Herhaal deze stap nog twee keer totdat de aros volledig is opgelost.Houd de Aros-oplossing in een vloeibare staat door de kolf warm te houden op een hotplate. Stel in op 50 graden Celsius, voeg 990 microliters van de 1%aro-oplossing en 10 microliters appelazijn toe aan een 1,5 milliliter upend DF-buis. Om een 1% appelazijnoplossing te maken, voort te draaien de oplossing tot gemengd voordat het wordt geplaatst in een droge badincubator ingesteld op 50 graden Celsius, stel de testkamer in op de gewenste omstandigheden zoals temperatuur en vochtigheid.Zet de 660 nanometer LED-paneel aan. Spoel de zeef en testplaten met heet water en verwarm ze in een droogoven tot alle vocht is verdampt. Koel. Koel de zeven en platen af tot de temperatuur van de testkamer.Voordat u met experimenten begint, plaatst u een ondiepe schaal bovenop de diffuserplaat en vult u deze met water om de lokale luchtvochtigheid te verhogen en om het water in de aros-druppel te maskeren. Plaats ten slotte de zeef boven de waterbak. De testplaat is gemaakt van helder acryl en bestaat uit zes testarena's.Een schuif bevat houdkamers die vliegen laden, tijdelijk bevatten en gelijktijdig vrijlaten van zes vliegen in hun respectieve kamers. Aan het begin van het experiment geven kruislijnen die in het midden van elke arena op de plaat zijn geëtst aan, dat geuren moeten worden gepipetteerd. Plaats de schuiven in de acryl testplaat.Schuif voorzichtig de afzuiger in de fles voorbij de katoenen plug en laat ongeveer zes vliegen in de afzuiger lopen. Het is van cruciaal belang om zo voorzichtig mogelijk met ze om te gaan. Men kan profiteren van fototactisch, vliegengedrag om vliegen te induceren, om naar de afzuiger te lopen door de flesopening naar een zwakke lichtbron te richten.Indien nodig kan voorzichtig zuigen worden toegepast om ongeveer zes vrouwelijke vliegen af te zuigen. Vermijd het selecteren van witoogmannen. Plaats de punt van de afzuiger in het eerste gat van de testplaat.Laat een enkele vlieg passeren in de houdcel en schuif voorzichtig de schuif naar voren om een andere vlieg in

a-single-fly-assay-for-foraging-behavior-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Gedrag assays voor het meten van motorische functies, leren en geheugen capaciteiten...

Het testen van Beweegwijzer, leren en geheugen Tekortkomingen in Drosophila Modellen van Neurodegeneratie

Drosophila melanogaster is een genetisch en gedragsmatig soepel model systeem dat is gebruikt om de moleculaire en cellulaire basis van een groot aantal belangrijke biologische processen meer dan een eeuw een begrip. Drosophila goed is benut om inzicht te krijgen in de genetische basis van vlieg gedrag.

Methoden om Assay Drosophila Gedrag

Drosophila-vrouwtjes kiezen tussen substraten en selecteren locaties die aantrekkelijk zijn voor het leggen van eieren. Deze video beschrijft een gedragstest die hun besluitvorming test, de zogenaamde eierleggingsvoorkeurstest. De aanbevolen clip demonstreert de procedure met een op maat gemaakte opstelling, waarmee onderzoekers niet alleen het gedrag van veel vrouwen tegelijkertijd kunnen testen, maar ook compatibel zijn met video-opname en optogenetische opstellingen.

Drosophila Egg-Laying Preference Assay: een methode om besluitvorming bij vliegen te testen

Hier presenteren we een protocol om de vermijding van gestreste individuen te kwantificeren. Dit paradigma is krachtig maar gebruiksvriendelijk en kan worden gebruikt om de invloed van genen en omgeving op een soort sociale interactie bij Drosophila melanogaster te beoordelen.

Ongecompliceerd Assay voor de kwantificering van Sociale Avoidance in Drosophila melanogaster

De automatische tracking systeem Flywalk wordt gebruikt voor hoge-resolutie kwantificering van geur-begeleide gedrag in Drosophila melanogaster.

Hoge-resolutie Kwantificering van Geur-begeleide Gedrag in<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Met behulp van de<em&gt; Flywalk</em&gt; Paradigm

We bieden een gedetailleerd protocol voor een Drosophila melanogaster foerageerpadlengte-assay. We bespreken de voorbereiding en het omgaan met testdieren, hoe de assay uit te voeren en de gegevens te analyseren.

Foerageren Path-length Protocol<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Larven

We beschrijven hier een gedragsopstelling en methode voor gegevensanalyse voor het meten van reukresponsen van maximaal 100 azijnvliegen (Drosophila melanogaster). Dit systeem kan worden gebruikt met enkele of meerdere reukstimuli en is aanpasbaar voor optogenetische activering of het tot zwijgen brengen van neuronale subsetten.

Olfactorische gedrag getest door Computer Tracking Of<em&gt; Drosophila</em&gt; In een vier-kwadrant olfactometer

We presenteren een protocol voor een tweekeuze voertest voor vliegen. Deze voertest is snel en gemakkelijk te uitvoeren en is niet alleen geschikt voor kleinschalig laboratoriumonderzoek, maar ook voor gedragsschermen met hoge doorvoer bij vliegen.

Een snelle voedselvoorkeurtest in Drosophila

Het huidige protocol beoordeelt de locomotorische activiteit van Drosophila door de beweging van vliegen in een handgemaakte arena te volgen en te analyseren met behulp van open-source software Fiji, compatibel met plug-ins om pixels van elk frame te segmenteren op basis van high-definition video-opname om parameters van snelheid, afstand, enz. Te berekenen.

Een eenvoudige techniek om locomotorische activiteit in Drosophila te testen

Dit protocol beschrijft een gedragstest voor het registreren van door suiker uitgelokt zoekgedrag met behulp van Drosophila melanogaster. De test kan worden gebruikt om voedings- en foerageergerelateerd gedrag te bestuderen, evenals de onderliggende neuronale mechanismen.

Volgen van door suiker uitgelokt lokaal zoekgedrag in Drosophila

Autisme Spectrum Stoornis (ASS) wordt geassocieerd met verminderd sociaal en communicatief gedrag en het ontstaan van repetitief gedrag. Voor het bestuderen van de onderlinge relatie tussen ASS-genen en gedragsstoornissen in het Drosophila-model , worden in dit artikel vijf gedragsparadigma's beschreven voor het bepalen van sociale afstand, agressie, verkering, verzorging en gewenningsgedrag.

Paradigma's voor gedragsbeoordeling in het Drosophila-model van autismespectrumstoornis

Leer een geautomatiseerde test voor foerageergedrag in Drosophila melanogaster. Deze methode kwantificeert gedragsveranderingen door voedseldeprivatie en helpt onderzoekers de relatie tussen honger en olfactorisch zoekgedrag bestuderen.

A Single-fly test voor foerageergedrag in Drosophila

Meer video's verkennen