Name: Isolatie van myeloïde dendritische cellen en epitheelcellen van Human Thymus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-19T21:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 7 s
Description: Leer de isolatie van myeloïde dendritische cellen en epitheelcellen uit menselijke thymus via mechanische disruptie, enzymatische digestie en dichtheidscentrifugatie. Deze reproduceerbare methode biedt hoge zuiverheid.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wij zijn dankbaar voor de chirurgen van de afdeling Thorax-en Cardiovasculaire Chirurgie, Universiteitskliniek Tübingen voor het verstrekken van ons met de thymus monsters en Bruno Kyewski (DKFZ, Heidelberg, Duitsland) voor het verstrekken van de CDR2 antilichaam. We willen ook graag Hans-Jörg Bühring en Sabrina Grimm bedanken van de sorteerinrichting (Universiteit van Tübingen). Dit werk werd ondersteund door de SFB 685 en de Hertie Foundation.

<ol><li>Miller, J. F. A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discovery+of+thymus+function+and+of+thymus-derived+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Reviews%22%5BJournal%5D)">The discovery of thymus function and of thymus-derived lymphocytes.</a> Immunological Reviews. 185, 7-14 (2002).</li>
<li>Klein, L., Hinterberger, M., Wirnsberger, G., Kyewski, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+presentation+in+the+thymus+for+positive+selection+and+central+tolerance+induction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Antigen presentation in the thymus for positive selection and central tolerance induction.</a> Nat Rev Immunol. 9, 833-844 (2009).</li>
<li>Vandenabeele, S., Hochrein, H., Mavaddat, N., Winkel, K., Shortman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+thymus+contains+2+distinct+dendritic+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Human thymus contains 2 distinct dendritic cell populations.</a> Blood. 97, 1733-1741 (2001).</li>
<li>Gotter, J., Brors, B., Hergenhahn, M., Kyewski, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medullary+Epithelial+Cells+of+the+Human+Thymus+Express+a+Highly+Diverse+Selection+of+Tissue-specific+Genes+Colocalized+in+Chromosomal+Clusters%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Medullary Epithelial Cells of the Human Thymus Express a Highly Diverse Selection of Tissue-specific Genes Colocalized in Chromosomal Clusters.</a> The Journal of Experimental Medicine. 199, 155-166 (2004).</li>
<li>Rouse, R. V., Bolin, L. M., Bender, J. R., Kyewski, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies+reactive+with+subsets+of+mouse+and+human+thymic+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+%26+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies reactive with subsets of mouse and human thymic epithelial cells.</a> Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 36, 1511-1517 (1988).</li>
<li>Stoeckle, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cathepsin+S+dominates+autoantigen+processing+in+human+thymic+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Autoimmunity%22%5BJournal%5D)">Cathepsin S dominates autoantigen processing in human thymic dendritic cells.</a> Journal of Autoimmunity. 38, 332-343 (2012).</li>
<li>Woods Ignatoski, K. M., Bingham, E. L., Frome, L. K., Doherty, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+trans-differentiation+of+thymus+cells+into+parathyroid-like+cells+without+genetic+manipulation%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Directed trans-differentiation of thymus cells into parathyroid-like cells without genetic manipulation.</a> Tissue Eng Part C Methods. 17, 1051-1059 (2011).</li>
<li>Williams, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Cell+Analysis+of+Complex+Thymus+Stromal+Cell+Populations%3A+Rapid+Thymic+Epithelia+Preparation+Characterizes+Radiation+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Translational+Science%22%5BJournal%5D)">Single Cell Analysis of Complex Thymus Stromal Cell Populations: Rapid Thymic Epithelia Preparation Characterizes Radiation Injury.</a> Clinical and Translational Science. 2, 279-285 (2009).</li>
<li>Bendriss-Vermare, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+thymus+contains+IFN-%CE%B1-producing+CD11c-%2C+myeloid+CD11c%2B%2C+and+mature+interdigitating+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Human thymus contains IFN-α-producing CD11c-, myeloid CD11c+, and mature interdigitating dendritic cells.</a> The Journal of Clinical Investigation. 107, 835-844 (2001).</li>
<li>Schmitt, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+characterization+of+human+thymic+dendritic+cell+subsets%5BTitle%5D)+AND+%22Immunobiology%22%5BJournal%5D)">Ex vivo characterization of human thymic dendritic cell subsets.</a> Immunobiology. 212, 167-177 (2007).</li>
<li>Dzionek, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BDCA-4%3A+Three+Markers+for+Distinct+Subsets+of+Dendritic+Cells+in+Human+Peripheral+Blood%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">BDCA-4: Three Markers for Distinct Subsets of Dendritic Cells in Human Peripheral Blood.</a> The Journal of Immunology. 165, 6037-6046 (2000).</li>
<li>Wu, L., Shortman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+of+thymic+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity of thymic dendritic cells.</a> Seminars in Immunology. 17, 304-312 (2005).</li>
<li>Seach, N., Wong, K., Hammett, M., Boyd, R. L., Chidgey, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purified+enzymes+improve+isolation+and+characterization+of+the+adult+thymic+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Purified enzymes improve isolation and characterization of the adult thymic epithelium.</a> Journal of Immunological Methods. 385, 23-34 (2012).</li>
<li>Adamopoulou, E., Tenzer, S., Hillen, N., Klug, P., Rota, I. A., Tietz, S., Gebhardt, M., Stevanovic, S., Schild, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+the+MHC-peptide+matrix+of+central+tolerance+in+the+human+thymus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Exploring the MHC-peptide matrix of central tolerance in the human thymus.</a> Nature Communications. , (2013).</li>
</ol>

