Name: De Slice kweekmethode voor Na Ontwikkeling van Tooth Germs In explantaatkweek (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-13T20:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 47 s
Description: Leer de slice-kweekmethode voor tandkiemontwikkeling in muizenmandibula's met behulp van een tissue chopper. Deze techniek maakt unieke observatie en lineage tracing van cellulaire dynamiek mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Sarah A. Alfaqeeh wordt gefinancierd door Kind Saud University College of Dentistry, ministerie van Hoger Onderwijs, Koninkrijk Saoedi-Arabië.

1. Instellen <ol><li> Slijp de dissectie-instrumenten (met behulp van een slijpsteen gesmeerd met minerale olie) en steriliseren vóór gebruik op orgelcultuur met behulp van een 70% ethanol spray en droge warmte sterilisatie. Slijp de dissectie naalden met behulp van elektrolyse in 2 M natriumhydroxide met een 12 V voeding. </li><li> Bereid het kweekmedium voor de dissectie en kweek van embryonale organen, bestaande uit geavanceerde Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium F12 (DMEM F12) aangevuld met 1% GlutaMAX en 1% penicilline-streptomycine. </li></ol> 2. Embryo Dissection <ol><li> Cull een getimede gepaard zwangere vrouw met behulp van een schema een methode goedgekeurd door het ministerie van Binnenlandse Zaken of ander bestuursorgaan. Ontleden weg de huid rond de onderbuik, en opengesneden de buik met een schaar. Zoek de twee baarmoederhoorns, die met elkaar te verbinden op de lagere middellijn. </li><li> Ontleden de baarmoeder en in een buis gevuld met medium op ijs. When op het ijs, kan het weefsel worden gelaten voor meerdere uren. </li><li> Verwijder de baarmoeder en in een petrischaal in medium onder de microscoop. Waar mogelijk embryo dissecties in een laminaire stroming kap worden uitgevoerd om besmetting te minimaliseren. </li><li> Ontleden de embryo&#39;s uit de baarmoeder en hen bevrijden van hun extra-embryonale weefsels. </li><li> Onthoofden de embryo&#39;s met behulp van een wolfraam naald en breng de hoofden in een verse schotel van medium. </li><li> Isoleer de kaken van de koppen door een naald in de mondholte en doorsnijden naar de achterkant van het hoofd (Figuren 1A en 1B). Geïsoleerde kaken kan tijdelijk worden opgeslagen in medium op ijs tijdens het wachten voor het hakken. </li><li> Voor gehele onderkaak plakjes stadia E11.5-E15.5 zijn ideaal voor tandkiem cultuur. Na E15.5 de ontwikkelende bot in de onderkaak is te hard voor het hakken. Tand plakken kan nog steeds worden gemaakt, maar het bot (dentary en de vorming van alveolaire bot) moet eerst worden verwijderd metdissectie voordat hakken 9. Verwijder bot voorzichtig met wolfraam naalden en pincet. </li></ol> 3. Embryo Snijden <ol><li> Bereid de onderkaak weefsel plakjes met behulp van een standaard tafel weefsel chopper (figuur 1C). Gebruik een nieuw blad na ongeveer 200 onderkaken, en zorg ervoor dat het gelijk ligt met de montageschijf bij het vallen. </li><li> Maak de montageschijf en dozerblad met 70% ethanol voor gebruik. Voorzichtigheid is geboden bij gebruik van de machine, zoals het blad is zeer scherp. </li><li> Stel de chopper op een snij meetbereik van 200-400 micrometer overeenkomstig de leeftijd van het monster, en afhankelijk of het geheel tandkiem vereist. Zet het mes werking op maximum. </li><li> Transfer van een onderkaak om de plastic montage schijf met behulp van een pipet of tang. Schik de onderkaak op de schijf maken het zeker de oriëntatie is nog steeds duidelijk. De ontwikkeling tong kan worden gebruikt als een nuttige landmark voor het bepalen oriëntatie. Voor kiezen gebruik afRontal / dwarsrichting (zie vlak van het hakken in Figuur 1B), terwijl voor snijtanden gebruik een sagittale slice door de onderkaak naar de verschillende oriëntatie van deze tanden reflecteren als ze