Microgolven Functionalisering van poly (ethyleenglycol) en On-hars Peptiden voor gebruik in Chain Polymerisaties en Hydrogel Vorming

Het algemene doel van deze procedure is om polyethyleenglycol en peptiden functioneel te maken met methacrylaatgroepen voor daaropvolgende kettingpolymerisaties en hydrogelsynthese. Dit wordt bereikt door eerst methacrylzuuranhydride en de niet-functionele precursor in een scintillatieglas te combineren. De tweede stap is om microgolfenergie te gebruiken om de peg of het peptide te functioneliseren.

Vervolgens wordt de PEG DM opgelost in chloormethan, of wordt het peptide van de hars afgesplitst. En alle beschermende groepen van de zijketen worden verwijderd in een op zuur gebaseerde cocktail. De laatste stap is om de PEG DM of het met acrylzuur gefunctionaliseerde peptide in ether te precipiteren.

Uiteindelijk wordt proton NMR of Maldi time of flight mass spectrometry gebruikt om de succesvolle functionelering van de peg of het peptidemacro te laten zien. Hallo, mijn naam is Amy Van Hove. Ik ben een PhD-student in de afdeling Biomedische Technologie aan de Universiteit van Rochester.

Het belangrijkste voordeel van deze techniek boven bestaande methoden zoals het reageren van PEG met methacrylzuurfluoride is dat de reactie aanzienlijk sneller en milieuvriendelijker is. Hallo, mijn naam is Brandon Wilson. Ik ben een student scheikunde aan de Universiteit van Rochester.

Deze methode kan helpen om belangrijke vragen in het biomaterialenveld te beantwoorden, zoals hoe hydrogels die worden geproduceerd met peg dimethyl kunnen worden gebruikt om de afgifte van therapeutische cellen in moleculen te beheersen. Hallo, ik ben Danielle Benoit, een assistent-professor in de afdeling Biomedische Technologie aan de Universiteit van Rochester. De implicaties van deze techniek zijn voor het ontwikkelen van therapieën voor een verscheidenheid aan ziekten, aangezien de gesynthetiseerde verbindingen kunnen worden gebruikt voor cel- en medicijnafgiftetoepassingen.

Voordat u met deze procedure begint, droogt u het vereiste glaswerk gedurende één uur in een oven om besmetting met water in een grote weibrood te voorkomen. Weg uit vijf gram peg met een moleculair gewicht tussen 1000 en 100.000 dalton. Verwijder indien aanwezig het plastic stuk van het deksel van een scintillatieglas in de chemische kap in de chemische kap.

Sproeit 10 molaire overmaat van methacrylzuuranhydride in een gescheurde scintillatieglas. Voeg vervolgens PEG toe aan de fles. Draai vervolgens los de dop op de fles en plaats de fles in de magnetron.

Stel de magnetron in op vijf minuten op maximaal vermogen met hittebestendige handschoenen. Verwijder de fles uit de magnetron elke 30 seconden. Draai vervolgens de dop helemaal dicht en vortex de steekproef gedurende 30 seconden.

Maak de dop los voordat u de fles terugbrengt naar de magnetron. Herhaal deze stappen totdat de oplossing gedurende de volledige vijf minuten in de magnetron is geplaatst. Nadat u de fles uit de magnetron hebt verwijderd, maakt u de dop los en laat u de PEG DM afkoelen tot kamertemperatuur.

Los vervolgens de PEG DM op in 10 tot 15 milliliter dichloromethaan. Precipiteer de PEG DM in 10 x overmaat van pre dathyl ether gedurende 20 minuten. Gebruik een zeven centimeter Buckner trechter en een 500 milliliter fles.

Verzamel de PEG DM door vacuümfiltratie. Breng vervolgens de gefilterde PEG DM over naar een 50 milliliter kegelvormige buis met een naald met grote maat door de dop voor ventilatie. Plaats de buis in een vacuümkamer en droog de PEG DM een nacht lang.

Na het verwijderen van de buis uit de vacuümkamer, los op de PEG DM in DI chloromethaan op met ijskoud dathyl ether. Om niet-reactief methacrylzuuranhydride te verwijderen na filtratie en verzameling, droog de PEG DM op dezelfde manier als eerder in een vacuümkamer. Voor proton NMR-analyse, plaats ongeveer 10 milligram PEG DM in een scintillatieglas en voeg ongeveer één milliliter gedeutereerd chloroform toe.

Zodra het monster is opgelost, breng het over naar een schone NMR-buis. Verzamel vervolgens de proton NMR-spectra en voer de monsters bij kamertemperatuur uit gedurende ten minste 64 scans om voldoende gegevensresolutie te verkrijgen. Nadat het peptide van belang is gesynthetiseerd door vaste fase synthese, bewaar het op de hars in DMF bij vier graden Celsius totdat het klaar is om te worden gebruikt.

Verzamel vervolgens het peptidehars via filtratie met behulp van een zeven centimeter Buckner trechter met filterpapier en een 250 milliliter fles. Verwijder het plastic stuk van het deksel van een scintillatieglas en breng de hars over naar de fles. Voeg met een wegwerppipet net genoeg methacrylzuuranhydride toe om de hars te bedekken Na losjes de dop op de fles te hebben gedraaid, plaats deze in de magnetron en stel de timer in op drie minuten.

Op maximaal vermogen met hittebestendige handschoenen, verwijder de fles uit de magnetron elke 15 tot 20 seconden. Na het volledig vastdraaien van de dop, vortex de steekproef gedurende 15 seconden. Maak de dop los voordat u de fles terugbrengt naar de magnetron.

Herhaal deze totdat de oplossing gedurende de volledige drie minuten in de magnetron is geplaatst. Laat met de losgemaakte flesdop de peptideoplossing afkoelen tot kamertemperatuur met behulp van een kleine hoeveelheid DMF en een zeven centimeter Buckner trechter. Met filterpapier en een 250 milliliter fles.

Verzamel het peptidehars uit de fles voor splitsing en diepe bescherming. Breng het peptidehars over naar een verse scintillatieglas voor 0,25 millimol arginine bevattend peptide. Voeg 0,25 milliliter toe van elk tri ISO propyleen drie zes dioxide één acht octandiol thiol gedeïoniseerd water, en 18,0 milliliter TFA.

Draai vervolgens het reactiemengsel vier uur op een lab quake rotator bij kamertemperatuur. Wanneer u klaar bent, precipiteert u het peptide in 10 x overmaat van pre chill ethyl ether. Verdeel de oplossing gelijkmatig over vier 50 milliliter kegelvormige buizen, centrifugeert de vier monsters bij 3.200 G gedurende 10 minuten om het peptide te verzamelen na centrifugatie, decanteert de ether, suspendeert het peptide opnieuw in 100 milliliter vers ethylether verdeeld tussen twee 50 milliliter kegelvormige buizen.

Herhaal het centrifugatieproces. Suspensie het peptide in 50 m