Geen belangenconflict verklaard.

De hier beschreven protocol is een modificatie van het protocol gepubliceerd door Gotter c.s. 4. Kritische stappen in het protocol zijn de initiële toestand en voorbereiding van de weefsels alsmede de Percoll dichtheid scheiding. We raden aan het weefsel zo snel mogelijk na verzameling te verwerken. Het is belangrijk om snel maar grondig werken bij het schoonmaken en snijden van het weefsel. Tijdens de thymocyt wassen in stap 2.3 beschreven, is het cruciaal om de juiste balans te vinden bij het uitoe...

De thymus is het orgaan waarin T cel ontwikkeling optreedt. De relatieve en absolute omvang afneemt met de leeftijd als het achtereenvolgens wordt vervangen door vet hoewel thymus activiteit nog kan worden gedetecteerd in de ouderdom. Het belang van de immuunrespons aangetoond in de vroege jaren 1960 1. De T-cel repertoire wordt gevormd door de interactie van T-celreceptoren met peptide-MHC complexen op verschillende soorten thymus APC, die leven of dood cues de ontwikkeling T-cellen, wat resulteert in een functioneel en grotendeels zelfverdraagzaam T cel repertoire 2. Ongeveer 98% van de cellen in de humane thymus ontwikkelen T genoemd thymocyten cellen. De resterende 2% bestaat uit een aantal verschillende celtypen, waaronder een verscheidenheid van TEC (corticale, medullair, subcapsulaire), myeloïde en plasmacytoïde DC (mDC PDC), macrofagen, B cellen, volwassen re-circulerende T-cellen, granulocyten, fibroblasts, endotheelcellen en zeer zeldzame epitheliale cellen met een expressie fenotype lijkt op die van cellen van andere weefsels zoals spieren, neuronen en respiratoire epitheel (figuur 1). Van deze, TEC en DC zijn de belangrijkste APC soorten gevonden in een normale thymus. In de afgelopen jaren is de zuivering van deze APC types voor cultuur en moleculaire profiel kreeg meer en meer belangstelling. Door hun lage frequentie, isolatie van een van deze celtypen voor gedetailleerde analyse vereist een efficiënt, reproduceerbaar en kosten-effectieve procedure. De hier gepresenteerde methode is een wijziging van eerder gepubliceerde studies 3,4. Zoals bij andere weefsels, kunnen cellen extractie uit de thymus worden bereikt door enzymatisch opsplitsing van de cel-cel en cel-matrix interacties netwerken, om een ​​suspensie van afzonderlijke cellen te verkrijgen. Er zijn bepaalde parameters, zoals goede dissociatie efficiëntie, celopbrengst, leefbaarheid en behoud van cellen en celurface markers die cruciaal zijn en moeten worden geoptimaliseerd voor de succesvolle isolatie van deze zeldzame celpopulaties. In dit protocol wordt isolatie van DC en TEC subsets uitgevoerd door een enkele celsuspensie van weefsel door mechanische verbreking en enzymatische digestie. We gebruiken Collagenase Een van Clostridium histolyticum, die een uitgebalanceerde verhouding van verschillende enzym activiteiten heeft, af te breken de inheemse collageen, dat het weefsel bij elkaar houdt. DNase I is in de enzymoplossing naar cel aggregatie te verminderen door vrij DNA van dode cellen (thymocyten zijn zeer gevoelig). We hebben bovendien een alternatieve benadering van de typische enzymatische digestie weefsel met mechanische en enzymatische weefselbehandelelektrode bijgestaan ​​door een weefsel Dissociator. De celsuspensie wordt dan onderworpen aan een Percoll dichtheid centrifugatie voor verrijking van lage dichtheid fractie (LDF) cellen. Van deze fractie van de cellen, kan DC door kleuring f worden geïsoleerdof DC-oppervlaktemerkers (bijvoorbeeld CD 11 c +) en met behulp van magnetische scheiding of fluorescentie-geactiveerde celsortering (FACS). In tegenstelling tot de lymfoïde cellen die de meeste cellen in de thymus, hoeft TEC CD45 niet tot expressie op een hoog niveau, maar positief voor de epitheliale cel adhesie molecuul EpCAM. CTEC kunnen worden onderscheiden van medullaire TEC door de expressie van een toch ongedefinieerde antigeen herkend door de CDR-2 (corticale dendritische reticulocyten-2) antilichaam 4,5 en iets lager EpCAM-expressie. De differentiële co-expressie van EpCAM en CDR2 maakt de efficiënte isolatie van deze TEC subsets via high-speed celsortering 6. De hier gepresenteerde protocol geoptimaliseerd voor menselijke thymus weefsel. De duur van de procedure is gebaseerd op de hoeveelheid weefsel en het vermogen van de experimentator en de snelheid van de cel sorteerder als FACS sortering wordt gebruikt. Normaal gesproken kan het protocol voor de isolatie