groeien (zie vlak van het hakken in figuur 2A). </li><li> Verwijder het overtollige medium uit de hele weefsel met behulp van filtreerpapier om enigszins droog de onderkaak op de montageschijf. </li><li> Direct na het drogen, plaats de schijf op de ronde roestvrijstalen tafel van de chopper. Zet het apparaat aan en druk op start. De tabel doorloopt automatisch van links naar rechts terwijl tegelijkertijd de snij arm die het blad omhoog en zette op tot 200 slagen / min. </li><li> Schakel de machine uit zodra het weefsel volledig is gesneden. Zorg ervoor dat het mes arm is in de hoogste stand en verwijder de disc. Steek geen vingers onder het mes arm of laat de machine onbeheerd achter als het hakken. </li><li> Neem de montageschijf en voeg onmiddellijk medium to de plakjes op de schijf, om uitdroging te voorkomen. Voorzichtig los gesneden weefsel van de bodem van de schijf met een wolfraam naald en vervolgens pipet in een kleine petrischaal drager (figuur 2A). </li><li> Scheid de plakjes met behulp van een naald en selecteer vervolgens het weefsel plakjes met het weefsel van belang onder een stereomicroscoop (figuren 1D, 1E, en 2B). Plaats geselecteerde segmenten in verse cultuur gerechten met medium. </li></ol> 4. Slice Cultuur <ol><li> Bereid centrale putjes orgaan kweekschalen vinden die cultuur door toevoeging van ongeveer 2 ml geautoclaveerd water om de buitenste goed om uitdroging te voorkomen, en het positioneren van een metalen rooster in het midden van de schaal (Figuren 3A en 3B). </li><li> Bereid metalen roosters door te snijden stroken ongeveer 4 cm x 1,5 cm van platen van roestvrij staal gaas. Gebruik een perforator om een ​​gat in het midden maken en buigde zijkanten om een ​​gespreid einde te maken. Het rooster moet vlak sluiten in de centrale put, die evenwijdig is aan de bodem van de schaal (Figuren 3A en 3B). Autoclaaf de roosters te steriliseren voor gebruik. </li><li> Snijd een stuk transparante polyethyleentereftalaat (PET) membraan (poriegrootte 0,4 pm) groot genoeg is om de opening in het rooster bestrijken. Leg de gesneden membraan in de schaal met de geselecteerde slice. </li><li> Plaats de slice op de top van het membraan en dan til het membraan uit het medium, met slice afgevlakt in het centrum. </li><li> Plaats het filter op het rooster over het cirkelvormige gat in het midden en voeg ongeveer 1 ml kweekmedium de put, tot het niveau van het membraan. </li><li> Voor manipulaties eiwitten of kleine molecule inhibitoren toevoegen aan het medium (bijvoorbeeld 8). </li><li> Fotografeer de slice voor een record van morfologie op dag 0 van de cultuur. </li><li> Leg de schalen in een vochtige atmosfeer van 5% CO <sub&gt; 2 bij 37 ° C in een incubator. </li><li> Fotografeer de culturen regelmatig voor gemiddeld 7 dagen. Verander het kweekmedium elke 48-72 uur. Voor fotografie van de plakjes met een lichtbron van onderaf (Figuren 2C-E). </li></ol> 5. Lineage Tracing Als lineage tracing nodig is, kan lipofiele kleurstoffen zoals DII of DiO worden geïnjecteerd in de tandkiem vóór stap 4, slice cultuur. <ol><li> Trek glazen capillair naalden met behulp van een naald trekker. </li><li> Breek de punt van de naald met behulp van pincet en plaats punt naar beneden in de kleurstof oplossing. Laat enkele minuten terwijl de kleurstof vult de tip door capillaire werking. </li><li> Plaats de gevulde naald in een houder en bevestig via slang aan een injector of mond afzuiger. </li><li> Plaats de punt van de naald in het kweekmedium het gebied van het segment zal worden geëtiketteerd raken. Solliciteer luchtdruk om een ​​kleine hoeveelheid kleurstof verdringen uit de naald eend op het weefsel. </li><li> Verwijder de naald en controleer etikettering onder fluorescentie. </li><li> Succes bestempeld plakjes kan worden overgedragen aan filters en gekweekt zoals beschreven in stap 4. </li></ol>