van DC binnen 5-6 Uur en voor de isolatie van VEG 8-10 uur. De isolatie van DC en TEC subsets van thymusweefsel is tijd gevoelig. Hoe sneller de isolatieprocedure, hoe beter de toestand van de cellen. Tenslotte kunnen de geïsoleerde cellen worden voor verder onderzoek als vergelijkende studies van mRNA en eiwitexpressie PCR experimenten eiwitisolatie, moleculaire profiel (dwz transcriptomics, micro RNA-analyse) en celkweek 6. Ethiek Verklaring Om te kunnen werken met menselijke thymus weefsel moet de onderzoeker om goedkeuring te verkrijgen van de lokale ethische commissie of de verantwoordelijke overheden als een geïnformeerde schriftelijke toestemming van de donor (of meestal zijn of haar ouders, omdat weefsel wordt meestal verkregen uit minderjarig kinderen). Bovendien moeten alle menselijke weefsels worden behandeld als potentieel infectieus en passende maatregelen moeten worden genomen, zoals het werken met handschoenen, etc.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reagenten en materialen</td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>PAA</td><td>E15-842</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Dulbecco's PBS</td><td>PAA</td><td>H15-002</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Fetal bovien serum-Gold</td><td>PAA</td><td>A15-151</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Bovien serum albumine</td><td>PAA</td><td>K41-001</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Collagenase A</td><td>Roche</td><td>10 103 586 001</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>DNase I, graad II bovien pancreatisch</td><td>Roche</td><td>10 104 159 001</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA 10x in PBS</td><td>PAA</td><td>L11-001</td><td>stock conc. 20 mg/ml</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Proteïnelabeling kit</td><td>Molecular Probes</td><td>A-10235</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-menselijk CDR2 (gezuiverd)</td><td>Bruno Kyewski, DKFZ- Heidelberg, Duitsland</td><td></td><td>gelabeld met Alexa Fluor 488</td></tr><tr><td>anti-menselijk CD45 (Pacific Blue)</td><td>Biolegend</td><td>304022</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-menselijk EpCAM (APC)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-254</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-menselijk CD11c (PE)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-411</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-PE Microbeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-048-801</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CD45 Microbeads, menselijk</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-045-801</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>LS kolommen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>gentleMACS C Tubes</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-237</td><td>voor weefsel dissociator</td></tr><tr><td>Percoll (dichtheid 1.130 g/ml)</td><td>GE Healthcare, Life Sciences</td><td>17-0891-01</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Steriele gedestilleerd water (DNAse/ RNAse vrij)</td><td>GIBCO</td><td>10977-035</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Gamunex 10%</td><td>Tajecris-Biotherapeutics</td><td>G120052</td><td>1:10 voorverdunning, gebruik 20 &mu;l/1 x 106cellen</td></tr><tr><td>0.22 &mu;m filter</td><td>Millex GS</td><td>SLGS033SS</td><td>Spuitgedreven</td></tr><tr><td>Stericup filter unit</td><td>Millipore</td><td>SCGPU05RE</td><td>Pompgedreven</td></tr><tr><td>50 ml PC oak ridge centrifugebuizen</td><td>Nalgene</td><td>3118-0050</td><td>50 ml</td></tr><tr><td>50 ml PP conische buizen</td><td>Becton Dickinson</td><td>352070</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>12 mm x 75 mm 5 ml testbuizen</td><td>Becton Dickinson</td><td>352058</td><td>FACS kleuringen</td></tr><tr><td>Cell strainer 70 &mu;m</td><td>Becton Dickinson</td><td>352350</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td colspan="4">INSTRUMENTEN</td></tr><tr><td>Flow Cytometer-Sorter (BD FACSAriaTMIIu)</td><td>Becton Dickinson</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Sorvall Evolution R6 (rotor)</td><td>Kendro</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Rotator REAX 2</td><td>Heidolph</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>gentleMACS Dissociator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093 235</td><td>weefsel dissociator</td></tr></tbody></table>