<ol><li>Rothova, M., Peterkova, R., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+map+of+the+dental+mesenchyme%3A+dynamic+development+of+the+dental+papilla+and+follicle%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Fate map of the dental mesenchyme: dynamic development of the dental papilla and follicle.</a> Developmental biology. 366, 244-254 (2012).</li>
<li>Ferguson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activin+is+an+essential+early+mesenchymal+signal+in+tooth+development+that+is+required+for+patterning+of+the+murine+dentition%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+development%22%5BJournal%5D)">Activin is an essential early mesenchymal signal in tooth development that is required for patterning of the murine dentition.</a> Genes & development. 12, 2636-2649 (1998).</li>
<li>Trowell, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+culture+of+mature+organs+in+a+synthetic+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+cell+research%22%5BJournal%5D)">The culture of mature organs in a synthetic medium.</a> Experimental cell research. 16, 118-147 (1959).</li>
<li>Matalova, E., Antonarakis, G. S., Sharpe, P. T., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lineage+of+primary+and+secondary+enamel+knots%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+dynamics+%3A+an+official+publication+of+the+American+Association+of+Anatomists%22%5BJournal%5D)">Cell lineage of primary and secondary enamel knots.</a> Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 233, 754-759 (2005).</li>
<li>Mitsiadis, T. A., Tucker, A. S., De Bari, C., Cobourne, M. T., Rice, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+regulatory+relationship+between+Tbx1+and+FGF+signaling+during+tooth+morphogenesis+and+ameloblast+lineage+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+biology%22%5BJournal%5D)">A regulatory relationship between Tbx1 and FGF signaling during tooth morphogenesis and ameloblast lineage determination.</a> Developmental biology. 320, 39-48 (2008).</li>
<li>Diep, L., Matalova, E., Mitsiadis, T. A., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+the+tooth+bud+mesenchyme+to+alveolar+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+experimental+zoology.+Part+B%2C+Molecular%22%5BJournal%5D)">Contribution of the tooth bud mesenchyme to alveolar bone.</a> Journal of experimental zoology. Part B, Molecular. 312B, 510-517 (2009).</li>
<li>Rothova, M., Feng, J., Sharpe, P. T., Peterkova, R., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+mesoderm+to+the+developing+dental+papilla%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+journal+of+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Contribution of mesoderm to the developing dental papilla.</a> The International journal of developmental biology. 55, 59-64 (2011).</li>
<li>Buchtova, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiation+and+patterning+of+the+snake+dentition+are+dependent+on+Sonic+hedgehog+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Initiation and patterning of the snake dentition are dependent on Sonic hedgehog signaling.</a> Developmental biology. 319, 132-145 (2008).</li>
<li>Buchtova, M., Stembirek, J., Glocova, K., Matalova, E., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+regression+of+the+dental+lamina+underlies+the+development+of+diphyodont+dentitions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+dental+research%22%5BJournal%5D)">Early regression of the dental lamina underlies the development of diphyodont dentitions.</a> Journal of dental research. 91, 491-498 (2012).</li>
<li>Cho, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+primary+enamel+knot+determines+the+position+of+the+first+buccal+cusp+in+developing+mice+molars%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%3B+research+in+biological+diversity%22%5BJournal%5D)">The primary enamel knot determines the position of the first buccal cusp in developing mice molars.</a> Differentiation; research in biological diversity. 75, 441-451 (2007).</li>
<li>Sakano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+dynamics+in+cervical+loop+epithelium+during+transition+from+crown+to+root%3A+implications+for+Hertwig%27s+epithelial+root+sheath+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+periodontal+research%22%5BJournal%5D)">Cell dynamics in cervical loop epithelium during transition from crown to root: implications for Hertwig's epithelial root sheath formation.</a> Journal of periodontal research. , (2012).</li>
<li>Fisher, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+development+in+vitro+of+the+whole+and+halved+lower+molar+tooth+germ+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+oral+biology%22%5BJournal%5D)">Morphological development in vitro of the whole and halved lower molar tooth germ of the mouse.</a> Archives of oral biology. 16, 1481-1496 (1971).</li>
<li>Coin, R., Schmitt, R., Lesot, H., Vonesch, J. L., Ruch, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+halved+embryonic+lower+first+mouse+molars%3A+correlation+with+the+distribution+pattern+of+non+dividing+IDE+cells%2C+the+putative+organizers+of+morphogenetic+units%2C+the+cusps%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+journal+of+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Regeneration of halved embryonic lower first mouse molars: correlation with the distribution pattern of non dividing IDE cells, the putative organizers of morphogenetic units, the cusps.</a> The International journal of developmental biology. 44, 289-295 (2000).</li>
<li>Kavanagh, K. D., Evans, A. R., Jernvall, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicting+evolutionary+patterns+of+mammalian+teeth+from+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Predicting evolutionary patterns of mammalian teeth from development.</a> Nature. 449, 427-432 (2007).</li>
<li>Munne, P. M., Tummers, M., Jarvinen, E., Thesleff, I., Jernvall, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tinkering+with+the+inductive+mesenchyme%3A+Sostdc1+uncovers+the+role+of+dental+mesenchyme+in+limiting+tooth+induction%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Tinkering with the inductive mesenchyme: Sostdc1 uncovers the role of dental mesenchyme in limiting tooth induction.</a> Development. 136, 393-402 (2009).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen.

Deze methode van tand cultuur heeft het voordeel dat de toegang tot de tandkiem uitstekend, waardoor nauwkeurige lineage tracing en plaatsing van parels in het epitheel of de mesenchym. Gedefinieerde gebieden van de ontwikkeling van tandkiem kan dus specifiek worden gericht. Tijdens kweek de veranderende morfologie van de tandkiem te volgen, en het effect van manipulaties snel beoordeeld. De werkwijze is echter alleen geschikt voor kleine tand kiemen voor aanzienlijke vorming van harde weefs...

Bij een aantal experimenten is het belangrijk om te kunnen cultuur weefsel ex vivo ontwikkeling te volgen. Cultuur ontwikkelen weefsel worden bereikt in bepaalde perioden van ontwikkeling en staat manipulatie van genen door de toevoeging van elementen aan het kweekmedium, of beladen kralen, en door middel van transfectie en elektroporatie 1. Voor veel experimenten is het belangrijk om het weefsel te visualiseren als het groeit, bijvoorbeeld om het lot van afstammings gemerkte cellen volgen het weefsel ondergaat morfogenese. Dit kan bijzonder problematisch zijn voor weefsels die diep in het embryo ontwikkelt, die niet duidelijk wanneer een blok van weefsel van het embryo gekweekt. Tanden zijn goede voorbeelden van deze, als ze zich ontwikkelen in de onderkaak, bovenkaak en frontaal nasale proces. Wanneer de gehele onderkaak wordt gekweekt de oppervlakkige structuren van de tand kan worden bekeken, maar veranderingen in morfologie kunnen alleen worden geanalyseerd na het snijden van vaste weefsels <sup&gt; 2. We hebben een live-slice cultuur techniek waardoor we tandkiem ontwikkeling te volgen en het verschaffen van toegang tot de verschillende delen van de tand tijdens de ontwikkeling aangepast. De techniek culturen de tandkiem plakjes op de gas-vloeistof-interface, met behulp van een gemodificeerde Trowell methode 3. Deze slice culturen zijn zeer nuttig direct na morfogenese van de tand, en waarbij geslacht traceren van afzonderlijke onderdelen, zoals het glazuur knoop en dentale papil en follikel 1,4-7. De techniek is niet beperkt tot muizenembryo&#39;s en met succes gebruikt om levende cultuur plakjes varkens en slang tandweefsel 8,9. Naast het voordeel van de mogelijkheid om tandontwikkeling visualiseren, de plak werkwijze heeft ook het voordeel dat de dunne plakjes weefsel van het medium en lucht uit de incubator toegang tot voedingsstoffen toegenomen. Dit resulteert in een betere groei van de tand kiemen, die de ontwikkeling passen in vivo, en tonen Invasion van endotheelcellen in de papil 7. Daarentegen tand kiemen geheel onderkaak culturen ontwikkelen langzamer dan in vivo en het midden van de kweek vaak necrotisch langdurige culturen. In slice cultuur, de tand ontwikkelt in een deel van de kaak, en zijn interactie met de omringende ontwikkelen bot en ander weefsel kunnen worden bewaakt. In onze werkwijze het weefsel gesneden meteen na dissectie zonder de noodzaak voor inbedding in een dragermedium 10,11 en geen behoefte aan een systeem om het weefsel hechten aan het hakblok. De methode is daarom niet-invasieve en snel, waardoor vele onderkaken worden doorgesneden in een sessie.