isolatie van myeloïde dendritische cellen en epitheelcellen van human thymus

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

In dit protocol bieden wij een methode om dendritische cellen (DC) en epitheelcellen (TEC) isoleren van de humane thymus. DC en TEC zijn de belangrijkste antigeen presenterende cel (APC) soorten gevonden in een normale thymus en het is bekend dat ze verschillende rollen spelen tijdens de thymus selectie. Deze cellen zijn gelokaliseerd in verschillende micro-omgevingen in de thymus en elke soort APC maakt slechts een kleine populatie van cellen. Om verder inzicht in de biologie van deze celtypen karakterisatie van deze celpopulaties is zeer wenselijk maar door hun lage frequentie, isolatie van een van deze celtypen vereist een efficiënte en reproduceerbare werkwijze. Dit protocol detailleert een methode die geschikt zijn voor karakterisatie van diverse cellulaire eigenschappen te verkrijgen. Thymusweefsel mechanisch verstoord en na verschillende stappen van enzymatische digestie, wordt het resulterende celsuspensie verrijkt met een Percoll dichtheid centrifugatie stap. Voor isolatie van myeloïde DC (CD 11 c &lt;sup&gt; +), cellen van de lage-dichtheid-fractie (LDF) worden immunoselected door magnetische celsortering. Verrijking van TEC populaties (MTES, Ctec) wordt bereikt door depletie van hematopoietische (CD45 hi cellen) van de lage-dichtheid Percoll celfractie waardoor hun verdere isolering via fluorescentie geactiveerde celsortering (FACS) met specifieke cel markers. De geïsoleerde cellen kunnen worden gebruikt voor verschillende stroomafwaartse toepassingen.