<table><tbody><tr><td>Ethanol</td><td>VWR</td><td>101077Y</td><td>100% ethanol werd verdund in gedestilleerd H2O tot 70%.</td></tr><tr><td>DMEM F12</td><td>Gibco</td><td>12634-010</td><td>Advanced Dulbecco's Modified Eagle Medium F12</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-streptomycin</td><td>Sigma</td><td>P0781</td><td></td></tr><tr><td>DiI (Molecular probes)</td><td>Vybrant</td><td>V-22885</td><td>Cel-labeling oplossing</td></tr><tr><td></td><td>Invitrogen</td><td></td><td>Cel tracker CM-DiI, C-7000</td></tr><tr><td>DiO (Molecular probes)</td><td>Vybrant</td><td>V22886</td><td></td></tr><tr><td>Geminator 500</td><td>Thomas</td><td>Thomas No. 3885A20</td><td>Droogte-warmte sterilisatie</td></tr><tr><td>McIlwain weefselsnijder</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>10180</td><td>Standaard tafel</td></tr><tr><td>Orgaancultuurschaal (Center-Well Orgaan Cultuur Schaal)</td><td>Falcon</td><td>353037</td><td></td></tr><tr><td>Membrans (Cel Cultuur Inserts, 0.4 &mu;m poriegrootte)</td><td>BD Falcon</td><td>353090</td><td>PET track-etched membraan, 6-well formaat</td></tr><tr><td>Metalen roosters (Roestvrij staal - AISI 304 - Mesh)</td><td>Goodfellow</td><td>FE228710</td><td>(Fe/Cr18/Ni10)</td></tr><tr><td>AutoFlow Direct Heat CO2 Incubator</td><td>Nuaire</td><td>NU-5500</td><td></td></tr><tr><td>Picospritzer III</td><td>Intracel Ltd</td><td>051-0500-900 0-100 psi</td><td>Single channel picospritzer III</td></tr><tr><td>Glas capillair met filament 1 mm</td><td>WPI</td><td>TW100F-4</td><td></td></tr><tr><td>Wolfraamdraad 0.1 mm</td><td>Goodfellow</td><td>W005138</td><td></td></tr><tr><td>Wolfraamdraad 0.38 mm</td><td>Goodfellow</td><td>W005155</td><td></td></tr><tr><td>Aspiratorbuizen</td><td>Sigma</td><td>A5177</td><td>Gebruikt voor mond aspiratie lijntracers</td></tr></tbody></table>

de slice kweekmethode voor na ontwikkeling van tooth germs in explantaatkweek

The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture

Explantaatkweek staat manipulatie van het ontwikkelen van organen op specifieke tijdstippen en is daarom een ​​belangrijke methode voor het ontwikkelings bioloog. Voor veel organen is moeilijk toegankelijk ontwikkeling weefsel controle tijdens het ex vivo kweken mogelijk. De slice cultuur methode maakt het mogelijk de toegang tot weefsel zodat morfogenetische bewegingen kunnen worden gevolgd en specifieke celpopulaties kan worden gericht voor manipulatie of lineage tracing. In dit artikel beschrijven we een methode slice cultuur die zeer succesvol voor de cultuur van de tand ziektekiemen in een aantal soorten is geweest. De methode biedt een uitstekende toegang tot de tand kiemen, die zich ontwikkelen met een vergelijkbaar percentage met dat waargenomen in vivo, omringd door de andere kaak weefsels. Dit maakt weefsel interacties tussen de tand en het omringende weefsel te controleren. Hoewel dit document richt zich op de tanden kiemen kan hetzelfde protocol worden toegepast om de ontwikkeling van een doorlooptandere organen, zoals speekselklieren, Meckel&#39;s kraakbeen, nasale klieren, tong en oren.

Om de beweging van de eerste molaire tand follikel volgen, werden 250 urn frontale plakjes genomen via een onderkaak met de hierboven beschreven werkwijze. De tandheelkundige follikel is de laag van mesenchym dat de buitenste glazuur epitheel (OEE) van de ontwikkelende tand omringt, en is eerder getoond deelnemen aan de vorming van weefsel van het parodontium 6. Onderkaken werden ontleed op E14.5, de dop stadium van tandontwikkeling. In het segment was de omtrek van de dentale epitheel helder en condensatie d...

Hier hebben we detail een methode om cultuur tand ziektekiemen in onderkaak plakjes met een tissue chopper. Deze methode maakt het mogelijk unieke toegang tot de tand tijdens de ontwikkeling, het verstrekken van uitstekende gelegenheid voor manipulatie en lineage tracing, niet beschikbaar gebruik van meer traditionele kweekmethoden.

De Slice kweekmethode voor Na Ontwikkeling van Tooth Germs In explantaatkweek

Explant culture allows manipulation of developing organs at specific time points&#160;and is therefore an important method for the developmental ...

Het algemene doel van het volgende experiment is om de tandvorming gedurende meerdere dagen te volgen. Bij explan-kweek in vitro wordt dit bereikt door de ontwikkelende kaak van foetale muizen te dissecteren in levende plakken om de zich ontwikkelende tandkiemen bloot te leggen als tweede stap. De plakken worden geselecteerd, op filters boven een kweekmedium geplaatst en geïncubeerd om ontwikkeling mogelijk te maken.Daarna worden plakken gelabeld met een lijntracer om cellulaire beweging tijdens de kweekperiode te volgen, resultaten worden verkregen die de dynamische aard van tandweefsels laten zien terwijl ze zich ontwikkelen tijdens explan-kweek. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van conventionele explant-kweek is dat intern zich ontwikkelende organen zoals tandkiemen kunnen worden waargenomen gedurende hun ontwikkeling binnen de context van het omringende weefsel. Visuele demonstratie van deze methode is cruciaal omdat de stappen van snijden en selecteren moeilijk kunnen zijn als de opstelling van de machine of de oriëntatie van het weefsel onnauwkeurig is.Bereid eerst het dissectie- en kweekmedium voor de embryonale organen door 1%glutamaat en 1%penicill

the-slice-culture-method-for-following-development-tooth-germs

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Organotypische Slice Cultuur van E18 Rat Brains

Organotypic primary tissue explant cultures, which include precision-cut slices, represent the three-dimensional (3-D) tissue architecture as well as the multicellular interactions of native tissue. This video describes the culturing of murine lung tumor-derived tissue slices using a rotating incubation unit, a system that enables intermittent exposure of tissues to oxygen and nutrients. The protocol describes the methodology to generate and culture precision-cut lung tumor slices for drug...

Lung-tumor Tissue Explant Culture: A Procedure to Generate and Culture Precision-cut Lung Tumor Slices

The video demonstrates the generation and maintenance of organotypic slice cultures from glioblastoma tissue. The isolated tissue is embedded in an agarose matrix, and thin sections are obtained using a vibratome. These sections are then placed on permeable membrane inserts within a microplate and cultured in a slice culture maintenance media for long-term maintenance.