Als uitgangsmateriaal in dit protocol gebruiken wij thymus weefsel verwijderd uit kinderen die corrigerende cardiovasculaire chirurgie (Ministerie van Borst en Cardiovasculaire Chirurgie, universiteitskliniek Tübingen) verkregen na geïnformeerde toestemming en onder institutionele richtlijnen. Deze afgedankte materiaal kan sterk variëren in grootte 2-30 g of meer. Het aantal mDC en TEC subsets (Ctec en MTES) die worden verkregen afhankelijk van de grootte en de leeftijd van de thymus weefselmonster gebruikt voor isolati...

Dit protocol detailleert een methode voor het isoleren van antigen-presenterende cellen uit humane thymus via verschillende stappen enzymatische afbraak van het weefsel, gevolgd door centrifugatie van de enkele celsuspensie en tenslotte magnetische en / of FACS sorteren van celpopulaties plaats.

Isolatie van myeloïde dendritische cellen en epitheelcellen van Human Thymus

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Het algemene doel van deze procedure is het isoleren van dendritische cellen en epitheelcellen uit de menselijke thymus. Dit wordt bereikt door het gedisseceerde weefsel eerst te fragmenteren via mechanische disruptie. Vervolgens worden de weefselfragmenten enzymatisch verder verteerd om een suspensie van enkelvoudige cellen te verkrijgen.Ten slotte wordt de celsuspensie verrijkt voor de fractie cellen met een lage dichtheid door middel van Percoll-scheiding. Uiteindelijk kunnen de dendritische en epitheliale cellen uit deze fractie worden geïsoleerd via magnetische sortering, FACS-sortering, of een combinatie van beide. De hier gepresenteerde methode biedt een efficiënte, reproduceerbare en kosteneffectieve procedure voor de succesvolle isolatie en daaropvolgende studie van zeldzame celpopulaties, zoals dendritische cellen en thymische epitheliale cellen in de menselijke thymus.I rotta, een promovendus van ons laboratorium, zal de procedure voor u demonstreren. Begin met het plaatsen van het thymusweefsel in een Petrischaal met steriele PBS op kamertemperatuur en spoel eventueel resterend bloed weg. Voeg vervolgens verse PBS toe aan de Petrischaal en gebruik een pincet en een scha

isolation-myeloid-dendritic-cells-epithelial-cells-from-human

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Een sterk gezuiverde bereiding van de muis long dendritische cellen wordt beschreven. Specifieke aandacht wordt gegeven aan de isolatie van de conventionele dendritische cel subset.

Isolatie van Mouse Lung dendritische cellen

Hier hebben we details van een methodologie voor de snelle isolatie van de muis intestinale dendritische cellen (DC's) en macrofagen. Fenotypische karakterisering van intestinale DCs en macrofagen wordt uitgevoerd met behulp van multi-kleuren flowcytometrische analyse, terwijl magnetische kraal verrijking gevolgd door celsortering wordt gebruikt om zeer zuivere populaties voor functionele studies opleveren.

Isolatie en karakterisering van dendritische cellen en macrofagen van de muis Darm

Hier beschrijven we een efficiënte methode voor isolatie, identificatie en zuivering van muizen thymus epitheelcellen (TEC). Het protocol kan worden gebruikt voor studies van thymus functie voor normale T-cel ontwikkeling, thymus en T cel reconstitutie.

Isolatie, identificatie en zuivering van Muriene thymus epitheelcellen

Er bestaan verschillende zeldzame populaties van dendritische celsubpopulaties in lymfoïde organen en daarom zijn ze lastig te isoleren in voldoende aantallen en zuiverheid voor immunologische experimenten. Hier beschrijven we een methode met hoge efficiëntie en hoog rendement voor het isoleren van alle momenteel bekende belangrijke subpopulaties van dendritische cellen in de milt van muizen.

Een efficiënte en High Yield methode voor het isoleren van de muis dendritische cel subsets

Deze studie vergelijkt twee verschillende methoden voor het isoleren van humane monocyten voor het verkrijgen van in vitro dendritische cellen (DC's). Monocyten worden geselecteerd door adhesie of negatief verrijkt door magnetische scheiding. De monocytenopbrengst en levensvatbaarheid, samen met de levensvatbaarheid van MDDC, proliferatie en CD11c/CD14-oppervlaktemarkeringsuitdrukking, zullen worden vergeleken tussen beide methoden.

Karakterisering van Human-monocyten afgeleide dendritische cellen door Imaging flowcytometrie: Een vergelijking tussen twee monocyten Isolation Protocollen

Hier demonstreren we hoe monocyten worden geïsoleerd door magnetische kralenscheiding van mononucleaire cellen uit het perifere bloed na dichtheidsgradiëntcentrifugatie van humaan geanticoaguleerd bloed. Na incubatie gedurende 5 dagen, worden menselijke monocyten gedifferentieerd in onrijpe dendritische cellen en zijn ze klaar voor experimentele procedures in een niet-klinische omgeving.

Genereren van Human-monocyten afgeleide dendritische cellen uit volbloed

Hier beschrijven we een methode om te isoleren en te zuiveren van dendritische cellen uit verschillende anatomische compartimenten in de menselijke vrouwelijke voortplantingssysteem voor de evaluatie van hun phenotypical en functionele kenmerken. Deze methode kan worden aangepast aan het isoleren van andere immune cellen of van dendritische cellen uit andere mucosal weefsels.

Isolatie van dendritische cellen uit de menselijke vrouwelijke voortplantingssysteem voor Phenotypical en functionele Studies

Monocyt-afgeleide DC (MoDC) kleine hoeveelheden gevaar-geassocieerde moleculen kunnen voelen en zijn daarom gemakkelijk primer. Wij bieden een gedetailleerd protocol voor de isolatie van de MoDC uit bloed, tumoren en hun activering met immuuncomplexen terwijl het benadrukken van belangrijke voorzorgsmaatregelen die moeten worden overwogen om te voorkomen dat hun voortijdige activering.

Protocol van de isolatie van muis monocyt-afgeleide dendritische cellen en hun latere In Vitro activatie met Tumor immuuncomplexen

Hier presenteren we protocollen die isolatie van stromale cellen uit muizenbot, beenmerg, thymus en menselijk thymusweefsel mogelijk maken die compatibel zijn met single-cell multiomics.

Stromale celisolatie van hematopoëtische organen

Hier beschrijven we in vitro kweekomstandigheden, isolatie en verhoogde aanmaak van extracellulaire blaasjes (EV's) van Echinococcus granulosus. De kleine EV's werden gekenmerkt door dynamische lichtverstrooiing en transmissie-elektronenmicroscopie. De opname door beenmerg-afgeleide dendritische cellen en hun fenotypische modulatie werden bestudeerd met behulp van confocale microscopie en flowcytometrie.

Isolatie en dendritische celopname van kleine extracellulaire blaasjes van Echinococcus granulosus

We beschrijven een procedure om het vermogen van farmacologische middelen te beoordelen om tolerogene dendritische cellen te genereren uit naïeve van monocyten afgeleide dendritische cellen in vitro en om hun potentie te valideren door autologe regulerende T-celgeneratie te genereren.

Een eenvoudige en efficiënte methode voor het testen van immunomodulerende middelen voor het genereren van tolerogene dendritische cellen uit menselijke CD14+ -monocyten

Leer de isolatie van myeloïde dendritische cellen en epitheelcellen uit menselijke thymus via mechanische disruptie, enzymatische digestie en dichtheidscentrifugatie. Deze reproduceerbare methode biedt hoge zuiverheid.

Isolatie van myeloïde dendritische cellen en epitheelcellen van Human Thymus

Meer video's verkennen