Generating and Maintaining Slice Cultures from Human Glioblastoma Tissue

This video demonstrates the utilization of a microfluidic device to study the interactions between tooth germ pulp and trigeminal ganglia. It showcases the placement of tissues inside the microfluidic device and provides a detailed visualization of trigeminal neurite growth toward the tooth germ through the device's microgrooves. Additionally, it highlights the role of tooth-derived molecular factors in promoting or inhibiting neurite extension into the tooth germ pulp, which is crucial for...

Analyzing Tooth Germ and Trigeminal Ganglia Interactions Using a Microfluidic Co-culture System

Co-cultures vertegenwoordigen een waardevolle methode om de interacties tussen zenuwen en doelweefsels en organen te bestuderen. Microfluïdische systemen maken co-cultiveren van ganglia en hele zich ontwikkelende organen of weefsels in verschillende kweekmedia mogelijk, waardoor ze een waardevol hulpmiddel vormen voor de in vitro studie van de interactie tussen neuronen en hun doelwitten.

Analyse van de ontwikkelingslanden Tooth Germ Innervatie behulp van microfluïdische co-cultuur apparaten

Huidige ex vivo modellen van glioblastoom (GBM) zijn niet geoptimaliseerd voor fysiologisch relevant onderzoek naar menselijke tumorinval. Hier presenteren we een protocol voor het genereren en onderhouden van organotypische plakculturen uit vers menselijk GBM-weefsel. Een beschrijving van time-lapse microscopie en kwantitatieve cel migratie analyse technieken wordt verschaft.

Een humane glioblastoom organotypische snijcultuurmodel voor de studie van tumorcellenmigratie en patiëntspecifieke effecten van anti-invasieve medicijnen

Wij bieden een methode voor de generatie, de teelt en de systematische analyse van organotypic plakjes afgeleid van lymfkliertest Long tumoren. Ook beschrijven we hoe u kunt optimaliseren voor segment dikte en drug concentraties te behandelen tumor segmenten te selecteren.

Vaststelling en analyse van Tumor segment Explants als een voorwaarde voor het kenmerkende testen

Een protocol om vrij zwevende segment culturen van volwassen menselijk brein voor te bereiden wordt gepresenteerd. Het protocol is een variatie van de veelgebruikte segment cultuurmethode met behulp van membraan inserts. Het is eenvoudig, kosteneffectief, en aanbevolen voor het uitvoeren van korte termijn testen gericht op het ontrafelen van mechanismen van neurodegeneratie achter de leeftijd geassocieerde hersenziekten.

Korte-termijn vrij zwevende segment culturen van het volwassen menselijk brein

De Trowell-type orgaankweekmethode is gebruikt om complexe signaleringsnetwerken te ontrafelen die de tandontwikkeling regelen en, meer recent, voor het bestuderen van regulatie die betrokken is bij stamcellen van de continu groeiende muizensnijder. Fluorescerende reporter diermodellen en live-imaging methoden vergemakkelijken diepgaande analyses van tandheelkundige stamcellen en hun specifieke niche micro-omgeving.

Gebruik van trowell-type orgaancultuur om de regulatie van tandheelkundige stamcellen te bestuderen

Ex vivo live beeldvorming is een krachtige techniek voor het bestuderen van de dynamische processen van cellulaire bewegingen en interacties in levende weefsels. Hier presenteren we een protocol dat twee-fotonmicroscopie implementeert om tandepitheelcellen live te volgen in gekweekte snijtanden van hele volwassen muizen.

Ex vivo live beeldvorming gebruiken om celdelingen en bewegingen tijdens tandvernieuwing bij muizen te onderzoeken

Leer de slice-kweekmethode voor tandkiemontwikkeling in muizenmandibula's met behulp van een tissue chopper. Deze techniek maakt unieke observatie en lineage tracing van cellulaire dynamiek mogelijk.

De Slice kweekmethode voor Na Ontwikkeling van Tooth Germs In explantaatkweek

Meer video's verkennen